一种提高清瘟败毒散中栀子苷含量测定准确度的处理方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种预处理方法，具体涉及一种提高清瘟败毒散中栀子苷含量测定准确度的处理方法。
【背景技术】
[0002]清瘟败毒散是清代著名温病学家余师愚所创制的名方，载于其所著的《疫疹一得》一书中，现收录于《中华人民共和国兽药典》2010年版二部。本药由石膏、地黄、水牛角、黄连等14味药材组成，是“白虎汤”、“黄连解毒汤”和“犀角地黄汤”三方加减化裁而得。清瘟败毒散的处方包括:生石膏120g、生地黄30g、水牛角60g、黄连20g、栀子30g、牡丹皮20g、黄芩25g、赤芍25g、玄参25g、知母30g、连翘30g、桔梗25g、甘草15g、淡竹叶25g;具有泻火解毒，凉血的功效，在兽药临床上主要用于治疗热毒发斑，高热神昏。
[0003]2010年版《中华人民共和国兽药典》二部中清瘟败毒散的质量标准仅有显微鉴别和黄连的薄层鉴别，很难控制其质量，保证产品的安全性、有效性与质量可控性。但现有技术中公开的栀子苷含量测定方法的检测效果较差，不能满足需求。
【发明内容】
[0004]本发明所要解决的技术问题是:现有技术中清瘟败毒散用栀子苷的含量测定的检测效果较差，目的在于提供含量测定效果稳定且重复性高的一种提高清瘟败毒散中栀子苷含量测定准确度的处理方法。
[0005]本发明通过下述技术方案实现:
一种提高清瘟败毒散中栀子苷含量测定准确度的处理方法，包括:
(1)清瘟败毒散预处理:精密量取清瘟败毒散1.0g，按照20?50ml/g的加入量将浓度为50%以上的甲醇溶液加入清瘟败毒散中，称定重量，提取，冷却至室温，用甲醇溶液补足减失重量，过滤后获得滤液；
(2)将预处理后的检测液进行液相色谱检测，该液相色谱检测的流动相为13:87的乙腈和水。
[0006]现有技术中在进行栀子苷的含量测定之前，要先对原料进行预处理，然后再将其加入层析柱上进行含量测定，通常原料预处理方式的不同会导致检测的结果存在极大差异，对检测结果的重复性、稳定度等均造成极大地影响。并且由于药物中其他成份对待测成份造的干扰作用，因而适用于其中一种药物的预处理手段不一定适用于另一种药物，因而不同药物组份的预处理手段也不尽相同。
[0007]现有技术中并没有一种能够很好适用于清瘟败毒散中栀子苷含量测定，且有效提高检测准确度的处理方法，本发明根据清瘟败毒散中的组成成份和比例，设计出一种处理方法，可以有效避免清瘟败毒散中其他物质对栀子苷含量测定的影响，且经过该方式处理后使检测结果的稳定性、重复性均得到极大地提高，而且平均加样回收率以及加样回收率的RSD值也得到显著提高，效果十分显著。
[0008]优选地，所述液相色谱检测中色谱柱采用C18色谱柱，色谱柱的尺寸为ID4.6mm、长度250mm、粒径5um，检测波长238nm。
[0009]进一步，所述提取方法为功率100W、频率40KHz的超声提取，或提取时间为30min的加热回流提取。
[0010]优选地，所述提取方法为超声提取时，超声提取的时间大于30min。
[0011]作为最优地一种设置方式，所述甲醇溶液的浓度为75 %，甲醇溶液的加入量为25ml/g。
[0012]本发明与现有技术相比，具有如下的优点和有益效果:
通过本发明的优化设计，使检测结果的稳定性、重复性均得到极大地提高，而且平均加样回收率以及加样回收率的RSD值也得到显著提高，效果十分显著。
【附图说明】
[0013]此处所说明的附图用来提供对本发明实施例的进一步理解，构成本申请的一部分，并不构成对本发明实施例的限定。在附图中:
图1为实施例1的栀子苷线性关系图。
【具体实施方式】
[0014]为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，下面结合实施例和附图，对本发明作进一步的详细说明，本发明的示意性实施方式及其说明仅用于解释本发明，并不作为对本发明的限定。
[0015]实施例1
一种提高清瘟败毒散中栀子苷含量测定准确度的处理方法，具体制备过程如下:精密量取清瘟败毒散1.0g，按照25ml/g的加入量将浓度为75%的甲醇溶液加入清瘟败毒散中，称定重量，功率100W、频率40KHz的超声提取，冷却至室温，用甲醇溶液补足减失重量，过滤的滤液即为供试品溶液。
[0016]利用供试品溶液进行液相色谱检测，具体检测过程如下:
液相色谱检测的流动相选择为13:87的乙腈和水。所述液相色谱检测中色谱柱采用C18色谱柱，色谱柱的尺寸为ID4.6mm、长度250mm、粒径5um，检测波长238nm。
[0017]检测结果:
(1)使用自动进样器分别吸取栀子苷对照品(0.0309mg/mL)0.5、2、4、6、8、10、12、20uL，按照本发明的色谱条件进样分析，获得栀子苷线性关系图，如图1所示。通过该栀子苷线性关系图计算出清瘟败毒散中栀子苷含量为0.066% ；
(2)取1ul的供试品溶液六份分别进行液相色谱检测，根据检测得到的栀子苷的峰面积计算得出RSD值为1.098%；
(3)将供试品溶液1ul在0、2、4、6、8、10h时分别进样进行液相色谱检测，根据检测得到的栀子苷的峰面积计算得出RSD值为0.335%；
(4)配置0.2732mg/mL的栀子苷对照品，将供试品溶液1ul和栀子苷对照品1ul进行液相色谱检测，根据峰面积计算平均加样回收率为99.60%，加样回收率的RSD值为0.76% ο
[0018]实施例2 本实施例是实施例1的对照实施例，本实施例中供试品溶液的预处理方法不同，具体制备过程如下:
精密量取清瘟败毒散1.0g，按照20ml/g的加入量将浓度为80%的甲醇溶液加入清瘟败毒散中，称定重量，功率100W、频率40KHz的超声提取，冷却至室温，用甲醇溶液补足减失重量，过滤的滤液即为供试品溶液。
[0019]本实施例的检测结果:
(1)取1ul的供试品溶液六份分别进行液相色谱检测，根据检测得到的栀子苷的峰面积计算得出RSD值为1.206%；
(2)将供试品溶液1ul在0、2、4、6、8、10h时分别进样进行液相色谱检测，根据检测得到的栀子苷的峰面积计算得出RSD值为0.724%;
(3)配置0.2732mg/mL的栀子苷对照品，将供试品溶液1ul和栀子苷对照品1ul进行液相色谱检测，根据峰面积计算平均加样回收率为93.84%，加样回收率的RSD值为2.13%。
[0020]实施例3
本实施例是实施例1的对照实施例，本实施例中供试品溶液的预处理方法不同，具体制备过程如下:
精密量取清瘟败毒散1.0g，按照30ml/g的加入量将浓度为70%的甲醇溶液加入清瘟败毒散中，称定重量，功率100W、频率40KHz的超声提取，冷却至室温，用甲醇溶液补足减失重量，过滤的滤液即为供试品溶液。
[0021]本实施例的检测结果:
(1)取1ul的供试品溶液六份分别进行液相色谱检测，根据检测得到的栀子苷的峰面积计算得出RSD值为1.104%；
(2)将供试品溶液1ul在0、2、4、6、8、10h时分别进样进行液相色谱检测，根据检测得到的栀子苷的峰面积计算得出RSD值为1.156%；
(3)配置0.2732mg/mL的栀子苷对照品，将供试品溶液1ul和栀子苷对照品1ul进行液相色谱检测，根据峰面积计算平均加样回收率为95.61%，加样回收率的RSD值为3.12%。
[0022]实施例4
本实施例是实施例1的对照实施例，本实施例中供试品溶液的预处理方法不同，具体制备过程如下:
精密量取清瘟败毒散1.0g，按照50ml/g的加入量将浓度为50%的甲醇溶液加入清瘟败毒散中，称定重量，功率100W、频率40KHz的超声提取，冷却至室温，用甲醇溶液补足减失重量，过滤的滤液即为供试品溶液。
[0023]本实施例的检测结果:
(1)取1ul的供试品溶液六份分别进行液相色谱检测，根据检测得到的栀子苷的峰面积计算得出RSD值为1.131%;
(2)将供试品溶液1ul在0、2、4、6、8、10h时分别进样进行液相色谱检测，根据检测得到的栀子苷的峰面积计算得出RSD值为0.576%；
(3)配置0.2732mg/mL的栀子苷对照品，将供试品溶液1ul和栀子苷对照品1ul进行液相色谱检测，根据峰面积计算平均加样回收率为96.2%，加样回收率的RSD值为3.28%。
[0024]通过实施例1-4检测结果对比可知，本发明优选方案的稳定性、重复性均得到极大地提高，而且平均加样回收率以及加样回收率的RSD值也得到显著提高，效果十分显著。
[0025]以上所述的【具体实施方式】，对本发明的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明，所应理解的是，以上所述仅为本发明的【具体实施方式】而已，并不用于限定本发明的保护范围，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1.一种提高清瘟败毒散中栀子苷含量测定准确度的处理方法，其特征在于，包括: (1)清瘟败毒散预处理:精密量取清瘟败毒散1.0g，按照20?50ml/g的加入量将浓度为50%以上的甲醇溶液加入清瘟败毒散中，称定重量，提取，冷却至室温，用甲醇溶液补足减失重量，过滤后获得滤液； (2)将预处理后的检测液进行液相色谱检测，该液相色谱检测的流动相为13:87的乙腈和水。2.根据权利要求1所述的一种提高清瘟败毒散中栀子苷含量测定准确度的处理方法，其特征在于，所述液相色谱检测中色谱柱采用C18色谱柱，色谱柱的尺寸为ID4.6mm、长度250_、粒径5um，检测波长238nm。3.根据权利要求1所述的一种提高清瘟败毒散中栀子苷含量测定准确度的处理方法，其特征在于，所述提取方法为功率100W、频率40KHz的超声提取，或提取时间为30min的加热回流提取。4.根据权利要求3所述的一种提高清瘟败毒散中栀子苷含量测定准确度的处理方法，其特征在于，所述提取方法为超声提取时，超声提取的时间大于30min。5.根据权利要求2或3或4所述的一种提高清瘟败毒散中栀子苷含量测定准确度的处理方法，其特征在于，所述甲醇溶液的浓度为75%，甲醇溶液的加入量为25ml/g。
【专利摘要】本发明公开了一种提高清瘟败毒散中栀子苷含量测定准确度的处理方法；解决了现有技术中清瘟败毒散用栀子苷的含量测定的检测效果较差的问题。本发明包括：（1）清瘟败毒散预处理：精密量取清瘟败毒散1.0g，按照20～50ml/g的加入量将浓度为50%以上的甲醇溶液加入清瘟败毒散中，称定重量，提取，冷却至室温，用甲醇溶液补足减失重量，过滤后获得滤液；（2）将预处理后的检测液进行液相色谱检测，该液相色谱检测的流动相为13∶87的乙腈和水。本发明稳定性、重复性均得到极大地提高，而且平均加样回收率以及加样回收率的RSD值也得到显著提高。
【IPC分类】G01N30/74, G01N30/06
【公开号】CN105651906
【申请号】
【发明人】潘春晖, 刘涛, 杨琼, 张煊
【申请人】四川德成动物保健品有限公司
【公开日】2016年6月8日
【申请日】2016年2月5日