专利名称：‘花叶’日本醉鱼草的微型快繁方法
技术领域：
本发明涉及一种植物微型快繁方法，具体地，涉及一种1、‘花叶’日本醉鱼草(Buddleja japonica‘Variegata’)的微型快繁方法。
背景技术：
日本花叶醉鱼草(Buddleja japonica‘Variegata’)系马钱科醉鱼草属的常绿小灌木，是一种适宜盆栽或花坛布置的观赏新品种。其株形优美，枝繁叶茂，叶缘金黄色，叶中部深绿色，极具观赏价值。国内外已对部分醉鱼草属观赏种类及其品种的营养繁殖和种子繁殖进行了研究，但尚未见对该品种进行微型快繁的报道。
发明内容
本发明针对现有技术未对日本花叶醉鱼草(Buddlejajaponica‘Variegata’)进行微型快繁研究，用‘花叶’日本醉鱼草的茎尖或茎段为外植体，实现了其花叶特征稳定性遗传的微型快繁的目的。为了实现本发明的目的，本发明提供了如下技术方案‘花叶’日本醉鱼草(Buddleja japonica‘Variegata’)的微型快繁方法，包括启动培养、增殖培养、生根培养、移栽步骤，培养条件选择启动培养基MS+6-BA0.05mg·L-1(单位下同)+IBA0.05+NAA0.05；增殖培养基①MS+6-BA0.1+NAA0.1；②MS+6-BA0.2+NAA0.1；③MS+6-BA0.5+NAA0.1；生根培养基MS+IAA0.1+IBA0.05，以上培养基均加入3％蔗糖、0.65％琼脂，PH5.8，培养温度为(23±1)℃，光照时间12hd-1，光照度1000～1500lx，启动培养是切取顶芽和带腋芽的茎段首先用肥皂及自来水清洗，然后用蒸馏水冲洗干净后，在超净台上用70％酒精消毒30s，再用0.1％的HgCl2溶液消毒3～5min，无菌水冲洗5～6次，接种到启动培养基上，经过10～15d的培养，茎段腋芽开始萌动，茎尖明显伸长，30d芽可长成3～5cm的新梢，无丛生芽产生；增殖培养是将启动培养获得的无菌苗在无菌条件下，去掉基部叶片，切成长1cm左右含1个腋芽的茎段或茎尖，分别接种在增殖培养基①②③上；生根培养是将增殖培养产生的丛芽，选取2-3cm长的顶芽接种于生根培养基MS+IAA0.1+IBA0.05上诱导生根，移栽是当不定根长至0.5～1cm时，在实验室内自然光照条件下不打开瓶盖炼苗2～3d后取出小苗，小心洗去根部的培养基，用1∶1000的多菌灵溶液浸泡15min，栽于温室内以珍珠岩为基质的苗床中，加盖塑料薄膜保湿，一周后揭去薄膜，两周移栽成活后的小苗可以转入自然红土∶腐叶土∶珍珠岩＝4∶2∶1(V/V)的混合基质中进行壮苗培养和开花栽培。
上述的培养方法，保持‘花叶’日本醉鱼草观赏特性稳定遗传的微型快繁在6-BA0.1mg·L-1的MS培养基中连续培养10代以上。
具体实施例方式下面结合本发明的实施例来进一步对本发明的实质性内容进行说明，但本发明内容并不局限于此。
实施例11植物名称‘花叶’日本醉鱼草(Buddlejajaponica‘Variegata’)。
2材料类别 茎尖和带腋芽的茎段。
3培养条件启动培养基MS+6-BA0.05mg·L-1(单位下同)+IBA0.05+NAA0.05；增殖培养基①MS+6-BA0.1+NAA0.1；②MS+6-BA0.2+NAA0.1；③MS+6-BA0.5+NAA0.1；生根培养基MS+IAA0.1+IBA0.05。以上培养基均加入3％蔗糖、0.65％琼脂，PH5.8。培养温度为(23±1)℃，光照时间12hd-1，光照度1000～1500lx。
4生长与分化情况4.1启动培养切取顶芽和带腋芽的茎段首先用肥皂及自来水清洗，然后用蒸馏水冲洗干净后，在超净台上用70％酒精消毒30s，再用0.1％的HgCl2溶液消毒3～5min，无菌水冲洗5～6次，接种到启动培养基上，经过10～15d的培养，茎段腋芽开始萌动，茎尖明显伸长，30d芽可长成3～5cm的新梢，无丛生芽产生。
4.2增殖培养将启动培养获得的无菌苗在无菌条件下，去掉基部叶片，切成长1cm左右含1个腋芽的茎段或茎尖，分别接种在增殖培养基①②③上，增殖培养30d的统计结果表明①号培养基中的芽体生长最佳，形成丛生芽，芽基部有极少的愈伤组织形成，花叶保持不变，约10％的增殖芽会长出1～3条不定根。增殖系数可达到4；②号培养基中的芽体矮小且叶片明显变小，有愈伤组织产生，基部的丛生芽中有少量的绿色苗和黄化苗出现，增殖系数为6；③号培养基中的芽体增殖丛生，有的形成莲座状，有10％左右的玻璃苗产生，且花叶性状发生变化，基部丛生芽条叶面的绿色部分减小，叶面有趋于黄白色的症状，基部愈伤组织增大。
4.3保持‘花叶’日本醉鱼草观赏特性稳定遗传的微型快繁方法以上增殖培养的结果表明，此醉鱼草的‘花叶’性状主要受6-BA的影响，6-BA浓度高于0.1mg·L-1以上‘花叶’性状发生变异。实验结果如下在6-BA0.1mg·L-1的MS培养基中连续培养10代以上，后代仍然能保持‘花叶’日本醉鱼草观赏特性的稳定遗传。其增殖速率为4n(n为培养代数)，一年一个无菌植株能繁殖出百万与母本一模一样的后代。
4.4生根培养将增殖培养产生的丛芽，选取2~3cm长的顶芽接种于生根培养基MS+IAA0.1+IBA0.05上诱导生根。12d左右芽体开始生根，17d后每芽条可生根4～6条，生根率达95％以上。
4.5移栽当不定根长至0.5～1cm时，在实验室内自然光照条件下不打开瓶盖炼苗2～3d后取出小苗，小心洗去根部的培养基，用1∶1000的多菌灵溶液浸泡15min，栽于温室内以珍珠岩为基质的苗床中，加盖塑料薄膜保湿，一周后揭去薄膜，两周后成活率达97％。移栽成活后的小苗可以转入自然红土∶腐叶土∶珍珠岩＝4∶2∶1(V/V)的混合基质中进行壮苗培养和开花栽培。
本发明对研究叶斑类观赏品种的遗传稳特性和实现该品种资源的离体保存具有理论现实意义，同时为日本花叶醉鱼草的商业化生产奠定了基础。
权利要求
1.‘花叶’日本醉鱼草(Buddlija japonica‘Variegata’)的微型快繁方法，包括启动培养、增殖培养、生根培养、移栽步骤，其特征在于培养条件选择启动培养基MS+6-BA0.05mg·L-1(单位下同)+IBA0.05+NAA0.05；增殖培养基①MS+6-BA0.1+NAA0.1；②MS+6-BA0.2+NAA0.1；③MS+6-BA0.5+NAA0.1；生根培养基MS+IAA0.1+IBA0.05，以上培养基均加入3％蔗糖、0.65％琼脂，PH5.8，培养温度为(23±1)℃，光照时间12hd-1，光照度1000～1500lx，启动培养是切取顶芽和带腋芽的茎段首先用肥皂及自来水清洗，然后用蒸馏水冲洗干净后，在超净台上用70％酒精消毒30s，再用0.1％的HgCl2溶液消毒3～5min，无菌水冲洗5～6次，接种到启动培养基上，经过10～15d的培养，茎段腋芽开始萌动，茎尖明显伸长，30d芽可长成3～5cm的新梢，无丛生芽产生；增殖培养是将启动培养获得的无菌苗在无菌条件下，去掉基部叶片，切成长1cm左右含1个腋芽的茎段或茎尖，分别接种在增殖培养基①②③上；生根培养是将增殖培养产生的丛芽，选取2-3cm长的顶芽接种于生根培养基MS+IAA0.1+IBA0.05上诱导生根，移栽是当不定根长至0.5～1cm时，在实验室内自然光照条件下不打开瓶盖炼苗2～3d后取出小苗，小心洗去根部的培养基，用1∶1000的多菌灵溶液浸泡15min，栽于温室内以珍珠岩为基质的苗床中，加盖塑料薄膜保湿，一周后揭去薄膜，两周移栽成活后的小苗可以转入自然红土∶腐叶土∶珍珠岩＝4∶2∶1(V/V)的混合基质中进行壮苗培养和开花栽培。
2.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于保持‘花叶’日本醉鱼草观赏特性稳定遗传的微型快繁在6-BA0.1mg·L-1的MS培养基中连续培养10代以上。
全文摘要
提供一种‘花叶’日本醉鱼草(Buddleja japonica‘Variegata’)的微型快繁方法，包括启动培养、增殖培养、生根培养、移栽步骤，对研究叶斑类观赏品种的遗传稳特性和实现该品种资源的离体保存具有理论现实意义，同时为日本花叶醉鱼草的商业化生产奠定了基础。
文档编号A01H4/00GK1481675SQ03117810
公开日2004年3月17日 申请日期2003年4月30日 优先权日2003年4月30日
发明者孙卫邦, 曾春霞 申请人:中国科学院昆明植物研究所