专利名称：蛇接骨的组织培养繁殖和栽培技术的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种蛇接骨的组织培养繁殖和栽培技术。
背景技术：
蛇接骨[Gynura Procumbens(Lour)Merr]别名平卧土三七、回筋口干、树三七、石三七、见肿消、羊草跌打、乌风七，为菊科土三七属植物，是中国及东南亚国家民间常用的传统中草药，具有散瘀消肿、消炎止咳作用，对跌打损伤、风湿关节痛、支气管炎、肺结核等许多疾患有显著的疗效，在国外已开始对其药理、植物活性成份进行深入研究，但国内很少有关于蛇接骨药用价值及其药理作用的专门报道，目前的蛇接骨均为野生，有限的野生资源限制了蛇接骨的开发利用和科学实验。
发明内容
本发明的目的就是提供一种蛇接骨组织培养繁殖和栽培技术，为开发利用蛇接骨提供种源材料。
本发明是这样来实现的，采用组织培育方法繁殖蛇接骨种苗，将蛇接骨的叶子切片，在试管里培养产生愈伤组织，再转移诱导培养，分化芽、根，培养成完整的植株，然后将试管苗移栽，具体方法步骤为(1)组织培养繁殖取蛇接骨叶片两片，用自来水冲洗干净，用70％酒精浸1-3分钟，再在0.1％氯化汞溶液中浸渍6-10分钟，表面灭菌后，用无菌水冲洗4-5次，切成1厘米×1厘米小块外植体，接种在试管培养基上(试管培养基为MS+6BA2mg+NAA0.2mg)，经2-4周的培养，叶片边缘切口处出现绿色粒状愈伤组织，将此愈伤组织切块转接到增殖培养基上(增埴培养基为MS+6BA1mg+NAA0.2mg+GA0.05mg)，进行增殖培养15-25天，再转接到分化培养基(MS+6BA1mg+NAA0.2mg+椰汁50ml/L)上，进行分化培养，诱导芽根，培养20-40天，分化出芽、根，培养成完整的小植株，以上接种都是在接种箱内无菌操作。上述的培养基的PH为6.0，并添加琼脂8g/L，蔗糖20g/L，培养温度25±1℃，日照时数10h，光照强度1000LX。
(2)种苗移栽试管苗移栽是组织培养繁殖的重要环节，是由导养转为自养的过程，在试管苗生根移栽前必须打开瓶盖，炼苗3-5天，然后用镊子小心取出试管苗放入18℃的温水中洗去根系周围的培养基，插入预先处理好的培植基质床中，培植基质是沙和腐植土混合，提前一周用0.2％kMnO4消毒。栽植后要浇透水，使基质与根条之间密切结合，有利扎根。
(3)栽培技术蛇接骨有同名异株，产地不同种质资源，所含有效成份有差异，药用效果也有差异。蛇接骨，适宜在热带山区丘陵沙质红土壤中生长，降雨量要求在1200毫米以上，气候湿润，土壤肥沃，无积水的环境生长，基杆匍匐状伸长，基杆紫红色，分枝多，基杆为五钝梭形，叶片呈螺旋状互生，叶片椭圆形，边缘外翻(卷)，叶片表面有细嫩茸毛，茎杆和叶片含暗灰色油脂状物质，粘在手上不易洗脱。蛇接骨冬季要用薄膜棚保温越冬，迂霜雪易受冻害。对水，肥管理和病虫害防治要求比较严，必须环环扣紧，加强田间管理才能夺高产。为保持本蛇接骨与原产地所含药用有效成份相仿，要求对栽培该药草的地块进行土壤改良，使土壤所含的元素物质与原产地土壤的元素物质相近，为此，才能最大限度保持蛇接骨的药用有效成份。
(4)培养基及其制备按照培养基的要求称取大量元素、微量元素、有机成份、铁盐、激素等物质，按程序溶解后再混合搅拌均匀，最后用蒸馏水将容积补到1L，调整PH值至6，加入琼脂加热溶解充分，分装到培养基容器内，将分装好的培养基放入高压锅内灭菌。灭菌条件压强为1.05Mpa，当锅内压力上升到0.5Mpa时，打开放气阀将冷空气放出，放尽冷空气后，当压力表指针上升在1.05Mpa时开始计时保持20分钟恒压，完成高压灭菌后，冷却取出培养基放入接种箱内备用。
本发明采用组织培养方法，繁殖蛇接骨种苗，通过科学的栽培管理，使野生的蛇接骨得以人工驯化，形成规模生产，为开发利用蛇接骨提供种源。
具体实施例方式
实施例一，本发明是采用组织培养的方法，繁殖蛇接骨种苗，具体方法步骤是(1)组织培养繁殖取蛇接骨种苗(种苗原产印度尼西亚，中国科学院赠送永丰县扶贫开发)叶片两片用自来水冲洗干净，用70％酒精浸2分钟，再在0.1％氯化汞溶液中浸渍8分钟，表面灭菌后，用无菌水冲洗5次，切成1厘米×1厘米小块外植体，接种在试管培养基上(试管培养基为MS+6BA2mg+NAA0.2mg)，经3周的培养，叶片边缘切口处出现绿色粒状愈伤组织，将此愈伤组织切块转接到增殖培养基上(增埴培养基为MS+6BA1mg+NAA0.2mg+GA0.05mg)，进行增殖培养20天，再转接到分化培养基(MS+6BA1mg+NAA0.2mg+椰汁50mg/L)上，进行分化培养，诱导芽根，培养30天，分化出芽、根，形成完整的小植株，以上接种都是在接种箱内无菌操作。培养基的PH为6.0，并添加琼脂8g/L，蔗糖20g/L，培养温度25±1℃，日照时数10h，光照强度1000/X。
(2)种苗移栽试管苗移栽是组织培养繁殖的重要环节，也是由导养转为自养的过程，在试管苗生根移栽前打开药盖炼苗5天，然后用镊子小心取出试管苗放入18℃的温水中洗去根系周围的培养基，插入预先处理好的培植基质床中，培植基质是沙和腐植土混合，提前一周用0.2％kMnO4消毒。栽植后要用清水浇透，使基质与根条之间密切结合，有利扎根。
(3)栽培技术蛇接骨有同名异株，产地不同种质资源，所含有效成份有差异，药用效果也有差异。本蛇接骨的特征特性，适宜在热带山区丘陵沙质红土壤中生长，降雨量要求在1200毫米以上，气候湿润，土壤肥沃，无积水的环境生长，基杆匍匐状伸长，基杆紫红色，分枝多，基杆为五钝梭形，叶片呈螺旋状互生，叶片椭圆形，边缘外翻(卷)，叶片表面有细嫩茸毛，茎杆和叶片含暗灰色油脂状物质，粘在手上不易洗脱。在我县种植春季现蕾开花，不成熟种子，花丝脱落似蒲公英花丝随风在空中飘扬。冬季要用薄膜棚保温越冬，迂霜雪易受冻害。对水，肥管理和病虫害防治要求比较严，必须环环扣紧，加强田间管理才能夺高产。为保持本蛇接骨与原产地所含药用有效成份相仿，我们对栽培该药草的地块进行土壤改良，使土壤所含的元素物质与原产地土壤的元素物质相近，最大限度保持蛇接骨的药用有效成份。
(4)培养基及其制备按照培养基的要求称取大量元素、微量元素、有机成份、铁盐、激素等物质，按程序溶解后再混合搅拌均匀，最后用蒸馏水将容积补到1L，调整PH值至6，加入琼脂加热溶解充分，分装到培养基容器内，将分装好的培养基放入高压锅内灭菌。灭菌条件压强为1.05Mpa，当锅内压力上升到0.5Mpa时，打开放气阀将冷空气放出，放尽冷空气后，当压力表指针上升在1.05Mpa时开始计时保持20分钟恒压，完成高压灭菌后，冷却取出培养基放入接种箱内备用。
权利要求
1.一种蛇接骨的组织培养繁殖和栽培技术，其特征是采用组织培养方法繁殖蛇接骨种苗，将蛇接骨的叶子切片，在试管里培养产生愈伤组织，再转移诱导培养，分化芽、根，培养成完整的植株，然后将试管苗移栽，具体方法步骤为(1)组织培养繁殖取蛇接骨种苗叶片两片用水冲洗干净，用70％酒精浸1-3分钟，再在0.1％氯化汞溶液中浸渍6-10分钟，表面灭菌后，用无菌水冲洗4-5次，切成1厘米×1厘米小块外植体，接种在试管培养基上，经2-4周的培养，叶片边缘切口处出现绿色粒状愈伤组织，将此愈伤组织切块转接到增殖培养基上，进行增殖培养15-20天，再转接到分化培养基上，进行分化培养，诱导芽根，培养20-40天，分化出芽、根，形成完整的小植株，接种是在接种箱内无菌操作；(2)种苗移栽在试管苗生根移栽前，打开瓶盖，炼苗3-5天，然后用镊子小心取出试管苗放入18℃的温水中洗去根系周围的培养基，插入预先处理好的培植基质床中，培植基质是沙和腐植土混合，并提前一周用0.2％kMnO4消毒，栽植后浇透水，使基质与根条之间密切结合；(3)栽培技术蛇接骨适宜在热带山区丘陵沙质红土壤中生长，降雨量要求在1200毫米以上，气候湿润，土壤肥沃，无积水的环境生长，冬季要用薄膜棚保温越冬，对水，肥管理和病虫害防治要求严，必须环环扣紧，加强田间管理；(4)培养基及其制备按照培养基的要求称取大量元素、微量元素、有机成份、铁盐、激素等物质，按程序溶解后再混合搅拌均匀，最后用蒸馏水将容积补到1L，调整PH值至6，加入琼脂加热溶解充分，分装到培养基容器内，将分装好的培养基放入高压锅内灭菌，灭菌条件压强为1.05Mpa，当锅内压力上升到0.5Mpa时，打开放气阀将冷空气放出，放尽冷空气后，当压力表指针上升在1.05Mpa时开始计时保持20分钟恒压，完成高压灭菌后，冷却取出培养基放入接种箱内备用。
2.根据权利要求1所述的蛇接骨组织培养繁殖和栽培技术，其特征是试管培养基为MS+6BA2mg+NAA0.2mg，增埴培养基为MS+6BA1mg+NAA0.2mg+GA0.05mg，分化培养基MS+6BA1mg+NAA0.2mg+椰汁50mg/L；培养基的PH为6.0，并添加琼脂8g/L，蔗糖20g/L。
3.根据权利要求1所述的蛇接骨组织培养繁殖和栽培技术，其特征是组织培养的温度25±1℃，日照时数10-12h，光照强度1000LX。
全文摘要
一种蛇接骨的组织培养繁殖和栽培技术，它是将蛇接骨的叶子切片，在试管里培养产生愈伤组织，再转移诱导培养，分化芽、根，培养成完整的植株，然后将试管苗移栽，通过科学的栽培管理，形成规模生产，本发明采用组织培养方法，繁殖蛇接骨种苗，使野生的蛇接骨得以人工驯化，形成规模生产，为开发利用蛇接骨提供种源。
文档编号A01H4/00GK1631112SQ20051000247
公开日2005年6月29日 申请日期2005年1月24日 优先权日2005年1月24日
发明者雷一鸣, 刘小荣 申请人:雷一鸣, 刘小荣