专利名称：大弹涂鱼的人工繁殖方法
技术领域：
本发明涉及一种鱼类的人工繁殖方法，尤其是涉及一种大弹涂鱼的人工繁殖方法。
背景技术：
大弹涂鱼(Boleophthalmus pectinirostris)属于鲈形目(Perciformes)，鰕虎鱼亚目(Gobiodei)，弹涂鱼科(Periophthalmidae)，大弹涂鱼属(Boleophthalmus)。大弹涂鱼分布于中国、朝鲜、日本、缅甸和马来半岛，在中国主要分布于江苏、浙江、福建、台湾、广东和广西沿海。大弹涂鱼栖息于河口港湾潮间带淤泥滩涂及红树林区，属暖水广温广盐性穴居鱼类，其幼鱼和成鱼主要摄食底栖硅藻，具有食物链短、病害少、成活率高、养殖成本低、管理方便、不污染环境以及活鱼耐运输等特点。大弹涂鱼肉味鲜美，营养丰富，具有滋补强身的功效，含有常见的16种氨基酸，其中8种为人体必需的氨基酸(王军，苏永全，厦门大学学报(自然科学版)，1994，33(1)96-99)，深受沿海群众的喜爱。近几年市场需求量很大，是一种具有市场前景的滩涂养殖经济鱼类。
我国养殖的大弹涂鱼苗种一直都是采自天然海区滩涂。但由于近20多年来沿海滩涂大量围垦，大弹涂鱼的栖息地面积不断减少，加上环境污染以及滥捕等原因，自然海区大弹涂鱼野生苗数量逐年减少，菌种价格逐年上涨，苗种的供求矛盾突出，养殖成本增加，严重阻碍了大弹涂鱼养殖业的发展。
为了解决苗种问题，我国台湾地区最早于20世纪70年代开展大弹涂鱼人工繁殖和育苗试验，以后中断研究(廖一久，中国水产(台湾)，1986，39823-27)。张其永等于20世纪80年代进行大弹涂鱼人工繁殖和育苗研究，利用潮间带的亲鱼经激素催产后人工授精，培育出7000尾达到放养规格的苗种(张其永，洪万树，戴庆年等，厦门大学学报(自然科学版)，1987，26(3)366-373；张其永，洪万树，戴庆年等，Aquaculture，1989，83375-385)。20世纪90年代初，倪勇等进行大弹涂鱼人工繁殖和育苗中间试验，培育出7000多尾鱼苗(倪勇，张其永，陈德富等，海洋渔业，1993，15(2)56-62)。在过去20年里，大弹涂鱼的人工繁殖和育苗技术基本停留在一个水平上，未能取得明显的进展。其主要原因是在亲鱼选择、催产方法、人工授精、受精卵孵化以及诱导产卵等方面仍然存在一些问题。
发明内容
本发明的目的在于针对已有大弹涂鱼的人工繁殖和育苗技术所存在的问题，提供一种利用大弹涂鱼生殖的生理和生态特性，采用内分泌调控和模拟生殖环境的方法，提高大弹涂鱼亲鱼的催熟率、产卵量和受精率的人工繁殖方法。
本发明的步骤为1)亲鱼催熟在生殖季节选取腹部膨大、尿殖乳突圆形外突呈鲜红色的雌性亲鱼和尿殖乳突呈三角形突起的雄性亲鱼，采用激素注射催熟，所说的激素为促黄体素释放激素类似物(LHRH-A3)和人绒毛膜促性腺激素(HCG)中的一种或二种混合物，每次注射剂量为LHRH-A30.5～1μg+HCG 100～150IU/尾，或LHRH-A31.0～2.0μg/尾，或HCG 100～150IU/尾，雌、雄亲鱼同等剂量，注射部位为胸鳍基部，催熟效果良好；2)性信息素诱导亲鱼产卵经激素催熟的亲鱼，按雌∶雄＝1∶1配对放入产卵池内，产卵池底部设产卵管道，在产卵管道内吊挂性类固醇激素17α-羟孕酮(17α-P)或17α，20β双羟孕酮(17α，20β-P)等性信息素，诱导亲鱼进入产卵管道内交配产卵，实现生殖同步化，提高了雌鱼的产卵率、产卵量和成熟卵的受精率；3)人工授精亲鱼经激素催熟后，采用半干法进行人工授精，人工授精前先挤出雌鱼卵子检查其成熟度，选取具有以下特征的成熟卵用于人工授精(1)卵子圆形而透明；(2)多油球且集中发亮；(3)卵膜外侧的粘着丝发达；授精时解剖雌鱼取出卵巢，撕开卵巢膜，分散卵子；同时解剖雄鱼取出精巢和贮精囊囊，剪成小块，置于研钵内研磨，加少许海水激活精子，然后将精液浇于卵群上，搅动让其充分受精，然后以清洁海水洗涤3～4次，移入孵化容器中孵化。
本发明通过选择亲鱼催产所需的激素种类、适宜的剂量以及有效的催产方法，同时利用大弹涂鱼生殖的生理和生态特性，选择能够获得高受精率的成熟卵，并采用内分泌调控和模拟生殖环境的方法，以性信息素诱导亲鱼交配产卵以及采用人工受精等方法，大大提高了亲鱼的催熟率、产卵量和受精率，使得大弹涂鱼人工繁殖技术取得了突破性进展。
具体实施例方式
下面通过实施例对本发明作详细说明。
实施例1生殖季节选取健壮活泼、性腺发育至第IV期的养殖亲鱼。亲鱼体长10.5～13.0cm，体重17.3～32.0g。雌性亲鱼腹部膨大，尿殖乳突圆形外突呈鲜红色；雄性亲鱼尿殖乳突呈三角形突起。亲鱼年龄为1～2龄。产卵池面积10m2/口，池深1.5m，池底和池壁铺设黑色瓷砖，避免亲鱼擦伤。池面用遮阳网遮光，保持弱光环境。产卵管道由陶瓷材料制成，管道长50cm，宽9.5cm，高7.5cm。分为上下2部分，上半部内壁粗糙，有利于受精卵附着；下半部内壁涂釉光滑，有利于亲鱼的活动和交配产卵。管道上下2部分可分开或组合，方便检查亲鱼产卵情况。
1、亲鱼催熟分3组做对比实验，每组雌鱼30尾。第1组以LHRH-A3和HCG(购自宁波市激素制品有限公司)两种激素混合注射雌、雄亲鱼，分两次胸腔注射，每次注射剂量为LHRH-A31μg+HCG 100IU，雌、雄亲鱼注射同等剂量，两次注射间隔48h。第2组和第3组分别单独注射LHRH-A31μg或HCG100IU，只注射1次。结果表明(见表1)，采用混合激素和2次注射的方法，其催熟率均明显高于单种激素1次注射。
表1不同注射方法对大弹涂鱼雌鱼的催熟效果
2、性信息素诱导产卵17α-P和17α，20β-P(购自美国Sigma公司)经甲醇溶解，分别取100μg装入塑料管内(2mL)，氮气吹干后加生理盐水至1mL，管口塞少许棉花，吊挂在产卵管道上半部内表面，激素经棉花渗透到管道内的水体中。
经激素催熟的亲鱼，按雌、雄1∶1配对放入产卵池内。亲鱼入池后48h检查产卵管道内亲鱼的产卵情况，以面积法计算产卵量，胚胎发育至原肠期计算受精率。诱导产卵期间产卵池上方覆盖双层遮阳网，保持弱光环境，水体不充气，水温25.0-27.0℃，盐度15-20。结果表明(见表2)，管道内吊挂性信息素的实验组，其管道产卵率、总产卵量和平均受精率均显著高于对照组。
表2性信息素诱导大弹涂鱼产卵结果
3、人工授精亲鱼注射激素催熟后，雌鱼腹部膨大，此时就可挑选卵子发育符合受精标准的雌亲鱼用于人工授精。首先挤出雌鱼卵子检查其成熟度，如果卵子具有圆形而透明、多油球且集中发亮以及粘着丝发达等特征，就开始进行人工授精。
人工授精操作方法一边解剖雌鱼，选取符合受精标准的成熟卵置于大规格的培养皿(直径12cm)内；另一边解剖成熟雄鱼，取出精巢和贮精囊，放入研钵内，用剪刀切成小块，经研磨后加入少许海水激活精子。将激活后的精子浇在卵群上，然后用羽毛轻轻搅动卵群，使其充分受精。3-5min后用清洁海水洗涤2-3次，除去多余精子和杂质，将受精卵移入孵化容器中孵化。
将雌鱼卵子的成熟度分为3类进行人工授精。第1类为卵子圆形透明、多油球且集中发亮、粘着丝发达；第2类为卵子圆形透明、多油球但分散微亮，粘着丝中等发达；第3类为卵子圆形稍透明、多油球但分散微亮，粘着丝不发达。各类卵子的亲鱼数为20尾。实验结果表明，第1类卵子的平均受精率为76.6％，第2类为42.0％，第3类为4.9％。第1类卵子的平均受精率均显著高于第2类和第3类。
实施例2生殖季节选取健壮活泼、性腺发育至第IV期的野生亲鱼。亲鱼体长10.0-12.2cm，体重17.0-28.5g。雌性亲鱼腹部膨大，尿殖乳突圆形外突呈鲜红色；雄性亲鱼尿殖乳突呈三角形突起。亲鱼年龄为1-2龄。产卵池面积5m2/口，池深1.5m，池底和池壁铺设黑色瓷砖，避免亲鱼擦伤。池面用遮阳网遮光，保持弱光环境。产卵管道同实施例1。
1、亲鱼催熟同实施例1，分3组做对比实验，结果见表3，采用混合激素2次注射的催熟率可以达到65％，而单种激素1次注射的催熟率仅为45.0％(LHRH-A3)或40.0％(HCG)。
表3不同注射方法对大弹涂鱼雌鱼的催熟效果
2、信息素诱导产卵水温26.5～29.0℃。其他同实施例1。结果见表4，管道内吊挂17α-P或17α，20β-P的实验组，其管道产卵率、总产卵量和平均受精率分别显著高于对照组。
表4性信息素诱导大弹涂鱼产卵结果
3、人工授精 同实施例1，第1类卵子的平均受精率为86.5％，第2类为52.4％，第3类为6.1％。第1类卵子的平均受精率均显著高于第2类和第3类。各类卵子的亲鱼数为25尾。
实施例3生殖季节选取健壮活泼、性腺发育至第IV期的滩涂围网养殖亲鱼。亲鱼体长10.2-12.8cm，体重17.1-31.0g。雌性亲鱼腹部膨大，尿殖乳突圆形外突呈鲜红色；雄性亲鱼尿殖乳突呈三角形突起。亲鱼年龄为1-2龄。产卵池面积10m2/口，池深1.5m，池底和池壁铺设黑色瓷砖，避免亲鱼擦伤。池面用遮阳网遮光，保持弱光环境。产卵管道同实施例1。
1、亲鱼催熟；同实施例1，分3组做对比实验，结果见表5，采用混合激素2次注射的催熟率可以达到70.0％，而单种激素1次注射的催熟率仅为43.3％(LHRH-A3)或40.0％(HCG)。
表5不同注射方法对大弹涂鱼雌鱼的催熟效果
2、性信息素诱导产卵水温27.5～30.5℃，其他同实施例1，从表6可以看出，管道内吊挂17α-P或17α，20β-P的实验组，其管道产卵率、总产卵量和平均受精率分别显著高于对照组(表6)。
表6性信息素诱导大弹涂鱼产卵结果
3、人工授精同实施例1。第1类卵子的平均受精率为81.4％，第2类为45.8％，第3类为5.2％。第1类卵子的平均受精率均显著高于第2类和第3类。各类卵子的亲鱼数为20尾。
权利要求
1.大弹涂鱼的人工繁殖方法，其特征在于其步骤为1)亲鱼催熟生殖季节选取腹部膨大、尿殖乳突圆形外突呈鲜红色的雌性亲鱼和尿殖乳突呈三角形突起的雄性亲鱼，采用激素注射催熟，所说的激素为促黄体素释放激素类似物LHRH-A3和人绒毛膜促性腺激素HCG中的一种或二种混合物，每次注射剂量为LHRH-A31μg+HCG 100IU/尾，或LHRH-A31.0～2.0μg/尾，或HCG 100～150IU/尾，雌、雄亲鱼同等剂量，注射部位为胸鳍基部；2)性信息素诱导亲鱼产卵经激素催熟的亲鱼，按雌∶雄＝1∶1配对放入产卵池内，产卵池底部设产卵管道，在产卵管道内吊挂性类固醇激素17α-羟孕酮17α-P或17α，20β双羟孕酮17α，20β-P性信息素，诱导亲鱼进入产卵管道内交配产卵；3)人工授精亲鱼经激素催熟后，采用半干法进行人工授精，人工授精前先挤出雌鱼卵子检查其成熟度，选取具有以下特征的成熟卵用于人工授精a卵子圆形而透明；b多油球且集中发亮；c卵膜外侧的粘着丝发达；授精时解剖雌鱼取出卵巢，撕开卵巢膜，分散卵子；同时解剖雄鱼取出精巢和贮精囊囊，剪成小块，置于研钵内研磨，加少许海水激活精子，然后将精液浇于卵群上，搅动让其充分受精，然后以清洁海水洗涤3～4次，移入孵化容器中孵化。
2.如权利要求1所述的大弹涂鱼的人工繁殖方法，其特征在于产卵池池底和池壁铺设黑色瓷砖，池面用遮阳网遮光，保持弱光环境。
3.如权利要求1所述的大弹涂鱼的人工繁殖方法，其特征在于产卵管道由陶瓷材料制成，分为上下2部分，上半部内壁粗糙，下半部内壁涂釉光滑。
4.如权利要求3所述的大弹涂鱼的人工繁殖方法，其特征在于产卵管道上下2部分分开或组合。
全文摘要
大弹涂鱼的人工繁殖方法涉及一种鱼类的人工繁殖方法，尤其是涉及一种大弹涂鱼的人工繁殖方法。提供一种利用大弹涂鱼生殖的生理和生态特性，采用内分泌调控和模拟生殖环境的方法，提高大弹涂鱼亲鱼的催熟率、产卵量和受精率的人工繁殖方法。步骤为采用激素注射催熟亲鱼，所说的激素为促黄体素释放激素类似物(LHRH－A
文档编号A01K61/00GK1751666SQ20051011836
公开日2006年3月29日 申请日期2005年10月28日 优先权日2005年10月28日
发明者洪万树, 张其永, 蔡珠金, 江国强, 陈仕玺, 叶启旺 申请人:厦门大学