专利名称：兔眼蓝莓组织培养方法
技术领域：
本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及兔眼蓝莓的植物组织培养方法。
二研究背景兔眼蓝莓是果树中的珍品，风味独特，可鲜食，也可加工各种兔眼蓝莓系列食品，还可以用作提取花色素的原料。其果实中的花色素为一种水溶性生物黄酮，具有预防近视、增强心脏功能、抗癌、抗心血管疾病作用。国际粮农组织已将其列为人类五大保健食品之一。传统扦插繁殖方法存在着生根难、繁殖系数低的缺限。目前，国内外关于兔眼蓝莓组织培养的研究还不系统，高效繁育体系也很缺乏。
三
发明内容
本发明需要解决的问题是提供一种兔眼蓝莓的高效组织培养方法。技术方案为1.诱导将兔眼蓝莓茎段接种在诱导培养基上。该培养基是在WPM常规培养基中添加了10毫克/升的玉米素。培养1个月后，待培养物长出新梢后，即开始下一个阶段。
2.增殖将第1步中所得的新梢剪下转移到增殖培养基。该培养基是在WPM常规培养基中添加了5毫克/升的玉米素。培养1个月后，再用同样方法继代3次。然后进入第三步。
3.生根将第2步所得的小苗，转移到常规生根培养基中。一个月后，小苗基部出现根系。再过15天后，进入下一步。
4.炼苗将第3步得到的生根苗栽在炼苗基质中。该基质组成物为草炭和石英砂，草炭和石英砂比例为1-3∶1。按照一般炼苗要求进行管理后即可获得大量成品苗。
本发明采用了三种特殊基质，即诱导培养基、增殖培养基和炼苗基质。诱导培养基添加的玉米素浓度是10毫克/升；增殖培养基添加的玉米素浓度是5毫克/升；炼苗基质是1-3∶1的草炭和石英砂组合。
采用本方法，在诱导阶段一般3天就可以看到芽子萌动，7天即有70％的芽子萌发。20天后，新梢长度可达0.8-1.2厘米，叶片数量6-8片，大小近乎田间正常叶的1/3(图1)。同时，在茎段和叶片上会出现明显的白色粉状物，叶色黄绿，鲜嫩，茎段底部膨大。在增殖阶段，4天即可看到再生苗开始生长和分化现象，而且分化出来的新稍也明显粗壮，增殖率可达到12倍以上(图2)。在炼苗阶段，成活率最高可达99％，一个月后的生长量达1.2厘米以上，新增叶片2-4片(图3)。
本发明的有益效果是1.显著提高了外植体的萌芽率和大于1厘米的枝条数；2.使新梢增殖率达到了12倍以上；3.幼苗的成活率达到了99％。
本发明解决了兔眼蓝莓传统扦插方法生根难、繁殖系数低的难题，为兔眼蓝莓的开发利用提供了一种工业化生产优质成品苗的方法。
本发明所述兔眼蓝莓可开发成兔眼蓝莓果汁、兔眼蓝莓果酒、兔眼蓝莓果酱、兔眼蓝莓保健食品，以及制备抗肿瘤、治疗心血管疾病的药物。
四
图1诱导培养基上生长的兔眼蓝莓茎段图2增殖培养基上生长的兔眼蓝莓新梢图3炼苗基质中的兔眼蓝莓成活苗五具体实施方式
1.取材与消毒田间采集未木质化的新梢，清水冲洗2h后，酒精消毒30秒，无菌水冲洗3次。再用0.1％升汞再消毒10分钟，无菌水冲洗3次。剪去叶片大小的2/3后，将枝条剪成1-2个芽的节段。
2.诱导培养在超净工作台上，将剪好的茎段接种在诱导培养基上。该培养基组成为WPM+10毫克/升玉米素。
3.增殖培养30天后可以获得长度在1厘米以上的大量新梢。将长出的新梢移接在增殖培养基上开始增殖。增殖培养基的组成为WPM+5毫克/升的玉米素。继代3遍。
4.生根将上一步获得的茎段取出，接种到生根培养基上进行生根培养。所用配方为1/2 WPM+0.1毫克/升的吲哚乙酸。
5.炼苗提前3天打开瓶盖。移栽时，用镊子小心取出幼苗，洗干净。选择生根的幼苗并移栽到草炭与石英砂之比为1-3∶1的基质中，在完全封闭的塑料棚中于组培室内度过15天。其间保持棚内湿度100％。之后移入田间，并在密封的塑料棚中保持湿度80％、透光度70％情况下度过5天，开始放风。15天后，揭去棚膜。
权利要求
1，兔眼蓝莓组织培养方法，其特征在于由以下三个步骤组成(1)诱导将兔眼蓝莓茎段接种在诱导培养基上，该培养基是在WPM常规培养基中添加了10毫克/升的玉米素，培养1个月后，待培养物长出新梢后，即开始下一个阶段；(2)增殖将第1步中所得的新梢剪下转移到增殖培养基上进行增殖，该培养基是在WPM常规培养基中添加了5毫克/升的玉米素，培养1个月后，再将新梢继续增殖，获得大量新梢后进入第三步；(3)生根将第2步所得的新梢，转移到常规生根培养基中，一个月后，新梢基部出现根系，再过15天，进行炼苗。
2，根据权利要求1培养方法培养出的生根苗的炼苗方法，其特征在于将权利要求1培养出的生根苗移栽在炼苗基质中进行常规管理，该炼苗基质的组成物为草炭和石英砂，比例为1-3∶1。
3，根据权利要求1培养方法培养的兔眼蓝莓在制备兔眼蓝莓果汁、兔眼蓝莓果酒，兔眼蓝莓果酱以及兔眼蓝莓保健品中应用。
4，根据权利要求1培养方法培养的兔眼蓝莓在制备治疗肿瘤、心血管疾病药物中的应用。
全文摘要
本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种兔眼蓝莓高效繁殖方法。该方法分为诱导、增殖、生根、炼苗四个阶段。该方法解决了兔眼蓝莓茎段新梢高效诱导、快速增殖、稳定成活的重要技术问题，达到了高效诱导外植体萌芽、快速进行新梢增殖和高质量保证幼苗成活的目的，提供了一种工业化生产优质成品苗的新方法。
文档编号A01G31/00GK101069487SQ20071002450
公开日2007年11月14日 申请日期2007年6月20日 优先权日2007年6月20日
发明者张长青, 朱土农 申请人:金陵科技学院