专利名称：暗纹东方鲀家系无毒化养殖方法
技术领域：
发明涉及一种河豚鱼的无毒化养殖方法，是一种暗纹东方飩家系无毒化养殖方 法，是一种暗纹东方飩家系商品鱼无毒化健康安全养殖方法。
背景技术：
河豚属飩形目；飩亚目；飩科；东方飩属，国内共有19种，常见的种类有暗纹东方 飩、菊黄东方飩、双斑东方飩、红鳍东方飩、假睛东方飩等种类，野生河豚是一类剧毒鱼类， 在食用方面受到严格的限制。已有研究结果表明，河豚，尤其是暗纹东方飩在一定条件下能够进行无害化养殖 上海海洋大学有毒鱼类专家伍汉霖教授认为“飩毒鱼类的肌肉多属无毒或仅含弱毒，单吃 鱼肉大致上可以认为是安全的”，“暗纹东方飩……肌肉、血液和精巢无毒，鲜食时须将内 脏、血液、皮肤、鱼眼除去，洗净后长时间蒸煮，方可食用”。南京师大河豚鱼专家华元渝教授 认为“暗纹东方飩体内河豚毒素的含量与海水生活环境及其饵料有关，经过几代完全淡水 环境的培育，并饲以清洁的无毒源饵料，才有可能生产出毒性一代比一代低的、可供安全食 用的暗纹东方飩”。中国科学院资深院士刘建康老先生评价暗纹东方飩是“一种很有文化特 色、很有经济价值、又有很高知名度的鱼”，他为此提出了四点希望“希望进一步的开发研究 能变河豚毒素为宝；希望暗纹东方飩养殖业的发展能成为水产支柱产业；希望越来越多的 国内外友人能品尝到美味的暗纹东方飩；希望“拼死吃河豚”成为历史，并祝愿河豚饮食文 化时代流芳。”暗纹东方飩是河豚中的一种，已经有近20年的养殖历史，业界仍然没有培育出 完全无毒的暗纹东方飩。国内外涉及暗纹东方飩的授权专利只有人工繁殖CN98111600.0 和控毒养殖CN0213814. 5两项专利，暗纹东方飩家系选育ZL2006100245220和飩系选育 ZL2006100245216等已经申请的专利侧重于系谱的建立和选择优良的家系品种。本专利与 控毒养殖CN0213814. 5专利方法不一样，要求的权利不一样。随着科学的发展和进步，最新研究结果表明河豚毒素是外源性的，毒素来源于外 界环境中食物和海洋中的产毒细菌，河豚自己不能代谢产生毒素。野生暗纹东方飩的毒素 来源于与其共生的海洋微生物和摄食的含毒素海洋生物毒素，是被动积累的，是来源于外 界的，本身不能合成和代谢产生。通过杀灭养殖环境中产毒细菌，投喂不含河豚毒素的食 物，河豚毒素无法产生和积累，完全有可能能够培育出没有河豚毒素的暗纹东方飩家系商 品鱼，从而可能使养殖的暗纹东方飩家系真正实现无毒化养殖，可能使养殖的暗纹东方飩 家系商品鱼达到食品新资源的要求，符合无公害安全食用水产品的生产标准。抗菌肽是广泛存在于细菌、植物、软体动物、两栖动物、鱼类、鸟类和哺乳动物体内 的一类小分子多肽，由20 60个氨基酸残基组成，具有广谱杀菌作用。同抗生素的单一 作用位点不同，抗菌肽是作用于细菌的整个细胞膜，使膜去极化或者形成“孔洞”，造成细胞 内含物外流或者肽分子进入细胞内部与DNA、RNA等靶标作用，进而杀死细菌。除高效杀菌 作用外，抗菌肽还具有明显的杀伤真菌、病毒和原虫的作用，并能选择性杀伤肿瘤细胞而不
3破坏正常细胞，因此是生物体天然免疫防御系统的重要组成部分。由于抗菌肽本身是来源 于养殖动物自身的一种小蛋白，动物对其的排异反应很低，而且杀菌作用发挥到一定的程 度之后，动物体内的很多蛋白酶就把抗菌肽降解了，检测不到残留物质，对环境没有任何污 染，是一种无毒、无害、绿色环保的产品。同时，抗菌肽还具有不易出现耐药性突变、分子量 小、热稳定性好、水溶性好、作用迅速等特点。它在水产养殖业中的推广应用，对提高鱼体的 抗病力，减少甚至杜绝抗生素类药物的使用，维持鱼类健康，实现水产养殖业的可持续发展 具有重要的现实意义。抗菌多肽是浙江清华长三角研究院与瑞鑫百奥生物科技(深圳)有限公司合作开 发的新一代绿色饲料添加剂。本添加剂应用DNA重组技术，将蟾蜍中的四种抗菌肽、两种 防御素的基因在可食用面包酵母菌中高效表达，并通过制粒、包被等后加工技术制成的高 科技生物制品。防御素能有效抑制病毒，抗菌肽对大肠杆菌、布氏杆菌、绿脓杆菌、链球菌、 葡萄球菌、霉菌等均具有很强的杀灭能力。本品在养殖过程中对动物的疾病预防和保健方 面具有明显效果，高于传统抗生素，无残留，无副作用。本饲料添加剂在甲鱼、对虾、鲟鱼、 鳗鱼、金钱龟、河豚等水产养殖中可明显降低死亡率、提高生长速度，加快出栏率，降低料肉 比。冬虫夏草(学名=Cordyc印s sinensis)，又名中华虫草，又称为夏草冬虫，简称虫 草。是中国传统的名贵中药材，它是由肉座菌目麦角菌科虫草属的冬虫夏草菌寄生于高山 草甸土中的蝠蛾幼虫，使幼虫僵化，在适宜条件下，夏季由僵虫头端抽生出长棒状的子座而 形成(即冬虫夏草菌的子实体与僵虫菌核(幼虫尸体)构成的复合体)。含丰富生物活性 成分，提高免疫力、抗病毒等方面的作用早已有大量医学试验证明，是一种全新的天然绿色 饲料添加剂，虫草培养基是实验室培养虫草的下脚料，营养成分和次生代谢产物和虫草非 常接近，功效和作用基本相同，开发虫草培养基饲料添加剂产品是非常有意义和具有市场 前景的事情。判断河豚鱼是否有毒的常用方法是生物检验检测法，通常的做法是投喂或勻浆液 注射小白鼠试验，小白鼠死亡就证明该产品或商品带毒。我们也运用此方法来鉴别我们的 产品是否带毒。
发明内容
本发明的目的在于提供一种能够在的淡水环境养殖条件下，有效控制暗纹东方飩 家系商品鱼产生和积累河豚毒素的养殖方法，使暗纹东方飩家系商品鱼达到和四大家鱼一 样安全食用的程度。判断商品鱼全鱼和通常认为的剧毒器官如肝脏和卵巢是否带毒的方法是商品 鱼全鱼和通常认为的剧毒器官如肝脏和卵巢及其勻浆液投喂或注射小鼠、猫、狗、鸡看是 否有中毒反应，以及常规煮熟的全鱼和通常认为的剧毒器官如肝脏和卵巢及其勻浆液投 喂或注射小鼠、猫、狗、鸡看是否有中毒反应；实验动物均没有死亡并且没有不正常行为判 定为无毒。暗纹东方飩家系无毒化养殖的原理是杜绝毒素的遗传来源，切断来源于外界环 境和产毒细菌的河豚毒素，防止通过食物链和共生产毒细菌积聚在河豚体内，通过标准化 养殖和净化处理，使暗纹东方飩家系无毒化养殖小白鼠商品鱼完全不带河豚毒素。
本发明的技术解决方案是一种暗纹东方飩家系无毒化养殖方法，其特征包括下 列步骤在养殖过程中加强无毒化鉴别，从源头确保养殖苗种不带河豚毒素，防止产毒微生 物共生，控制养殖环境产毒微生物生存，防止饵料带入毒素，最后在商品鱼上市前进行提高 商品鱼品质的净化处理，每个阶段验证当批次商品鱼的无毒特性，最终确保养殖的暗纹东 方飩家系在性成熟时，卵巢和肝脏也无毒，结果证实暗纹东方飩商品鱼全鱼无毒。本案还保 护以任何规格暗纹东方飩的无毒化生物体为基础进行繁殖和养殖行为。所述加强无毒化鉴别是指判断商品鱼全鱼和通常认为的剧毒器官如肝脏和卵巢 是否带毒的方法在养殖各阶段的大小不同规格的商品鱼全鱼和通常认为的剧毒器如肝 脏和卵巢及其勻浆液投喂或注射小鼠、猫、狗、鸡看是否有中毒反应，以及常规煮熟的全鱼 和通常认为的剧毒器官如肝脏和卵巢及其勻浆液投喂或注射小鼠、猫、狗、鸡看是否有中 毒反应；实验动物均没有死亡并且没有不正常表现判定为无毒。所述从源头控制养殖苗种的来源是指养殖过程中使用不带毒素的苗种，杜绝毒素 的遗传来源，其方法是人工繁殖选用的母本和父本都来源于淡水养殖群体，他们没有亲缘 关系，每批受精卵都留一部分用于动物喂养试验，验证该批受精卵不带毒素，该批另一部分 受精卵孵化培育出鱼苗供养殖使用。逐代强化选择性无毒化繁殖，稳定无毒性状，选育出不 含河豚毒素的苗种，杜绝养殖群体由遗传因素携带河豚毒素的可能。所述共生产毒微生物调控方法是指抗菌多肽能有效降低环境微生物的含量；虫 草培养基是实验室培养虫草的下脚料，具有提高免疫力、抗病毒等方面的作用；在饲料中添 加防止产毒微生物在鱼体肠道共生的添加剂。抗菌肽锌或抗菌多肽添加剂添加量百万分之 一，每半月添加两天；虫草培养基添加量百万分之二，每半月添加两天。所述防止养殖环境需盐产毒细菌生存的方法是指人工养殖使用水源保护区域内 淡水，符合渔业用水标准，杜绝养殖水环境中需盐产毒细菌繁殖生长；每隔半月定期消毒杀 菌，防止养殖水环境中需盐产毒细菌生存。所述防止饵料带入毒素的方法是指投喂不含毒素的无公害全价配合饲料，防止 饵料带入毒素，切断由食物链带入河豚毒素的途径。所述提高暗纹东方飩无毒家系商品鱼品质的方法是指稳定养殖条件，规范渔药 的使用，防止药物残留的污染效应；在水泥池中应用饮用水源流水净化处理7-10天，投喂 现剖新鲜淡水野生蛘肉，提高暗纹东方飩无毒家系商品鱼品质。所述暗纹东方飩无毒家系商品鱼验证方法是指同一淡水池塘养殖的商品鱼，随 机取样20%剖杀加工，废弃物如肝脏和/或卵巢用于动物喂养实验验证群体不含河豚毒 素，真正做到大样本加工废弃物动物喂养实验验证群体不含河豚毒素。所述本案扩展保护以无毒化暗纹东方飩的任何规格生物体为基础进行养殖和繁 殖的行为，经过暗纹东方飩家系无毒化养殖方法培育的母本和父本继续进行常规的人工繁 殖和常规的淡水环境养殖的行为。所述本案扩展保护还包括以任何规格暗纹东方飩无毒化生物体为基础，通过养殖 和繁殖，逐代强化无毒化性状，稳定无毒性状，选育出不含河豚毒素的苗种，开发出暗纹东 方飩养殖家系无毒化养殖产品。这类延伸的方法也受到本案方法的保护。
具体实施例方式一种暗纹东方飩家系无毒化养殖方法，其特征包括下列步骤在养殖过程中加强 无毒化鉴别，通过从源头控制养殖苗种的来源，防止产毒微生物在暗纹东方飩肠道共生，控 制养殖环境中产毒微生物生存，防止饵料带入毒素，最后在商品鱼上市前进行提高商品鱼 品质的净化处理，验证当批次商品鱼的无毒特性，最终确保养殖的暗纹东方飩家系在性成 熟时，性腺和肝脏也无毒，结果证实暗纹东方飩商品鱼全鱼无毒。本案还保护以任何规格暗 纹东方飩的无毒化生物体为基础进行繁殖和养殖行为。一种暗纹东方飩家系无毒化养殖方法所述加强无毒化鉴别是指在无毒化养殖的 各个阶段，加强生物体的无毒化判定。判断商品鱼全鱼和通常认为的剧毒器官如肝脏和卵 巢是否带毒的方法商品鱼全鱼和通常认为的剧毒器官如肝脏和卵巢及其勻浆液投喂或 注射小鼠、猫、狗、鸡看是否有中毒反应，以及常规煮熟的全鱼和通常认为的剧毒器官如肝 脏和卵巢及其勻浆液投喂或注射小鼠、猫、狗、鸡看是否有中毒反应；实验动物均没有死亡 并且没有不正常行为判定为无毒。一种暗纹东方飩家系无毒化养殖方法所述从源头控制养殖苗种的来源是指养殖 过程中使用不带毒素的苗种，杜绝毒素的遗传来源的方法在人工繁殖时选用的母本和父 本都来源于淡水环境养殖的养殖群体，经控温控盐度等生理生态学方法处理，促进性腺发 育成熟，每批受精卵都留一部分用于无毒化鉴别的动物喂养试验，验证该批受精卵不带毒 素，该批另一部分受精卵孵化培育出鱼苗供养殖使用。以任何规格暗纹东方飩无毒化生物 体为基础，通过养殖和繁殖，逐代强化无毒化性状，稳定无毒性状，选育出不含河豚毒素的 苗种，开发无毒暗纹东方飩养殖产业，杜绝由遗传携带河豚毒素的可能。一种暗纹东方飩家系无毒化养殖方法所述抗菌多肽能有效降低环境微生物的含 量；虫草培养基是实验室培养虫草的下脚料，具有提高免疫力、抗病毒等方面的作用；在养 殖的各阶段，喂养的全价饲料中，添加防止产毒微生物在鱼体肠道共生的添加剂。在养殖过 程中，投喂全价人工饲料中添加抗菌肽锌或抗菌多肽添加剂，添加量百万分之一，每半月添 加两天；在饲料中添加虫草培养基，添加量百万分之二，每半月添加两天。—种暗纹东方飩家系无毒化养殖方法所述防止养殖环境需盐产毒细菌生存的方 法是指使用水源保护区域内淡水，杜绝养殖水环境中需盐产毒细菌繁殖生长；定期消毒 杀菌，防止养殖水环境中需盐产毒细菌生存。投喂不含毒素的无公害全价配合饲料如甲鱼 全价饲料、鳗鱼全价饲料，切断由食物链导入河豚毒素的途径。苗种培育时用禽蛋黄作为开 口饵料，丰年虫幼体作为后续饵料，在淡水条件下，于水泥池中工厂化控温20_25°C培育暗 纹东方飩家系的仔鱼，用淡水饵料生物如桡足类、枝角类、红虫培育暗纹东方飩家系的稚幼 鱼。暗纹东方飩家系的第一年养殖为鱼种养殖，鱼种养殖是在淡水池塘或淡水网箱环境里 养殖，饵料为不含河豚毒素的甲鱼全价饲料或鳗鱼全价饲料，在养殖过程中，投喂全价人工 饲料中添加抗菌肽锌或抗菌多肽添加剂，添加量百万分之一，每半月添加两天；在饲料中添 加虫草培养基，添加量百万分之二，每半月添加两天；养殖过程中每半月用杀菌渔药如溴 氯海因、二溴海因、二氧化氯、碘制剂、氯制剂预防细菌病同时杀灭能够产生河豚毒素的细 菌等微生物，防止产毒微生物与暗纹东方飩家系鱼种共生，阻止河豚毒素的产生和积累。鱼 种越冬时用日晒海盐配制人工海水，配置方法为直接在淡水中加入日晒海盐，盐度5-10%。， 保持冬季最低水温9°C以上，越冬过程中每半月用杀菌渔药预防细菌病同时杀灭能够产生河豚毒素的细菌等微生物，防止产毒微生物与暗纹东方飩家系鱼种共生，阻止河豚毒素的 产生和积累。暗纹东方飩家系的第二年养殖为成鱼养殖，在淡水池塘或淡水网箱环境里养 殖，饵料为不含河豚毒素的甲鱼全价饲料或鳗鱼全价饲料，在养殖过程中，投喂全价人工饲 料中添加抗菌肽锌或抗菌多肽添加剂，添加量百万分之一，每半月添加两天；在饲料中添加 虫草培养基，添加量百万分之二，每半月添加两天；养殖过程中每半月用杀菌渔药预防细菌 病同时杀灭能够产生河豚毒素的细菌等微生物，防止产毒微生物与暗纹东方飩家系鱼种共 生，阻止河豚毒素的产生和积累。每天投喂2-3次，以1-1. 5小时吃完为投喂标准。一种暗纹东方飩家系无毒化养殖方法所述提高暗纹东方飩无毒家系商品鱼品质 的方法是指稳定养殖条件，规范渔药的使用，防止药物残留的污染效应；在饮用水源水泥 池流水净化处理7-10天，将鱼种和商品鱼转移到飩淡水水泥池中暂养和净化处理，投喂现 剖新鲜淡水野生蛘肉，去除泥腥味，提高商品鱼品质。一种暗纹东方飩家系无毒化养殖方法所述暗纹东方飩无毒家系商品鱼验证方法 是指同一淡水池塘养殖的商品鱼，随机取样20%剖杀加工，废弃物如肝脏和/或卵巢用于 动物喂养实验验证群体不含河豚毒素，真正做到大样本加工废弃物动物喂养实验验证暗纹 东方飩家系无毒化养殖群体不含河豚毒素。本案扩展保护以无毒化暗纹东方飩的任何规格生物体为基础进行养殖繁殖的行 为，经过暗纹东方飩家系无毒化养殖方法培育的母本和父本继续进行常规的人工繁殖和常 规的淡水环境养殖的行为。本案扩展保护还包括本技术领域人员，以任何规格暗纹东方飩无毒化生物体为基 础，通过养殖和繁殖，逐代强化无毒化性状，稳定无毒性状，选育出不含河豚毒素的苗种，开 发出暗纹东方飩养殖家系无毒化养殖产品。本发明能够在淡水池塘养殖条件下，经过净化处理，有效控制不同大小规格的暗 纹东方飩家系鱼种和商品鱼不含河豚毒素，且方法简单，易掌握无公害。目前已经1000万 人次在定点供应宾馆饭店海鲜酒楼试食验证，2006年3月份，样品经浙江医学科学院药物 研究所检测，其可能最毒的性腺和肝脏达到无毒级别，结果表明暗纹东方飩家系鱼种和商 品鱼是无毒的健康安全的水产品，我们近十年的养殖和繁殖实践也验证了产品的无毒特 性。本发明适用于东方飩属的不同河豚种类的无毒化养殖，具体应用时可根据不同种 类和每代的养殖结果调整养殖标准，可根据养殖单位和个人的养殖规模和实际环境情况作 适当调整，不因毒性监控阶段的增减而免除对本案的侵权。
权利要求
暗纹东方鲀家系无毒化养殖方法，其特征是在淡水养殖过程中加强无毒化鉴别；从源头确保养殖苗种不带河豚毒素，防止产毒微生物共生，控制养殖环境产毒微生物生存，防止饵料带入毒素，在商品鱼上市前进行提高商品鱼品质的净化处理，每个阶段验证当批次商品鱼的无毒特性，最终确保养殖的暗纹东方鲀家系在性成熟时，卵巢和肝脏也无毒，结果证实暗纹东方鲀商品鱼全鱼无毒；本案还保护包括以暗纹东方鲀任何规格无毒化生物体为基础进行繁殖和养殖的行为。
2.根据权利要求书1所述暗纹东方飩家系无毒化养殖方法，其特征是在淡水养殖过 程中加强无毒化鉴别是指在淡水养殖生产的各阶段如受精卵、鱼苗、鱼种、商品鱼加强无毒 化鉴别，全鱼和通常认为的剧毒器官如肝脏和卵巢及其勻浆液投喂或注射实验动物，实验 动物均没有死亡并且没有不正常表现。
3.根据权利要求书1所述暗纹东方飩家系无毒化养殖方法，其特征是；从源头确保养 殖苗种不带河豚毒素，人工繁殖选用的母本和父本都来源于淡水养殖群体，每批受精卵都 留一部分用于动物喂养试验，验证该批受精卵不带河豚毒素，该批另一部分受精卵孵化培 育出鱼苗供养殖使用。
4.根据权利要求书1所述暗纹东方飩家系无毒化养殖方法，其特征是在饲料中添加 防止产毒微生物在鱼体肠道共生的添加剂抗菌肽锌或抗菌多肽添加量百万分之一，每半 月添加两天；虫草培养基添加量百万分之二，每半月添加两天。
5.根据权利要求书1所述暗纹东方飩家系无毒化养殖方法，其特征是防止养殖环境 需盐产毒细菌生存的方法是指人工养殖使用水源保护区域内淡水，用水符合渔业用水标 准，杜绝养殖水环境中需盐产毒细菌繁殖生长；每隔半月定期消毒杀菌，防止养殖水环境中 需盐产毒细菌生存。
6.根据权利要求书1所述暗纹东方飩家系无毒化养殖方法，其特征是投喂不含毒素 的无公害全价配合饲料，防止饵料带入毒素，切断由食物链带入河豚毒素的途径。
7.根据权利要求书1所述暗纹东方飩家系无毒化养殖方法，其特征是稳定养殖条件， 规范渔药的使用，防止药物残留的污染效应；在水泥池中应用饮用水源流水净化处理7-10 天，投喂现剖新鲜淡水野生蛘肉，提高暗纹东方飩无毒家系商品鱼品质。
8.根据权利要求书1所述暗纹东方飩家系无毒化养殖方法，其特征是同一淡水池塘 养殖的商品鱼，随机取样20%剖杀加工，废弃物如肝脏和/或卵巢用于动物喂养实验验证 群体不含河豚毒素，真正做到大样本加工废弃物动物喂养实验验证暗纹东方飩无毒家系商 品鱼群体不含河豚毒素。
9.根据权利要求书1所述暗纹东方飩家系无毒化养殖方法，其特征是扩展保护以无 毒化暗纹东方飩的任何规格生物体为基础进行养殖和繁殖的行为，经过暗纹东方飩家系无 毒化养殖方法培育的母本和父本继续进行常规的人工繁殖和常规的淡水环境养殖的行为。
10.根据权利要求书1所述暗纹东方飩家系无毒化养殖方法，其特征是扩展保护以任 何规格暗纹东方飩无毒化生物体为基础，通过养殖和繁殖，逐代强化无毒化性状，稳定无毒 性状，选育出不含河豚毒素的苗种，开发出暗纹东方飩养殖家系无毒化养殖产品。
全文摘要
一种暗纹东方鲀家系无毒化养殖方法，其特征包括在养殖过程中加强无毒化鉴别，控制养殖苗种的毒素来源，防止产毒微生物共生，约束养殖环境产毒微生物生存，防止饵料带入毒素，最后在商品鱼上市前进行提高商品鱼品质的净化处理，验证当批次商品鱼的无毒特性，最终确保养殖暗纹东方鲀家系在性成熟时，性腺、肝脏及商品鱼全鱼均无毒。本案还保护以任何规格暗纹东方鲀无毒化生物体为基础进行繁殖和养殖的行为。本发明提供能够在淡水养殖环境条件下，有效防止暗纹东方鲀家系商品鱼产生和积累河豚毒素的养殖方法，使暗纹东方鲀家系商品鱼无公害，达到和四大家鱼一样安全食用的程度，满足新资源食品的申请和备案条件。
文档编号A01K61/00GK101940186SQ20101029522
公开日2011年1月12日 申请日期2010年9月28日 优先权日2010年9月28日
发明者阳清发 申请人:上海能正渔业科技开发有限公司