专利名称：暗纹东方鲀无毒家系阶段式种群选育方法
技术领域：
本发明涉及养殖暗纹东方飩优良品种的选育方法，具体说就是暗纹东方飩无毒家 系阶段式种群选育方法。
背景技术：
目前我国河豚养殖苗种来源主要是利用海捕河豚及部分人工养殖性成熟河豚进 行育苗，或者由国外进口河豚受精卵进行育苗。由于多年粗放养殖和缺乏足够供育苗用的 暗纹东方飩野生种群，暗纹东方飩品种退化非常严重，养殖暗纹东方飩的养殖特性如性早 熟，抗逆性差、生长率下降，商品规格大小差异大等性状退化严重，因此通过一些生物学手 段，以表现型的优选来固定群体优良遗传特性，优选出高产优质、抗逆性强、种质稳定，不带 河豚毒素的暗纹东方飩种质和方法是我国河豚养殖业急需解决的技术难题。品种退化是影响鱼类养殖持续稳定发展的关键问题之一，通过选择出抗病或抗逆 性强的鱼类新品种，可以减轻病害和环境恶化对鱼类养殖的影响。家系选育作为动物品种 改良的重要手段，在畜禽类的选育中发挥了重要作用，产生了巨大的经济效益和社会效益， 水产动物的品种改良由于其养殖特点和繁殖生物学特性而有较大的困难，我国鱼类选育的 工作刚刚处于起步阶段，通过杂交育种，群体选育，染色体组工程育种，综合育种，基因工程 育种等技术方法，以鲤、鲫、鲂、罗非鱼为材料，选育出十数个鱼类新品系，品种改良取得了 很大的成果。但国内外还没有涉及完美的暗纹东方飩家系种群选育的专利报道，国内涉及 暗纹东方飩的授权专利只有人工繁殖CN98111600. 0和控毒养殖CN02138614. 5两项专利， 暗纹东方飩家系选育ZL2006100245220和飩系选育ZL2006100245216等已经申请授权的专 利侧重于系谱的建立和选择优良的家系品种。随着科学的发展和进步，最新研究结果表明河豚毒素是外源性的，毒素来源于外 界环境中食物和海洋中的产毒细菌，河豚自己不能代谢产生毒素。野生暗纹东方飩的毒素 来源于与其共生的海洋微生物和摄食的含毒素海洋生物毒素，是被动积累的，是来源于外 界的，本身不能合成和代谢产生。养殖商品鱼群体中时不时出现完全无毒个体，这也为选育 出无毒群体带来了希望。根据暗纹东方飩的繁殖生物学特性和河豚毒素产生原理，以种群 的表现型来反向选择和固定群体的基因组成，通过表现型的强化选择，达到挑选出不带河 豚毒素，生长快，抗逆性强的种群的目的，我们设计了一套完整的，切实可行的，效果明显的 暗纹东方飩无毒家系阶段式种群选育的技术方法。判断河豚鱼是否有毒的常用方法是生物检验检测法，通常的做法是小白鼠投喂或 勻浆液注射试验，小白鼠死亡就证明该产品或商品带毒。我们也运用此方法来鉴别我们的 产品是否带毒。
发明内容
为了实现上述目的，本发明采取的技术方案为暗纹东方飩无毒家系阶段式种群 选育方法①判断商品鱼全鱼和通常认为的剧毒器官如肝脏和卵巢是否带毒的方法是各种规格商品鱼全鱼和通常认为的剧毒器官如肝脏和卵巢及其勻浆液投喂或注射小鼠、猫、 狗、鸡，看是否有中毒反应，以及常规煮熟的全鱼和通常认为的剧毒器官如肝脏和卵巢及 其勻浆液投喂或注射小鼠、猫、狗、鸡，看是否有中毒反应；它们均没有死亡并且没有不正 常表现判定为无毒；②选用非近亲淡水人工养殖亲鱼，主要包括直接从国内不同地区选用 人工养殖群体两个或两个以上，群体选择的标准是产地不同、养殖世代不一样、群体间没 有亲缘关系；个体选择的标准是从每个群体从中优选出无毒、活力强、身体生物学特征正 常，斑纹清晰，体重大于平均体重15 20%的亲鱼，作为备选亲鱼均分别养殖，选择强度为 10 20%，选择强度还可以根据研究和生产的需要作相应调整；③在暗纹东方飩生长的关 键时期产卵前期、人工繁殖期、仔鱼期、稚鱼期、鱼种期、商品鱼期及成熟前期七个阶段为选 育关键阶段，按照无毒、病害少、生长快、斑纹清晰、身体生物学特征正常的标准进行选择， 经三到四年时间连续养殖，培育不同大小规格商品鱼和新一代人工养殖亲鱼；④在经过种 群选育的、非近亲人工养殖亲鱼之间开始新一个选育周期，经过连续两个及更多个选育周 期，逐代稳定无毒性状，选育出不含河豚毒素的苗种，杜绝由遗传携带河豚毒素的可能，选 育出生长快速、抗逆性强的无毒种群所述判断商品鱼全鱼和通常认为的剧毒器官如肝脏和卵巢是否带毒的方法是 指商品鱼全鱼和通常认为的剧毒器官如肝脏和卵巢及其勻浆液投喂或注射小鼠、猫、 狗、鸡看是否有中毒反应，以及常规煮熟的全鱼和通常认为的剧毒器官如肝脏和卵巢及其 勻浆液投喂或注射小鼠、猫、狗、鸡看是否有中毒反应；它们均没有死亡并且没有不正常表 现判定对应个体和种群无毒。所述产卵前期进行优选是指将产卵前不同来源的全人工淡水养殖亲鱼群体，群体 的20%做无毒鉴定后，分别养于不同预产池中，每池100-200对亲鱼作为一个养殖群体， 至少两个不同的养殖群体，也可设两个以上不同养殖群体，关键是；群体间选择的标准还包 括是产地来源地域不同、养殖世代不一样、追溯群体间没有亲缘关系；个体选择的标准是 从每个群体从中优选出活力强、身体生物学特征正常，斑纹清晰，体重大于平均体重15 20 %的亲鱼，作为备选亲鱼均分别养殖，选择强度为10 20 %，选择强度还可以根据研究 和生产的需要作相应调整。所述人工繁殖期进行优选是指在暗纹东方飩产卵孵化时在人工繁殖时选用的母 本和父本都来源于养殖群体，交配的任何一方都不是来源于野生个体，每批受精卵都留一 部分用于动物喂养试验，验证该批受精卵不带毒素，该批另一部分受精卵孵化培育出鱼苗 供养殖使用。所述仔鱼期进行优选是指在暗纹东方飩产卵孵化后，从仔鱼中优选活力强，趋光 性好，分布于水体中上层的仔鱼作为最初的选育群体，按照无毒、病害少、生长快、趋光性 强、生物学特征正常的标准进行选择，优选出的仔鱼约占孵化出仔鱼的50 %，所选的仔鱼移 入育苗池中养至可出售的乌仔鱼苗，然后转移到土池中进行稚鱼培育。所述稚鱼期进行优选是指在暗纹东方飩稚鱼期(体长3-5厘米)，在每一群体的稚 鱼按照无毒、病害少、生长快、生物学特征正常，斑纹清晰的标准进行选择，选择出其中较大 个体的暗纹东方飩稚鱼(体长4-5厘米)进行养殖，淘汰过小的个体，淘汰率为70-90%。所述鱼种期进行优选是指在暗纹东方飩鱼种期(体重40-150克)，在每一群体的 鱼种中按照无毒、病害少、生长快、生物学特征正常，斑纹清晰的标准进行选择，选择较大个
4体的暗纹东方飩鱼种(体重100-150克)进行养殖，淘汰过小的个体，选择连接身体两侧黑 斑的条纹连续、清晰不散乱的个体保留下来，淘汰率为50-60%。所述商品鱼期进行优选是指在暗纹东方飩商品鱼期(体重300-600克)，在每一群 体的商品鱼中按照无毒、病害少、生长快、生物学特征正常，斑纹清晰的标准进行选择，选择 较大个体的暗纹东方飩商品鱼(体重400-600克)进行养殖，淘汰过小的个体，选择连接身 体两侧黑斑的条纹清晰不散乱的个体保留下来，淘汰率为70-80%。所述成熟前期进行优选是指在暗纹东方飩成熟前期(体重500-800克)，在每一群 体的成熟前期鱼中按照无毒、病害少、生长快、生物学特征正常，斑纹清晰的标准进行选择， 选择较大个体的暗纹东方飩成熟前期鱼(体重700-800克)进行养殖，淘汰过小的个体，选 择连接身体两侧黑斑的条纹清晰不散乱的个体保留下来，淘汰率为70-80%。所述连续选育是指在实施选育前要进行谱系追溯，避免近亲交配，按上述方法选 育出的、不带河豚毒素的暗纹东方飩淡水人工种群，其后代在淡水环境里按照本判断监控 标准常规养殖的群体不带河豚毒素，其非近亲后代之间人工繁殖产生的后代在淡水环境里 连续进行种群选育，然后在淡水环境里常规养殖的群体也不带河豚毒素。本案还保护以无 毒个体为基础开展的无毒选育和无毒化养殖方法及其各种规格无毒商品鱼和无毒产品。本发明具有如下优点通过对非近亲暗纹东方飩养殖种群连续多代阶段式种群选 育，优选出生长快速、高产优质、抗逆性强、种质稳定的无毒种群；此项技术适用于任何规模 的苗种场，操作简单易行，见效快，选出的种群对当地环境的适应性和耐受性高，生产效益 好。具体实施实例(1)产卵前期进行优选是指将产卵前不同来源的全人工养殖亲鱼群体，群体的 20%做无毒鉴定后，分别养于不同预产池中，每池100-200对亲鱼作为一个养殖群体，至少 两个不同的养殖群体，也可设两个以上不同的养殖群体，养殖群体的来源地域不做限制；群 体问选择的标准还包括是追溯群体间两代和/或三代内没有亲缘关系、产地不同、养殖世 代不一样；个体选择的标准是从每个群体从中优选出活力强、身体生物学特征正常，斑纹 清晰，体重大于平均体重15 20%的亲鱼，作为备选亲鱼均分别养殖，选择强度为10 20%，选择强度还可以根据研究和生产的需要作相应调整。最初选用不同来源的4-8个种 群共5000-10000对亲鱼，每个群体从中优选出活力强、身体特征正常，体重大于平均体重 15 20%的亲鱼500-1000对，作为备选亲鱼均分别养殖，选择强度为10 20%，选择强度 还可以根据研究需要作相应调整，不同来源的亲鱼均单独养殖，与其他种群的亲鱼区别开 来，不得混杂。(2)在暗纹东方飩生长的关键阶段人工繁殖期、仔鱼期、稚鱼期、鱼种期、商品鱼期 及成熟前期六个阶段为选育关键阶段，经三到四年时间连续养殖和优选，选育出生长快速、 抗逆性强的无毒品种。本案判断商品鱼全鱼和通常认为的剧毒器官如肝脏和卵巢是否带毒的方法是 指商品鱼全鱼和通常认为的剧毒器官如肝脏和卵巢及其勻浆液投喂或注射小鼠、猫、 狗、鸡看是否有中毒反应，以及常规煮熟的全鱼和通常认为的剧毒器官如肝脏和卵巢及其 勻浆液投喂或注射小鼠、猫、狗、鸡看是否有中毒反应；它们均没有死亡并且没有不正常表 现判定为无毒；此判断方法应用于种群选育的各个阶段。
人工繁殖期进行优选是指在暗纹东方飩产卵孵化时在人工繁殖时选用的母本和 父本都来源于养殖群体，交配的任何一方都不是来源于野生个体，每批受精卵都留一半用 于动物喂养试验，验证该批受精卵不带毒素，该批另一半受精卵孵化培育出鱼苗供养殖使 用。仔鱼期进行优选是指在暗纹东方飩产卵孵化后，从仔鱼中优选活力强，趋光性好， 分布于水体中上层的仔鱼作为最初的选育群体，按照无毒、病害少、生长快、斑纹清晰、趋光 性强、生物学特征正常的标准进行选择，优选活力强，趋光性好，水体中上层的仔鱼作为最 初的选育群体，优选出的仔鱼约占孵化出仔鱼的50%，所选的仔鱼移入鱼苗池中养至可出 售的乌仔鱼苗(体长0. 7-1. 0厘米)，转移到土池中进行稚鱼培育。稚鱼期进行优选是指在暗纹东方飩稚鱼期(体长3-5厘米)，在每一群体的稚鱼按 照无毒、病害少、生长快、生物学特征正常，斑纹清晰的标准进行选择，选择出其中较大个体 的暗纹东方飩稚鱼(体长4-5厘米)进行养殖，淘汰过小的个体，淘汰率为70-90%。鱼种期进行优选是指在暗纹东方飩鱼种期(体重40-150克)，在每一群体的鱼种 中按照无毒、病害少、生长快、生物学特征正常，斑纹清晰的标准进行选择，选择较大个体的 暗纹东方飩鱼种(体重100-150克)进行养殖，淘汰过小的个体，选择连接身体两侧黑斑的 条纹连续、清晰不散乱的个体保留下来，淘汰率为50-60%。商品鱼期进行优选是指在暗纹东方飩商品鱼期(体重300-600克)，在每一群体的 商品鱼中按照无毒、病害少、生长快、生物学特征正常，斑纹清晰的标准进行选择，选择较大 个体的暗纹东方飩商品鱼(体重400-600克)进行养殖，淘汰过小的个体，选择连接身体两 侧黑斑的条纹清晰不散乱的个体保留下来，淘汰率为70-80%。成熟前期进行优选是指在暗纹东方飩成熟前期(体重500-800克)，在每一群体的 成熟前期鱼中按照无毒、病害少、生长快、生物学特征正常，斑纹清晰的标准进行选择，选择 较大个体的暗纹东方飩成熟前期鱼(体重700-800克)进行养殖，淘汰过小的个体，选择连 接身体两侧黑斑的条纹清晰不散乱的个体保留下来，淘汰率为70-80%。连续选育是指在实施选育前要进行谱系追溯，避免近亲交配，按上述方法选育出 的、不带河豚毒素的暗纹东方飩种群群体，其后代在淡水环境里常规养殖的群体不带河豚 毒素，其非近亲后代之间人工繁殖产生的后代在淡水环境里连续进行种群选育，然后在淡 水环境里常规养殖的群体也不带河豚毒素。本案还保护以无毒种群为基础开展的无毒选育 和无毒化养殖方法及其各种规格无毒商品鱼和无毒产品。这500-1000对暗纹东方飩作为备用亲鱼，促熟、育苗，继续进行选育，从每一种群 中优选100-200对亲鱼作为阶段式种群选育的亲鱼分别继续饲养，育苗时应将来自同一养 殖池的雌雄鱼分开，与其他养殖池的雄雌鱼交配，以避免亲鱼的近交，此为群体选育的关 键，其他的亲鱼可用于一般的育苗生产或出售。本发明具有如下优点通过对非近亲暗纹东方飩养殖种群连续多代阶段式种群选 育，优选出高产优质、抗逆性强、种质稳定，暗纹东方飩新种群，特别是选育出生长快速，抗 逆性强的无毒种群；此项技术适用于任何规模的苗种场，操作简单易行，见效快，选出的品 系对当地环境的适应性和耐受性高，生产效益好。本发明适用于东方飩属的不同河豚种类河豚的阶段式种群选育，具体应用时应根 据不同种类和每代的养殖结果确定选育标准，其中用于选育的种群规模即所用亲鱼数量的
6多少，可根据参与育苗和养殖的单位及个人的养殖育苗规模和实际环境条件作适当调整， 不因选育阶段的增减而避免对本案的侵权。
权利要求
暗纹东方鲀无毒家系阶段式种群选育方法，其特征是①无毒的判定标准是全鱼和通常认为的剧毒器官如肝脏和卵巢及其匀浆液投喂或注射小鼠、猫、狗、鸡看是否有中毒反应；它们均没有死亡并且没有不正常表现判定为无毒；②选用非近亲淡水人工养殖亲鱼，主要包括直接从国内不同地区选用人工养殖群体两个或两个以上；③在暗纹东方鲀生长的七个关键阶段如产卵前期、人工繁殖期、仔鱼期、稚鱼期、鱼种期、商品鱼期及成熟前期分阶段选育，经三到四年时间连续养殖和选育，培育不同大小规格商品鱼和新一代人工养殖亲鱼；④经过种群选育的、非近亲人工养殖亲鱼之间开始新一个选育周期，经过连续两个及更多周期，逐代稳定无毒性状，选育出不含河豚毒素的苗种，杜绝由遗传携带河豚毒素的可能，培育出生长快速、抗逆性强的无毒种群。
2.根据权利要求书1所述暗纹东方飩无毒家系阶段式种群选育方法，其特征是无毒 鉴别的标准是在淡水养殖过程的各阶段生物体，全鱼和通常认为的剧毒器官如肝脏和卵 巢及其勻浆液投喂或注射实验动物，实验动物均没有死亡并且没有不正常表现。
3.根据权利要求书1所述暗纹东方飩无毒家系阶段式种群选育方法，其特征是在选 育前加强无毒化鉴别是指在养殖生产的七个关键阶段如产卵前期、人工繁殖期、仔鱼期、 稚鱼期、鱼种期、商品鱼期及成熟前期分阶段选育，加强无毒化鉴别，选择群体的20%个体 做无毒鉴定，各阶段全鱼和通常认为的剧毒器官如肝脏和卵巢及其勻浆液投喂或注射实 验动物，实验动物均没有死亡并且没有不正常行为，确认种群无毒后作为备选种群。
4.根据权利要求书1所述暗纹东方飩无毒家系阶段式种群选育方法，其特征是种 群和个体选择的对象是非近亲淡水人工养殖亲鱼，种群选择的标准是产地地域不同、养殖 世代不一样、种群间没有亲缘关系；个体选择的标准是从每个种群从中优选出无毒、活力 强、生物学特征正常，斑纹清晰，体重大于平均体重15 20%的亲鱼，作为备选亲鱼均分别 养殖，选择强度为10 20%。
5.根据权利要求书1所述暗纹东方飩无毒家系阶段式种群选育方法，其特征是在暗 纹东方飩生长的七个关键阶段按照无毒、病害少、生长快、斑纹清晰、生物学特征正常的标 准进行选择，经三到四年时间分阶段连续养殖和选育，培育不同大小规格商品鱼和新一代 人工养殖亲鱼。
6.根据权利要求书1所述暗纹东方飩无毒家系阶段式种群选育方法，其特征是连续 选育是指经过种群选育的、非近亲人工养殖亲鱼之间开始新一个选育周期前，要进行谱系 追溯，避免近亲交配，按上述方法选育出的、不带河豚毒素的暗纹东方飩淡水人工种群，按 照本判断监控标准，其后代在淡水环境里常规养殖的群体不带河豚毒素，其非近亲后代之 间人工繁殖产生的后代在淡水环境里连续进行种群选育，然后在淡水环境里常规养殖的群 体也不带河豚毒素，经过连续两个及更多周期选育，逐代稳定无毒性状，选育出不含河豚毒 素的苗种，杜绝由遗传携带河豚毒素的可能，从而选育出生长快速、抗逆性强的无毒种群。
7.根据权利要求书1所述暗纹东方飩无毒家系阶段式种群选育方法，其特征是本案 还保护以暗纹东方飩无毒个体为基础开展的无毒选育和无毒化养殖方法及其各种规格无 毒商品鱼和无毒产品。
全文摘要
暗纹东方鲀无毒家系阶段式种群选育方法是指根据种群选择标准和个体选择标准选用非近亲人工淡水养殖亲鱼；选育阶段包括产卵前期、人工繁殖期、仔鱼期、稚鱼期、鱼种期、商品鱼期及成熟前期，在三到四年时间连续养殖周期中按照各阶段选择标准进行选择，选育出不含河豚毒素的个体；经过连续两个及更多周期选育，逐代稳定无毒性状，杜绝由遗传携带河豚毒素的可能，选育出生长快速、抗逆性强的无毒种群；判断各种规格商品鱼全鱼和剧毒器官如肝脏和卵巢是否带毒，选择并保留无毒种群。此项方法操作简单易行，见效快，适用于任何规模的苗种场进行种群选育。
文档编号A01K61/00GK101940185SQ20101029521
公开日2011年1月12日 申请日期2010年9月28日 优先权日2010年9月28日
发明者阳清发 申请人:上海能正渔业科技开发有限公司