专利名称：绛红褐链霉菌sp3菌株及其在红豆杉土传根病和红豆杉促生上的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及微生物技术领域，尤其涉及的是ー种绛红褐链霉菌SP3菌株及其在红豆杉土传根病和红豆杉促生上的应用。
背景技术：
红豆杉是第四纪冰川孑遗植物，被称为植物王国里的“活化石”，因其资源稀少，被列为世界珍稀树种加以保护。它是我国一级保护珍稀树种，是集药用、观赏、緑化、特种优质用材为一体的珍贵树种，其根、茎、叶可提取加工成全球紧俏的高新技术产品抗癌新药——紫杉醇。其体内提取的紫杉醇是目前世界上最好的抗癌药物之一，在资源植物中具有较突出的地位。由于天然红豆杉资源极其有限，且为国家保护的珍稀树种，所以人工种植红豆杉成为提取紫杉醇的主要来源。此外，红豆杉的树形美丽，果实成熟后红绿相映的颜色搭配令人陶酔，广泛应用于水土保持及园艺观赏林。房前屋后、道路两旁也适宜种植，是改善生态环境和建设秀美山川的优良树种。红豆杉在园林绿化、室内盆景方面也有十分广阔的发展前景。红豆杉在生长过程中易发生根腐病，植株最直观的表现就是根茎腐烂。在南方红豆杉上，此病在植株根、茎上都有发生，属于软腐中的根腐和茎腐。地上部份是慢慢失水黄化枯死而不倒伏，也称为立枯。一般表现为霉状物，但在病部很难发现霉状物。主根病斑是水溃状小斑点，表面软腐；侧根发病后褐变而腐烂。红豆杉根腐病发生后,植物生长缓慢，易死亡，有关这方面研究都还尚少。因此，对于红豆杉根腐病的防治和促生方法也还处于发展探索当中，一般以化学农药、化学肥料为主，但由于长时期施用化学农药(肥料)易污染环境，破坏生态。
发明内容
本发明的绛红褐链霉菌SP3菌株于2009年7月10日采用采用平板稀释法分离于四川洪雅县红豆杉根际经鉴定为绛红褐链霉菌，经抗菌谱研究，该菌对红豆杉根腐病菌(Pythium sp.)抑菌率达到100%，已经于2012年7月19日保藏于中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，地址位于北京市朝阳区北辰西路I号院3号，保藏编号为CGMCC NO. 6383，分类命名为绛红褐链霉菌Sti^ptomycespurpeofuscuso本发明筛选的生防菌绛红褐链霉菌SP3新菌株具有防病、促生双重功能，兼有生物防治和生物肥料特点，对土传病害有特效，不仅能避免化学药物(农药、化肥)所造成的污染环境的严重后果，而且具有可持续、成本低的特点。
具体实施例方式以下结合具体实施例，对本发明进行详细说明。
实施例I绛红褐链霉菌SP3液体制剂的发酵①一级 斜面种子常规方法制作改良高氏一号斜面培养基(KNO3Ig, KH2PO4O. 5g，MgSO4. 7H20 O. 5g，NaClO. 5g，Fe2 (S04) 3. 7H20 0. Olg,可溶性淀粉 20g,琼脂 17g，水1000ml)，接种SP3后在26-28°C下培养48小时制成一级斜面种子。②二级液体种子改良高氏一号培养液[KNO3Ig,KH2PO4O. 5g，MgSO4. 7H20 O. 5g，NaClO. 5g，Fe2(S04)3. 7H20 0. Olg，可溶性淀粉20g，红豆杉根浸溃液1000ml (制备方法10克红S·杉根在1000晕升水中煮沸30分钟,保持水量1000晕升,过滤去除根残洛为红S·杉根浸溃液)，PH7. 2 7. 4]经高压灭菌后，按IOOmL液体盛于300mL三角瓶比例(通氧控制)装瓶，在无菌状态接种SP3斜面种子，每瓶接种2支斜面种子，温度26-28 V，初始pH值6. O，120r/min振荡培养36h，制成SP3 二级液体种子。③液体发酵培养液(葡萄糖5g、甘油5g、黄豆饼粉3g、蛋白胨5g、NaCl 2. 5g、CaCO2 2g、蒸馏水IOOOmL)经高压灭菌后，按IOOmL液体盛于300mL三角瓶比例(通氧控制)装瓶，在无菌状态接种上述SP3 二级液体种子，108cfu/mL孢子悬浮液接种量为1%(体积比)， 温度26-28°C，初始pH值7. 0，140r/min振荡培养96h，制成SP3液体制剂。平板法测定SP3对红豆杉根腐病菌(Pythium sp.)抑菌率达到100%以上。(2)制剂保存瓶装制剂常温保存半年(1%甘油)或低温(4度)I年半不影响防治和促生效果。(3)灌根方式施用①预防处理未发病红豆杉用上述液体制剂200-600倍稀释度(体积比)沿根系幅面灌根，每株100毫升，每年春季施用一次，可防病促生(地径增加)。②防治处理发病红豆杉按10-200倍体积比稀释度沿根系幅面灌根及附近土壤淋灌，每株200毫升，春、夏各一次，连续三年，可治病促生(高生长)。实施例2试验于2009年3月起在四川农业大学林木种质圃进行，红豆杉生长期间进行常规管理，并定期轮换花盆的位置。试验土壤采自四川省雅安市大兴镇林木育种基地，采样深度为O 20 cm,砂壤土。土壤理化性质经测定为土壤pH 7. I,有机质含量10.43 g/kg,全氮含量0.80 g/kg,全磷含量0.34 g/kg,有效磷含量4.50 mg/kg。样土风干后过I mm筛，并与过I _筛的河沙以3:1 (V:V)混合后用于盆栽试验。待红豆杉苗移栽成活后，分不同浓度沿根系幅面灌根上述液体菌剂IOOmL,重复6次，以每盆灌注培养液(不含菌)100mL对照。每年生长停止后统计发病率和测定地径，结果见表I表I 绛红褐链霉菌SP3灌根方式生防和促生功能参数红豆杉(盆栽)
权利要求
1.绛红褐链霉菌SP3菌株，保藏编号为CGMCCNO. 6383，分类命名为绛红褐链霉菌btreptomyces purpeofuscus。
2.根据权利要求I所述的绛红褐链霉菌SP3菌株在红豆杉土传根病和红豆杉促生上的应用。
全文摘要
本发明公开了绛红褐链霉菌SP3菌株，保藏编号为CGMCC No.6383，分类命名为绛红褐链霉菌Streptomyces purpeofuscus。本发明筛选的生防菌绛红褐链霉菌SP3新菌株具有防病、促生双重功能，兼有生物防治和生物肥料特点，对土传病害有特效，不仅能避免化学药物(农药、化肥)所造成的污染环境的严重后果，而且具有可持续、成本低的特点。
文档编号A01P21/00GK102864110SQ201210367119
公开日2013年1月9日 申请日期2012年9月27日 优先权日2012年9月27日
发明者朱天辉, 张丽娜, 李姝江, 谯天敏, 朴春根, 韩珊 申请人:四川农业大学