一种利用蒜瓣诱导大蒜愈伤组织的方法
【专利摘要】本发明公开了一种利用蒜瓣诱导愈伤组织的方法，包括取蒜瓣消毒后纵向切取组织块，将组织块接种于诱导培养基上于黑暗条件下诱导愈伤组织形成，诱导温度为18-22℃；所述的诱导培养基为MS培养基，1LMS培养基中添加1-2mg的NAA、1-1.5mg的6-BA、0.5-1mg的ZT、20-30g蔗糖和7g琼脂；本发明方法以蒜瓣作为外植体，取材方便、简单易行，诱导率可达88%。
【专利说明】ー种利用蒜瓣诱导大蒜愈伤组织的方法
【技术领域】[0001]本发明涉及植物组织培养【技术领域】，具体涉及ー种利用蒜瓣诱导大蒜愈伤组织的方法。
【背景技术】
[0002]欠荒、{AlIium sativum L.Garlic)是一种多年生草本植物，属于百合科葱属的植物；地下鱗茎分瓣，辛辣且具有刺激性气味，可以供食用或调味，也可以用于药材。大蒜的营养丰富，每100克含有水分69.8克、蛋白质4.4克、脂肪0.2克、碳水化合物23.6克、钙5毫克、磷44毫克，铁0.4毫克，维生素C3毫克。此外，还含有硫胺素、核黄素、尼克酸、蒜素、柠檬醛以及硒和锗等微量元素。含挥发油约0.2%，油中主要成分为大蒜辣素，具有杀菌作用，是大蒜中所含的蒜氨酸受大蒜酶的作用水解产生。尚含多种烯丙基、丙基和甲基组成的硫醚化合物等。蒜中含有“蒜胺”，这种物质对大脑的益处比维生素B，还强许多倍。
生产上均采用传统的地方品种和自然变异的大蒜品种培植，很难获得或创造可育的大蒜材料进行有性杂交育种。但随着新的育种技术发展，人工诱变、原生质体的分离和融合以及组织培养等新的手段相继涌现，使大蒜的育种工作取得了很大的进展。但是目前，一般以大蒜的鱗茎的茎芽、茎尖或者胚作为外植体来诱导大蒜进行再生；利用上述外植体虽然可以成功的诱导出愈伤组织，但是需要以损失大量的鱗茎为代价，不利于种质资源的保存，且茎尖或者茎芽的体积较小，取材不便，给育种工作増加困难。
【发明内容】
[0003]针对现有技术存在的缺陷，本发明所要解决的技术问题是提供ー种利用蒜瓣为外植体诱导大蒜愈伤组织的方法，此方法既可以获得高诱导率、高质量的胚型愈伤组织，且外植体来源广泛，制备简单、易行。
[0004]为了解决上述技术问题，本发明的技术方案如下:
(1)外植体处理:ー种利用蒜瓣诱导大蒜愈伤组织的方法:包括如下步骤:将大蒜剥皮后用无菌水清洗蒜瓣，先于体积浓度为75%的こ醇中浸泡30s，再于体积浓度为3%-10%的次氯酸钠中消毒3-8min，无菌水清洗干净后于无菌操作台中切掉蒜瓣的顶部和基部，以中间部分的蒜瓣作为外植体，纵向先将外植体平均切成两个组织块，然后纵向将每块组织块再切成两份组织块；
(2)接种:将步骤I中的组织块随机接种于诱导培养基中，接种时，按照大蒜原本生长方向纵向接种，即组织块原本处于蒜瓣基部的部位与培养基接触；
(3)愈伤组织诱导:将装有蒜瓣组织块的培养皿于全黑暗、18-22°C下培养至愈伤组织形成。
[0005]所述的诱导培养基为MS培养基，ILMS培养基中添加l_2mg的NAA、1_1.5mg的6-BA、0.5-lmg的ZT、20_30g蔗糖和7g琼脂，高温高压灭菌冷却后待用。
[0006]所述的蒜瓣组织块的长度为0.5-lcm。[0007]本发明的有益效果是:
(1)提出ー种利用大蒜的蒜瓣作为外植体诱导愈伤组织形成的方法，最高诱导率可达
88% ；
(2)本方法以大蒜的蒜瓣作为外植体，外植体来源广泛、取材方便；避免因为采用茎尖或茎芽作为外植体而带来的大蒜种质资源匮乏的缺陷，也可以克服茎尖、茎芽制备的困难的难题。
【具体实施方式】
[0008]以下通过实施例进ー步阐述本发明的有益效果:
实施例1:
(1)外植体处理:将大蒜剥皮后用无菌水清洗蒜瓣，先于体积浓度为75%的こ醇中浸泡30s，再于体积浓度为3%的次氯酸钠中消毒8min，无菌水清洗干净后于无菌操作台中切掉蒜瓣的顶部和基部，以中间部分的蒜瓣作为外植体，纵向先将外植体平均切成两个组织块，然后纵向将每块组织块再切成两份组织块；
(2)接种:将步骤I中的组织块随机接种于诱导培养基中，接种时，组织块原本处于蒜瓣基部的部位与培养基接触，共接种100块组织块；所述的诱导培养基为MS培养基，ILMS培养基中添加2mg的NAA、Img的6_BA、0.5mg的ZT、25g蔗糖和7g琼脂；所述的蒜瓣组织块的长度为0.5-lcm。
[0009](3)愈伤组织诱导:将装有蒜瓣组织块的培养皿于全黑暗、18_22°C下培养至愈伤组织形成，100块组织块中有85块外植体上有愈伤组织形成，愈伤组织诱导率为85%。
[0010]实施例2:
(1)外植体处理:将大蒜剥皮后用无菌水清洗蒜瓣，先于体积浓度为75%的こ醇中浸泡30s，再于体积浓度为:5%的次氯酸钠中消毒3min，无菌水清洗干净后于无菌操作台中切掉蒜瓣的顶部和基部，以中间部分的蒜瓣作为外植体，纵向先将外植体平均切成两个组织块，然后纵向将每块组织块再切成两份组织块；
(2)接种:将步骤I中的组织块随机接种于诱导培养基中，接种时，组织块原本处于蒜瓣基部的部位与培养基接触，共接种100块组织块；所述的诱导培养基为MS培养基，ILMS培养基中添加2mg的NAA、Img的6_BA、0.5mg的ZT、25g蔗糖和7g琼脂；所述的蒜瓣组织块的长度为0.5-lcm。
[0011](3)愈伤组织诱导:将装有蒜瓣组织块的培养皿于全黑暗、18_22°C下培养至愈伤组织形成，100块组织块中有88块外植体上有愈伤组织形成，愈伤组织诱导率为88%。
[0012]实施例3:
(1)外植体处理:将大蒜剥皮后用无菌水清洗蒜瓣，先于体积浓度为75%的こ醇中浸泡30s，再于体积浓度为3%的次氯酸钠中消毒8min，无菌水清洗干净后于无菌操作台中切掉蒜瓣的顶部和基部，以中间部分的蒜瓣作为外植体，纵向先将外植体平均切成两个组织块，然后纵向将每块组织块再切成两份组织块；
(2)接种:将步骤I中的组织块随机接种于诱导培养基中，接种时，组织块原本处于蒜瓣基部的部位与培养基接触，共接种100块组织块；所述的诱导培养基为MS培养基，ILMS培养基中添加2mg的NAA、1.5mg的6_BA、Img的ZT、25g蔗糖和7g琼脂；所述的蒜瓣组织块的长度为0.5-lcm。
[0013](3)愈伤组织诱导:将装有蒜瓣组织块的培养皿于全黑暗、18_22°C下培养至愈伤组织形成，100块组织块中有80块外植体上有愈伤组织形成，愈伤组织诱导率为80%。
[0014]实施例4:
(1)外植体处理:将大蒜剥皮后用无菌水清洗蒜瓣，先于体积浓度为75%的こ醇中浸泡30s，再于体积浓度为5%的次氯酸钠中消毒3min，无菌水清洗干净后于无菌操作台中切掉蒜瓣的顶部和基部，以中间部分的蒜瓣作为外植体，纵向先将外植体平均切成两个组织块，然后纵向将每块组织块再切成两份组织块；
(2)接种:将步骤I中的组织块随机接种于诱导培养基中，接种时，组织块原本处于蒜瓣基部的部位与培养基接触，共接种100块组织块；所述的诱导培养基为MS培养基，ILMS培养基中添加2mg的NAA、1.5mg的6_BA、Img的ZT、25g蔗糖和7g琼脂；所述的蒜瓣组织块的长度为0.5-lcm。 [0015](3)愈伤组织诱导:将装有蒜瓣组织块的培养皿于全黑暗、18_22°C下培养至愈伤组织形成，100块组织块中有86块外植体上有愈伤组织形成，愈伤组织诱导率为86%。
[0016]上述实例只是为说明本发明的技术构思以及技术特点，并不能以此限制本发明的保护范围。凡根据本发明的实质所做的等效变换或修饰，都应该涵盖在本发明的保护范围之内。
【权利要求】
1.ー种利用蒜瓣诱导大蒜愈伤组织的方法，其特征在于，所述方法为: (1)外植体处理:将大蒜剥皮后用无菌水清洗蒜瓣，先于体积浓度为75%的こ醇中浸泡30s，再于体积浓度为3%-10%的次氯酸钠中消毒3-8min，无菌水清洗干净后于无菌操作台中切掉蒜瓣的顶部和基部，以中间部分的蒜瓣作为外植体，纵向先将外植体平均切成两个组织块，然后纵向将每块组织块再切成两份组织块； (2)接种:将步骤I中的组织块随机接种于诱导培养基中，接种时，按照大蒜原本生长方向纵向接种，即组织块原本处于蒜瓣基部的部位与培养基接触； (3)愈伤组织诱导:将装有蒜瓣组织块的培养皿于全黑暗、18-22°C下培养至愈伤组织形成。
2.根据权利要求1所述的利用蒜瓣诱导大蒜愈伤组织的方法，其特征在于，所述的诱导培养基为MS培养基，ILMS培养基中添加l_2mg的NAA、1_1.5mg的6_BA、0.5-lmg的ZT、20-30g蔗糖和7g琼脂，高温高压灭菌冷却后待用。
3.根据权利要求1所述的利用蒜瓣诱导大蒜愈伤组织的方法，其特征在于，所述的蒜瓣组织块的长度为0. 5-lcm。
【文档编号】A01H4/00GK103598090SQ201310525495
【公开日】2014年2月26日 申请日期:2013年10月31日 优先权日:2013年10月31日
【发明者】李本明 申请人:李本明