一种缩短长柄扁桃试管苗生根时间的方法
【专利摘要】本发明公开了一种缩短长柄扁桃试管苗生根时间的方法，对获得的长柄扁桃不定芽通过调整常规培养基中营养元素的剂量和添加适量的硝酸镧，从而显著缩短长柄扁桃试管苗的生根周期，同时增加试管苗的根数和根长。本发明简单易行，提高长柄扁桃试管苗生根效率，可用于长柄扁桃快速繁殖。
【专利说明】一种缩短长柄扁桃试管苗生根时间的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于生物【技术领域】,具体涉及一种缩短长柄扁桃(Amygdalus pedunculataPal1.)试管苗生根时间的方法。
【背景技术】
[0002]长柄扁桃(Amygdaluspedunculata Pal1.)属蓄薇科(Rosaceae)桃属(Amygdalus)扁桃亚属(Amygdalus)的落叶灌木,又名野楼桃、柄扁桃、毛楼桃,主要分布在我国内蒙古和陕西等地区，在西伯利亚地区和蒙古也有分布。长柄扁桃具有重要的经济价值和生态价值。长柄扁桃果仁含粗脂肪531g/kg，粗蛋白255.9g/kg，铁39.88mg/kg，锌42.16mg/kg, ψ] 0.224mg/kg,营养价值高。果实中含致湾成分郁李仁式(Amygdaluside, 3-rhamnoglucosyIkaempferol),可广泛用于医疗、保健方面,对气管炎、高血压、神经衰弱、肺炎、糖尿病都有一定疗效，也可用来辅助治疗癌症；长柄扁桃果仁中含油量高达45.19%~52.00 %，不仅可开发成新型高端食用油，还可制备成性能良好的生物柴油。长柄扁桃桃仁中的许多成分如苦杏仁甙、高蛋白都可以直接开发利用。在我国北方干旱半干旱地区，长柄扁桃可作为抗旱、抗寒的优良树种，具有防风固沙的显著生态作用。
[0003]但是，由于沙漠淹没和人为破坏，长柄扁桃日趋绝迹，已被列为二级濒危植物。在这种情况下，人们开始通过组织培养的方式对其进行人工快速繁殖。在长柄扁桃组织培养过程中，生根是一个关键性环节。到目前为止，用常规的单纯生长素诱导的方式很难达到满意的效果。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于，提供一种缩短长柄扁桃试管苗生根时间的方法，该方法能够显著缩短长柄扁桃试管苗的生根周期，同时增加试管苗的平均根数和根长到2.5倍和1.7倍。
[0005]为了实现上述任务，本发明采取如下的技术解决方案:
[0006]一种缩短长柄扁桃试管苗生根时间的方法，其特征在于，按以下步骤操作:
[0007]步骤一，长柄扁桃不定芽的获得:
[0008]取长柄扁桃试管苗带有节的茎段(约3cm)，用次氯酸钠溶液或氯化汞溶液进行表面灭菌，然后接到含0.5mg/L的吲哚丁酸和0.2mg/L的6-苄氨基腺嘌呤的MS固体培养基上进行培养，培养温度25°C ±2°C，光照强度为4200LUX、光周期16小时；培养40天后产生大量的不定芽；
[0009]步骤二，长柄扁桃不定芽生根的处理:
[0010]当不定芽伸长至3cm时，转移到附加含有0.2mg/L吲哚丁酸的MS培养基(其中NH4N03、KNO3> KH2PO4, MgS047H20、CaCl22H20 作为一个整体调节其剂量到原来的 1/4 倍-1/12倍)上，培养基中同时添加了 15-25mg -L-1硝酸镧，15天以后，可见到根的形成，25天以后根数增多、长度增加，即得到用于移栽和驯化的长柄扁桃试管苗。[0011]本发明的缩短长柄扁桃试管苗生根时间的方法，通过降低常规MS培养基中营养元素的剂量以改变培养基的而营养水平和渗透势，调整常规培养基中营养元素(nh4no3、KNO3> KH2PO4, MgSO4.7H20、CaCl2.2H20)的剂量和添加适量的硝酸镧，从而显著缩短长柄扁桃试管苗的生根周期从45天到25天，而且使试管苗的平均根数和根长增加2.5倍和1.7倍，提高长柄扁桃试管苗生根效率，为长柄扁桃人工规模化繁殖提供重要的技术参数。
【具体实施方式】
[0012]以下结合实施例对本发明作进一步的详细说明。
[0013]在以下实施例中的试管苗，为长柄扁桃(Amygdalus pedunculata Pal1.)通过组织培养获得的无菌植株。
[0014]MS 基本培养基组成:L 65g/L 的 ΝΗ4Ν03、1.9g/L 的 KNO3> 0.17g/L 的 KH2PO4'0.37g/L 的 MgS047H20、0.44g/L 的 CaCl22H20、0.83mg/L 的 ΚΙ、6.2mg/L 的 Η3Β03、22.3mg/L 的 MnS044H20、8.6mg/L 的 ZnS047H20、0.25mg/L 的 Na2Mo042H20、0.025mg/L 的 CuC125H20、0.025mg/L 的 CoC126H20、37.3mg/L 的 Na2EDTA、27.8mg/L 的 FeS047H20。
[0015]经 申请人:研究发现，长柄扁桃试管苗在进行组织培养快速繁殖过程中，生根时间长(平均需要45天)、根数较少，而且较短。如果要进行长柄扁桃的人工规模化繁殖，必须缩短长柄扁桃试管苗的生根周期。 申请人:研究发现，采用降低常规用于生根的MS培养基中营养元素的剂量，并添加适量的硝酸镧，两者巧妙结合达到既缩短长柄扁桃试管苗生根的周期又增加平均根数和根长的效果。
[0016]本发明的一种缩短长柄扁桃试管苗生根时间的方法，按以下两个步骤操作:
[0017](I)长柄扁桃不定芽的获得:
[0018]取长柄扁桃试管苗带有节的茎段约3cm，用次氯酸钠溶液或氯化汞溶液进行表面灭菌，然后接到含吲哚丁酸:0.5mg/L和6-苄氨基腺嘌呤:0.2mg/L的MS固体培养基上进行培养，培养温度25°C ±2°C，光照强度为4200LUX、光周期16小时；培养40天后产生大量的不定芽；
[0019](2)长柄扁桃不定芽生根的处理:
[0020]当不定芽伸长至3cm时，转移到附加有0.2mg/L吲哚丁酸的MS固体培养基(其中KNO3> NH4NO3^ KH2PO4, MgS047H20、CaCl22H20 作为一个整体调节其剂量到原来的 1/4 倍-1/12倍；同时，在其中添加了 15-25mg.L-1硝酸镧)上诱导根的形成，使长柄扁桃试管苗的生根周期从45天缩短到25天；试管苗的平均根数达到5.2条，根长达到8.5cm,分别是对照的
2.3倍和1.8倍。
[0021]所述的步骤(1)长柄扁桃不定芽是从长柄扁桃试管苗茎段的节处诱导出来；步骤
(2)KN03、NH4N03、KH2PO4、MgSO4.7H20、CaCl2.2H20 作为一个整体添加的的最佳剂量为 MS 培养基规定剂量的1/8 ;硝酸镧的最佳剂量为20mg.L'
[0022]以下是发明人给出的具体实施例。
[0023]实施例1:
[0024]1、长柄扁桃不定芽的获得
[0025]取长柄扁桃试管苗带有节的茎段约3cm，用次氯酸钠溶液或氯化汞溶液进行表面灭菌，然后接到含0.5mg/L的吲哚丁酸和0.2mg/L的6-苄氨基腺嘌呤的MS固体培养基上进行培养，培养温度25°C ±2°C，光照强度为4200LUX，光周期16小时；培养40天后产生大量的不定芽；
[0026]2、长柄扁桃不定芽生根的处理
[0027]当不定芽伸长至3cm时，转移到附加有0.2mg/L吲哚丁酸的MS固体培养基上诱导根的形成。30天后长出可见的根；45天以后，试管苗的平均根数为2.3条、根长为4.6cm,可用于移栽和驯化。
[0028]实施例2:
[0029]1、长柄扁桃不定芽的获得
[0030]与实施例1相同。
[0031]2、长柄扁桃不定芽生根的处理
[0032]当不定芽伸长至3cm时，转移到附加有0.2mg/L吲哚丁酸的MS固体培养基上诱导根的形成。其中，MS培养基中KN03、NH4NO3^ KH2PO4, MgSO4.7H20和CaCl2.2H20作为一个整体调节其剂量到原来的1/4倍。25天后长出可见的根；35天以后，试管苗的平均根数为3.4条、根长为5.0cm,可用于移栽和驯化。
[0033]实施例3:
[0034]1、长柄扁桃不定芽的获得
[0035]与实施例1相同。
[0036]2、长柄扁桃不定芽生根的处理
[0037]当不定芽伸长至3cm时，转移到附加有0.2mg/L吲哚丁酸的MS固体培养基上诱导根的形成。其中，MS培养基中KN03、NH4N03、KH2P04、MgSOJH2O和CaCl22H20作为一个整体调节其剂量到原来的1/8倍。20天后长出可见的根；30天以后，试管苗的平均根数为3.3条、根长为6.2cm,可用于移栽和驯化。
[0038]实施例4:
[0039]1、长柄扁桃不定芽的获得
[0040]与实施例1相同。
[0041]2、长柄扁桃不定芽生根的处理
[0042]当不定芽伸长至3cm时，转移到附加有0.2mg/L吲哚丁酸的MS固体培养基上诱导根的形成。其中，MS培养基中KN03、NH4NO3^ KH2PO4^MgSO4.7H20和CaCl22H20作为一个整体调节其剂量到原来的1/12倍。25天后长出可见的根；40天以后，试管苗的平均根数为3.6条、根长为5.8cm,可用于移栽和驯化。
[0043]实施例5:
[0044]1、长柄扁桃不定芽的获得
[0045]与实施例1相同。
[0046]2、长柄扁桃不定芽生根的处理
[0047]当不定芽伸长至3cm时，转移到附加有0.2mg/L吲哚丁酸的MS固体培养基上诱导根的形成。其中，添加了 15mg.171硝酸镧。25天后长出可见的根；35天以后，试管苗的平均根数为4.5条、根长为6.4cm，可用于移栽和驯化。 [0048]实施例6:
[0049]1、长柄扁桃不定芽的获得[0050]与实施例1相同。
[0051]2、长柄扁桃不定芽生根的处理
[0052]当不定芽伸长至3cm时，转移到附加有0.2mg/L吲哚丁酸的MS固体培养基上诱导根的形成。其中，添加了 20mg 硝酸镧。20天后长出可见的根；30天以后，试管苗的平均根数为4.3条、根长为6.2cm，可用于的移栽和驯化。
[0053]实施例7:
[0054]1、长柄扁桃不定芽的获得
[0055]与实施例1相同。
[0056]2、长柄扁桃不定芽生根的处理
[0057]当不定芽伸长至3cm时，转移到附加有0.2mg/L吲哚丁酸的MS固体培养基上诱导根的形成。其中，添加了 25mg 硝酸镧。30天后长出可见的根；40天以后，试管苗的平均根数为4.0条、根长为5.7cm，可用于移栽和驯化。
[0058]实施例8:
[0059]1、长柄扁桃不定芽的获得
[0060]与实施例1相同。
[0061]2、长柄扁桃不定芽生根的处理
[0062]当不定芽伸长至3cm时，转移到附加有0.2mg/L吲哚丁酸的MS固体培养基上诱导根的形成。其中，MS培养基中KN03、NH4N03、KH2P04、MgSOJH2O和CaCl22H20作为一个整体调节其剂量到原来的1/4倍。同时，在其中添加了 Ιδπ^.!/1硝酸镧。20天后长出可见的根；30天以后，试管苗的平均根数为4.5条、根长为6.2cm，可用于移栽和驯化。
[0063]实施例9:
[0064]1、长柄扁桃不定芽的获得
[0065]与实施例1相同。
[0066]2、长柄扁桃不定芽生根的处理
[0067]当不定芽伸长至3cm时，转移到附加有0.2mg/L吲哚丁酸的MS固体培养基上诱导根的形成。其中，MS培养基中KN03、NH4NO3^ KH2PO4, MgSO4.7H20和CaCl2.2H20作为一个整体调节其剂量到原来的1/4倍。同时，在其中添加了 20!^.!^硝酸镧。15天后长出可见的根；25天以后，试管苗的平均根数为4.3条、根长为7.4cm，可用于移栽和驯化。
[0068]实施例10:
[0069]1、长柄扁桃不定芽的获得
[0070]与实施例1相同。
[0071]2、长柄扁桃不定芽生根的处理
[0072]当不定芽伸长至3cm时，转移到附加有0.2mg/L吲哚丁酸的MS固体培养基上诱导根的形成。其中，MS培养基中KN03、NH4N03、KH2P04、MgSOJH2O和CaCl22H20作为一个整体调节其剂量到原来的1/4倍。同时，在其中添加了 30mg 硝酸镧。20天后长出可见的根；30天以后，试管苗的平均根数为4.8条、根长为5.7cm，可用于移栽和驯化。
[0073]实施例11:
[0074]1、长柄扁桃不定芽的获得
[0075]与实施例1相同。[0076]2、长柄扁桃不定芽生根的处理
[0077]当不定芽伸长至3cm时，转移到附加有0.2mg/L吲哚丁酸的MS固体培养基上诱导根的形成。其中，MS培养基中KNO3、NH4NO3、KH2PO4、MgSOJH2O和CaCl22H20作为一个整体调节其剂量到原来的1/8倍。同时，在其中添加了 20!?*!/1硝酸镧。15天后长出可见的根；25天以后，试管苗的平均根数为5.2条、根长为8.5cm，可用于移栽和驯化。
[0078]实施例12:
[0079]1、长柄扁桃不定芽的获得
[0080]与实施例1相同。
[0081] 2、长柄扁桃不定芽生根的处理
[0082]当不定芽伸长至3cm时，转移到附加有0.2mg/L吲哚丁酸的MS固体培养基上诱导根的形成。其中，MS培养基中KN03、NH4N03、KH2P04、MgSOJH2O和CaCl22H20作为一个整体调节其剂量到原来的1/12倍。同时，在其中添加了 Ιδπ^.!/1硝酸镧。20天后长出可见的根；30天以后，试管苗的平均根数为4.4条、根长为6.5cm，可用于移栽和驯化。
[0083]实施例13:
[0084]1、长柄扁桃不定芽的获得
[0085]与实施例1相同。
[0086]2、长柄扁桃不定芽生根的处理
[0087]当不定芽伸长至3cm时，转移到附加有0.2mg/L吲哚丁酸的MS固体培养基上诱导根的形成。其中，MS培养基中KN03、NH4N03、KH2P04、MgSOJH2O和CaCl22H20作为一个整体调节其剂量到原来的1/12倍。同时，在其中添加了硝酸镧。15天后长出可见的根；25天以后，试管苗的平均根数为4.0条、根长为6.6cm，可用于移栽和驯化。
[0088]实施例14:
[0089]1、长柄扁桃不定芽的获得
[0090]与实施例1相同。
[0091]2、长柄扁桃不定芽生根的处理
[0092]当不定芽伸长至3cm时，转移到附加有0.2mg/L吲哚丁酸的MS固体培养基上诱导根的形成。其中，MS培养基中KN03、NH4N03、KH2P04、MgSOJH2O和CaCl22H20作为一个整体调节其剂量到原来的1/12倍。同时，在其中添加了 25mg.171硝酸镧。25天后长出可见的根；35天以后，试管苗的平均根数为5.4条、根长为6.9cm，可用于移栽和驯化。
【权利要求】
1.一种缩短长柄扁桃试管苗生根时间的方法，其特征在于，该方法包括以下两个步骤: 步骤一，长柄扁桃不定芽的获得: 取长柄扁桃带有节的茎段，用次氯酸钠溶液或氯化汞溶液进行表面灭菌，然后接到含有吲哚丁酸:0.5mg/L和6-苄氨基腺嘌呤:0.2mg/L的MS培养基上进行培养，培养温度250C ±2°C，光照强度为4200LUX，光周期16小时；培养40天后产生大量的不定芽； 步骤二，长柄扁桃不定芽生根的处理: 当不定芽伸长至3cm时，转移到修订的长柄扁桃生根培养基中培养，所述的长柄扁桃生根培养基是添加0.2mg/L吲哚丁酸的MS培养基，其中NH4N03、KNO3> KH2PO4, MgS047H20、CaCl2.2H20作为一个整体调节其剂量到原来的1/4倍-1/12倍，同时添加硝酸镧:15-25mg.L-1 ；15天以后，可见到根的形成，25天以后根数增多、长度增加，即获得可用于移栽和驯化的长柄扁桃试管苗。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤一中所述的长柄扁桃不定芽是从长柄扁桃茎段的节处诱导出来。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤二中所述的可用于移栽和驯化的长柄扁桃试管苗是指根数超过2条、根长大于4.0cm的长柄扁桃试管苗。
【文档编号】A01H4/00GK103907536SQ201410152552
【公开日】2014年7月9日 申请日期:2014年4月16日 优先权日:2014年4月16日
【发明者】郭斌, 尉亚辉, 何玮, 郭丽珠 申请人:西北大学