一种美国红树莓苗的无激素培养及快速繁殖方法
【专利摘要】本发明公开了一种美国红树莓苗的无激素培养及快速繁殖方法，属于植物快繁【技术领域】，包括以下步骤：1)选取消毒灭菌处理后的1～2cm茎尖或带芽茎段作为外植体；2)将外植体放置于诱导培养基中培养产生丛芽，15～20天繁殖出大量丛生芽；3)切割丛生芽放置于生根壮苗培养基中使其大量繁殖；4)经生根培养后，直接放入育苗袋移植获得种苗。本发明解决了美国红树莓苗无性繁殖存在的种苗携带病毒、品种退化、产量低等问题,无需采集大量外植体来获得无菌苗，且不采取激素混用而达到提高增殖率和减少变异的目的，省去了组培苗营养钵移栽的环节，提高移栽成活率，与传统繁殖方式相比，产量提高约90％，对缓解市场供需矛盾有积极意义。
【专利说明】一种美国红树莓苗的无激素培养及快速繁殖方法
【技术领域】
[0001]本发明属于植物快繁【技术领域】，具体涉及一种美国红树莓苗的无激素培养及快速繁殖方法。
【背景技术】
[0002]树莓(blue raspberry)又称木莓、覆盆子,是蔷薇科悬钩子属植物,多年生小灌木类，属浆果类果树，约有450多种，主要分布在北半球的寒带、温带，少数分布在热带、亚热带和南半球。目前，世界树莓发展很快，主要有:俄罗斯、美国、智利、澳大利亚、波兰、加拿大、英国等30多个国家。在国际市场上被誉为黄金水果“水果之王”。特别是美国红树莓，由于色美味香，口感独特，且对多种现代病具有良好的预防和治疗效果，欧美人称其为“贵族水果”。我国栽培历史较晚，近两年市场上较为多见。其果实为聚合浆果柔嫩多汁、色泽宜人、风味独特、营养丰富，属于不饱和脂肪酸，可促进前列腺素分泌荷尔蒙。树莓果经榨汁后可以制成果酱、果汁、果酒、果冻等，也可广泛应用于医疗保健、化妆品等方面。树莓栽培周期短、见效快、分枝多、产量高、生长快、受益长，经济效益显著。随着我国果树业的发展，树莓将成为第三代无污染的绿色保健型水果。红树莓常规的繁殖方法有分根法、分株法、扦插法和压条法等。但上述繁殖方法繁殖速度慢，对母本材料要求高，用量大，还受到季节的限制，难以进行规模化、标准化生产和优良品种的大面积推广。此外，目前运用组织培养方法繁殖生产种苗的方法成本较高、培养周期较长，在育苗过程中采取激素，对种苗的变异性和存活率。因此，需要寻找一种新的成本低、时间短、无激素培养、成活率高的无性繁殖方法来扩大美国红树莓繁殖量，进行美国红树莓苗木的产业化生产，以满足市场需求。本发明采用独特的培养配方，解决了目前美国红树莓苗无性繁殖存在的种苗携带病毒、品种退化、有效产量低等问题。本发明之方法高效、快速，周期短、繁殖率高、成本低廉，无需通过采集大量外植体来获得无菌苗，且不采取激素混用而达到提高增殖率和减少变异的目的，省去了组培苗营养钵移栽的环节，提高移栽成活率，与传统繁殖方式相比，产量提高约90 %，完全实现了美国红树莓优良品种种苗的规模化和标准化生产，对缓解美国红树莓的市场供需矛盾有积极意义。
【发明内容】
[0003]本发明解决的问题在于提供一种美国红树莓苗的无激素培养及快速繁殖方法，本方法是一种周期短、繁殖率高、无激素培养、成本低廉的无病毒携带的育苗方法。
[0004]本发明是通过以下技术方案来实现:
[0005]快速繁殖美国红树莓的方法，包括以下步骤:
[0006]I)选取消毒灭菌处理后的美国红树莓的茎尖或带芽茎段作为外植体:所截取的外植体为I?2cm茎尖或带芽茎段；
[0007]2)将美国红树莓外植体放置于诱导培养基中直接诱导培养产生丛芽:将外植体转接至丛生芽诱导及增殖培养基，15?20天繁殖出大量丛生芽；
[0008]3)切割丛生芽放置于生根壮苗培养基中使其大量繁殖:将丛生芽转接至生根壮苗培养基，约20天后，可获得高7?9cm、根系发达、根茎粗壮的美国红树莓苗；
[0009]4)经生根培养后，直接放入育苗袋移植获得美国红树莓种苗
[0010]所述步骤I)中消毒灭菌方法是在无菌超净台中，将经洗涤剂清洗过的I?2cm茎尖或带芽茎段，依次在体积浓度为80%?90%的酒精中消毒处理30秒、在质量浓度为1%的聚维酮碘溶液中灭菌处理5分钟、在体积浓度为1.5%的次氯酸钠溶液中消毒处理10分钟，之后用去离子水清洗2?3次。
[0011]所述步骤2)中丛生芽诱导剂增殖培养基的配置为MS固体培养基添加0.8?
1.0mg/Kg6-苄氨基嘌呤、25?35g/Kg蔗糖和4?6g/Kg琼脂；培养条件为:温度23?25°C，相对湿度75?90%，光照时间10?12小时/天，光照强度3000?5000Lx。
[0012]所述步骤3)中所述生根壮苗培养基为1/2MS固体培养基添加0.2?0.5mg/Kg乙酸、50?60g/Kg香蕉汁、165?200g/Kg番爺汁、8?12g/Kg活性炭、10?25g/Kg果糖和4?6g/Kg琼脂；培养条件为:温度23?25°C，相对湿度75?90%，光照时间10?12小时/天，光照强度3000?5000Lx。
[0013]所述步骤4)中的生根苗移至室外散射光下锻炼6?10天后，取出生根苗，用清水将苗上培养基洗净，放入质量浓度为I %的百菌清溶液中消毒I?2分钟，移栽至装有腐殖土:红土 = 1:1，其中该混合基质中含有质量比为5%的珍珠岩，即得红树莓种苗。
[0014]与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果:
[0015]本发明采用独特的培养配方，解决了目前美国红树莓苗无性繁殖存在的种苗携带病毒、品种退化、有效产量低等问题。本发明之方法高效、快速，周期短、繁殖率高、成本低廉，无需通过采集大量外植体来获得无菌苗，且不采取激素混用而达到提高增殖率和减少变异的目的，省去了组培苗营养钵移栽的环节，提高移栽成活率，与传统繁殖方式相比，产量提高约90%，完全实现了美国红树莓优良品种种苗的规模化和标准化生产，对缓解美国红树莓的市场供需矛盾有积极意义。
【具体实施方式】
[0016]下面结合具体的实施例对本发明做进一步的详细说明，所述是对本发明的解释而不是限定。
[0017]实施例1
[0018]一种美国红树莓苗的无激素培养及快速繁殖方法，包括以下步骤:
[0019]I)将经洗涤剂清洗过的2cm茎尖，依次在体积浓度为80%的酒精中消毒处理30秒、在质量浓度为I %的聚维酮碘溶液中灭菌处理5分钟、在体积浓度为1.5%的次氯酸钠溶液中消毒处理10分钟，之后用去离子水清洗2次。
[0020]2)处理后的茎尖转接至丛生芽诱导剂增殖培养基中培植:在MS固体培养基添加0.8mg/Kg6-苄氨基嘌呤、25/Kg果糖和4g/Kg琼脂；培养条件为:温度23°C，相对湿度75%，光照时间10小时/天，光照强度3000LX。
[0021]3)切割丛生芽放置于生根壮苗培养基中使其大量繁殖:将幼苗转接至1/2MS固体培养基添加0.2mg/Kg乙酸、50/Kg香蕉汁、165/Kg番茄汁、8g/Kg活性炭、10/Kg果糖和4g/Kg琼脂的生根壮苗培养基中培养，培养条件为:温度23°C，相对湿度75%，光照时间10小时/天，光照强度3000LX，约30天后，可获得高6cm、根系发达、根茎粗壮的美国红树莓苗。
[0022]4)生根苗移至室外散射光下锻炼6天后，取出生根苗，用清水将苗上培养基洗净，放入质量浓度为I %的百菌清溶液中消毒2分钟，移栽至装有腐殖土:红土= 1:1，其中该混合基质中含有质量比为5%的珍珠岩，即得美国红树莓种苗
[0023]实施例2
[0024]一种美国红树莓苗的无激素培养及快速繁殖方法，包括以下步骤:
[0025]I)将经洗涤剂清洗过的Icm带芽茎段，依次在体积浓度为90%的酒精中消毒处理30秒、在质量浓度为I %的聚维酮碘溶液中灭菌处理5分钟、在体积浓度为1.5%的次氯酸钠溶液中消毒处理10分钟，之后用去离子水清洗2次。
[0026]2)处理后的茎尖转接至丛生芽诱导剂增殖培养基中培植:在MS固体培养基添加
0.9mg/Kg6-苄氨基嘌呤、28/Kg果糖和5g/Kg琼脂；培养条件为:温度25°C，相对湿度85%，光照时间11小时/天，光照强度4000LX。
[0027]3)切割丛生芽放置于生根壮苗培养基中使其大量繁殖:将幼苗转接至1/2MS固体培养基添加0.3mg/Kg乙酸、50/Kg香蕉汁、185/Kg番茄汁、8/Kg活性炭、15/Kg蔗糖和5g/Kg琼脂的生根壮苗培养基中培养，培养条件为:温度25°C，相对湿度90%，光照时间11小时/天，光照强度4000LX，约30天后，可获得高6cm、根系发达、根茎粗壮的美国红树莓苗。
[0028]4)生根苗移至室外散射光下锻炼8天后，取出生根苗，用清水将苗上培养基洗净，放入质量浓度为I %的百菌清溶液中消毒I分钟，移栽至装有腐殖土:红土= 1:1，其中该混合基质中含有质量比为5%的珍珠岩，即得红树莓种苗
[0029]实施例3
[0030]一种美国红树莓苗的无激素培养及快速繁殖方法，包括以下步骤:
[0031]I)将经洗涤剂清洗过的Icm带芽茎段，依次在体积浓度为90%的酒精中消毒处理30秒、在质量浓度为I %的聚维酮碘溶液中灭菌处理5分钟、在体积浓度为1.5%的次氯酸钠溶液中消毒处理10分钟，之后用去离子水清洗2次。
[0032]2)处理后的茎尖转接至丛生芽诱导剂增殖培养基中培植:在MS固体培养基添加Img/Kg6-苄氨基嘌呤、30/Kg果糖和6g/Kg琼脂；培养条件为:温度23°C，相对湿度85 %，光照时间11小时/天，光照强度3000Lx。
[0033]3)切割丛生芽放置于生根壮苗培养基中使其大量繁殖:将幼苗转接至1/2MS固体培养基添加0.3mg/Kg乙酸、60/Kg香蕉汁、180/Kg番茄汁、8/Kg活性炭、12/Kg果糖和4g/Kg琼脂的生根壮苗培养基中培养，培养条件为:温度23°C，相对湿度85%，光照时间12小时/天，光照强度3000LX，约30天后，可获得高6cm、根系发达、根茎粗壮的美国红树莓苗。
[0034]4)生根苗移至室外散射光下锻炼6天后，取出生根苗，用清水将苗上培养基洗净，放入质量浓度为I %的百菌清溶液中消毒I分钟，移栽至装有腐殖土:红土= 1:1，其中该混合基质中含有质量比为5%的珍珠岩，即得红树莓种苗
[0035]实施例4
[0036]一种美国红树莓苗的无激素培养及快速繁殖方法，包括以下步骤:
[0037]I)将经洗涤剂清洗过的2cm带芽茎段，依次在体积浓度为80%的酒精中消毒处理30秒、在质量浓度为I %的聚维酮碘溶液中灭菌处理5分钟、在体积浓度为1.5%的次氯酸钠溶液中消毒处理10分钟，之后用去离子水清洗2次。
[0038]2)处理后的茎尖转接至丛生芽诱导剂增殖培养基中培植:在MS固体培养基添加
0.8mg/Kg6-苄氨基嘌呤、30/Kg果糖和6g/Kg琼脂；培养条件为:温度23°C，相对湿度90%，光照时间12小时/天，光照强度5000Lx。
[0039]3)切割丛生芽放置于生根壮苗培养基中使其大量繁殖:将幼苗转接至1/2MS固体培养基添加0.2mg/Kg乙酸、60/Kg香蕉汁、200/Kg番茄汁、8/Kg活性炭、15/Kg果糖和4g/Kg琼脂的生根壮苗培养基中培养，培养条件为:温度25°C，相对湿度90%，光照时间12小时/天，光照强度5000LX，约30天后，可获得高8cm、根系发达、根茎粗壮的美国红树莓苗。
[0040]4)生根苗移至室外散射光下锻炼8天后，取出生根苗，用清水将苗上培养基洗净，放入质量浓度为I %的百菌清溶液中消毒I分钟，移栽至装有腐殖土:红土= 1:1，其中该混合基质中含有质量比为5%的珍珠岩，即得红树莓种苗。
[0041]实施例5
[0042]一种美国红树莓苗的无激素培养及快速繁殖方法，包括以下步骤:
[0043]I)将经洗涤剂清洗过的2cm茎尖，依次在体积浓度为90%的酒精中消毒处理30秒、在质量浓度为I %的聚维酮碘溶液中灭菌处理5分钟、在体积浓度为1.5%的次氯酸钠溶液中消毒处理10分钟，之后用去离子水清洗2次。
[0044]2)处理后的茎尖转接至丛生芽诱导剂增殖培养基中培植:在MS固体培养基添加
0.8mg/Kg6-苄氨基嘌呤、25/Kg果糖和6g/Kg琼脂；培养条件为:温度25°C，相对湿度75%，光照时间12小时/天，光照强度5000Lx。
[0045]3)切割丛生芽放置于生根壮苗培养基中使其大量繁殖:将幼苗转接至1/2MS固体培养基添加0.5mg/Kg乙酸、60/Kg香蕉汁、200/Kg番茄汁、8/Kg活性炭、10/Kg果糖和6g/Kg琼脂的生根壮苗培养基中培养，培养条件为:温度25°C，相对湿度85%，光照时间10小时/天，光照强度5000LX，约30天后，可获得高8cm、根系发达、根茎粗壮的美国红树莓苗。
[0046]4)生根苗移至室外散射光下锻炼6天后，取出生根苗，用清水将苗上培养基洗净，放入质量浓度为I %的百菌清溶液中消毒I分钟，移栽至装有腐殖土:红土= 1:1，其中该混合基质中含有质量比为5%的珍珠岩，即得红树莓种苗。
【权利要求】
1.一种美国红树莓苗的无激素培养及快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤: 1)选取消毒灭菌处理后的美国红树莓的茎尖或带芽茎段作为外植体； 2)将美国红树莓外植体放置于诱导培养基中直接诱导培养产生丛芽； 3)切割丛生芽放置于生根壮苗培养基中使其大量繁殖。 4)经生根培养后，直接放入育苗袋移植获得美国红树莓种苗。
2.根据权利要求1所述的一种美国红树莓苗的无激素培养及快速繁殖方法，其特征在于:所述步骤I)美国红树莓外植体进行消毒灭菌处理:在无菌超净台中，将经洗涤剂清洗过的I?2cm茎尖或带芽茎段，依次在体积浓度为80%?90%的酒精中消毒处理30秒、在质量浓度为I %的聚维酮碘溶液中灭菌处理5分钟、在体积浓度为1.5%的次氯酸钠溶液中消毒处理10分钟，之后用去离子水清洗2?3次。
3.根据权利要求1所述的一种美国红树莓苗的无激素培养及快速繁殖方法，其特征在于:所述步骤2)中所述丛生芽诱导剂培养基是MS固体培养基添加0.8?1.0mg/Kg6-苄氨基嘌呤、25?35g/Kg果糖和4?6g/Kg琼脂；培养条件为:温度23?25°C，相对湿度75?90%，光照时间10?12小时/天，光照强度3000?5000Lx。
4.根据权利要求1所述的一种美国红树莓苗的无激素培养及快速繁殖方法，其特征在于:所述步骤3)中所述生根壮苗培养基的配置为:1/2MS固体培养基添加0.2?0.5mg/Kg乙酸、50?60g/Kg香蕉汁、165?200g/Kg番爺汁、8?12g/Kg活性炭、10?25g/Kg果糖和4?6g/Kg琼脂；培养条件为:温度23?25°C，相对湿度75?90%，光照时间10?12小时/天，光照强度3000?5000Lx。
5.根据权利要求1所述的一种美国红树莓苗的无激素培养及快速繁殖方法，其特征在于:所述步骤4)中的生根苗移至室外散射光下锻炼6?10天后，取出生根苗，用清水将苗上培养基洗净，放入质量浓度为I %的百菌清溶液中消毒I?2分钟，移栽至装有腐殖土:红土 = 1:1，其中该混合基质中含有质量比为5%的珍珠岩，即得红树莓种苗。
【文档编号】A01H4/00GK104170731SQ201410258289
【公开日】2014年12月3日 申请日期:2014年6月11日 优先权日:2014年6月11日
【发明者】马纯 申请人:陕西恒富源林业有限公司