一种金挖耳的快速繁殖方法
【专利摘要】本发明涉及一种金挖耳的快速繁殖方法，包括外植体的消毒、诱导培养、增殖培养、生根培养和炼苗移栽。本发明的金挖耳组培方法操作简便，生长周期短，成活率高，可以短期内获得大量的制药原料。
【专利说明】一种金挖耳的快速繁殖方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及金挖耳组织培养的快繁方法，属于植物【技术领域】。
【背景技术】
[0002]金挖耳，Carpesium divaricatum,菊科天名精属的植物，生长于海拔100米至2000米的山坡那、荒地，多生于路旁或山坡灌丛中，分布在日本、朝鲜以及中国大陆的华东、华中、西南、华南、东北等地，清热解毒，治感冒，头风，泄泻，咽喉肿痛，赤眼，痈肿疮毒，痔核出血。目前金挖耳的利用皆为人工采集，采集难度达，尚未有人工引种栽培，使用率低，组培应用于金挖耳的繁殖技术，有利于其广泛的推广应用。
【发明内容】
[0003]本发明所要解决的技术问题是提供一种金挖耳的快速繁殖方法，由该方法所制备得到的金挖耳增殖系数高，成活率高，可以提高金挖耳的利用率。
[0004]本发明所要解决的技术问题是通过以下方案来实现的:
取金挖耳带芽茎段，先在漂白粉中浸泡3min，毛刷去除表面污溃，流水冲洗lh，超净工作台上75%酒精处理30s，氯化汞处理9min，无菌水冲洗5遍。接入培养基配方为MS+NAA0.2mg/L+IBA0.5mg/l+VC诱导培养基中进行芽诱导培养，附加蔗糖30g/L，琼脂
6.5g/L，PH5.8，光照 20001x，诱导出来的芽放入增殖培养基 MS+2，4-D0.15mg/L+TDZ0.3mg/L+15g/LPVP,附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，PH5.8，光照20001x，增殖培养出来的丛生芽放入生根培养基3/4MS+NAA0.3mg/L，将生根试管苗的玻璃瓶置于培养室中打开封口膜炼苗培养，然后小心取出试管苗，洗净根部培养基，栽植于含水量为50%的珍珠岩的育苗盘中培养15d，移栽至室外，三层薄膜覆盖，培养20天后，逐层掀开薄膜，进行野外栽培。
[0005]采用本发明制备的金挖耳成活率为94%，周期短，产量大，能耗少，利于大规模种植。
[0006]下面将结合【具体实施方式】对本发明作进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
[0007]实施例1
取金挖耳带芽茎段，先在漂白粉中浸泡3min，毛刷去除表面污溃，流水冲洗lh，超净工作台上75%酒精处理30s，氯化汞处理9min，无菌水冲洗5遍。接入培养基配方为MS+NAA0.2mg/L+IBA0.5mg/l+VC诱导培养基中进行芽诱导培养，附加蔗糖30g/L，琼脂
6.5g/L，PH5.8，光照20001x，诱导出来的芽放入增殖培养基MS+2，4-D0.lmg/L+TDZ0.2mg/L+15g/LPVP,附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，PH5.8，光照20001x，增殖培养出来的丛生芽放入生根培养基3/4MS+NAA0.lmg/L,生根后的金挖耳试管苗先移栽到温室，然后移栽到大田进行炼苗培养，金挖耳成活率为91%。
[0008]实施例2
取金挖耳带芽茎段，先在漂白粉中浸泡3min，毛刷去除表面污溃，流水冲洗lh，超净工作台上75%酒精处理30s，氯化汞处理9min，无菌水冲洗5遍。接入培养基配方为MS+NAA0.2mg/L+IBA0.5mg/l+VC诱导培养基中进行芽诱导培养，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，PH5.8，光照20001x，诱导出来的芽放入增殖培养基MS+2，4-D0.2mg/L+TDZ0.4mg/L+15g/LPVP,附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，PH5.8，光照20001x，增殖培养出来的丛生芽放入生根培养基3/4MS+NAA0.5mg/L,生根后的金挖耳试管苗先移栽到温室，然后移栽到大田进行炼苗培养，金挖耳成活率为90%。
[0009]实施例3
取金挖耳带芽茎段，先在漂白粉中浸泡3min，毛刷去除表面污溃，流水冲洗lh，超净工作台上75%酒精处理30s，氯化汞处理9min，无菌水冲洗5遍。接入培养基配方为MS+NAA0.2mg/L+IBA0.5mg/l+VC诱导培养基中进行芽诱导培养，附加蔗糖30g/L，琼脂
6.5g/L，PH5.8，光照 20001x，诱导出来的芽放入增殖培养基 MS+2，4-D0.15mg/L+TDZ0.2mg/L+15g/LPVP,附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，PH5.8，光照20001x，增殖培养出来的丛生芽放入生根培养基3/4MS+NAA0.5mg/L，生根后的金挖耳试管苗先移栽到温室，然后移栽到大田进行炼苗培养，金挖耳成活率为89%。
[0010]实施例4
取金挖耳带芽茎段，先在漂白粉中浸泡3min，毛刷去除表面污溃，流水冲洗lh，超净工作台上75%酒精处理30s，氯化汞处理9min，无菌水冲洗5遍。接入培养基配方为MS+NAA0.2mg/L+IBA0.5mg/l+VC诱导培养基中进行芽诱导培养，附加蔗糖30g/L，琼脂
6.5g/L，PH5.8，光照 20001x，诱导出来的芽放入增殖培养基 MS+2，4-D0.15mg/L+TDZ0.4mg/L+15g/LPVP,附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，PH5.8，光照20001x，增殖培养出来的丛生芽放入生根培养基3/4MS+NAA0.lmg/L,生根后的金挖耳试管苗先移栽到温室，然后移栽到大田进行炼苗培养，金挖耳成活率为92%。
【权利要求】
1.一种金挖耳的快速繁殖方法，包括无菌外植体的获得、芽的诱导、芽的增殖、生根诱导、野外炼苗移栽，其主要步骤如下: (1)取金挖耳带芽茎段，按照常规的消毒方法对其进行灭菌处理； (2)将步骤(I)灭菌处理过的金挖耳带芽茎段接入培养基配方为MS+NAA0.2mg/L+IBA0.5mg/l+VC诱导培养基中进行芽诱导培养，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，PH5.8，光照 2000IX ； (3)取步骤(2)诱导出来的芽放入增殖培养基MS+2，4-D0.1-0.2mg/L+TDZ0.2-0.4mg/L+15g/LPVP,附加蔗糖 30g/L，琼脂 6.5g/L，PH5.8，光照 20001x ； (4)取步骤(3)增殖培养出来的丛生芽放入生根培养基3/4MS+NAA0.1-0.5mg/L ； (5)取步骤(4)生根后的金挖耳试管苗先移栽到温室，然后移栽到大田进行炼苗培养。
2.按照权利要求1所述的一种金挖耳的快速繁殖方法，其特征在于:步骤(I)中所述金挖耳无菌芽的获得为，取金挖耳带芽茎段，先在漂白粉中浸泡3min，毛刷去除表面污溃，流水冲洗lh，超净工作台上75%酒精处理30s，氯化汞处理9min，无菌水冲洗5遍。
3.按照权利要求1所述的一种金挖耳的快速繁殖方法，其特征在于:步骤(2)诱导培养基MS+NAA0.2mg/L+IBA0.5mg/l中附加了 VC，能克服苗在增殖培养过程中褐化现象的出现。
4.按照权利要求1所述的一种金挖耳的快速繁殖方法，其特征在于:步骤(3)中的增殖培养基MS+2，4-D0.1-0.2mg/L+TDZ0.2-0.4mg/L中附加了 15g/LPVP可以防止在增殖培养过程中幼苗的玻璃化现象。
5.按照权利要求1所述的一种金挖耳的快速繁殖方法，其特征在于:步骤(4)中的生根培养条件为蔗糖20g/L，琼脂5g/L，PH5.8，光照40001x，湿度60-70%。
6.按照权利要求1所述的一种金挖耳的快速繁殖方法，其特征在于:步骤(5)中金挖耳的炼苗培养方法为将生根试管苗的玻璃瓶置于培养室中打开封口膜炼苗培养，然后小心取出试管苗，洗净根部培养基，栽植于含水量为50%的珍珠岩的育苗盘中培养15d,移栽至室外，三层薄膜覆盖，培养20天后，逐层掀开薄膜，进行野外栽培。
【文档编号】A01H4/00GK104170736SQ201410449524
【公开日】2014年12月3日 申请日期:2014年9月4日 优先权日:2014年9月4日
【发明者】张金芳, 杨存 申请人:南京标科生物科技有限公司