一种获得睡莲品种间杂交种的方法
【专利摘要】本发明涉及一种获得睡莲品种间杂交种的方法，属于植物育种【技术领域】。其主要技术措施是：品种间进行杂交后，取授粉后14-16d的子房，并对其进行无菌处理，再将其中的胚取出，后将胚作为外植体在1/2MS添加2，4-D 1.5mg/L+6-BA 2.0mg/L的培养基进行培养，经过继代培养和扩繁得到幼苗后，将幼苗转移到MS添加0.2mg/LNAA的培养基中生根，培养温度20-25℃，每日光照10-12h，光照度1600-2000lx。本发明能够解决睡莲品种间杂交受精后障碍这一关键技术问题，同时可得到睡莲品种间的杂交种实生苗。
【专利说明】一种获得睡莲品种间杂交种的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种获得睡莲品种间杂交种的方法，属于植物育种【技术领域】。
【背景技术】
[0002]睡莲是睡莲科睡莲属(Nymphaea)植物的泛称。全世界睡莲属植物有40-50种,我国有5种。睡莲以其丰富的花色、圣洁的寓意及茎叶对水中富营养物和有害物质的强吸附能力，深受人们的喜爱，被广泛应用于园林水景中。
[0003]目前，品种间杂交育种依然是花卉新品种的选育的主要方法之一。国外睡莲的杂交选育开展了 150年，已选育大批新品种，而国内睡莲的新品种选育从上世纪末刚刚起步，许多通过杂交手段获得杂交种技术还未能突破，如，睡莲部分品种间杂交存在受精后障碍，致使杂交得不到种子，严重影响了睡莲花色、叶色等优异基因的再组合，因此解决这一难题对睡莲新品种选育具有重要的意义。
[0004]而利用胚培养技术来克服睡莲品种间受精后障碍可以直接获得杂交花型、花色、叶色和抗性不同的睡莲新品种。这一技术的公布不仅可以填补国内睡莲胚培养技术的空白，而且可以提供一种选育睡莲新品种的方法，从而加速睡莲特异遗资源应用于生产提供技术支持。
【发明内容】
[0005]本发明要解决的技术问题是:针对现有技术存在的缺陷，提供一种获得睡莲品种间杂交种的方法，此方法能够解决睡莲品种间杂交受精后障碍这一关键技术问题，同时可得到睡莲品种间的杂交种实生苗。
[0006]本发明通过以下技术方案解决技术问题:一种获得睡莲品种间杂交种的方法,主要包括以下步骤:
[0007]步骤一、将父母本在开花前一天进行套袋隔离，第二天上午，取新鲜的父本花粉对母本进行授粉，授粉后进行套袋隔离；
[0008]步骤二、授粉后14-16d连续取杂交花序，将子房轻轻剥出，后将子房用流水冲洗lOmin，再用医用乙醇消毒50s，消毒后置于0.1 %的升汞溶液中4_5min，然后用无菌水冲洗5-6次，冲洗后用无菌的刀片划开种皮，取其胚作为外植体。
[0009]步骤三、将外植体置于1/2MS添加2，4-D 1.5mg/L+6_BA 2.0mg/L的培养基中进行培养，每瓶接种胚胎10-15个；35d后转入继代培养，继代培养基为MS+6-BA 1.0mg/L+NAA0.lmg/L,得到幼苗后转到MS+6-BA 0.2mg/L的培养基中扩繁；扩繁得到幼苗后，将幼苗转移到MS添加0.2mg/LNAA的培养基生根，培养温度20-25 °C，每日光照10_12h，光照度1600-20001x。
[0010]有益效果本发明提供的获得睡莲品种间杂交种的方法，与现有技术相比具有如下优点和积极效果:
[0011](I)本发明利用不同花色、花型的睡莲品种间进行杂交，结合胚培养技术进行种质创新，拓宽了睡莲品种的遗传基础，交换了睡莲品种间的优异基因，实现了部分种间杂交，创造了一批新种质。
[0012](2)在胚培养技术上比较了不同培养基、不同激素配比、不同胚龄等的效果，筛选出培养胚龄以14-16d最好，培养基以1/2MS，培养基中添加2，4-Dl.5mg/L+6-BA 2.0mg/L效果较好。
[0013](3)获得了一批睡莲品种间的种间杂种。
[0014](4)在本发明的基础上，使利用创新的睡莲种质进行睡莲育种成为可能，同时可进行睡莲起源演化及睡莲属亲缘关系研究。
【具体实施方式】
[0015]本发明提供的获得睡莲品种间杂交种的方法，其实施方式如下:
[0016]1.1材料选择
[0017]‘粉妆’ (Nymphaea ‘Fen Zhuangj)和‘白仙子’ (Nymphaea ‘Gonnere’)(均为公知品种，见参考文献黄国振，邓惠勤，李祖修，李钢.睡莲.中国林业出版社，北京，2001)，
‘粉妆’花色是粉色花，花型是星形，而‘白仙子’花色是白色，花型球状。若将‘白仙子’的花型转移到‘粉妆’上，将培育出多瓣花型漂亮的粉色花，事实上，经过多年杂交实践，‘粉妆’与‘白仙子’杂交得不到杂交种，其主要原因在于存在受精后障碍。
[0018]1.2 ‘粉妆’和‘白仙子’杂交种实生苗的获得
[0019]‘粉妆’作为母本，‘白仙子’作为父本进行人工杂交，将父母本在开花前一天套袋，人工授粉工作选择在晴天进行，花朵开放当天进行授粉。授粉前用干净的镊子将父本的花粉块轻轻取下，置于干燥的烧杯中或纸上，置入母本的柱头上，完成授粉后套袋。授粉后14-16d连续取杂交花序，将子房轻轻剥出，后将子房用流水冲洗lOmin，再用医用乙醇消毒50s，消毒后置于0.1 %的升汞溶液中4-5min，然后用无菌水冲洗5_6次，冲洗后用无菌的刀片划开种皮，取其胚作为外植体。将此外植体置于1/2MS添加2，4-D 1.5mg/L+6-BA
2.0mg/L的培养基中进行培养，每瓶接种胚胎10-15个；35d后转入继代培养，继代培养基为MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.lmg/L，得到幼苗后转到MS+6-BA 0.2mg/L的培养基中扩繁；扩繁得到幼苗后，将幼苗转移到MS添加0.2mg/LNAA的培养基生根，培养温度20_25°C，每日光照10-12h，光照度1600-20001X。获得‘粉妆’和‘白仙子’种间杂交后代材料。
【权利要求】
1.一种获得睡莲品种间杂交种的方法，包括以下步骤: 步骤一、将父母本在开花前一天进行套袋隔离，第二天上午，取新鲜的父本花粉对母本进行授粉，授粉后进行套袋隔离； 步骤二、授粉后14-16d连续取杂交花序，将子房轻轻剥出，后将子房用流水冲洗lOmin，再用医用乙醇消毒50s，消毒后置于0.1%的升汞溶液中4_5min，然后用无菌水冲洗5-6次，冲洗后用无菌的刀片划开种皮，取其胚作为外植体； 步骤三、将外植体置于添加生长素和细胞分裂素的接种培养基中进行培养，每瓶接种胚胎10-15个；35d后转入继代培养，得到幼苗后转到MS+6-BA 0.2mg/L的培养基中扩繁；扩繁得到幼苗后，将幼苗转移到生根培养基中，培养温度20-25°C，每日光照10-12h，光照度 1600-20001x。
2.根据权利要求1所述一种获得睡莲品种间杂交种的方法，其特征在于:所述步骤二中，取子房的时间为授粉后14-16d。
3.根据权利要求1所述一种获得睡莲品种间杂交种的方法，其特征在于:所述步骤三中接种培养基为:1/2MS，培养基中添加的生长素是浓度为1.5mg/L的2，4_D，细胞分裂素是浓度为2.0mg/L的6-BA ;所述继代培养的培养基为MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.lmg/L ;所述生根培养基为MS添加0.2 mg/L NAA。
【文档编号】A01H1/02GK104255432SQ201410450321
【公开日】2015年1月7日 申请日期:2014年9月4日 优先权日:2014年9月4日
【发明者】孙春青, 潘跃平, 马志虎, 戴忠良, 毛忠良, 吴国平, 秦文斌, 姚悦梅, 张振超, 潘永飞, 孙国胜, 王建华, 陈智超 申请人:镇江瑞繁农艺有限公司