本发明涉及植物栽培技术领域，具体说是一种花叶万年青的原种制作方法。
背景技术：
花叶万年青，别名哑秆，天南星科，种拉丁名为dieffenbachiapicta(lodd.)schott，性喜高温多湿的半阴环境，忌强光直射，生长适温18-25℃，冬季生长温度15℃以上，如低于10℃则叶片发黄脱落。要求疏松肥沃、排水良好的土壤。可用扦插或组织培养法(即组培法)繁殖。
目前，花叶万年青的组培工艺通常包括：母本——原种制作——初代培养——初代切割与细菌检测——增殖切割——过渡培养——生根培养——出货。其中，原种制作是组培工艺中非常关键的一步。现有的花叶万年青原种制作方法，通常采用以下步骤：
1、预处理：将选择好的母株置于干燥、通风良好的资源圃或苗床上，制种前15～25d停止浇水、施肥，使其自然干燥，干燥程度由两个方面判断：1)基质土层干燥，用手捏呈散沙状，不粘手；2)植株萎蔫程度：整株萎蔫。
2、采种：用刀片去除叶片以及基部和茎段间的一些明显的杂质，切成1个芽1段，顶芽去除外苞片并去除杂质，用洗衣粉浸泡并用清水冲洗干净；根据茎段、顶芽大小及老嫩程度进行分类。
3、消毒：在无菌工作台上根据外植体(即茎段和顶芽)的大小进行分瓶，每瓶5～8个，喷酒精5～8s后用质量浓度为1.0wt‰的升汞水溶液进行消毒20～40min，然后用无菌水冲洗3次，每隔3～5min换1次。然后切除外植体两端变色部分以及四周被腐蚀的部分，使外植体露出新鲜组织再接种到培养基上。
采用上述的花叶万年青原种制作方法，制作周期通常在3个月左右，真、细菌污染率及死亡率高，原种制作成功率只能达到50％左右。
技术实现要素：
为了克服上述现有技术的缺陷，本发明所要解决的技术问题是提供一种制作周期短、真细菌污染率低、原种成活率高的花叶万年青的原种制作方法。
为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：
花叶万年青的原种制作方法，包括：
预处理：将母株置于18～25℃、相对湿度为15～20％、通风良好的环境中晾3～8天，期间停止浇水、施肥；
采种：去除叶片以及基部和茎段间的杂质，采用顶芽和茎段作为外植体，顶芽去除外苞片并去除杂质，茎段按1个侧芽1段进行切割，用洗衣粉浸泡外植体并用清水冲洗干净；
消毒：将外植体用升汞水溶液消毒25～30min，消毒后用无菌水清洗干净，然后切除外植体两端变色部分以及四周被腐蚀的部分，使外植体露出新鲜组织再接种到培养基上；
培养：控制培养时的温度为26±1℃，光照度为300～500lx。
本发明的有益效果在于：区别于现有技术，本发明加强了对母本的预处理和外植体的消毒，并优化培养工艺，整个制作周期可大大缩短至50～60天，顶芽萌动时间仅需5～8天，茎段的芽萌动时间仅需8～13天，而且无论是顶芽还是茎段，均没有出现真菌污染，彻底消除了真菌污染现象，茎段无真、细菌污染以及死亡现象，外植体的总体成活率可达70％以上。
具体实施方式
为详细说明本发明的技术内容、所实现目的及效果，以下结合实施方式予以说明。
本发明最关键的构思在于：加强对母本的预处理和外植体的消毒，并优化培养工艺。
具体的，本发明提供的花叶万年青的原种制作方法，包括：
预处理：将母株置于18～25℃、相对湿度为15～20％、通风良好的环境中晾3～8天，期间停止浇水、施肥；
采种：去除叶片以及基部和茎段间的杂质，采用顶芽和茎段作为外植体，顶芽去除外苞片并去除杂质，茎段按1个侧芽1段进行切割，用洗衣粉浸泡外植体并用清水冲洗干净；
消毒：将外植体用升汞水溶液消毒25～30min，消毒后用无菌水清洗干净，然后切除外植体两端变色部分以及四周被腐蚀的部分，使外植体露出新鲜组织再接种到培养基上；
培养：控制培养时的温度为26±1℃，光照度为300～500lx。
其中，所述升汞水溶液的浓度为1.5wt‰。
其中，用升汞水溶液消毒25～30min后，用无菌水清洗3～5次，每次3～5min。
其中，所述培养基中包含有tdz、kt、蔗糖和卡拉胶，tdz的含量为0.05mg/l，kt的含量为0.2mg/l。
其中，所述培养基中还包含有ams和2-ip，所述2-ip的含量为3mg/l。
其中，所述培养基的ph值为5.8。
从上述描述可知，本发明的有益效果在于：区别于现有技术，本发明加强了对母本的预处理和外植体的消毒，并优化培养工艺，整个制作周期可大大缩短至50～60天，顶芽萌动时间仅需5～8天，茎段侧芽萌动时间仅需8～13天，而且无论是顶芽还是茎段，均没有出现真菌污染，彻底消除了真菌污染现象，茎段无真、细菌污染以及死亡现象，外植体的总体成活率可达70％以上。
实施例1
1、材料与方法
1.1试验材料
选取无病虫害，植株比较键壮，发育成熟，无变异同时具有母本基本生长性状(叶色为绿色和乳白色斑块相间，叶片大，椭圆状披针形)的植株作为母本。经预处理后，选取母株上出现轻度萎焉现象的顶芽和茎段作为外植体。
1.2试验方法
1.2.1试验步骤
制种前将引种的母本植株置于18～25℃、相对湿度为15～20％、通风良好的环境中晾3～8天，期间停止浇水、施肥，待其植株叶片呈现萎蔫状并且老叶出现黄化时便可进行原种制作。用刀片去除叶片以及基部和茎段间的一些明显的杂质，切成1个芽1段，顶芽去除外苞片并去除杂质，用洗衣粉浸泡并用清水冲洗干净；根据茎段、顶芽大小及老嫩程度进行分类，将分类好的外植体放置于无菌空瓶中，6～8个为一瓶。在瓶盖上标明植物代码及消毒时间，用质量浓度为1.5wt‰的升汞水溶液进行消毒，消毒时间根据外植体的大小及老嫩程度而定(顶芽：30min，茎段：25～30min)，然后用无菌水清洗3～5遍(每次3～5min)。切除顶芽上下表层及茎段四周被升汞腐蚀的部分，让其露出新鲜组织，再接种到培养基上(1个/瓶)。
1.2.2培养基
ph5.8
1.2.3培养条件
26±1℃300～500lx4～5w
1.2.4调查指标
顶芽萌动时间；茎段侧芽萌动时间；真、细菌污染率及死亡率；成活率
2结果与分析
2.1结果
该品种采用顶芽和茎段作为外植体，消毒时间为30min全部为顶芽，一共3个，细菌污染2个，成活1个；消毒时间为25min的全部为茎段，总共8个，无真细菌污染以及死亡现象。(具体见下表1)。
表1肯扶拉原种制作试验结果数据表
从表1的记载可知，采用本发明的花叶万年青的原种制作方法，顶芽萌动时间仅需5～8天，茎段侧芽萌动时间仅需8～13天，而且无论是顶芽还是茎段，均没有出现真菌污染，彻底消除了真菌污染现象，茎段无真、细菌污染以及死亡现象，外植体的总体成活率可达72.73％。
以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等同变换，或直接或间接运用在相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。