一种内生真菌促进刺五加种子发芽的方法与流程

文档序号:15227973发布日期:2018-08-21 18:59阅读:504来源:国知局
本发明属于中药种植
技术领域
,具体涉及一种内生真菌促进刺五加种子发芽的方法。
背景技术
:刺五加(拉丁名:radixacanthopanacissenticosl,英文名称:manyprickleacanthopanaxroot),又称坎柺棒子、刺拐棒、老虎潦、刺花棒、五加参等,为五加科五加属木本植物,主要分布于我国黑龙江、吉林、辽宁、河北、山西等省,在俄罗斯、朝鲜、日本也有分布。刺五加具有悠久的药用历史,根、茎、叶、皮和果实均可入药,具有补中益精,坚筋骨、强意志、祛风湿、活血祛瘀、健胃利尿的作用,具有珍贵的药用价值,主治风寒湿痹、腰膝酸痛、筋骨痿软、体虚羸弱、食欲不振、跌打损伤、骨折、水肿、脚气、阴下湿痒等,在《神农本草经》中被列为上品,久服可以轻身、延年益寿,因此有“宁得一把五加,不用金玉满车”的说法。现代药理研究表明刺五加具有兴奋/抑制中枢神经系统、抗疲劳、抗衰老、抗癌、抗菌、消炎、调节内分泌、增强免疫功能随着刺五加药用价值的不断挖掘,制药、保健品、食品等领域对刺五加原材料的需求大量上升,野生刺五加经历了掠夺式的无序采集,使得野生刺五加资源遭受了严重的破坏,目前已经面临枯竭,远远不能满足市场需求,从而造成了刺五加价格连年上涨,而刺五加自然状态下生殖能力弱,被中国植物红皮书列为渐危物种,从而使得人工种植刺五加的需求越来越大。目前,刺五加的繁殖方式包括扦插繁殖、组织培养繁殖和种子繁殖三种,其中刺五加无性繁殖困难,而有性繁殖则具有幼苗茁壮等天然的优势,但刺五加种子具有先天休眠的特性,在果实成熟后,刺五加种子仍需要经冬越夏完成形态发育和生理成熟后才能发芽,且种子的质量差,休眠期长,容易导致自然状态下刺五加种子的霉变,严重影响了自然状态下刺五加种子的发芽率,直接播种需要经过近2年才能有11.53%的发芽率,若种子经变温层积处理半年后播种可于第2年获得17.0%的发芽率,严重制约了种子繁殖方法在刺五加人工栽培中的使用。刺五加种子休眠的原因是:刺五加种胚在形态上似已发育完全,但生理上还未成熟,必须要通过后熟作用才能萌发,即成熟种子离开母体后,需要经过一系列的生理生化变化后,才能完成生理成熟而具备发芽的能力。现有技术中为了打破刺五加种子休眠,一般使用变温催芽和低温休眠依次或交替进行的方法,虽然可以在一定程度上提高刺五加种子的发芽率,但由于处理步骤繁杂、不易控制,且所需周期长,仍然制约了种子繁殖方法在刺五加人工种植中的应用。内生真菌是指生活于不存在外在感染的健康植物组织内部的真菌,研究表明,植物内生菌与病原菌具有相同的生态位,在植物体内相互竞争空间、营养,使病原菌得不到正常的营养供给而消亡,从而增强宿主抵御病害的能力,植物的内生菌还可以分泌抗生素、毒素等代谢物质,可诱导植物产生系统抗性。链格孢菌(alternaria)为真菌的一种,多数寄居在植物上,一方面,链格孢菌可引起经济作物的病害,因此,多被认定为引起经济作物病害的病原之一。少数种类的链格孢菌还可以侵入人体或动物体,引起皮癣、甲癣等疾病,另一方面,链格孢由于其次代谢产物具有杀虫、灭菌等活性,而具有开发成杀虫剂、抑菌剂的潜力。已有文献报道了链格孢菌as3.577能够定向将熊果酸生物合成为3-羰基熊果酸,从而进一步拓阔了链格孢菌的用途。由于链格孢菌一般被视为经济作为疾病的病原,因此,链格孢菌在在农作物种植上的应用报道较少,张志刚等,公开了细极链格孢菌蛋白激发子是一种能诱导植物获得系统性抗病性的蛋白激发子,可使棉花产生对病虫害的抗性,促进植株生长,还可以提高棉花生长功能叶的叶绿素含量、净光合速率,气孔导度、蒸腾速率、外界光合作用有效辐射等,延缓叶片的衰老和光合功能衰退,延长了叶片的光合功能期。但链格孢菌在其他植物种植上的应用现有技术中并没有报道。本发明的目的即是提供一种快速有效的促进刺五加种子发芽的方法。技术实现要素:本发明的目的提供一种简便有效的促进刺五加种子发芽的方法,具体的为对刺五加种子进行内生真菌alternariaalternata浸种处理和变温层积处理。优选的所述方法包括如下步骤:(1)种子的获取:采集刺五加黑紫色的成熟果实,放入容器中,加入少量水,等待果实软化后,平铺在地表进行踏踩,使种肉分离,再放入容器中加水多次进行淘洗,倒出果肉以及瘪粒的种子,捞出容器底部的刺五加种子晒干待用;(2)种子消毒:将刺五加种子用次氯酸钠水溶液浸种消毒后,用清水冲洗净,再用清水浸泡24h,使种子吸水饱和,取出后沥干水分,所述次氯酸钠的浓度为5-8%,所述次氯酸钠的浸种时间为5-15min,所述清水冲洗次数为3-5次;(3)刺五加内生真菌浸种培养:将刺五加内生真菌alternariaalternata接种在液体培养基上,在摇床上摇7天,取刺五加种子,用75%酒精浸泡20-40s,用无菌水冲洗3-5次,5-8%次氯酸钠处理5-15min,再用无菌水冲洗3-5次,将经上述处理的刺五加种子放入装有内生真菌的锥形瓶中,继续摇24-48h,120rpm,随后用酒精和次氯酸钠溶液对浸泡后的种子再次进行浸泡消毒,方法同上,消毒完毕后的刺五加种子放入经高压灭菌的河沙里,并及时补充水分,所述刺五加种子与河沙按体积比1∶1-5混匀。(4)取经步骤(3)处理的刺五加种子,用酒精和次氯酸钠溶液对浸泡后的种子进行浸泡消毒,方法同上,再次用刺五加内生真菌alternariaalternata悬液浸种共生3-7天,方法同上,用酒精和次氯酸钠溶液对浸泡后的种子进行浸泡消毒,方法同上;(5)种子解除休眠:将经步骤(4)处理的刺五加种子平铺于用高压锅灭菌的湿河沙中,种子与湿河沙按体积比1∶1-5混匀,装入木箱或大花盆中进行混沙层积催芽,保持湿度50-70%,缺水时适量浇水,水中加1%新洁尔灭,刺五加种子变温层积:第一阶段:温度保持在20-25℃,时间为10周,每日翻动一次;第二阶段:刺五加种子温度保持在10-15℃,时间为6周,2-3天翻一次;第三阶段:刺五加种子温度保持在0-5℃,时间为9周。(6)取出经步骤(5)处理的刺五加种子,置于室温培养箱下培养。优选的,步骤(1)中刺五加成熟果实与水的重量比为5-20:1,所述淘洗次数为5-10次;更优选的,所述步骤(1)中刺五加成熟果实与水的重量比为10:1,所述淘洗次数为10次;优选的,步骤(2)中次氯酸钠的浓度为5%,所述次氯酸钠的浸种时间为10min,所述清水冲洗次数为5次;优选的,步骤(3)中,酒精浸泡时间为30s,使用无菌水冲洗3次,5%次氯酸按处理10min,再用无菌水冲洗5次,将经上述处理的刺五加种子放入装有内生真菌的锥形瓶中,继续摇36h,120rpm,随后用酒精和次氯酸钠溶液对浸泡后的种子再次进行浸泡消毒,方法同上,消毒完毕后的刺五加种子放入经高压灭菌的河沙里,并及时补充水分,所述刺五加种子与河沙按体积比1∶2混匀。优选的,所述步骤(4)中使用刺五加内生真菌alternariaalternata悬液浸种共生6天。优选的,步骤(5)中种子与湿河沙按体积比1∶2混匀,装入木箱或大花盆中进行混沙层积催芽,保持湿度60%。本发明有益效果1.本发明促进刺五加种子发芽的方法能有效促进刺五加种子的形态成熟和生理成熟,并打破刺五加种子的休眠,从而有效解决刺五加种子休眠时间长、发芽率低的问题,有利于刺五加资源发展及生态资源保护。2.本发明促进刺五加种子发芽的方法快速有效,可大幅度缩短刺五加种子形态成熟和生理成熟所需时间,提高刺五加种子的发芽率,从而有效促进有性繁殖在刺五加人工种植中的应用,提升刺五加幼苗的质量,从而有效改善刺五加人工种植的效率和效益。具体实施方式在下文中更详细地描述了本发明以有助于对本发明的理解。实施例1:一种促进刺五加种子发芽的方法,包括以下步骤:(1)种子的获取:采集刺五加黑紫色的成熟果实,放入容器中,加入少量水,所述刺五加成熟果实与水的重量比为10:1,等待果实软化后,平铺在地表进行踏踩,使种肉分离,再放入容器中加水淘洗10次,倒出果肉以及瘪粒的种子,捞出容器底部的刺五加种子晒干待用;(2)种子消毒:将刺五加种子用次氯酸钠水溶液浸种消毒后,用清水冲洗净,再用清水浸泡24h,使种子吸水饱和,取出后沥干水分,所述次氯酸钠的浓度为5%,所述次氯酸钠的浸种时间为10min,所述清水冲洗次数为5次;(3)刺五加内生真菌浸种培养:将刺五加内生真菌alternariaalternata接种在液体培养基上,在摇床上摇7天,取刺五加种子,用75%酒精浸泡30s,用无菌水冲洗3次,5%次氯酸钠处理10min,再用无菌水冲洗5次,将经上述处理的刺五加种子放入装有内生真菌的锥形瓶中,继续摇48h,120rpm,随后用酒精和次氯酸钠溶液对浸泡后的种子再次进行浸泡消毒,方法同上,消毒完毕后的刺五加种子放入经高压灭菌的河沙里,并及时补充水分,所述刺五加种子与河沙按体积比1∶3混匀;(4)取经步骤(3)处理的刺五加种子,用酒精和次氯酸钠溶液对浸泡后的种子进行浸泡消毒,方法同上,再次用刺五加内生真菌alternariaalternata悬液浸种共生5天,方法同上,用酒精和次氯酸钠溶液对浸泡后的种子进行浸泡消毒,方法同上;(5)种子解除休眠:将经步骤(4)处理的刺五加种子平铺于用高压锅灭菌的湿河沙中,种子与湿河沙按体积比1∶3混匀,装入木箱或大花盆中进行混沙层积催芽,保持湿度70%,缺水时适量浇水,水中加1%新洁尔灭,刺五加种子变温层积:第一阶段:温度保持在20-25℃,时间为10周,每日翻动一次;第二阶段:刺五加种子温度保持在10-15℃,时间为6周,2-3天翻一次;第三阶段:刺五加种子温度保持在0-5℃,时间为9周。(6)取出经步骤(5)处理的刺五加种子,置于室温培养箱下培养。实施例2:一种促进刺五加种子发芽的方法,包括以下步骤:(1)种子的获取:采集刺五加黑紫色的成熟果实,放入容器中,加入少量水,所述刺五加成熟果实与水的重量比为10:1,等待果实软化后,平铺在地表进行踏踩,使种肉分离,再放入容器中加水淘洗10次,倒出果肉以及瘪粒的种子,捞出容器底部的刺五加种子晒干待用;(2)种子消毒:将刺五加种子用次氯酸钠水溶液浸种消毒后,用清水冲洗净,再用清水浸泡24h,使种子吸水饱和,取出后沥干水分,所述次氯酸钠的浓度为5%,所述次氯酸钠的浸种时间为10min,所述清水冲洗次数为5次;(3)刺五加内生真菌浸种培养:将刺五加内生真菌alternariaalternata接种在液体培养基上,在摇床上摇7天,取刺五加种子,用75%酒精浸泡30s,用无菌水冲洗3次,5%次氯酸钠处理10min,再用无菌水冲洗5次,将经上述处理的刺五加种子放入装有内生真菌的锥形瓶中,继续摇24h,120rpm,随后用酒精和次氯酸钠溶液对浸泡后的种子再次进行浸泡消毒,方法同上,消毒完毕后的刺五加种子放入经高压灭菌的河沙里,并及时补充水分,所述刺五加种子与河沙按体积比1∶2混匀。(4)取经步骤(3)处理的刺五加种子,用酒精和次氯酸钠溶液对浸泡后的种子进行浸泡消毒,方法同上,再次用刺五加内生真菌alternariaalternata悬液浸种共生4天,方法同上,用酒精和次氯酸钠溶液对浸泡后的种子进行浸泡消毒,方法同上;(5)种子解除休眠:将经步骤(4)处理的刺五加种子平铺于用高压锅灭菌的湿河沙中,种子与湿河沙按体积比1∶2混匀,装入木箱或大花盆中进行混沙层积催芽,保持湿度50%,缺水时适量浇水,水中加1%新洁尔灭,刺五加种子变温层积:第一阶段:温度保持在20-25℃,时间为10周,每日翻动一次;第二阶段:刺五加种子温度保持在10-15℃,时间为6周,2-3天翻一次;第三阶段:刺五加种子温度保持在0-5℃,时间为9周。(6)取出经步骤(5)处理的刺五加种子,置于室温培养箱下培养。实施例3:一种促进刺五加种子发芽的方法,包括以下步骤:(1)种子的获取:采集刺五加黑紫色的成熟果实,放入容器中,加入少量水,所述刺五加成熟果实与水的重量比为10:1,等待果实软化后,平铺在地表进行踏踩,使种肉分离,再放入容器中加水淘洗10次,倒出果肉以及瘪粒的种子,捞出容器底部的刺五加种子晒干待用;(2)种子消毒:将刺五加种子用次氯酸钠水溶液浸种消毒后,用清水冲洗净,再用清水浸泡24h,使种子吸水饱和,取出后沥干水分,所述次氯酸钠的浓度为5%,所述次氯酸钠的浸种时间为10min,所述清水冲洗次数为5次;(3)刺五加内生真菌浸种培养:将刺五加内生真菌alternariaalternata接种在液体培养基上,在摇床上摇7天,取刺五加种子,用75%酒精浸泡30s,用无菌水冲洗3次,5%次氯酸钠处理10min,再用无菌水冲洗5次,将经上述处理的刺五加种子放入装有内生真菌的锥形瓶中,继续摇48h,120rpm,随后用酒精和次氯酸钠溶液对浸泡后的种子再次进行浸泡消毒,方法同上,消毒完毕后的刺五加种子放入经高压灭菌的河沙里,并及时补充水分,所述刺五加种子与河沙按体积比1∶2混匀。(4)取经步骤(3)处理的刺五加种子,用酒精和次氯酸钠溶液对浸泡后的种子进行浸泡消毒,方法同上,再次用刺五加内生真菌alternariaalternata悬液浸种共生7天,方法同上,用酒精和次氯酸钠溶液对浸泡后的种子进行浸泡消毒,方法同上;(5)种子解除休眠:将经步骤(4)处理的刺五加种子平铺于用高压锅灭菌的湿河沙中,种子与湿河沙按体积比1∶2混匀,装入木箱或大花盆中进行混沙层积催芽,保持湿度60%,缺水时适量浇水,水中加1%新洁尔灭,刺五加种子变温层积:第一阶段:温度保持在20-25℃,时间为10周,每日翻动一次;第二阶段:刺五加种子温度保持在10-15℃,时间为6周,2-3天翻一次;第三阶段:刺五加种子温度保持在0-5℃,时间为9周。(6)取出经步骤(5)处理的刺五加种子,置于室温培养箱下培养。实施例4:一种简便有效的促进刺五加种子发芽的方法,包括以下步骤:(1)种子的获取:采集刺五加黑紫色的成熟果实,放入容器中,加入少量水,所述刺五加成熟果实与水的重量比为10:1,等待果实软化后,平铺在地表进行踏踩,使种肉分离,再放入容器中加水淘洗10次,倒出果肉以及瘪粒的种子,捞出容器底部的刺五加种子晒干待用;(2)种子消毒:将刺五加种子用次氯酸钠水溶液浸种消毒后,用清水冲洗净,再用清水浸泡24h,使种子吸水饱和,取出后沥干水分,所述次氯酸钠的浓度为5%,所述次氯酸钠的浸种时间为10min,所述清水冲洗次数为5次;(3)刺五加内生真菌浸种培养:将刺五加内生真菌alternariaalternata接种在液体培养基上,在摇床上摇7天,取刺五加种子,用75%酒精浸泡30s,用无菌水冲洗3次,5%次氯酸钠处理10min,再用无菌水冲洗5次,将经上述处理的刺五加种子放入装有内生真菌的锥形瓶中,继续摇36h,120rpm,随后用酒精和次氯酸钠溶液对浸泡后的种子再次进行浸泡消毒,方法同上,消毒完毕后的刺五加种子放入经高压灭菌的河沙里,并及时补充水分,所述刺五加种子与河沙按体积比1∶2混匀。(4)取经步骤(3)处理的刺五加种子,用酒精和次氯酸钠溶液对浸泡后的种子进行浸泡消毒,方法同上,再次用刺五加内生真菌alternariaalternata悬液浸种共生6天,方法同上,用酒精和次氯酸钠溶液对浸泡后的种子进行浸泡消毒,方法同上;(5)种子解除休眠:将经步骤(4)处理的刺五加种子平铺于用高压锅灭菌的湿河沙中,种子与湿河沙按体积比1∶2混匀,装入木箱或大花盆中进行混沙层积催芽,保持湿度60%,缺水时适量浇水,水中加1%新洁尔灭,刺五加种子变温层积:第一阶段:温度保持在20-25℃,时间为10周,每日翻动一次;第二阶段:刺五加种子温度保持在10-15℃,时间为6周,2-3天翻一次;第三阶段:刺五加种子温度保持在0-5℃,时间为9周。(6)取出经步骤(5)处理的刺五加种子,置于室温培养箱下培养。效果例1:内生真菌浸种对刺五加种子酶活力和激素水平的影响1.1实验分组采集刺五加黑紫色的成熟果实,放入容器中,加入少量水,所述刺五加成熟果实与水的重量比为15:1,等待果实软化后,平铺在地表进行踏踩,使种肉分离,再放入容器中加水淘洗8次,倒出果肉以及瘪粒的种子,捞出容器底部的刺五加种子晒干,将其分为空白组和处理组,每组1000粒。1.2实验方法种子消毒:将空白组和处理组刺五加种子均用次氯酸钠水溶液浸种消毒后,用清水冲洗净,再用清水浸泡24h,使种子吸水饱和,取出后沥干水分,所述次氯酸钠的浓度为5%,所述次氯酸钠的浸种时间为10min,所述清水冲洗次数为5次;处理组刺五加种子的内生真菌浸种培养:(1)刺五加内生真菌浸种培养:将刺五加内生真菌alternariaalternata接种在液体培养基上,在摇床上摇7天,取刺五加种子,用75%酒精浸泡30s,用无菌水冲洗3次,5%次氯酸钠处理10min,再用无菌水冲洗5次,将经上述处理的刺五加种子放入装有内生真菌的锥形瓶中,继续摇36h,120rpm,随后用酒精和次氯酸钠溶液对浸泡后的种子再次进行浸泡消毒,方法同上,消毒完毕后的刺五加种子放入经高压灭菌的河沙里,并及时补充水分,所述刺五加种子与河沙按体积比1∶2混匀。(2)取经步骤(1)处理的刺五加种子,用酒精和次氯酸钠溶液对浸泡后的种子进行浸泡消毒,方法同上,再次用刺五加内生真菌alternariaalternata悬液浸种共生6天,方法同上,用酒精和次氯酸钠溶液对浸泡后的种子进行浸泡消毒,方法同上;(3)种子解除休眠:将经步骤(2)处理的刺五加种子平铺于用高压锅灭菌的湿河沙中,种子与湿河沙按体积比1∶2混匀,装入木箱或大花盆中进行混沙层积催芽,保持湿度60%,缺水时适量浇水,水中加1%新洁尔灭;刺五加种子变温层积:第一阶段:温度保持在20-25℃,时间为10周,每日翻动一次,结束后测定酶活力和激素水平,所述酶活力包括:sod、cat、mda和pod,所述激素包括:吲哚乙酸、水杨酸、脱落酸和吲哚丁酸;第二阶段:刺五加种子温度保持在10-15℃,时间为6周,2-3天翻一次,结束后测定酶活力和激素水平,具体同前;第三阶段:刺五加种子温度保持在0-5℃,时间为9周,结束后测定各组酶活力和激素水平,具体同前。空白组刺五加种子的浸种培养:除液体培养基中不接种刺五加内生真菌alternariaalternata外,按照处理组方法进行空白组刺五加种子的浸种培养,并测定酶活力和激素水平,具体实验结果见表1-2。1.3实验结果表1实验结果显示,相对于空白组,经刺五加内生真菌alternariaalternata浸种处理的刺五加种子在变温层积各阶段的sod酶活力逐步增强,且显著高于未经刺五加内生真菌alternariaalternata浸种处理的空白组,pod酶活力增长幅度与空白组相类似,而cat酶和mda水平随着变温层积的进行,虽均有所增长,但处理组增长幅度均明显低于空白组,该实验结果显示了通过刺五加内生真菌alternariaalternata浸种处理的刺五加种子可有效提升刺五加种子内sod酶活力,并抑制cat酶活力,抑制mda的产生,显示了刺五加内生真菌alternariaalternata浸种处理可有效提升刺五加种子的抗过氧化能力,有效防止种子后熟过程中的过氧化损伤,可有效促进变温层积打破刺五加种子的休眠的效应,从而有利于促进刺五加种子的萌发。表1刺五加内生真菌alternariaalternata浸种对刺五加种子酶活力的影响表2刺五加内生真菌alternariaalternata浸种对刺五加种子激素的影响表2实验结果显示了,相对于空白组,经刺五加内生真菌alternariaalternata浸种处理的刺五加种子中有利于种子萌发的吲哚乙酸、水杨酸和吲哚丁酸的含量及其增长幅度均优于空白组,而对于刺五加种子萌发具有抑制作用的脱落酸的含量的降低幅度也高于空白组,从而表明了刺五加内生真菌alternariaalternata浸种处理方法既可以增强促进刺五加种子萌发的吲哚乙酸、水杨素和吲哚丁酸的生成,还可以减少刺五加种子种抑制刺五加种子萌发的脱落酸的含量,从而可有效促进刺五加种子的萌发。效果例2:刺五加内生真菌alternariaalternata浸种处理对刺五加种子发芽率的影响。2.1实验分组实验分实施例1-4组和空白1-2组,其中实施例1-4组刺五加种子为经实施例1-4相应步骤(1)-(5)处理所得的经刺五加内生真菌alternariaalternata浸种处理的刺五加种子,所述空白1组为经实施例4步骤(5)所述变温层积处理半年后的刺五加种子,所述空白2组为按照实施例4步骤(1)-(5)所述方法处理,但不接种刺五加内生真菌alternariaalternata所得的刺五加种子。2.2实验方法各组刺五加种子均500粒,置于室温培养箱下培养30天,计算出芽率,具体实验结果参见表3,所述:出芽率=发芽种子例数/500×100%。2.3实验结果应用统计软件spss的多因素方差分析模块进行数据分析,p<0.05表示差异有统计学意义。表3实验结果显示了本发明实施例1-4所述的经刺五加内生真菌alternariaalternata浸种处理的刺五加种子相对于空白1组和空白2组均有明显的提高,尤其以实施例4组的出芽率最高,从而显示了本发明所述的刺五加内生真菌alternariaalternata浸种处理可以有效提升刺五加种子的出芽率,而本发明实施例1-4所述方法的出芽率仍有一定的差异,其中以实施例4组的出芽率最为优异,分析本发明实施例1-4所述方法的差异可以看出,刺五加内生真菌alternariaalternata浸种时间对于刺五加种子出芽率具有显著影响,如在其他参数大体相同的情况下,步骤(4)再次用刺五加内生真菌alternariaalternata悬液浸种6天的实施例4相对于步骤(4)中浸种5天的实施例1和浸种4天的实施例2出芽率均明显增高,表明了提升步骤(4)的刺五加内生真菌alternariaalternata浸种时间有利于提高刺五加种子的出芽率,而步骤(4)浸种时间最长的实施例3的出芽率相对于实施例4组却显示了一定程度的降低,提示了步骤(4)的浸种时间也并非越长越好。表3刺五加内生真菌alternariaalternata浸种对刺五加种子出芽率的影响实验组萌发粒数发芽率平均值%实施例1281**56.20%实施例2214**42.80%实施例3293**58.60%实施例4314**62.80%空白1组11022.00%空白2组12825.60%与空白1组比较**p<0.01.以上描述了本发明优选实施方式,然其并非用以限定本发明。本领域技术人员对在此公开的实施方案可进行并不偏离本发明范畴和精神的改进和变化。当前第1页12
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