本发明涉及食用菌菌种选育技术领域，尤其是一种野生富硒香菇菌种的驯化方法。
背景技术：
香菇产量在世界人工栽培食用菌中居第二位。随着生活品质的提高，人们开始逐渐认识到香菇的营养价值，由于其独特的风味和增强人体免疫功能的作用，成为人们最喜爱的健康食品之一。
近年来，由于野生香菇市场的供应不求，因此将香菇从野外自然生长逐步变为人工驯化栽培，因此香菇的产量大幅度的提高，为了更加满足日益增长的市场需求，则越来越多的种植户为了提高产量应用各种化肥以及农药，使得香菇产量虽然增加但是香菇风味与野生香菇相比相差较远，随着人们不断追求健康生活理念，广大的消费者更加青睐于野生香菇，因此野生香菇资源大范围的遭到严重破坏。
硒是人体必须的微量元素，硒及硒化物除具有抗氧化性能外，还具有抗肿瘤、延长寿命和提高机体免疫力等功能。世界上有40多个国家土壤中缺硒，我国有70％地区属于缺硒地区，寻找和开发富硒产品，以保证人体摄入充足的硒，正被各国科学工作者所关注。
目前，以食用菌作为富集硒元素的载体，在我国正处于研究中。尤其是香菇栽培面积广，操作简单，富集能力显著，将香菇作为富集硒元素的载体，研究者较多。而目前的富硒香菇的研究，主要集中在富硒香菇的种植方面，对野生富硒香菇菌种驯化方面的研究较少。同时研究生产的香菇虽然含硒量较高，但是香菇的风味、品质较差，对硒肥的吸收利用率较低，也存在着生产中的香菇菌种易退化、易遭污染，抗逆性差的缺点，没有从根本上解决问题。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种野生富硒香菇菌种的驯化方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种野生富硒香菇菌种的驯化方法，包括以下步骤：
s1、种菇选择：在6～15℃的冬春季节，选取在安徽石台县含富硒土壤山区的树木伴生的发育健壮、菌伞盖厚大、无病虫害、成熟度适当的野生香菇菇体为种菇，并装入无菌纸袋内带回；
s2、种菇预处理：将选取的种菇，去除菇体表面的杂物，并用含75％酒精的棉球对菇体伞盖、菌柄表面进行消毒，再用无菌水漂洗2～4次，并用灭菌的脱脂棉吸干菇体表面水分；
s3、组织分离：在无菌接种室内，将手术刀用酒精灯火焰消毒，待手术刀冷却后，用手术刀将菇体的伞盖、菌柄一分为二，挑取菇体的伞盖与菌柄交界处小块菌肉，置于培养皿中的基础pda培养基上；
s4、组织培养：将s3步骤中带菇体分离组织的基础pda培养基的培养皿，移入20～25℃的恒温箱中常规培养10～15天；培养期内，每隔1～2天观察一次，并随时淘汰掉遭霉菌或细菌污染的培养物；
s5、转管培养：用接种针挑选s4步骤中以组织分离培养物为中心的菌丝外边沿1～2厘米处的无污染香菇菌丝以及少量培养基，置于试管中的含树叶汁液、富硒营养液、基础pda培养基的混合培养基上，再次移入20～25℃的恒温箱中，常规斜面培养10～15天；
s6、斜面复培：挑选s5步骤中、离培养基斜面顶端4～5厘米的香菇菌种，以树叶汁液、富硒营养液、基础pda培养基的混合物为培养基，常规斜面培养10～15天，最后置于超低温-80～-50℃保藏，即驯化出野生富硒香菇菌种。
优选地，所述s4步骤中的常规培养的时间，以菌丝长满培养皿为准。
优选地，所述s5、s6步骤中的常规斜面培养的时间，以菌丝长满试管的斜面为准。
优选地，在s5步骤中，所述混合培养基，以质量百分比计，其组分包括：树叶汁液5.0％～12.0％、富硒营养液0.5％～3.0％、余量为基础pda培养基。
优选地，在s6步骤中，所述树叶汁液、富硒营养液、基础pda培养基的混合物，以质量百分比计，其组分包括：树叶汁液10.0％～18.0％、富硒营养液2.5％～6.0％、余量为基础pda培养基。
优选地，所述基础pda培养基，其制备方法为：称取洗净去皮的马铃薯小块200g，切成小块，加水1000ml，煮沸20分钟后，过滤，在滤汁中补足水分到1000ml；再分别加入琼脂18g、葡萄糖20g、磷酸二氢钾3g、硫酸镁1.5g、维生素10mg，煮沸溶解后，补足水分；最后分装、灭菌、备用，即制得基础pda培养基。
优选地，所述树叶汁液，其原料为柞树树叶、栎树树叶、桦树树叶中的一种或多种的混合物。
优选地，所述富硒营养液为亚硒酸钠溶液。
本发明的有益效果在于：
本发明一种野生富硒香菇菌种的驯化方法，以富硒山区的树木伴生的野生优良香菇菇体为种菇，并在驯化培养过程中的培养基中添加树叶汁液、富硒营养液，且树叶汁液、富硒营养液的比例不断调整，增强野生富硒香菇菌种对生产过程中以树木木屑、富硒营养液为培养基的适应性，提高驯化的香菇菌种对富硒营养液的吸收率，降低其退化速度，提升香菇菌种的抗逆性，降低遭污染的可能，针对性强；同时提高香菇菌种在生产中的品质与风味，经济效益高，具有实际指导意义和推广应用价值。
具体实施方式
为了便于本领域技术人员理解，下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。
实施例1：
一种野生富硒香菇菌种的驯化方法，包括以下步骤：
s1、种菇选择：在6～15℃的冬春季节，选取在安徽石台县含富硒土壤山区的树木伴生的发育健壮、菌伞盖厚大、无病虫害、成熟度适当的野生香菇菇体为种菇，并装入无菌纸袋内带回。
s2、种菇预处理：将选取的种菇，去除菇体表面的杂物，并用含75％酒精的棉球对菇体伞盖、菌柄表面进行消毒，再用无菌水漂洗2次，并用灭菌的脱脂棉吸干菇体表面水分。
s3、组织分离：在无菌接种室内，将手术刀用酒精灯火焰消毒，待手术刀冷却后，用手术刀将菇体的伞盖、菌柄一分为二，挑取菇体的伞盖与菌柄交界处小块菌肉，置于培养皿中的基础pda培养基上。
s4、组织培养：将s3步骤中带菇体分离组织的基础pda培养基的培养皿，移入20℃的恒温箱中常规培养，常规培养的时间，以菌丝长满培养皿为准；培养期内，每隔1～2天观察一次，并随时淘汰掉遭霉菌或细菌污染的培养物，当培养10天，菌丝长满培养皿时，组织培养结束。
s5、转管培养：用接种针挑选s4步骤中以组织分离培养物为中心的菌丝外边沿1～2厘米处的无污染香菇菌丝以及少量培养基，置于试管中的含树叶汁液、富硒营养液、基础pda培养基的混合培养基上，再次移入20℃的恒温箱中，常规斜面培养，常规斜面培养的时间，以菌丝长满试管的斜面为准；当培养12天，菌丝长满试管中的培养基时，转管培养结束；其中，上述的混合培养基，以质量百分比计，其组分包括：树叶汁液5.0％、亚硒酸钠富硒营养液3.0％、余量为基础pda培养基。
s6、斜面复培：挑选s5步骤中、离培养基斜面顶端4～5厘米的香菇菌种，以树叶汁液、富硒营养液、基础pda培养基的混合物为培养基，常规斜面培养；常规斜面培养的时间，以菌丝长满试管的斜面为准，当培养15天，菌丝长满试管中的培养基时，转管培养结束；最后置于超低温-80～-50℃保藏，即驯化出野生富硒香菇菌种。其中，上述的树叶汁液、富硒营养液、基础pda培养基的混合物，以质量百分比计，其组分包括：树叶汁液10.0％、亚硒酸钠富硒营养液6.0％、余量为基础pda培养基。
其中，基础pda培养基，其制备方法为：称取洗净去皮的马铃薯小块200g，切成小块，加水1000ml，煮沸20分钟后，过滤，在滤汁中补足水分到1000ml；再分别加入琼脂18g、葡萄糖20g、磷酸二氢钾3g、硫酸镁1.5g、维生素10mg，煮沸溶解后，补足水分；最后分装、灭菌、备用，即制得基础pda培养基。
其中，树叶汁液，其原料为柞树树叶、栎树树叶、桦树树叶中的一种或多种的混合物。
实施例2：
一种野生富硒香菇菌种的驯化方法，包括以下步骤：
s1、种菇选择：在6～15℃的冬春季节，选取在安徽石台县含富硒土壤山区的树木伴生的发育健壮、菌伞盖厚大、无病虫害、成熟度适当的野生香菇菇体为种菇，并装入无菌纸袋内带回。
s2、种菇预处理：将选取的种菇，去除菇体表面的杂物，并用含75％酒精的棉球对菇体伞盖、菌柄表面进行消毒，再用无菌水漂洗4次，并用灭菌的脱脂棉吸干菇体表面水分。
s3、组织分离：在无菌接种室内，将手术刀用酒精灯火焰消毒，待手术刀冷却后，用手术刀将菇体的伞盖、菌柄一分为二，挑取菇体的伞盖与菌柄交界处小块菌肉，置于培养皿中的基础pda培养基上。
s4、组织培养：将s3步骤中带菇体分离组织的基础pda培养基的培养皿，移入25℃的恒温箱中常规培养，常规培养的时间，以菌丝长满培养皿为准；培养期内，每隔1～2天观察一次，并随时淘汰掉遭霉菌或细菌污染的培养物，当培养15天，菌丝长满培养皿时，组织培养结束。
s5、转管培养：用接种针挑选s4步骤中以组织分离培养物为中心的菌丝外边沿1～2厘米处的无污染香菇菌丝以及少量培养基，置于试管中的含树叶汁液、富硒营养液、基础pda培养基的混合培养基上，再次移入25℃的恒温箱中，常规斜面培养，常规斜面培养的时间，以菌丝长满试管的斜面为准；当培养15天，菌丝长满试管中的培养基时，转管培养结束；其中，上述的混合培养基，以质量百分比计，其组分包括：树叶汁液12.0％、亚硒酸钠富硒营养液0.5％、余量为基础pda培养基。
s6、斜面复培：挑选s5步骤中、离培养基斜面顶端4～5厘米的香菇菌种，以树叶汁液、富硒营养液、基础pda培养基的混合物为培养基，常规斜面培养；常规斜面培养的时间，以菌丝长满试管的斜面为准，当培养10天，当菌丝长满试管中的培养基时，转管培养结束；最后置于超低温-80～-50℃保藏，即驯化出野生富硒香菇菌种。其中，上述的树叶汁液、富硒营养液、基础pda培养基的混合物，以质量百分比计，其组分包括：树叶汁液18.0％、亚硒酸钠富硒营养液2.5％、余量为基础pda培养基。
其中，基础pda培养基，其制备方法为：称取洗净去皮的马铃薯小块200g，切成小块，加水1000ml，煮沸20分钟后，过滤，在滤汁中补足水分到1000ml；再分别加入琼脂18g、葡萄糖20g、磷酸二氢钾3g、硫酸镁1.5g、维生素10mg，煮沸溶解后，补足水分；最后分装、灭菌、备用，即制得基础pda培养基。
其中，树叶汁液，其原料为柞树树叶、栎树树叶、桦树树叶中的一种或多种的混合物。
实施例3：
一种野生富硒香菇菌种的驯化方法，包括以下步骤：
s1、种菇选择：在6～15℃的冬春季节，选取在安徽石台县含富硒土壤山区的树木伴生的发育健壮、菌伞盖厚大、无病虫害、成熟度适当的野生香菇菇体为种菇，并装入无菌纸袋内带回。
s2、种菇预处理：将选取的种菇，去除菇体表面的杂物，并用含75％酒精的棉球对菇体伞盖、菌柄表面进行消毒，再用无菌水漂洗3次，并用灭菌的脱脂棉吸干菇体表面水分。
s3、组织分离：在无菌接种室内，将手术刀用酒精灯火焰消毒，待手术刀冷却后，用手术刀将菇体的伞盖、菌柄一分为二，挑取菇体的伞盖与菌柄交界处小块菌肉，置于培养皿中的基础pda培养基上。
s4、组织培养：将s3步骤中带菇体分离组织的基础pda培养基的培养皿，移入22℃的恒温箱中常规培养，常规培养的时间，以菌丝长满培养皿为准；培养期内，每隔1～2天观察一次，并随时淘汰掉遭霉菌或细菌污染的培养物，当培养13天，菌丝长满培养皿时，组织培养结束。
s5、转管培养：用接种针挑选s4步骤中以组织分离培养物为中心的菌丝外边沿1～2厘米处的无污染香菇菌丝以及少量培养基，置于试管中的含树叶汁液、富硒营养液、基础pda培养基的混合培养基上，再次移入23℃的恒温箱中，常规斜面培养，常规斜面培养的时间，以菌丝长满试管的斜面为准；当培养15天，当菌丝长满试管中的培养基时，转管培养结束；其中，上述的混合培养基，以质量百分比计，其组分包括：树叶汁液8.0％、亚硒酸钠富硒营养液2.0％、余量为基础pda培养基。
s6、斜面复培：挑选s5步骤中、离培养基斜面顶端4～5厘米的香菇菌种，以树叶汁液、富硒营养液、基础pda培养基的混合物为培养基，常规斜面培养；常规斜面培养的时间，以菌丝长满试管的斜面为准，当培养12天，当菌丝长满试管中的培养基时，转管培养结束；最后置于超低温-80～-50℃保藏，即驯化出野生富硒香菇菌种。其中，上述的树叶汁液、富硒营养液、基础pda培养基的混合物，以质量百分比计，其组分包括：树叶汁液14.0％、亚硒酸钠富硒营养液4.5％、余量为基础pda培养基。
其中，基础pda培养基，其制备方法为：称取洗净去皮的马铃薯小块200g，切成小块，加水1000ml，煮沸20分钟后，过滤，在滤汁中补足水分到1000ml；再分别加入琼脂18g、葡萄糖20g、磷酸二氢钾3g、硫酸镁1.5g、维生素10mg，煮沸溶解后，补足水分；最后分装、灭菌、备用，即制得基础pda培养基。
其中，树叶汁液，其原料为柞树树叶、栎树树叶、桦树树叶中的一种或多种的混合物。
上述对发明进行了示例性描述，显然本发明具体实现并不受上述方式的限制，只要采用了本发明的方法构思和技术方案进行的这种非实质改进，或未经改进将发明的构思和技术方案直接应用于其他场合的，均在本发明的保护范围之内。