一种应用于虾无节幼体微流水清洗消毒的装置和方法与流程

本发明属于水产动物养殖领域，尤其是一种应用于虾无节幼体微流水清洗消毒的装置和方法。

背景技术：

无节幼体是指某些甲壳动物(如桡足类、蔓足类、磷虾类和十足目枝鳃类等)刚孵出的幼体。虾无节幼体则是在更高的发育阶段才开始出现，身体尚不分为头胸部和腹部，呈扁平椭圆形，在正中线前方有无节幼体眼1个，其后方有口和消化管(肛门尚未开启)，左右具第一触角、第二触角和大颚等3对附肢，附肢均由数个关节构成，具游泳刚毛。

无节幼体是虾种苗生产过程中最基础的环节，幼体质量的优劣、是否携带感染病原等直接影响育苗成活率，从而影响育苗效果，故当前虾无节幼体质量的问题仍然制约着对虾养殖生产的进一步扩大及对虾苗种生产企业经济效益的提高，如何提高无节幼体质量的相关研究显得十分必要。因此，迫切需要从源头抓起，对无节幼体进行清洗消毒，降低无节幼体有机质和微生物的携带量，防止弧菌感染传播，从而杜绝病原携带到育苗车间。众所周知，收集完无节幼体后的暂养环节是保证幼体质量一个非常重要的步骤，关于这一个环节的探究基本没有报道，一般都是依靠种虾技术员的操作经验来把控的，操作方法几乎都是一脉相承，传统的方法是通过降低暂养密度，对暂养幼体进行加换水(把幼体从一个桶捞到另一个桶)，但容易对幼体造成损伤，影响幼体的质量。

如中国专利申请申请号201611160264.9，公开了一种南美白对虾无节幼体优选方法，该方法首先采用0.5ppm氯、50ppm聚维酮碘消毒受精卵后，将受精卵放入流水孵化桶孵化成无节幼体，该方法存在消毒剂影响受精卵孵化的风险，尤其是余氯对受精卵的孵化影响极大。又如中国专利申请申请号201620950026.7，201620950025.2以及201610731644.7，都是关于无节幼体的筛选装置和方法，对无节幼体的消毒则没有涉及到。再如中国专利申请申请号201520851280.7，公开了一种青虾微流水养殖装置，包括玻璃缸、进水装置和出水装置，其特征在于：进水装置包括进水管和微量液体流量计，用于向玻璃缸内排入净水并控制进水量；出水装置包括排水孔、溢流管及排水管，所述出水装置为上下垂直方向设置，用于排出玻璃缸内养殖水，进而使残饵、粪便等污染物随水流方向排出或便于集中吸污收集处理。而中国专利申请申请号201510486547.1，公开一种虾类养殖尾水循环处理方法，包括在虾类养殖棚下游的过滤池上方设置筛网，通过筛网的养殖尾水在沉淀池中沉淀，经过沉淀后的养殖尾水引入河沟，经过河沟中微生物和植物净化，将养殖用水再引回养殖蓄水池。上述相关专利和有关的文献虽有消毒、微流水清洗的步骤和方法的报道，但关于虾无节幼体的涉及甚少。

技术实现要素：

针对现有技术的不足，本发明提供一种应用于虾无节幼体微流水清洗消毒的装置和方法，可针对无节幼体产卵时和受精卵发育时的残留物，以及由于无节幼体的生长特性，在暂养过程中不可避免携带一些影响幼体培育的微生物，进行有效清除和降低含量。

本发明的技术方案为：

一种应用于虾无节幼体微流水清洗消毒的装置，其特征在于：所述装置包括暂养桶和圆柱形网箱，所述圆柱形网箱置于暂养桶中且高出暂养桶的顶部上沿20cm，避免幼体在流水过程中跑漏出幼体暂养桶；所述圆柱形网箱包括支撑骨架、圆柱形网兜和绑索，所述支撑骨架由不锈钢管焊接制成，所述圆柱形网兜上沿与底部均设有绑索，所述圆柱形网兜通过绑索与支撑骨架固定，使整个圆柱形网兜与支撑骨架紧密贴合，形成一个完整的圆柱形网箱；所述圆柱形网箱中央位置设有气管和散气石，所述气管垂直设置，所述气管与散气石连接时穿入一个铅粒，防止散气石充气时四处摆动；所述气管为透明软管，所述气管上设有气阀开关，气阀开关用于控制气量的大小；所述圆柱形网箱中央正上方还设有水龙头，所述水龙头前方安装有一个数显流量计，用于指示出水量，确保散气石与网箱底部恰好相接触；所述气管悬挂于水龙头上。

进一步的，所述暂养桶为圆柱形，体积为0.5～1.0m³，高度为0.8～1.0m，该暂养桶可以容纳无节幼体1000万尾～3000万尾。

进一步的，所述圆柱形网兜的孔径为200目。

本发明还保护一种应用于虾无节幼体微流水清洗消毒的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

步骤一：制作微流水清洗消毒的装置；

步骤二：微流水条件：通过多次流水试验以及对无节幼体弧菌携带量、水体中弧菌含量的跟踪，得到最适合的微流水时间及流量大小；

步骤三：微生物含量的检测：包括检测暂养桶中水的微生物含量以及无节幼体本身携带的微生物含量，前者取水样进行tcbs平板涂布，后者取无节幼体充分研磨后进行tcbs平板涂布，然后在恒温培养箱中培养16～18h；

步骤四：无节幼体的损伤率及黏脏率检测：用电子显微镜进行镜检，损伤率主要观察无节幼体有无存在尾棘、附肢或者刚毛断裂，或者存在受到挤压而死亡的个体；黏脏率主要观察无节幼体身体或附肢刚毛是否被水中的有机物质黏着。

进一步的，步骤二中微流水的各项水质指标必须与幼体孵化池中的水保持一致，包括温度、盐度、总碱度及ph值；通过多次流水试验以及对无节幼体弧菌携带量、水体中弧菌含量的跟踪，得出微流水最佳的清洗流量是0.6～1.0m³/h，清洗时间2～3h。

进一步的，步骤三所述微生物含量的检测的具体步骤包括：分别在进行微流水清洗消毒前后，取暂养桶中的水样到超净工作台进行tcbs平板涂布；分别在进行微流水清洗消毒前后，取暂养桶中的无节幼体，用已消毒好的捞网接幼体，喷75％的酒精清洗，接着喷蒸馏水，精密称量0.1g，与400ul0.85％的生理盐水充分混合研磨，在超净工作台内选取100ul样本加至tcbs平板，用涂布棒充分涂均匀，在31℃恒温箱中培养16～18小时后，观察平板中菌落生长情况。

进一步的，步骤四无节幼体的损伤率及黏脏率检测的具体步骤包括：用电子显微镜镜检，在放大倍数20～40下观察，损伤的表现为无节幼体的尾棘、附肢或者刚毛有断裂情况，或者存在受到挤压而死亡的幼体；黏脏的表现为无节幼体的身体或附肢刚毛被水中的有机物黏着；分别取不少于100尾无节幼体镜检，分别对损伤的幼体和黏脏的幼体计数，统计出该批次幼体的损伤率及黏脏率。

本发明的有益效果为：本发明装置结构简单，制作成本低，操作方法简单便捷，且能达到明显效果。通过缓慢注入新水，及时排换掉暂养桶中的旧水，通过混合溶液的特性，从而达到降低单位水体的微生物和残留物含量的效果，运用本发明方法对无节幼体进行微流水消毒，对幼体没有损伤，也不会产生应激，相比传统的无节幼体清洗方法，本发明微流水清洗消毒的方法可以使幼体的损伤率及黏脏率降低20％～40％，幼体的弧菌携带量降低50％～80％，非常适合无节幼体实际生产的运用，从而优化了无节幼体的质量，有效促进幼体的育苗成活率。

附图说明

图1为本发明装置的结构示意图；

图2为本发明圆柱形网箱的结构示意图。

图中，1、暂养桶；2、圆柱形网箱；21、支撑骨架；22、圆柱形网兜；23、绑索。

具体实施方式

下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步说明：

实施例1：

如图1-2所示，一种应用于虾无节幼体微流水清洗消毒的方法，包括以下步骤：

(1)制作微流水清洗消毒的装置：所述装置包括暂养桶1和圆柱形网箱2，所述圆柱形网箱2置于暂养桶1中且高出暂养桶1的顶部上沿20cm，所述圆柱形网箱2包括支撑骨架21、圆柱形网兜22和绑索23，所述支撑骨架21由不锈钢管焊接制成，所述圆柱形网兜22上沿与底部均设有绑索23，所述圆柱形网兜22通过绑索23与支撑骨架21固定，使整个圆柱形网兜22与支撑骨架21紧密贴合，形成一个完整的圆柱形网箱2；所述圆柱形网箱2中央位置设有气管和散气石(未图示)，所述气管垂直设置，所述气管与散气石连接时穿入一个铅粒，所述气管为透明软管，所述气管上设有气阀开关，所述圆柱形网箱2中央正上方还设有水龙头(未图示)，所述水龙头前方安装有一个数显流量计，所述气管悬挂于水龙头上；其中，所述暂养桶1为圆柱形，体积为0.5m³，高度为0.8m，可以容纳无节幼体1500万尾，所述圆柱形网兜22的孔径为200目；

(2)微流水条件：将南美白对虾无节幼体置于圆柱形网箱中，微流水的各项水质指标必须与幼体孵化池中的水保持一致，其中温度30.5℃、盐度32‰、总碱度120及ph值8.2，设置微流水的清洗流量为0.6m³/h，清洗时间为2h；

(3)包括检测暂养桶中水的微生物含量以及无节幼体本身携带的微生物含量，分别在进行微流水清洗消毒前后，取暂养桶中的水样到超净工作台进行tcbs平板涂布，具体操作是取100ul水样原液加入到平板中，用涂布棒充分涂均匀；分别在进行微流水清洗消毒前后，取暂养桶中的无节幼体，用已消毒好的捞网接幼体，喷75％的酒精清洗，接着喷蒸馏水，精密称量0.1g，与400ul0.85％的生理盐水充分混合研磨，在超净工作台内选取100ul样本加至tcbs平板，用涂布棒充分涂均匀，在31℃恒温箱中培养16小时后，观察平板中菌落生长情况；

(4)无节幼体的损伤率及黏脏率检测：用电子显微镜镜检，在放大倍数25下观察，损伤的表现为无节幼体的尾棘、附肢或者刚毛有断裂情况，或者存在受到挤压而死亡的幼体；黏脏的表现为无节幼体的身体或附肢刚毛被水中的有机物黏着；分别对100尾无节幼体镜检，分别对损伤的幼体和黏脏的幼体计数，统计出该批次南美白对虾无节幼体的损伤率及黏脏率，做好数据记录。记录结果如表1所示。

表1本发明无节幼体微流水清洗消毒方法前后效果对比

由表1可见，通过微流水清洗消毒前后效果的对比，暂养桶中的水体弧菌含量及南美白无节幼体自身携带的弧菌含量大大降低，此外对幼体不造成损伤，同时还会有效降低幼体的黏脏率，可以说通过本发明方法能大幅度提高无节幼体的质量，降低南美白对虾育苗过程中病虫害的发生几率，提高种苗的质量及经济效益。

实施例2：

如图1-2所示，一种应用于虾无节幼体微流水清洗消毒的方法，包括以下步骤：

(1)制作微流水清洗消毒的装置：所述装置包括暂养桶1和圆柱形网箱2，所述圆柱形网箱2置于暂养桶1中且高出暂养桶1的顶部上沿20cm，所述圆柱形网箱2包括支撑骨架21、圆柱形网兜22和绑索23，所述支撑骨架21由不锈钢管焊接制成，所述圆柱形网兜22上沿与底部均设有绑索23，所述圆柱形网兜22通过绑索23与支撑骨架21固定，使整个圆柱形网兜22与支撑骨架21紧密贴合，形成一个完整的圆柱形网箱2；所述圆柱形网箱2中央位置设有气管和散气石，所述气管垂直设置，所述气管与散气石连接时穿入一个铅粒，所述气管为透明软管，所述气管上设有气阀开关，所述圆柱形网箱2中央正上方还设有水龙头，所述水龙头前方安装有一个数显流量计，所述气管悬挂于水龙头上；其中，所述暂养桶1为圆柱形，体积为1.0m³，高度为1.0m，可以容纳无节幼体3000万尾，所述圆柱形网兜22的孔径为200目；

(2)微流水条件：将南美白对虾无节幼体置于圆柱形网箱中，微流水的各项水质指标必须与幼体孵化池中的水保持一致，包括温度31℃、盐度31‰、总碱度130及ph值8.0，设置微流水的清洗流量为0.8m³/h，清洗时间为2h；

(3)微生物含量的检测：a、对采用微流水清洗消毒的操作，检测暂养桶中水的微生物含量以及无节幼体本身携带的微生物含量，在进行微流水清洗消毒2h后，取暂养桶中的水样到超净工作台，取100ul水样原液加入到tcbs平板中，用涂布棒充分涂均匀；再取暂养桶中的无节幼体，用已消毒好的捞网接幼体，喷75％的酒精清洗，接着喷蒸馏水，精密称量0.1g，与400ul0.85％的生理盐水充分混合研磨，在超净工作台内选取100ul样本加至tcbs平板，用涂布棒充分涂均匀，在31℃恒温箱中培养18小时后，观察平板中菌落生长情况；b、对采用传统方法的操作，经换水处理后，取样和检测方法同a；

(4)无节幼体的损伤率及黏脏率检测：用电子显微镜镜检，在放大倍数20下观察，损伤的表现为无节幼体的尾棘、附肢或者刚毛有断裂情况，或者存在受到挤压而死亡的幼体；黏脏的表现为无节幼体的身体或附肢刚毛被水中的有机物黏着；分别对两种操作方法处理后的150尾无节幼体镜检，分别对损伤的幼体和黏脏的幼体计数，统计出该批次南美白对虾无节幼体的损伤率及黏脏率，做好数据记录。记录结果如表2所示。

表2本发明无节幼体微流水清洗消毒方法与传统操作方法的效果对比

由表2可见，通过微流水清洗消毒方法与传统操作方法的效果对比，暂养桶中的水体、无节幼体弧菌含量都发生了巨大变化，而传统操作方法对幼体损伤率和黏脏率的提高有一定的促进作用，由此可见，通过微流水清洗消毒的方法能有效降低无节幼体弧菌含量，减少幼体的黏脏率，不会造成幼体的损伤。

(5)无节幼体发育跟踪：对经过两种方法处理的南美白对虾无节幼体运输到育苗场，在同一条车间进行投放，在所有育苗环节、人员操作及环境因素保持一致的情况下，经微流水清洗消毒过的无节幼体在苗池中发育良好，摄食较好、拖便多，正常变态，损耗量少；而对于经传统操作方法的幼体发育存在挂脏的现象，摄食和拖便一般，变态时间明显存在滞后，且损耗量较多。

实施例3：

如图1-2所示，一种应用于虾无节幼体微流水清洗消毒的方法，包括以下步骤：

(1)制作微流水清洗消毒的装置：所述装置包括暂养桶1和圆柱形网箱2，所述圆柱形网箱2置于暂养桶1中且高出暂养桶1的顶部上沿20cm，所述圆柱形网箱2包括支撑骨架21、圆柱形网兜22和绑索23，所述支撑骨架21由不锈钢管焊接制成，所述圆柱形网兜22上沿与底部均设有绑索23，所述圆柱形网兜22通过绑索23与支撑骨架21固定，使整个圆柱形网兜22与支撑骨架21紧密贴合，形成一个完整的圆柱形网箱2；所述圆柱形网箱2中央位置设有气管和散气石，所述气管垂直设置，所述气管与散气石连接时穿入一个铅粒，所述气管为透明软管，所述气管上设有气阀开关，所述圆柱形网箱2中央正上方还设有水龙头，所述水龙头前方安装有一个数显流量计，所述气管悬挂于水龙头上；其中，所述暂养桶1为圆柱形，体积为1.0m³，高度为0.8m，可以容纳无节幼体3000万尾，所述圆柱形网兜22的孔径为200目；

(2)微流水条件：将斑节对虾无节幼体置于圆柱形网箱中，微流水的各项水质指标必须与幼体孵化池中的水保持一致，包括温度29.5℃、盐度30‰、总碱度120及ph值8.0，设置微流水的清洗流量为0.6m³/h，清洗时间2.5h；

(3)微生物含量的检测：检测暂养桶中水的微生物含量以及无节幼体本身携带的微生物含量，在进行微流水清洗消毒2.5h后，取暂养桶中的水样到超净工作台，取100ul水样原液加入到tcbs平板中，用涂布棒充分涂均匀；同时，取暂养桶中的斑节对虾无节幼体，用已消毒好的捞网接幼体，喷75％的酒精清洗，接着喷蒸馏水，精密称量0.1g，与400ul0.85％的生理盐水充分混合研磨，在超净工作台内选取100ul样本加至tcbs平板，用涂布棒充分涂均匀，在31℃恒温箱中培养16小时后，观察平板中菌落生长情况；

(4)斑节对虾无节幼体的损伤率及黏脏率检测：用电子显微镜镜检，在放大倍数25下观察，损伤的表现为无节幼体的尾棘、附肢或者刚毛有断裂情况，或者存在受到挤压而死亡的幼体；黏脏的表现为无节幼体的身体或附肢刚毛被水中的有机物黏着；分别取100尾无节幼体镜检，分别对损伤的幼体和黏脏的幼体计数，统计出该批次幼体的损伤率及黏脏率，做好数据记录；

(5)微流水清洗消毒后的斑节对虾无节幼体情况：水体中黄色弧菌菌落与绿色弧菌菌群数量分别是20cfu/ml和3cfu/ml，幼体自身携带黄色弧菌菌落与绿色弧菌菌群数量分别是0cfu/ml和0cfu/ml，幼体损伤率和黏脏率分别是4％和0％；

(6)斑节对虾无节幼体育苗效果：经微流水清洗消毒后的该批次无节幼体，整个发育过程表现正常，没有出现发育滞后的现象，总体育苗成活率达到70％，远高于其他斑节对虾38％平均育苗成活率。

实施例4：

如图1-2所示，一种应用于虾无节幼体微流水清洗消毒的方法，包括以下步骤：

(1)制作微流水清洗消毒的装置：所述装置包括暂养桶1和圆柱形网箱2，所述圆柱形网箱2置于暂养桶1中且高出暂养桶1的顶部上沿20cm，所述圆柱形网箱2包括支撑骨架21、圆柱形网兜22和绑索23，所述支撑骨架21由不锈钢管焊接制成，所述圆柱形网兜22上沿与底部均设有绑索23，所述圆柱形网兜22通过绑索23与支撑骨架21固定，使整个圆柱形网兜22与支撑骨架21紧密贴合，形成一个完整的圆柱形网箱2；所述圆柱形网箱2中央位置设有气管和散气石，所述气管垂直设置，所述气管与散气石连接时穿入一个铅粒，所述气管为透明软管，所述气管上设有气阀开关，所述圆柱形网箱2中央正上方还设有水龙头，所述水龙头前方安装有一个数显流量计，所述气管悬挂于水龙头上；其中，所述暂养桶1为圆柱形，体积为1.0m³，高度为0.8m，可以容纳无节幼体2500万尾，所述圆柱形网兜22的孔径为200目；

(2)微流水条件：将斑节对虾无节幼体置于圆柱形网箱中，微流水的各项水质指标必须与幼体孵化池中的水保持一致，包括温度31℃、盐度31‰、总碱度120及ph值8.15，设置微流水的清洗流量为1.0m³/h，清洗时间3h；

(3)微生物含量的检测：

a、对采用微流水清洗消毒的操作，检测暂养桶中水的微生物含量以及无节幼体本身携带的微生物含量，在进行微流水清洗消毒3h后，取暂养桶中的水样到超净工作台，取100ul水样原液加入到tcbs平板中，用涂布棒充分涂均匀；再取暂养桶中的无节幼体，用已消毒好的捞网接幼体，喷75％的酒精清洗，接着喷蒸馏水，精密称量0.1g，与400ul0.85％的生理盐水充分混合研磨，在超净工作台内选取100ul样本加至tcbs平板，用涂布棒充分涂均匀，在31℃恒温箱中培养18小时后，观察平板中菌落生长情况；

b、对采用传统方法的操作，经换水处理后，取样和检测方法同a；

(4)无节幼体的损伤率及黏脏率检测：用电子显微镜镜检，在放大倍数25下观察，损伤的表现为无节幼体的尾棘、附肢或者刚毛有断裂情况，或者存在受到挤压而死亡的幼体；黏脏的表现为无节幼体的身体或附肢刚毛被水中的有机物黏着；分别对两种操作方法处理后的100尾无节幼体镜检，分别对损伤的幼体和黏脏的幼体计数，统计出该批次斑节对虾无节幼体的损伤率及黏脏率，做好数据记录。记录结果如表3所示。

表3本发明无节幼体微流水清洗消毒方法与传统操作方法的效果对比

由表3可见，对斑节对虾无节幼体而言，通过微流水清洗消毒方法处理后，相比传统操作方法，暂养桶中的水体、无节幼体弧菌含量显著降低，对幼体损伤没有造成影响，还能促使幼体黏脏率降低，由此可见，通过微流水清洗消毒的方法能有效优化斑节对虾无节幼体的质量，进而提高育苗的成活率，提高种苗的质量。

上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理和最佳实施例，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。