本发明涉及组织培养方法，具体地，涉及一种多肉植物的组织培养方法。
背景技术：
多肉植物亦称多浆植物、肉质植物，在园艺上有时称多肉花卉，但以多肉植物这个名称最为常用。多肉植物是指植物营养器官的某一部分，如茎或叶或根(少数种类兼有两部分)具有发达的薄壁组织用以贮藏水分，在外形上显得肥厚多汁的一类植物。
多肉植物的繁殖方式常用的为：嫁接、扦插与播种；无论上述何种繁殖方式，均存在成活率低与繁殖效率低的缺陷，进而限制了多肉植物栽培。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种多肉植物的组织培养方法，该多肉植物的组织培养方法具有优异的成活率以及繁殖率。
为了实现上述目的，本发明提供了一种多肉植物的组织培养方法，包括：
1)将多肉植物的叶片进行灭菌消毒，接着将叶片切碎作为外植体，然后将外植体外植体置于基础培养基中进行初次诱导以得到愈伤组织；
2)将愈伤组织置于诱导培养基中进行二次诱导以催生不定芽；
3)将具有不定芽的愈伤组织切块以得到愈伤组织块且愈伤组织块至少具有两个不定芽，接着将愈伤组织块置于增殖培养基中进行增殖培养以得到增殖芽块；
4)将增殖芽块置于生根培养基中进行生根培养以得到组织培养苗；
5)将组织培养苗炼苗；
其中，步骤1)-4)的培养条件均至少符合以下条件：无菌且透气；基础培养基为含有naa(1-萘乙酸)、6-kt(激动素)和iaa(吲哚-3-乙酸)的ms培养基；诱导培养基为含有6-ba(6-苄氨基腺嘌呤)、蛋白胨、摩西球囊霉的ms培养基；增殖培养基为含有玉米素、水解酪蛋白、活性炭的ms培养基；生根培养基含有1/2ms培养基。
在上述技术方案中，本发明采取多肉植物的叶片作为外植体，然后依次经过初次诱导、二次诱导、增殖培养、生根培养、炼苗以得到成熟的多肉植物，在各个培养工序中采用特定的培养基进而使得得到的多肉植物具有优异的成活率和高产率，在此基础上能够大面积的进行培育多肉植物，从而为多肉植物的推广奠定了坚实的基础。
本发明的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。
具体实施方式
以下对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。
本发明提供了一种多肉植物的组织培养方法，包括：
1)将多肉植物的叶片进行灭菌消毒，接着将叶片切碎作为外植体，然后将外植体外植体置于基础培养基中进行初次诱导以得到愈伤组织；
2)将愈伤组织置于诱导培养基中进行二次诱导以催生不定芽；
3)将具有不定芽的愈伤组织切块以得到愈伤组织块且愈伤组织块至少具有两个不定芽，接着将愈伤组织块置于增殖培养基中进行增殖培养以得到增殖芽块；
4)将增殖芽块置于生根培养基中进行生根培养以得到组织培养苗；
5)将组织培养苗炼苗；
其中，步骤1)-4)的培养条件均至少符合以下条件：无菌且透气；基础培养基为含有naa、6-kt和iaa的ms培养基；诱导培养基为含有6-ba、蛋白胨、摩西球囊霉的ms培养基；增殖培养基为含有玉米素、水解酪蛋白、活性炭的ms培养基；生根培养基含有1/2ms培养基。
在本发明的基础培养基中，各组分的含量可以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高多肉植物的成活率和繁殖效率，优选地，在基础培养基中，naa的含量为0.5-0.8mg/l，6-kt的含量为0.2-0.4mg/l，iaa的含量为0.3-0.5mg/l。
在本发明的诱导培养基中，各组分的含量可以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高多肉植物的成活率和繁殖效率，优选地，在诱导培养基中，6-ba的含量为0.1-0.3mg/l，蛋白胨的含量为1.5-2.5mg/l，摩西球囊霉的孢子含量为1000-1200个/l。
在本发明的增殖培养基中，各组分的含量可以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高多肉植物的成活率和繁殖效率，优选地，在增殖培养基中，玉米素的含量为0.8-1.5mg/l，水解酪蛋白的含量为0.6-1mg/l，活性炭的含量为0.2-0.4mg/l。
在本发明的各种培养基中，为了更好地为各个组织提供优异的养分以及适宜的培养条件，优选地，基础培养基、诱导培养基、增殖培养基以及生根培养基均含有6.5-7.0g/l的琼脂和25-30g/l的蔗糖，且ph值为6.0-7.0。
在本发明的步骤1)中，灭菌消毒的具体条件可以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高多肉植物的成活率和繁殖效率，优选地，在步骤1)中，灭菌消毒具体为：先将叶片置于60-70重量％酒精水溶液中浸泡30-60s，接着将其置于3-5重量％次氯酸钠水溶液中浸泡3-4min，最后通过蒸馏水进行清洗3-5次。
在本发明的步骤1)中，外植体的大小可以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高多肉植物的成活率和繁殖效率，优选地，在步骤1)中，外植体的长度为0.35-0.45cm，宽度为0.15-0.3cm。
在本发明的步骤1)中，初次诱导的条件可以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高多肉植物的成活率和繁殖效率，优选地，初次诱导满足以下条件：先暗培养1-2天，接着转入光暗交替的条件下培养4-6天；其中，光暗交替条件为：光照时间为12-14h/天，黑暗时间为10-12h/天，光照强度为1800-2000lux，培养温度为21-23℃，相对湿度为50-60％。
在本发明的步骤2)中，二次诱导的条件可以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高多肉植物的成活率和繁殖效率，优选地，在步骤2)中，二次诱导于光暗交替的条件下进行直至不定芽的高度超过1cm；其中，光暗交替条件为：光照时间为12-14h/天，黑暗时间为10-12h/天，光照强度为1800-2000lux，培养温度为21-23℃，相对湿度为50-60％。
在本发明的步骤3)中，增殖培养的条件可以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高多肉植物的成活率和繁殖效率，优选地，在步骤3)中，增殖培养于光暗交替的条件下进行直至增殖芽块上增殖出的新不定芽的高度为2cm以上；其中，光暗交替条件为：光照时间。