提高真菌孢子的储存稳定性的方法与流程

文档序号:25440305发布日期:2021-06-11 21:59阅读:1613来源:国知局
提高真菌孢子的储存稳定性的方法与流程

无论是用于防止各种真菌有害生物或昆虫害虫,还是用于改善植物健康,生物防治剂在植物保护领域中都变得越来越重要。尽管也有病毒可用作生物防治剂,但迄今为止在该领域中使用的主要是基于细菌和真菌的那些。基于真菌的生物防治剂的最突出的形式是被称为分生孢子以及芽生孢子的无性孢子,但其他真菌繁殖体也可能是有前景的防治剂,如(微)菌核、子囊孢子、担孢子、厚垣孢子或菌丝段。

与许多基于细菌的孢子(如芽孢杆菌孢子)不同,许多真菌孢子不那么健壮,并且已证明难以以满足商业产品需要(特别是在一定温度下——如果可能通常在室温下——的可接受的储存稳定性)的形式提供真菌孢子。尽管在过去主要通过对每个真菌种单独开发改进的制剂来解决该问题,但仍然需要提供一种提高真菌孢子的储存稳定性的通用方法,该方法不需要大量的实验为每个菌种找到合适的制剂。

关于水分含量对真菌孢子储存稳定性的影响存在不同的观点。moore等人(biocontrolscienceandtechnology1996,6:51-61)记载了4-5%的水分含量适于使用油储存或干燥储存将黄绿僵菌(m.flavoviridae)孢子储存3个月。最近,微囊化和真菌孢子干燥的组合方法被用于提高棕色绿僵菌(m.brunneum)菌株的储存稳定性(przyklenk等人,2017,journalofmicroencapsulation34(5):498–512)。然而,该使用层流和干燥器的两步干燥方法得到的孢子的存活率在三个月后仅为50%,而在六个月后为1%。值得注意的是,没有残余水分含量的报道,并且观察到干燥时有高损失。过去经常使用脱水来获得干燥的真菌孢子。daoust等人journalofinvertebratepathology1983,41:151-160使用该方法,使得金龟子绿僵菌(m.anisopliae)分生孢子12个月后储存稳定性达到35%。kim等人(mycobiology2014,42(1):59-65)报道了使用空气干燥来干燥球孢白僵菌(beauveriabassiana)最长达140h,然而未进行长期实验。horaczek和viernstein(biologicalcontrol2004,31:65–71)使用三种不同的干燥方法来尝试稳定真菌孢子。

然而,仍然需要提供具有提高到商业水平的储存稳定性的真菌孢子。该技术问题在本发明中至少部分地得以解决。

因此,在第一方面,本发明涉及生产具有延长的储存稳定性的真菌孢子或延长真菌孢子的储存稳定性的方法,所述方法包括使真菌孢子经受干燥步骤以使残余水分含量小于12%。

真菌孢子包括有性形成的孢子(例如卵孢子、接合孢子或子囊孢子)和无性形成的孢子(例如分生孢子和厚垣孢子,还有夏孢子、冬孢子和黑粉菌孢子)。优选地,孢子是分生孢子。

储存稳定性表示真菌孢子在给定时间后发芽的能力。特别地,商业水平的储存稳定性是指在室温下3个月后、优选在6个月后真菌孢子的发芽率至少为80%。

与本发明有关的延长的储存稳定性意味着真菌孢子可以以至少80%的发芽率储存至少6个月。优选地,以该发芽率,真菌孢子可储存甚至8个月或甚至10个月或甚至12个月。从所附的实施例中可以明显看出,真菌孢子,例如棕色绿僵菌(metarhiziumbrunneum)的孢子,更特别地是菌株f52,可最优选地以至少80%的发芽率保存甚至12个月。尽管优选在室温下存在储存稳定性,但它至少也将在较低温度下存在。较低的温度可始于4℃,优选10℃,更优选15℃。

本发明发现,水分含量低于12%的干燥的真菌孢子有助于增强真菌孢子的储存稳定性。通常认为,水分含量越低,储存稳定性进一步提高。在某些情况下,可能不应将水分含量降低到一定阈值以下。

孢子的干燥可以使用本领域已知的方法进行,特别是真空干燥、喷雾干燥、冷冻干燥或脱水。

关于本发明,真菌孢子优选使用真空干燥来干燥。真空干燥是在减压环境下干燥材料的方法,其降低了快速干燥所需的热量。真空干燥器为热不稳定/热敏感材料提供低温干燥。根据本发明,在真空干燥过程中,通过产生真空或至少降低孢子所暴露的大气压来降低真菌孢子的水分含量。该技术背后的原理是将真菌孢子等物质暴露于低(较低)压力和(稍微)较高的温度下。当沸点随周围压力而降低时,需要较低的温度以更有效(更快)干燥,同时使材料不承受热应力。在本发明中可以使用任何种类的真空干燥器。然而,优选使用板式/台式干燥器和/或圆锥形干燥器。

在本发明的过程中,出乎意料地发现,真空干燥在被用于降低真菌孢子的水分含量时甚至进一步提高了所述孢子的储存稳定性。人们通常认为真空干燥方法可能太苛刻,因为水分的流失会太快,低压可能会胁迫/破坏/退化能存活的孢子,但现在发现使用真空干燥将真菌孢子干燥至残余水分含量为低于12%,会产生更加储存稳定的孢子,即保质期延长的孢子。

与本申请相关的残余水分含量或(残余)水含量与孢子中存在的水的含量有关。其可例如使用干燥秤来测量。该方法也称为“干燥失重”方法。示例性设置如下:将2-3g孢子粉样品放入干燥秤中,测量初始重量(起点)。之后,干燥秤将样品加热并测量随着时间推移而减少的重量(随着水的蒸发)。当重量保持恒定时,停止测量,计算重量损失并以初始重量的%表示,对应于残余水分。真菌孢子的最佳残余水分含量可能会根据孢子的类型和真菌种类而有所不同。关于本发明,真菌孢子的残余水分含量小于12%。通常,其可在1%至低于12%、优选1%至低于8%的范围内,例如在此之间的2%、3%、4%、5%、6%或7%或任何值,优选1.5%至6%,如2%或更低、3%或更低、4%或更低、5%或更低或6%或更低。为了清楚起见,如果没有另外说明,本申请中使用的%是指重量%。

在本方法中,真空干燥优选进行最长达16小时。因此,干燥时间通常选择为16小时或更短的时间,例如30分钟至14小时,优选1至12小时,或介于此间的任何值,例如2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个小时。在干燥过程中,孢子可以被搅动或保持原样。是否搅动孢子的决定尤其取决于孢子层的厚度。

在本发明的过程中,已经发现,与文献中所描述的不同,较短的干燥过程适合于提高真菌孢子、特别是分生孢子的储存稳定性。取决于真菌的种类和孢子的类型以及初始水分含量,干燥时间的长度可能会有所不同。

在一个优选的实施方案中,所述真空干燥在最高达40℃、优选最高达30℃(例如15℃至30℃或20℃至30℃)的温度下进行。

在另一个优选的实施方案中,所述真空干燥在50至0.5mbar之间、优选在10至1mbar之间的压力下进行。

在(真空)干燥过程中施加的温度和压力取决于真菌孢子,并且需要进行调整,这在技术人员的能力范围内是容易的。

在一个优选的实施方案中,真菌孢子是分生孢子。分生孢子是一种由真菌形成的孢子。分生孢子是无性形成的,包括但不限于粉末孢子、anellospores、节孢子、瓶梗孢子和pynidiospores。与例如细菌孢子相反,分生孢子并不预期在非常恶劣的环境条件下生存。在一些实施方案中,分生孢子是疏水的。在其他情况下,分生孢子是亲水的。

在另一个实施方案中,真菌孢子为厚垣孢子。

在一个实施方案中,真菌孢子是有性形成的。可用于本发明的有性形成的孢子包括卵孢子、接合孢子或子囊孢子。

根据本领域已知的方法,在合适的底物上培养本发明中使用的孢子的真菌微生物,例如通过深层发酵或固态发酵,例如使用在wo2005/012478或wo1999/057239中公开的设备。优选地,使用固态发酵来生产真菌孢子,因为已经发现,使用固态发酵来产生优选孢子(即分生孢子)并随后——任选地在将孢子从发酵底物分离之前或之后——将孢子干燥的组合,是实施本发明的合适基础。因此,在一个实施方案中,本方法还包括使用固态发酵培养真菌微生物并收获产生的真菌孢子。用于干燥的孢子材料可以是孢子粉,在诸如水等相容液体中的孢子悬浮液、浆体或糊剂。

通往本发明的研究是在通常的氧气/空气暴露下进行的。因此,即使没有氧气消耗也存在观察到的储存稳定性,据信这进一步有助于储存稳定性。

使用本发明的方法获得的真菌孢子可以以合适的制剂施用。优选地,这样的制剂提供了真菌孢子的增强的储存稳定性,从而导致甚至进一步增强的储存稳定性。

所述真菌孢子可源自对植物施加积极作用如植物保护作用或植物生长促进作用的任何真菌。因此,所述真菌可以是昆虫致病性真菌、食线虫真菌、促植物生长真菌、对植物病原体(如细菌或真菌植物病原体)具有活性的真菌、或具有除草作用的真菌。

nrrl是agriculturalresearchserviceculturecollection(农业研究服务培养物保藏中心)的缩写,它是国际保藏机构,目的是根据《国际承认用于专利程序的微生物保存布达佩斯条约》保藏微生物菌株,地址是nationalcenterforagriculturalutilizationresearch,agriculturalresearchservice,u.s.departmentofagriculture,1815northuniversitystreet,peroira,illinois61604usa。

atcc是americantypeculturecollection(美国典型培养物保藏中心)的缩写,它是国际保藏机构,目的是根据《国际承认用于专利程序的微生物保存布达佩斯条约》保藏微生物菌株,其地址为atccpatentdepository,10801universityblvd.,manassas,va10110usa。

如果真菌孢子或由所述真菌孢子生长的真菌具有杀真菌作用,则其可选自

b2.1盾壳霉(coniothyriumminitans),特别是菌株con/m/91-8(登记号dsm-9660;例如来自bayercropsciencebiologicsgmbh的);b2.2核果梅奇酵母(metschnikowiafructicola),特别是菌株nrrly-30752;b2.3赫色小球壳孢(microsphaeropsisochrace),特别是菌株p130a(atcc保藏74412);b2.4白黏帚菌(muscodoralbus),特别是菌株qst20799(登记号nrrl30547);b2.5哈茨木霉(trichodermaharzianumrifai),特别是菌株krl-ag2(也称为菌株t-22,atcc208479,例如来自bioworks,us的plantshieldt-22g、和turfshield)和菌株t39(例如来自makhteshim,us的);b2.6指状节丛孢(arthrobotrysdactyloides);b2.7少孢节丛孢(arthrobotrysoligospora);b2.8多孢节丛孢(arthrobotryssuperba);b2.9黄曲霉(aspergillusflavus),特别是菌株nrrl21882(例如来自syngenta的)或菌株af36(例如来自arizonacottonresearchandprotectioncouncil,us的af36);b2.10粉红粘帚霉(gliocladiumroseum)(也称为clonostachysroseaf.rosea),特别是来自adjuvantsplus的菌株321u、如xue所公开的菌株acm941(efficacyofclonostachysroseastrainacm941andfungicideseedtreatmentsforcontrollingtherootrotcomplexoffieldpea,canjourplantsci83(3):519-524)、菌株ik726(jensendf等人,developmentofabiocontrolagentforplantdiseasecontrolwithspecialemphasisonthenearcommercialfungalantagonistclonostachysroseastrain‘ik726’,australasplantpathol,2007,36:95-101)、菌株88-710(wo2007/107000)、菌株cr7(wo2015/035504)或wo2017109802中公开的菌株crro、crm和crr2;b2.11大伏革菌(phlebiopsisgigantea或phlebiagigantea或peniophoragigantea),特别是菌株vra1835(atcc90304)、菌株vra1984(dsm16201)、菌株vra1985(dsm16202)、菌株vra1986(dsm16203)、菌株focpgb20/5(imi390096)、菌株focpgsplog6(imi390097)、菌株focpgsplog5(imi390098)、菌株focpgbu3(imi390099)、菌株focpgbu4(imi390100)、菌株focpg410.3(imi390101)、菌株focpg97/1062/116/1.1(imi390102)、菌株focpgb22/sp1287/3.1(imi390103)、菌株focpgsh1(imi390104)和/或菌株focpgb22/sp1190/3.2(imi390105)(phlebiopsis产品为例如来自verderaandfin的来自e-nema,de的);b2.12寡雄腐霉(pythiumoligandrum),特别是菌株dv74或m1(atcc38472;例如来自bioprepraty,cz的polyversum);b2.13黄硬皮马勃(sclerodermacitrinum);b2.14黄色蠕形霉(talaromycesflavus),特别是菌株v117b;b2.15棘孢木霉(trichodermaasperellum),特别是来自isagro的菌株icc012或菌株skt-1(例如来自kumiaichemicalindustry的)、菌株t34(例如biocontroltechnologiess.l.,es的t34biocontrol);b2.16深绿木霉(trichodermaatroviride),特别是菌株cncmi-1237(例如来自agrauxine,fr的wp)、国际申请pct/it2008/000196中记载的菌株sc1、菌株77b(来自andermattbiocontrol的t77)、菌株编号v08/002387、菌株nmi编号v08/002388、菌株nmi编号v08/002389、菌株nmi编号v08/002390、菌株lc52(例如来自agrimmtechnologieslimited的sentinel)、菌株lui32(例如agrimmtechnologieslimited的tenet)、菌株atcc20476(imi206040)、菌株t11(imi352941/cect20498)、菌株skt-1(fermp-16510)、菌株skt-2(fermp-16511)、菌株skt-3(fermp-17021);b2.17哈马木霉(trichodermaharmatum);b2.18哈茨木霉(trichodermaharzianum),特别是菌株kd、菌株item908(例如来自koppert的trianum-p)、菌株th35(例如mycontrol的root-pro)、菌株db103(例如dagutatbiolab的t-gro7456);b2.19绿色木霉(trichodermavirens)(也称为绿色粘帚霉(gliocladiumvirens)),特别是菌株gl-21(例如certis,us的soilgard);b2.20绿色木霉(trichodermaviride),特别是菌株tv1、菌株b35(pietr等人,1993,zesz.nauk.arwszczecinie161:125-137);b2.21白粉寄生孢(ampelomycesquisqualis),特别是菌株aq10(例如cbceurope,italy的aq);b2.22阿肯色真菌(arkansasfungus)18,arf;b2.23出芽短梗霉(aureobasidiumpullulans),特别是菌株dsm14940的芽生孢子、菌株dsm14941的芽生孢子或菌株dsm14940和dsm14941的芽生孢子的混合物(例如bio-ferm,ch的);b2.24角毛壳菌(chaetomiumcupreum)(例如agrilife的biokuprumtm);b2.25球毛壳菌(chaetomiumglobosum)(例如rivale的rivadiom);b2.26枝状枝孢菌(cladosporiumcladosporioides),特别是菌株h39(stichtingdienstlandbouwkundigonderzoek);b2.27dactylariacandida;b2.28dilophosphoraalopecuri(例如twistfungus);b2.29尖孢镰刀菌(fusariumoxysporum),特别是菌株fo47(例如naturalplantprotection的fusaclean);b2.30链孢粘帚菌(gliocladiumcatenulatum)(同义词:链状粉红粘帚菌(clonostachysroseaf.catenulate)),特别是菌株j1446(例如lallemand的);b2.31蜡蚧轮枝菌(lecanicilliumlecanii)(以前称为蜡蚧轮枝孢(verticilliumlecanii)),特别是菌株kv01的分生孢子(例如koppert/arysta的);b2.32蠕形青霉菌(penicilliumvermiculatum);b2.33盖姆斯木霉(trichodermagamsii)(原名绿色木霉(t.viride)),特别是菌株icc080(imicc392151cabi,例如agrobiosoldemexico,s.a.dec.v.的bioderma);b2.34多孢木霉(trichodermapolysporum),特别是菌株imi206039(例如binabbio-innovationab,sweden的binabtfwp);b2.35钩木霉(trichodermastromaticum)(例如ceplac,brazil的tricovab);b2.36微变冢村氏菌(tsukamurellapaurometabola),特别是菌株c-924(例如);b2.37奥德曼细基格孢(ulocladiumoudemansii),特别是菌株hru3(例如botry-zenltd,nz的);b2.38黑白轮枝孢(verticilliumalbo-atrum)(原名黄萎病菌(v.dahliae)),特别是菌株wcs850(cbs276.92;例如treecareinnovations的dutchtrig);b2.39粉红产气霉(muscodorroseus),特别是菌株a3-5(登记号nrrl30548);b2.40厚垣轮枝孢菌(verticilliumchlamydosporium);b2.41棘孢木霉(trichodermaasperellum)菌株icc012和盖姆斯木霉(trichodermagamsii)菌株icc080的混合物(产品被称为例如来自bayercropsciencelp,us的bio-tamtm);b2.42simplicilliumlanosoniveum和b2.43trichodermafertile(例如来自basf的产品trichoplus)。

在一个优选的实施方案中,来自具有杀真菌活性的真菌的真菌孢子选自:

盾壳霉(coniothyriumminitans),特别是菌株con/m/91-8(登记号dsm-9660(可作为prophyta,de的获得);赫色小球壳孢(microsphaeropsisochracea)菌株p130a(atcc74412);黄曲霉(aspergillusflavus),菌株nrrl21882(可作为syngenta的获得)和菌株af36(可作为arizonacottonresearchandprotectioncouncil,us的af36获得);粉红粘帚霉(gliocladiumroseum),来自adjuvantsplus的菌株321u;黄色蠕形霉(talaromycesflavus),菌株vii7b;白粉寄生孢(ampelomycesquisqualis),特别是菌株aq10(可作为intrachembioitalia的aq获得);链孢粘帚菌(gliocladiumcatenulatum)(同义词:链状粉红粘帚菌(clonostachysroseaf.catenulate)),特别是菌株j1446(例如verderaoy的)、菌株ik726、菌株88-710(wo2007/107000)、菌株cr7(wo2015/035504);棘孢木霉(trichodermaasperellum),特别是来自isagro的菌株icc012或菌株skt-1(例如来自kumiaichemicalindustry的)、菌株t34(例如biocontroltechnologiess.l.,es的t34biocontrol);绿色木霉(trichodermaviride),特别是菌株tv1(例如koppert的trianum-p)或菌株b35(pietr等人,1993,zesz.nauk.arwszczecinie161:125-137);深绿木霉(trichodermaatroviride),特别是菌株cncmi-1237(例如来自agrauxine,fr的wp)或国际申请pct/it2008/000196中记载的菌株sc1、菌株77b(andermattbiocontrol的t77)、菌株编号v08/002387、菌株nmi编号v08/002388、菌株nmi编号v08/002389、菌株nmi编号v08/002390、菌株lc52(例如来自agrimmtechnologieslimited的sentinel)、菌株lui32(例如agrimmtechnologieslimited的tenet)、菌株atcc20476(imi206040)、菌株t11(imi352941/cect20498)、菌株skt-1(fermp-16510)、菌株skt-2(fermp-16511)、菌株skt-3(fermp-17021);和枝状枝孢菌(cladosporiumcladosporioides),例如菌株h39(stichtingdienstlandbouwkundigonderzoek)。

在一个甚至更优选的实施方案中,真菌孢子来自选自以下的具有杀真菌活性的真菌:盾壳霉(coniothyriumminitans),特别是菌株con/m/91-8(登记号dsm-9660)(可作为prophyta,de的获得);链孢粘帚菌(gliocladiumcatenulatum)(同义词:链状粉红粘帚菌(clonostachysroseaf.catenulate)),特别是菌株j1446(例如lallemand的)、菌株ik726、菌株88-710(wo2007/107000)、菌株cr7(wo2015/035504);绿色木霉(trichodermaviride),特别是菌株tv1(例如koppert的trianum-p)、菌株b35(pietr等人,1993,zesz.nauk.arwszczecinie161:125-137);和深绿木霉(trichodermaatroviride),特别是菌株cncmi-1237(例如agrauxine,fr的wp)、国际申请pct/it2008/000196中记载的菌株sc1、菌株77b(来自andermattbiocontrol的t77)。

最优选的是,来自具有杀真菌活性的真菌的真菌孢子来自盾壳霉(coniothyriumminitans),特别是菌株con/m/91-8;绿色木霉(trichodermaviride)菌株b35;和深绿木霉(trichodermaatroviride),特别是菌株cncmi-1237。

在一个尤其优选的实施方案中,真菌孢子来自盾壳霉(coniothyriumminitans),特别是菌株con/m/91-8。在另一个尤其优选的实施方案中,真菌孢子来自绿色木霉(trichodermaviride)菌株b35。在又一个尤其优选的实施方案中,真菌孢子来自深绿木霉(trichodermaatroviride)菌株cncmi-1237。在这些实施方案中甚至更优选的是,孢子使用固态发酵产生。在本段落描述的所有的实施方案中,优选的是,干燥工艺为真空干燥,如本申请中其他地方所述。

如果真菌孢子或由所述真菌孢子生长的真菌具有杀昆虫作用(昆虫致病性真菌),则所述真菌可选自

c2.1白黏帚菌(muscodoralbus),特别是菌株qst20799(登记号nrrl30547);c2.2粉红产气霉(muscodorroseus),特别是菌株a3-5(登记号nrrl30548);c2.3球孢白僵菌(beauveriabassiana),特别是菌株atcc74040(例如来自cbceurope,italy的来自biologicalsolutionsltd.的contegobb;来自agrilife的racer);菌株gha(登记号atcc74250;例如来自laverlaminternationalcorporation的botaniguardes和mycotrol-o);菌株atp02(登记号dsm24665);菌株ppri5339(例如来自basf的broadbandtm);菌株ppri7315,菌株r444(例如来自andermattbiocontrol的bb-protec),菌株il197、il12、il236、il10、il131、il116(全部参引于jaronski,2007.useofentomopathogenicfungiinbiologicalpestmanagement,2007:isbn:978-81-308-0192-6),菌株bv025(参见例如garcia等人,2006.manejointegradodeplagasyagroecología(costarica)第77期);菌株bagpk;菌株icpe279,菌株cg716(例如来自novozymes的);c2.4桔形被毛孢(hirsutellacitriformis);c2.5汤普森被毛孢(hirsutellathompsonii)(例如来自agrobio-techresearchcentre,in的mycohit和abtec);c2.6蜡蚧轮枝菌(lecanicilliumlecanii)(以前称为蜡蚧轮枝孢(verticilliumlecanii)),特别是菌株kv01(例如来自koppert/arysta的)、菌株daom198499或菌株daom216596的分生孢子;c2.9蜡蚧霉(lecanicilliummuscarium)(原名蜡蚧轮枝孢(verticilliumlecanii)),特别是菌株ve6/cabi(=imi)268317/cbs102071/arsef5128(例如来自koppert的mycotal);c2.10金龟子绿僵菌蝗变种(metarhiziumanisopliaevaracridum),例如来自basf,us的greenguard的arsef324或分离株imi330189(arsef7486;例如biologicalcontrolproducts的greenmuscle);c2.11棕色绿僵菌(metarhiziumbrunneum),例如菌株cb15(例如来自biocare的);或菌株f52(dsm3884/atcc90448;例如bayercropscience的bio1020以及例如novozymes的met52);c2.12金龟子绿僵菌(metarhiziumanisopliae)复合种/菌株,例如菌株esalq1037(例如来自sporganic)、菌株e-9(例如来自sporganic)、菌株m206077、菌株c4-b(nrrl30905)、菌株esc1、菌株15013-1(nrrl67073)、菌株3213-1(nrrl67074)、菌株c20091、菌株c20092或菌株icipe78;c2.15罗伯茨绿僵菌(metarhiziumrobertsii)23013-3(nrrl67075);c2.13莱氏野村菌(nomuraearileyi);c2.14玫烟色拟青霉(paecilomycesfumosoroseus)(新名:玫烟色棒束孢(isariafumosorosea)),特别是菌株apopka97(可作为certis,usa的preferal获得)、fe9901(可作为naturalindustries,usa的nofly获得)、arsef3581、arsef3302、arsef2679(arscollectionofentomopathogenicfungalcultures,ithaca,usa)、ifb01(中国典型保藏物培养中心cctccm2012400)、esalq1296、esalq1364、esalq1409(esalq:universityofpaulo(piracicaba,sp,brazil))、cg1228(embrapageneticresourcesandbiotechnology(brasília,df,brazil))、kchj2(dymarska等人,2017;plosone12(10)):e0184885)、hib-19、hib-23、hib-29、hib-30(gandarilla-pacheco等人,2018;revargentmicrobiol50:81-89)、che-cnrcb304、eh-511/3(flores-villegas等人,2016;parasites&vectors20169:176doi:10.1186/s13071-016-1453-1)、che-cnrcb303、che-cnrcb305、che-cnrcb307(gallou等人,2016;fungalbiology120(2016)414-423)、eh-506/3、eh-503/3、eh-520/3、pfcam、mbp、psmb1(nationalcenterforbiololgicalcontrol,mexico;castellanos-moguel等人,2013;revistamexicanademicologia38:23-33,2013)、rcef3304(meng等人,2015;genetmolbiol.2015jul-sep;38(3):381-389)、pf01-n10(cctccno.m207088)、ccm8367(czechcollectionofmicroorganisms,brno)、sfp-198(kim等人,2010;wileyonline:doi10.1002/ps.2020)、k3(yanagawa等人,2015;jchemecol.2015;41(12):118-1126)、clo55(ansariali等人,2011;plosone.2011;6(1):e16108.doi:10.1371/journal.pone.0016108)、ifts01、ifts02、ifts07(dong等人,2016/plosone11(5):e0156087.doi:10.1371/journal.pone.0156087)、p1(sunagrobiotechresearchcentre,india)、if-02、if-2.3、if-03(farooqandfreed,2016;doi:10.1016/j.bjm.2016.06.002)、ifrasc(meyer等人,2008;j.invertebr.pathol.99:96–102.10.1016/j.jip.2008.03.007)、pc-013(dsmz26931)、p43a、pcc(carrillo-pérez等人,2012;doi10.1007/s11274-012-1184-1)、pf04、pf59、pf109(kimjun等人,2013;mycobiology2013dec;41(4):221-224)、fg340(han等人,2014;doi:10.5941/myco.2014.42.4.385)、pfr1、pfr8、pfr9、pfr10、pfr11、pfr12(angel-sahagún等人,2005;journalofinsectscience)、ifr531(danielandwyss,2009;doi10.1111/j.1439-0418.2009.01410.x)、if-1106(山西农业大学昆虫生态与生防实验站)、i9602、i7284(hussain等人,2016,doi:10.3390/ijms17091518)、i03011(专利us4618578)、cnrcb1(centronacionaldereferenciadecontrolbiologico(cnrcb),colima,mexico)、scau-ifcf01(nian等人,2015;doi:10.1002/ps.3977)、pf01-n4(华南农业大学生物防治教育部工程研究中心,中国广州)、pfr-612(instituteofbiotechnology(ib-fcb-uanl),mexico)、pf-tim、pf-tiz、pf-hal、pf-tic(chan-cupul等人,2013,doi:10.5897/ajmr12.493);c2.15粉虱座壳孢(aschersoniaaleyrodis);c2.16布氏白僵菌(beauveriabrongniartii)(例如来自andermattbiocontrolag的beaupro);c2.17暗孢耳霉(conidiobolusobscurus);c2.18毒力虫霉(entomophthoravirulenta)(例如来自ecomic的vektor);c2.19大链壶菌(lagenidiumgiganteum);c2.20黄绿绿僵菌(metarhiziumflavoviride);c2.21冻土毛霉(mucorhaemelis)(例如来自indorebiotechinputs&research的bioavard);c2.22飞虱虫疠霉(pandoradelphacis);c2.23虫生簇孢(sporothrixinsectorum)(例如来自biocerto,br的sporothrixes);c2.24圆孢虫疫霉(zoophtoraradicans)。

在一个优选的实施方案中,所述真菌孢子源于选自以下的真菌种:玫烟色棒束孢(isariafumosorosea)、常现青霉(penicilliumfrequentans)、枝状枝孢菌(cladosporiumcladosporioides)、cladosporiumdelicatum、绿僵菌属(metarhiziumspp.)、球孢白僵菌(beauveriabassiana)、beauveriabrogniartii、lecanicilliumspp.、粉红螺旋聚孢霉(clonostachysrosea)、莱氏野村菌(nomuraearileyi)、木霉属(trichodermaspp.)、拜莱青霉(penicilliumbilaii)、盾壳霉(coniothyriumminitans)和淡紫拟青霉(purpureocilliumlilacinum)。

在另一个优选的实施方案中,所述真菌孢子源自昆虫致病性真菌,即,具有杀昆虫活性。它们包括上文列出的种,例如玫烟色棒束孢(isariafumosorosea)、绿僵菌属(metarhiziumspp.)、球孢白僵菌(beauveriabassiana)、beauveriabrogniartii、lecanicilliumspp.和莱氏野村菌(nomuraearileyi)。

在一个更优选的实施方案中,具有杀昆虫作用的真菌菌株可选自

c2.3球孢白僵菌(beauveriabassiana),特别是菌株atcc74040;菌株gha(登记号atcc74250);菌株atp02(登记号dsm24665);菌株ppri5339;菌株ppri7315,菌株r444,菌株il197、il12、il236、il10、il131、il116;菌株bagpk;菌株icpe279,菌株cg716;c2.6蜡蚧轮枝菌(lecanicilliumlecanii)(以前称为蜡蚧轮枝孢(verticilliumlecanii)),特别是菌株kv01、菌株daom198499或菌株daom216596的分生孢子;c2.9蜡蚧霉(lecanicilliummuscarium)(原名蜡蚧轮枝孢(verticilliumlecanii)),特别是菌株ve6/cabi(=imi)268317/cbs102071/arsef5128;c2.10蝗绿僵菌(metarhiziumacridum),例如arsef324或分离株imi330189(arsef7486);c2.11棕色绿僵菌(metarhiziumbrunneum),例如菌株cb15或菌株f52(dsm3884/atcc90448);c2.12金龟子绿僵菌(metarhiziumanisopliae)复合种/菌株,例如菌株esalq1037、菌株e-9、菌株m206077、菌株c4-b(nrrl30905)、菌株esc1、菌株15013-1(nrrl67073)、菌株3213-1(nrrl67074)、菌株c20091、菌株c20092或菌株icipe78;c2.14玫烟色拟青霉(paecilomycesfumosoroseus)(新名:玫烟色棒束孢(isariafumosorosea)),特别是菌株apopka97、fe9901、arsef3581、arsef3302、arsef2679、ifb01(中国典型保藏物培养中心cctccm2012400)、esalq1296、esalq1364、esalq1409、cg1228、kchj2、hib-19、hib-23、hib-29、hib-30、che-cnrcb304、eh-511/3、che-cnrcb303、che-cnrcb305、che-cnrcb307、eh-506/3、eh-503/3、eh-520/3、pfcam、mbp、psmb1、rcef3304、pf01-n10(cctccno.m207088)、ccm8367、sfp-198、k3、clo55、ifts01、ifts02、ifts07、p1、if-02、if-2.3、if-03、ifrasc、pc-013(dsmz26931)、p43a、pcc、pf04、pf59、pf109、fg340、pfr1、pfr8、pfr9、pfr10、pfr11、pfr12、ifr531、if-1106、i9602、i7284、i03011(专利us4618578)、cnrcb1、scau-ifcf01、pf01-n4、pfr-612、pf-tim、pf-tiz、pf-hal和pf-tic。

甚至更优选的是,真菌菌株属于玫烟色棒束孢(isariafumosorosea)菌种。优选的玫烟色棒束孢菌株选自apopka97、fe9901、arsef3581、arsef3302、arsef2679、ifb01(中国典型保藏物培养中心cctccm2012400)、esalq1296、esalq1364、esalq1409、cg1228、kchj2、hib-19、hib-23、hib-29、hib-30、che-cnrcb304、eh-511/3、che-cnrcb303、che-cnrcb305、che-cnrcb307、eh-506/3、eh-503/3、eh-520/3、pfcam、mbp、psmb1、rcef3304、pf01-n10(cctccno.m207088)、ccm8367、sfp-198、k3、clo55、ifts01、ifts02、ifts07、p1、if-02、if-2.3、if-03、ifrasc、pc-013(dsmz26931)、p43a、pcc、pf04、pf59、pf109、fg340、pfr1、pfr8、pfr9、pfr10、pfr11、pfr12、ifr531、if-1106、i9602、i7284、i03011(专利us4618578)、cnrcb1、scau-ifcf01、pf01-n4、pfr-612、pf-tim、pf-tiz、pf-hal、pf-tic。

最优选的是,所述玫烟色棒束孢(isariafumosorosea)菌株选自apopka97和fe9901。特别优选的菌株是apopka97。对于玫烟色棒束孢(isariafumosorosea),优选将孢子干燥至残余水分含量为5-10%,优选6-8%。

在昆虫致病性真菌中,尤其优选绿僵菌属(metarhiziumspp.)的那些。绿僵菌属包括若干种,最近已经对其中一些进行了重新分类(关于概述,参见bischoff等人,2009,mycologia101(4):512-530)。绿僵菌属的成员包括:平沙绿僵菌(m.pingshaense)、金龟子绿僵菌(m.anisopliae)、罗伯茨绿僵菌(m.robertsii)、棕色绿僵菌(m.brunneum)(这四种也称为金龟子绿僵菌(metarhiziumanisopliae)复合种)、蝗绿僵菌(m.acridum)、大孢绿僵菌(m.majus)、贵州绿僵菌(m.guizouense)、鳞翅目绿僵菌(m.lepidiotae)和m.globosum。在这些当中,金龟子绿僵菌、罗伯茨绿僵菌、棕色绿僵菌和蝗绿僵菌是甚至更优选的,而棕色绿僵菌和蝗绿僵菌是最优选的。

还特别优选的属于绿僵菌属(metarhiziumspp.)的示例性的菌株为:蝗绿僵菌(metarhiziumacridum)arsef324(basf的产品greenguard)或分离株imi330189(arsef7486;例如biologicalcontrolproducts的greenmuscle);棕色绿僵菌(metarhiziumbrunneum)菌株cb15(例如biocare的)或菌株f52(dsm3884/atcc90448;例如bayercropscience的bio1020以及例如novozymes的met52);金龟子绿僵菌(metarhiziumanisopliae)复合菌株菌株esalq1037或菌株esalqe-9(二者均来自wporganic),菌株m206077,菌株c4-b(nrrl30905),菌株esc1,菌株15013-1(nrrl67073),菌株3213-1(nrrl67074),菌株c20091,菌株c20092,或菌株icipe78。最优选的是分离株f52(也称为met52),其主要感染甲虫幼虫,并且最初是为防治葡萄黑耳喙象(otiorhynchussulcatus)而开发;和商业上用于蝗虫防治的arsef324。基于f52分离株的商业产品为单个分离株f52的继代培养物,并且在数个保藏物培养中心有代表,包括:juliuskühn-instituteforbiologicalcontrol(先前为bba),darmstadt,germany:[asm.a.43];hri,uk:[275-86(缩略词v275或kvl275)];kvldenmark[kvl99-112(ma275或v275)];bayer,germany[dsm3884];atcc,usa[atcc90448];usda,ithaca,usa[arsef1095]。数家公司已经开发了基于该分离株的颗粒制剂和乳油制剂,并已在欧盟和北美(美国和加拿大)注册,用于对抗苗圃观赏植物和软果中的葡萄黑象甲、其他鞘翅目(coleoptera)、温室观赏植物中的西花蓟马和草坪中的麦小蝽(chinchbug)。

球孢白僵菌(beauveriabassiana)已大量生产并用于处理各种各样的昆虫害虫,包括粉虱、蓟马、蚜虫和象鼻虫。lecanicilliumspp.用于对抗粉虱、蓟马和蚜虫。绿僵菌属(metarhiziumspp.)用于对抗包括甲虫、蝗虫和其他蚱蜢、半翅目(hemiptera)和叶螨在内的害虫。玫烟色棒束孢(isariafumosorosea)例如对粉虱、蓟马和蚜虫有效。

优选的球孢白僵菌(beauveriabassiana)的菌株包括菌株atcc74040;菌株gha(登记号atcc74250);菌株atp02(登记号dsm24665);菌株ppri5339;菌株ppri7315,菌株il197、il12、il236、il10、il131、il116、菌株bv025;菌株bagpk;菌株icpe279,菌株cg716;esalqpl63、esalq447和esalq1432,cg1229,imi389521,npp111b005,bb-147。

最优选的是,球孢白僵菌(beauveriabassiana)菌株包括菌株atcc74040和菌株gha(登记号atcc74250)。

对于球孢白僵菌(beauveriabassiana),优选将孢子干燥至残余水分含量为2-6%,优选3-5%,例如4%。

在一个尤其优选的实施方案中,真菌孢子来自棕色绿僵菌(metarhiziumbrunneum)菌株f52。在另一个尤其优选的实施方案中,真菌孢子来自玫烟色拟青霉(paecilomycesfumosoroseus)(新名:玫烟色棒束孢(isariafumosorosea))菌株apopka97。在又一个尤其优选的实施方案中,真菌孢子来自球孢白僵菌(beauveriabassiana)菌株ppri5339.甚至更优选的是,在这些实施方案中,孢子使用固态发酵产生。在本段中描述的所有实施方案中,优选干燥工艺为真空干燥,如本申请中其它地方所述。

如果真菌孢子或由所述真菌孢子生长的真菌具有杀线虫作用,则其可选自

d2.1白黏帚菌(muscodoralbus),特别是菌株qst20799(登记号nrrl30547);d2.2粉红产气霉(muscodorroseus),特别是菌株a3-5(登记号nrrl30548);d2.3淡紫拟青霉(purpureocilliumlilacinum)(以前称为淡紫色拟青霉(paecilomyceslilacinus)),特别是淡紫拟青霉菌株251(agal89/030550;例如来自bayercropsciencebiologicsgmbh的bioact)、菌株580(laverlam的wp(atccno.38740))、产品中的菌株(t.stanesandcompanyltd.)、产品中的菌株(varshabioscienceandtechnologyindiapvtltd.)、产品中的菌株(nicoorgomaures,india)、产品中的菌株(ballagroagrotecnologialtda,brazil)和产品spectrumpae中的菌株(promotoratecnicaindustrial,s.a.dec.v.,mexico);d2.4康宁木霉(trichodermakoningii);d2.5harposporiumanguillullae;d2.6明尼苏达被毛孢(hirsutellaminnesotensis);d2.7monacrosporiumcionopagum;d2.8monacrosporiumpsychrophilum;d2.9疣孢漆斑菌(myrotheciumverrucaria),特别是菌株aarc-0255(例如来自valentbiosciences的diteratm);d2.10多变拟青霉(paecilomycesvariotii),菌株q-09(例如来自quimia,mx的);d2.11菜豆壳多孢(stagonosporaphaseoli)(例如来自syngenta);d2.12木素木霉(trichodermalignorum),特别是菌株tl-0601(例如来自futurecobioscience,es的mycotric);d2.13腐皮镰刀菌(fusariumsolani),菌株fs5;d2.14洛斯里被毛孢(hirsutellarhossiliensis);d2.15掘氏单顶孢(monacrosporiumdrechsleri);d2.16哺噬单顶孢(monacrosporiumgephyropagum);d2.17nematoctonusgeogenius;d2.18nematoctonusleiosporus;d2.19侵管新赤壳(neocosmosporavasinfecta);d2.20类球囊霉属(paraglomussp),特别是巴西类球囊霉(paraglomusbrasilianum);d2.21厚垣孢普可尼亚菌(pochoniachlamydosporia)(也称为厚垣轮枝孢菌(vercilliumchlamydosporium)),特别是var.catenulata(例如imisd187;例如来自thenationalcenterofanimalandplanthealth(censa),cu的klamic);d2.22异皮壳多孢(stagonosporaheteroderae);d2.23meristacrumasterospermum;d2.24duddingtoniaflagrans。

在一个更优选的实施方案中,具有杀线虫作用的真菌菌株选自淡紫拟青霉(purpureocilliumlilacinum)、特别是淡紫拟青霉菌株251(agal89/030550)(可作为prophyta的bioact获得)的孢子和duddingtoniaflagrans的孢子。最优选的是,具有杀线虫活性的真菌菌株为淡紫拟青霉菌株251。甚至更优选的是,在该实施方案中,孢子使用固态发酵产生。此外,优选的是,干燥工艺为真空干燥,如本申请中其他地方所述。

如果真菌孢子或由所述真菌孢子生长的真菌支持和/或促进和/或激发植物健康和植物生长,则其可选自

e2.1黄色蠕形霉(talaromycesflavus),特别是菌株v117b;e2.2深绿木霉(trichodermaatroviride),特别是菌株cncmi-1237(例如来自agrauxine,fr的wp)、国际申请pct/it2008/000196中记载的菌株sc1、菌株编号v08/002387、菌株编号v08/002387、菌株编号nmi编号v08/002388、菌株编号nmi编号v08/002389、菌株编号nmi编号v08/002390、菌株lc52(例如来自agrimmtechnologieslimited的sentinel)、菌株kd(例如来自andermattbiocontrol的t-gro)和/或菌株lui32(例如来自agrimmtechnologieslimited的tenet);e2.3哈茨木霉(trichodermaharzianum),特别是菌株item908或t-22(例如来自koppert的trianum-p);e2.4疣孢漆斑菌(myrotheciumverrucaria),特别是菌株aarc-0255(例如来自valentbiosciences的diteratm);e2.5拜莱青霉(penicilliumbilaii),特别是菌株atcc22348和/或菌株atcc20851(例如来自monsantobioag的);e2.6寡雄腐霉(pythiumoligandrum),特别是菌株dv74或m1(atcc38472;例如来自bioprepraty,cz的polyversum);e2.7rhizopogonamylopogon(例如包含在来自helenachemicalcompany的myco-sol中);e2.8rhizopogonfulvigleba(例如包含在来自helenachemicalcompany的myco-sol中);e2.9哈茨木霉(trichodermaharzianum),特别是菌株tsth20、菌株kd、来自planthealthproducts,za的产品eco-t、或菌株1295-22;e2.10康宁木霉(trichodermakoningii);e2.11聚丛球囊霉(glomusaggregatum);e2.12明球囊霉(glomusclarum);e2.13沙漠球囊霉(glomusdeserticola);e2.14幼套球囊霉(glomusetunicatum);e2.15根内球囊霉(glomusintraradices);e2.16单孢球囊霉(glomusmonosporum);e2.17摩西球囊霉(glomusmosseae);e2.18双色蜡蘑(laccariabicolor);e2.19浅黄根须腹菌(rhizopogonluteolus);e2.20rhizopogontinctorus;e2.21rhizopogonvillosulus;e2.22光硬皮马勃(sclerodermacepa);e2.23点柄乳牛肝菌(suillusgranulatus);e2.24suilluspunctatapies;e2.25绿色木霉(trichodermavirens),特别是菌株gl-21;和e2.26黑白轮枝孢(verticilliumalbo-atrum)(原名黄萎病菌(v.dahliae)),特别是菌株wcs850(cbs276.92;例如来自treecareinnovations的dutchtrig);e2.27绿色木霉(trichodermaviride),例如菌株b35(pietr等人,1993,zesz.nauk.arwszczecinie161:125-137)和e2.28淡紫拟青霉(purpureocilliumlilacinum)(以前称为淡紫色拟青霉(paecilomyceslilacinus))菌株251(agal89/030550;例如来自bayercropsciencebiologicsgmbh的bioact)。

在一个更优选的实施方案中,对植物健康和/或生长具有有益作用的真菌菌株选自

黄色蠕形霉(talaromycesflavus)菌株vii7b;哈茨木霉(trichodermaharzianum)菌株kd或来自planthealthproducts,sz的产品eco-t中的菌株;拜莱青霉(penicilliumbilaii)菌株atcc22348和/或菌株atcc20851;绿色木霉(trichodermavirens)菌株gl-21、绿色木霉(trichodermaviride)菌株b35;深绿木霉(trichodermaatroviride)菌株cncmi-1237,和淡紫拟青霉(purpureocilliumlilacinum)(以前称为淡紫色拟青霉(paecilomyceslilacinus))菌株251(agal89/030550)。

在一个甚至更优选的实施方案中,对植物健康和/或生长具有有益作用的真菌菌株选自拜莱青霉(penicilliumbilaii)、特别是菌株atcc22348,绿色木霉(trichodermaviride)菌株b35,深绿木霉(trichodermaatroviride)菌株cncmi-1237和淡紫拟青霉(purpureocilliumlilacinum)(以前称为淡紫色拟青霉(paecilomyceslilacinus))菌株251(agal89/030550)。

在一个特别优选的替代实施方案中,对植物健康和/或生长具有有益作用的真菌菌株选自哈茨木霉(trichodermaharzianum),特别是菌株kd、菌株item908或菌株t-22;绿色木霉(trichodermavirens),特别是菌株gl-21;和绿色木霉(trichodermaviride),特别是菌株b35(pietr等人,1993,zesz.nauk.arwszczecinie161:125-137)。

在一个尤其优选的实施方案中,真菌孢子来自拜莱青霉(penicilliumbilaii),特别是菌株atcc22348。在另一个尤其优选的实施方案中,真菌孢子来自绿色木霉(trichodermaviride)菌株b35。在又一个尤其优选的实施方案中,真菌孢子来自深绿木霉(trichodermaatroviride)菌株cncmi-1237.在另一个尤其优选的实施方案中,真菌孢子来自淡紫拟青霉(purpureocilliumlilacinum)(以前称为淡紫色拟青霉(paecilomyceslilacinus))菌株251(agal89/030550)。甚至更优选的是,在这些实施方案中,孢子使用固态发酵产生。在本段描述的所有的实施方案中,优选的是,干燥工艺为真空干燥,如本申请中其他地方所述。

如果真菌孢子或由所述真菌孢子生长的真菌具有除草作用,则它们可选自

f2.1phomamacrostroma,特别是菌株94-44b;f2.2小核盘菌(sclerotiniaminor),特别是菌株imi344141(例如agriumadvancedtechnologies的sarritor);f2.3胶孢炭疽菌(colletotrichumgloeosporioides),特别是菌株atcc20358(例如agriculturalresearchinitiatives的collego(也称为lockdown));f2.4stagonosporaatriplicis;或f2.5尖孢镰刀菌(fusariumoxysporum),其不同的菌株对不同的植物种具有活性,例如杂草独脚金(strigahermonthica)(尖孢镰刀菌strigae专化型(fusariumoxysproumformaespecialisstrigae))。

下述实施例以非限制性方式示例说明本发明。

图1和图2:在两种具有不同残余水分含量的不同底物上发酵的棕色绿僵菌孢子的发芽率比较。

实施例1:真菌孢子的干燥步骤

将分生孢子粉(通常在干燥前残余水分约50%)均匀地铺在导热盘中,确保粉末层的厚度不超过2cm。然后将所述盘放置在相应的真空干燥器中。之后,在干燥室中建立真空,使残余水分从粉末中蒸发。通过真空泵将水分泵出干燥室,粉末随之干燥。

将干燥用的盘子加热到设定温度,不断调整该温度以解决蒸发冷却的问题。粉末中的温度传感器显示粉末温度的变化。如果该温度朝着所述盘的温度方向升高,则表明在给定的真空下,几乎没有水分会从粉末中蒸发掉。然后可建立更高(更大/更强)的真空,以使更多的水分离开粉末或使粉末达到所需的水分含量。通过停止干燥过程,破坏真空,取出少量代表性样品并在红外水分分析仪中分析来确定水分含量。如果需要,那么再次开始干燥过程。

实施例2:发芽率的测定

为了确定孢子粉末样品在某一时间点的发芽率,将在25℃下储存孢子的真空密封的铝袋打开,并将最多1mg的孢子转移至锥形瓶(150ml)中,然后混入约100ml的含有低百分比的表面活性剂的水中,并用磁力搅拌器搅拌约30分钟。

之后,将悬浮液稀释10-100倍,并分别将100μl铺板在2个含人工培养基(马铃薯葡萄糖琼脂+氯霉素+苯菌灵)的培养皿上。将培养皿在黑暗中于25℃下培养40小时。

之后,检查200个孢子的发芽迹象(均匀成形的孢子,大小不变=没有发芽,孢子显示出发芽管=发芽),然后计算出发芽孢子的百分比。

实施例3:与未干燥的孢子相比,经干燥的绿僵菌孢子的发芽率增加

使用固态发酵获得棕色绿僵菌菌株f52的孢子。与底物分离后,将每个发酵批次分成多份,每份进行真空干燥程序以干燥至特定的残余水分含量。使用两种不同发酵底物(分别基于谷物)并随后进行真空干燥而获得的孢子被批次包装在密封的铝袋中,并保存直至进一步使用。根据实施例2中所述的程序确定发芽率。

如可从图1和2中看出,干燥至残余水分含量为2重量%以及4重量%的绿僵菌孢子,与具有更高残余水分含量、特别是残余水分含量为12%以上的孢子相比,显示出优异的储存稳定性。

实施例4:与未干燥的孢子相比,经干燥的球孢白僵菌孢子的发芽率增加

使用固态发酵获得球孢白僵菌孢子ppri5339的孢子。与底物分离后,将孢子分成多份,每份进行真空干燥程序以干燥至特定的残余水分含量。然后将孢子样品分别储存在25℃或30℃,并在一定的时间点取样。

如可从下表1中看出,在25℃在4%的残余水分含量下的孢子发芽率,与8%的残余水分含量相比,没有显著降低。

表1

实施例5:玫烟色棒束孢的干燥孢子的发芽率随水分含量减少而增加

使用固态发酵获得玫烟色棒束孢菌株apopka97的孢子。与底物分离后,将孢子分成多份,每份进行真空干燥程序以干燥至特定的残余水分含量。然后将孢子样品储存在25℃,并在一定的时间点取样。

如可从下表2中看出,具有最高水分含量(10%)的孢子的发芽率,与具有较低水分含量的其它份相比,在3个月后开始下降。

表2

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