一种机械或物理损伤的行有性生殖根茎类种质的抢救方法与流程

本发明属于植物栽培领域，具体涉及一种机械或物理损伤的行有性生殖根茎类种质的抢救方法。

背景技术：

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

可以行有性生殖的根茎类种质是指在营养生长阶段形成较大体积的肉质根或肉质块茎、秋季收获其肉质根/茎并经低温贮藏使其通过春化，翌年将通过春化的肉质根/茎定植与田间使其抽薹开花结实。这些种质的选育或收集过程是：头一年秋季营养生长阶段后在收货期选择性状优良的肉质根/茎、或者从市场购买商品性状良好、品质优良的肉质根/茎类种质，经低温诱导通过春化后翌年春季栽植至田间使其自交结实、收获种子进行保存。但发明人发现：在肉质根或茎收获、贮藏、运输阶段，如果遭遇低温冻害、机械挤压等外界刺激，均容易导致肉质根/茎损伤。一旦受伤，在春化阶段和栽培至田间后很容易感染病菌而导致种质死亡，从而丢失宝贵的种质。

技术实现要素：

为了克服上述问题，本发明提供了一种从冻伤的萝卜肉质根上拯救种质的方法，该发明对萝卜、胡萝卜、芜菁等行有性生殖的肉质根茎类种质有普遍的适用价值。

为实现上述技术目的，本发明采用如下技术方案：

本发明的第一个方面，提供了一种机械或物理损伤的行有性生殖根茎类种质的抢救方法，包括：

将有机械或物理损伤的肉质根/茎洗净、去皮、消毒，以顶芽为中心点辐射状将外植体切割成多份；

将切割后的外植体进行芽诱导至幼芽长出；

将幼芽切下进行生根诱导、驯化。

本发明的上述方法可以有效地促使这类种质完成生育期，从而避免了珍贵资源的丢失。

本发明的有益效果在于：

(1)本发明提供了一种冻伤的萝卜肉质根类种质的抢救方法。萝卜、胡萝卜、芜菁、苤蓝等以食用肉质根/茎为主的蔬菜，如果秋季栽培，其营养丰富的肉质根/茎在收获时遭遇极端天气极易被冻伤；另外，种质资源研究人员经常也会从菜市场发现一些外观商品性状和口感品质非常不错的肉质根/茎类种质，菜市场上的肉质根/茎几经周折，即使没有冻伤，其表皮也和容易挤压受伤。对于上述情况下的种质采集回来如果直接栽植到田间的话，重则顶芽根本不会生长肉质根/茎就已经腐烂，轻则顶芽虽然能够生长、但也完成不了生育周期，几乎很难收获种子，而离体进行芽诱导可以有效地促使这类种质完成生育期，从而避免了珍贵资源的丢失。

(2)本发明的操作方法简单、成本低、实用性强，容易推广。

附图说明

构成本发明的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。

图1是实施例1中冻伤肉质根的横切面表型；

图2是实施例1中表面消毒前的外植体；

图3是实施例1中以顶芽为中心沿横切面辐射状纵切示意图；

图4是实施例1中将切割后的外植体小块顶芽部位朝上放置于芽诱导培养基上。

具体实施方式

应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有指明，本发明使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。

需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本发明的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。

术语解释

本申请中，6-ba是指：6-苄氨基嘌呤。

本申请中，iba是指：吲哚丁酸。

一种机械或物理损伤的行有性生殖根茎类种质的抢救方法，包括：

将有机械或物理损伤的肉质根/茎洗净、去皮、消毒，以顶芽为中心点辐射状将外植体切割成多份；

将切割后的外植体进行芽诱导至幼芽长出；

将幼芽切下进行生根诱导、驯化。

在一些实施例中，所述去皮的具体步骤为距顶芽1.8～2.2cm纵切，削去表皮，流水冲洗三分钟。

在一些实施例中，所述消毒采用65～72％酒精浸润30～40秒、0.08～0.12％升汞表面消毒5～6分钟，无菌水冲洗多次，再次用无菌刀片削去外植体整个表面的1.5～2.5mm。以减少酒精和升汞对外植体的刺激。

本发明对于外植体具体的切割份数并不作特殊的限定，因此，在一些实施例中，将外植体切割成6-8份，以提高后续的芽诱导效果。

本申请中对于ms固体培养基的具体组成并不作特殊的限定，在一些实施例中，所述芽诱导在0.1～0.12mg/l6-ba的ms固体培养基上进行，以提高诱导率和培养的繁殖系数。

在一些实施例中，所述培养条件为在25～26℃恒温，16～18h光照/8～10h黑暗，以获得较好的培养效果，提高发芽率。

本申请中对于ms固体培养基的具体组成并不作特殊的限定，在一些实施例中，所述生根诱导在0.2～0.21mg/l的iba的ms固体培养基上进行，以提高生根率，促进主根的生长。

本申请的方法适用于多种肉质根/茎，在一些实施例中，所述肉质根/茎包括：萝卜、胡萝卜、芜菁，处理效果最好。

本申请的方法对多种机械或物理损伤的方法有效，因此，在一些实施例中，所述机械或物理损伤包括：低温冻害、机械挤压，都可以对肉质根/茎进行有效的抢救。

下面结合具体的实施例，对本发明做进一步的详细说明，应该指出，所述具体实施例是对本发明的解释而不是限定。

以下实施例中，ms固体培养基以青岛高科技工业园海博生物技术有限公司的ms培养基(产品货号：hb8469)为原料，配制而成。

实施例1：

1材料：冻伤的萝卜肉质根

2方法：

2.1对照组：冻伤的肉质根直接定植于温室，随时观察长势

2.2处理组：将冻伤的萝卜肉质根洗净表皮的泥土、距顶芽2厘米左右纵切，削去表皮，流水冲洗三分钟后置于超净工作台上，70％究竟酒精30秒、0.1％升汞表面消毒5分钟，无菌水冲洗3次，再次用无菌刀片削去外植体整个表面的2mm左右、以减少酒精和升汞对外植体的刺激。然后以顶芽为中心点辐射状切割外植体至6-8份，将其置于含0.1mg/l6-ba的ms固体培养基(芽诱导培养基)，培养条件：在25℃恒温，16h光照/8h黑暗。三周后待幼芽长出，再将幼芽切下来转移至含0.2mg/l的iba的ms固体培养基(诱导生根培养基)上诱导生根，三周后即可生根，生根的小苗经驯化后移栽至大田使其开花结实。

3结果

3.1田间种植情况

冻伤的肉质根定植与温室后，迟迟不见顶芽生长发育，两周后肉质根出现腐烂，彻底死亡。

3.2冻伤肉质根的横切面表型

冻伤的萝卜肉质其冻伤部位局部表皮皱缩，横切后可见皱缩部位表皮与木质部已经剥离，木质部表现为明显的缺水现象，颜色发白；而没有冻伤的部位表皮饱满，内部肉质根水分充足，颜色呈浅绿色。冻伤部位的缺水现象导致的颜色发白与萝卜的糠芯现象有明显不同。如图1所示。

3.3冻伤肉质根顶芽的抢救

3.3.1顶芽的离体诱导

图2是表面消毒前的外植体，经酒精浸润升汞消毒后，以顶芽为中心沿横切面辐射状纵切(示意图见图3)，切割后的外植体小块顶芽部位朝上放置于芽诱导培养基上(图4)。

图4进行芽诱导的外植体

3.3.2芽的生根诱导和驯化

实验结果表明：三周后即可生根，生根的小苗经驯化后移栽至大田使其开花结实。

最后应该说明的是，以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。上述虽然对本发明的具体实施方式进行了描述，但并非对本发明保护范围的限制，所属领域技术人员应该明白，在本发明的技术方案的基础上，本领域技术人员不需要付出创造性劳动即可做出的各种修改或变形仍在本发明的保护范围以内。