本发明属于生物技术领域，具体涉及到一种以罗汉果为容器培育石斛灵芝的方法。
背景技术：
罗汉果，是葫芦科多年生藤本植物，是桂林名贵的土特产。中医以其果实入药，含有罗汉果甜苷、多种氨基酸和维生素等药用成分，主治肺热痰火咳嗽、咽喉炎、扁桃体炎、急性胃炎、便秘等。罗汉果因其甜度高、热量低而作为甜味剂广泛使用，常作为肥胖者和糖尿病患者的代用糖。罗汉果果实中含有丰富的葡萄糖、果糖及多种维生素等，用途广泛，畅销国内外市场，在国际市场上享有很高的声誉，被人们誉为“神仙果”。
功能主治：
清热润肺，止咳，利咽，滑肠通便。用于肺火燥咳，咽痛失音，肠燥便秘。
药理作用：
（1）止咳作用：d-甘露醇有止咳作用。又可用于脑水肿，能提高血液渗透压，降低颅内压，脱水作用强于尿素，且持续时间长。还可用于大面积烧伤和烫伤的水肿，防治急性肾功能衰竭病和降低眼球内压，治疗急性青光眼以及代替糖作糖尿病患者的甜味食品或调味剂。
（2）对肠管作用：罗汉果健身茶(含罗汉果77.5%，含茶叶15%，含7.5%罗汉果制剂)对小白鼠离体小肠自发活动无明显影响，但可加强家兔和狗离体小肠自发活动。对乙酰胆碱或氯化钡引起的肠管强直性收缩均有拮抗作用，使肠管松弛而解痉;对肾上腺素引起的肠管松弛也有拮抗作用，使肠管恢复自发性活动。表明罗汉果健身茶对肠管运动机能有双向调节作用。
（3）其它作用：罗汉果健身茶对正常家兔胃生物电无影响，即不影响正常的消化道运动机能。罗汉果健身茶给麻醉狗灌胃，血压和心电图均无明显影响。
功效作用：
（1）罗汉果味甘性凉，归肺、大肠经，有润肺止咳，生津止渴的功效，适用于肺热或肺燥咳嗽，百日咳及暑热伤津口渴等，此外还有润肠通便的功效。
（2）罗汉果有清热润肺的功效，主治百日咳,痰火咳嗽,血燥便秘等症；对于治疗急性气管炎,急性扁桃体炎,咽喉火,急性胃炎都有很好的疗效,用它的根捣碎,敷于患处,可以治顽癣,痈肿,疮疖等;果毛可作刀伤药;用罗汉果少许,冲入开水浸泡,是一种极好的清凉饮料,既可提神生津,又可预防呼吸道感染,常年服用,能延年益寿。罗汉果汁还可用于烹调,清香可口。对于治疗急性气管炎，急性扁桃体炎，咽喉火，急性胃炎都有很好的疗效。
（3）罗汉果为卫生部首批公布的药食两用名贵中药材，其所含罗汉果甜甙比蔗糖甜300倍，不产生热量，是饮料、糖果行业的名贵原料，是蔗糖的最佳替代品。常饮罗汉果茶，可防多种疾病，现代医学证明，罗汉果对支气管炎、高血压等疾病有显著疗效，还是起到防治冠心病、血管硬化、肥胖症的作用。
当前，用罗汉果其果泡制的凉茶，久负盛名，还可作为调味品用于炖品。而其深加工产品主要有罗汉果固体饮料、罗汉果饮品，由罗汉果制备而成的糕点、糖果和饼干等等。
绍兴儒林生物科技有限公司、江南大学的陈乃伟和丁重阳申请的发明专利：一种利用铁皮石斛渣固体发酵灵芝的方法（申请号：cn201310183976.2）。石斛渣通过灵芝菌的发酵和生物转化，使得其中的纤维质被灵芝分解利用，产生灵芝多糖和灵芝酸等高效的生物活性物，可将石斛产品深度加工的废弃物转化为高附加值产品。其工艺流程如下：
(1)斜面培养：将灵芝菌种接种到斜面培养基(即pda培养基)上，在30℃环境下培养大约7天时间，至菌丝体长满斜面；
(2)液体种子培养，将斜面菌种接种到装有80ml种子培养基的250毫升的三角瓶中，种子培养基组成(单位克/升)：葡萄糖20，玉米粉20，麸皮10，kh2po41，mgso4·7h2o2，ph自然，121℃灭菌20分钟，在摇床转速150转/分钟，30℃条件下培养7天；
(3)固体发酵培养，取培养好的种子10ml接种到装有100g(干料重)发酵培养基的500ml的三角瓶中。发酵培养基组成：干料100g(石斛渣98g，麸皮1.9g，kh2po40.1g)，料水重量比1：1，121℃灭菌30分钟；22℃条件下培养10天，发酵结束测得多糖含量为1.31%，灵芝酸含量为0.297%。
上述技术方案中，是利用废弃的石斛渣为主要原料，然后接入灵芝菌种，经过10天左右培养时间，培育出灵芝菌丝体。由于铁皮石斛的核心成分已经被利用了，铁皮石斛渣只能是当做培育灵芝的一种载体，培育出来的菌丝体没有铁皮石斛的核心成分。
技术实现要素：
本发明的目的就是提供全新的一种以罗汉果为容器培育石斛灵芝的方法。具体包括：该方法是以罗汉果果实为栽培容器，以罗汉果的果肉和铁皮石斛为培养基，将铁皮石斛放置于罗汉果内，然后把灵芝菌种接入罗汉果内，并培养至灵芝菌丝体长满整个罗汉果乃至长出灵芝子实体，得到一个罗汉果石斛灵芝综合体。
本发明是通过以下技术方案来实现的：
1、一种以罗汉果为容器培育石斛灵芝的方法，技术方案中在于：该方法是以罗汉果果实为栽培容器，以罗汉果的果肉和铁皮石斛为培养基，将铁皮石斛放置于罗汉果内，然后把灵芝菌种接入罗汉果内，并培养至灵芝菌丝体长满整个罗汉果乃至长出灵芝子实体，得到一个罗汉果石斛灵芝综合体。
2、一种以罗汉果为容器培育石斛灵芝的方法，技术方案中在于所述的罗汉果果实可以是新鲜的罗汉果也可以是干的罗汉果。
3、一种以罗汉果为容器培育石斛灵芝的方法，技术方案中在于罗汉果的采集及处理方法如下：
（1）新鲜罗汉果采集及处理：采集八成以上成熟度的新鲜罗汉果为载体，然后将罗汉果果实平铺在室内进行通风晾晒至果实表面呈现黄色，含水量蒸发去果重的15～20%备用；
（2）干罗汉果采集及处理：采集果皮无破损的干罗汉果为载体，然后将罗汉果果实浸泡于淀粉糊中，再自然晾干备用。
4、一种以罗汉果为容器培育石斛灵芝的方法，技术方案中在于铁皮石斛的采集及处理方法如下：
（1）铁皮石斛采集及处理：采集两年生以上的新鲜铁皮石斛为原料，然后将铁皮石斛烘或晒干至物料含水量低于15%备用；
（2）铁皮石斛切段处理：将铁皮石斛切成0.5-5厘米的节段备用。
5、一种以罗汉果为容器培育石斛灵芝的方法，技术方案中在于灵芝菌种的培育方法如下：
（1）灵芝菌种采集：采集本领域常用的灵芝菌种作为菌源；
（2）制备试管种：马铃薯200克、铁皮石斛20-30克、罗汉果10-20克、葡萄糖10克、琼脂20克、水2000毫升，先将铁皮石斛切成0.5-1厘米的节段，把罗汉果破碎成小片，把马铃薯去皮后切成小块，再把马铃薯、铁皮石斛和罗汉果一起放置到2000毫升清水中，接着加热至水沸腾，并持续加热至2000毫升水减少至1000毫升得营养液，往营养液里添加葡萄糖和琼脂并分装于试管中，然后灭菌制成斜面试管，最后往斜面试管中接入灵芝菌种培育得试管种；
（3）制备液体菌种：马铃薯20000克、铁皮石斛4000-6000克、罗汉果2000-4000克、白糖1000克、蛋白胨200-500克、水200000毫升，先将铁皮石斛切成0.5-1厘米的节段，把罗汉果破碎成小片，把马铃薯去皮后切成小块，再把马铃薯、铁皮石斛和罗汉果一起放置到200000毫升清水中，接着加热至水沸腾，并持续加热至200000毫升水减少至100000毫升得营养液，再往营养液里添加白糖和蛋白胨后分装于三角瓶中，最后灭菌、接入试管种、旋转培养得灵芝液体菌种。
6、一种以罗汉果为容器培育石斛灵芝的方法，技术方案中在于灵芝菌丝体及灵芝子实体的培育方法如下：
（1）制备营养液：麦麸20000克、白糖1000克、蛋白胨200-500克、水200000毫升，把麦麸放置到200000毫升清水中，接着加热至水沸腾，并持续加热至200000毫升水减少至100000毫升，再添加白糖和蛋白胨后得营养液；
（2）果体装培养基：把铁皮石斛放置于营养液中浸泡10-12个小时后捞出，再用适量的动植物蛋白粉拌入铁皮石斛拌中，使铁皮石斛都均匀的粘上动植物蛋白粉，将罗汉果果实的一头削掉，并用工具将罗汉果果实扎透几个洞，再将粘有动植物蛋白粉的铁皮石斛灌入罗汉果果体内得罗汉果铁皮石斛混合体；
（3）灭菌接种：按照常规方法将罗汉果铁皮石斛混合体进行灭菌，然后把经过灭菌的罗汉果放置到接种室内，在无菌环境下把适量的灵芝液体菌种接入到罗汉果内的铁皮石斛基质中；
（4）灵芝菌丝体培育方法：将接好灵芝菌种的罗汉果放置于室温是22-25度、湿度是60-77及暗光的环境下培养6-10天，使灵芝菌丝体长满整个罗汉果，继而得到一种罗汉果石斛灵芝综合体；
（5）草子实体的培育方法：当灵芝菌丝体长满整个罗汉果，继续在室温为25-28度，湿度为85-90%及光照环境下继续培育至罗汉果内长出灵芝子实体，继而得到另一种罗汉果石斛灵芝综合体。
所述的灵芝(学名:ganodermalucidumkarst)，俗称赤芝、红芝、木曼芝，古称瑞草隶属于层茧纲、非褶菌目、灵芝科、灵芝属(ganoderma)所有真菌的总称，是我国著名的药食兼用大型真菌。现代科学研究表明，灵芝中合有的多糖、三萜等成分具有抗氯化、抗肿瘤、降血脂、隐血糖、抗衰老、调节免疫及促进新陈代谢等功效，且几乎无毒副作用，受到医药界的广泛重视。灵芝的开发利用越来越受到人们的重视，但灵芝野生资源稀缺，因此灵芝的人工高产、高品质栽培技术显得尤为重要。灵芝属高温型菌类，是以死亡倒木为生的木腐性真菌，对木质素，纤维素，半纤维素等复杂的有机物质具有较强的分解和吸收能力，主要依靠灵芝本身含有许多酶类，如纤维素酶，半纤维素酶及糖酶，氧化酶等，能把复杂的有机物质分解为自身可以吸收利用的简单营养物质，如木屑和一些农作物秸杆，棉籽壳，甘蔗渣，玉米芯等都可以栽培灵芝。灵芝菌丝及子实体均需一定的氮源才能正常生长，在灵芝人工栽培原料中，有一些可供菌丝、子实体吸收利用的氮源，需要添加含氮量较高的材料，以达到高产、高效的目的。氮源主要用于菌体细胞物质(氨基酸、蛋白质、核酸等)和含氮代谢物的合成。培养基中使用的氮源可分为两大类:有机氮源和无机氮源。常用的无机氮源包括各种铵盐、硝酸盐和氨水等。常用的有机氮源有花生饼粉、黄豆饼粉、棉子饼粉、玉米浆、酵母粉、鱼粉、蚕蛹粉、蛋白胨、麸皮、废菌丝体等。
所述的铁皮石斛（学名：dendrobiumofficinalekimuraetmigo）茎直立，圆柱形，长9-35厘米，粗2-4毫米，不分枝，具多节；叶二列，纸质，长圆状披针形，边缘和中肋常带淡紫色，其茎入药，是一种喜阴凉的多年生草本植物。铁皮石斛是一种兼具观赏价值与药用价值的特殊植物，药用作用非常巨大，受到医学界的重视，国际药用植物界称其为药界的大熊猫，被民间称作救命的仙草，可以益胃生津、滋阴清热，主要功效作用主要有增加人体免疫功能，促进消化，护肝利胆，抗风湿，降低或者控制血糖和血脂，促进循环扩张血管，降低血胆固醇和甘油三酯，滋阴养目等众多功能。
本发明既有如下优点：
1、本发明所提出以罗汉果为容器培育石斛灵芝的方法构思新颖，生产工艺简单、容易实施。
2、通过实施本发明，将罗汉果果实浸泡于淀粉糊中再自然晾干，有效的保障罗汉果表皮提高了韧性，果实不易破损，中后期培菌时果内菌丝不易污染，完整的果实也相互提高了商品的价值。
3、通过实施本发明，将拌有动植物蛋白粉的铁皮石斛装入罗汉果体内，使罗汉果的果肉和铁皮石斛组成为灵芝生长的培养基，由于罗汉果果肉营养丰富，是一种很好的氮源，铁皮石斛不但含有丰富的氮源，而且具有的植物纤维组织也非常适合灵芝生长，把灵芝菌种接入罗汉果果内时，灵芝菌种在培养基极具丰富的营养滋养下，菌丝生长迅猛，吃料迅速，很快就可以吃透整体培养基乃至整个罗汉果果体，菌丝转化为子实体时，子实体个体粗壮，生长速度快。
4、通过实施本发明，由灵芝菌丝体把罗汉果和铁皮石斛组合得到一个罗汉果灵芝综合体。罗汉果灵芝综合体不是罗汉果、铁皮石斛与灵芝的简单结合，而是一个全新的生物转化过程，其营养成分与保健功效也不是三者的简单叠加，而是合三为一，互补增益。制备而得的罗汉果灵芝综合体同时具有罗汉果果体、铁皮石斛和灵芝原有的营养、功能成分，还不丧失罗汉果原有的口味，是一种同时具有美味、休闲、食疗、养生等多功能及特色的保健食品。
5、但由于铁皮石斛性寒，体质虚寒之人没法吃铁皮石斛。通过实施本发明，铁皮石斛经过发酵以后不但把其性寒去掉，而且富含纤维的铁皮石斛也被分解及营养及早分离，便于人进食之后很容易地吸收，提高的吸收率。以罗汉果的果肉和铁皮石斛为营养基质，将灵芝接种在营养基质上，对其功效成分进行分解、吸收与转化，培育出一种新型灵芝菌丝体和子实体，这是灵芝种植业的一场革命，彻底改变了以木材等农林废弃物为原料培养灵芝的技术模式，大大的提高了灵芝的有效成分含量、口感和保健价值。
5、通过实施本发明，使罗汉果得以无限制扩大增值，改变了目前市场上罗汉果深加工产品不具特色及增值效果不佳等现状，解决了罗汉果的产后出路，并带动罗汉果相关产业的发展，形成新的经济增长点，具有巨大的经济效益和社会效益。
6、通过实施本发明，形成的罗汉果灵芝综合体不但新颖、特色，而且具有很高的营养价值和显著的保健效果，可用于泡茶、泡酒和煲汤，或者加工成其他特色食品。让人们在习以为常的摄入休闲食品时就可以达到食疗及保健养生效果。所以，本发明不但有非常好的市场前景，而且产生的经济效益亦会非常显著。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的方法进一步说明。
一种以罗汉果为容器培育灵芝的方法，技术方案中在于：该方法是以罗汉果果实为栽培容器，以罗汉果的果肉为营养源，以各种食材为辅料，将食材放置于罗汉果内，然后把灵芝菌种接入罗汉果内，并培养至灵芝菌丝体长满整个罗汉果乃至长出灵芝子实体，得到一个罗汉果灵芝综合体。
实施例一：
1、采集新鲜的罗汉果为原料。
2、罗汉果的采集及处理方法是：采集八成以上成熟度的新鲜罗汉果为载体，然后将罗汉果果实平铺在室内进行通风晾晒至果实表面呈现黄色，含水量蒸发去果重的15～20%备用。
3、铁皮石斛的采集及处理方法如下：
（1）铁皮石斛采集及处理：采集两年生以上的新鲜铁皮石斛为原料，然后将铁皮石斛烘或晒干至物料含水量低于15%备用；
（2）铁皮石斛切段处理：将铁皮石斛切成0.5厘米的节段备用。
4、灵芝菌种的培育方法如下：
（1）灵芝菌种采集：采集本领域常用的灵芝菌种作为菌源；
（2）制备试管种：马铃薯200克、铁皮石斛20-30克、罗汉果10-20克、葡萄糖10克、琼脂20克、水2000毫升，先将铁皮石斛切成0.5-1厘米的节段，把罗汉果破碎成小片，把马铃薯去皮后切成小块，再把马铃薯、铁皮石斛和罗汉果一起放置到2000毫升清水中，接着加热至水沸腾，并持续加热至2000毫升水减少至1000毫升得营养液，往营养液里添加葡萄糖和琼脂并分装于试管中，然后灭菌制成斜面试管，最后往斜面试管中接入灵芝菌种培育得试管种；
（3）制备液体菌种：马铃薯20000克、铁皮石斛4000-6000克、罗汉果2000-4000克、白糖1000克、蛋白胨200-500克、水200000毫升，先将铁皮石斛切成0.5-1厘米的节段，把罗汉果破碎成小片，把马铃薯去皮后切成小块，再把马铃薯、铁皮石斛和罗汉果一起放置到200000毫升清水中，接着加热至水沸腾，并持续加热至200000毫升水减少至100000毫升得营养液，再往营养液里添加白糖和蛋白胨后分装于三角瓶中，最后灭菌、接入试管种、旋转培养得灵芝液体菌种。
5、灵芝菌丝体及灵芝子实体的培育方法如下：
（1）制备营养液：麦麸20000克、白糖1000克、蛋白胨200-500克、水200000毫升，把麦麸放置到200000毫升清水中，接着加热至水沸腾，并持续加热至200000毫升水减少至100000毫升，再添加白糖和蛋白胨后得营养液；
（2）果体装培养基：把铁皮石斛放置于营养液中浸泡10-12个小时后捞出，再用适量的玉米粉拌入铁皮石斛拌中，使铁皮石斛都均匀的粘上玉米粉，将罗汉果果实的一头削掉，并用工具将罗汉果果实扎透几个洞，再将粘有玉米粉的铁皮石斛灌入罗汉果果体内得罗汉果铁皮石斛混合体；
（3）灭菌接种：按照常规方法将罗汉果铁皮石斛混合体进行灭菌，然后把经过灭菌的罗汉果放置到接种室内，在无菌环境下把适量的灵芝液体菌种接入到罗汉果内的铁皮石斛基质中；
（4）灵芝菌丝体培育方法：将接好灵芝菌种的罗汉果放置于室温是22-25度、湿度是60-77及暗光的环境下培养6-10天，使灵芝菌丝体长满整个罗汉果，继而得到一种罗汉果石斛灵芝综合体；
（5）草子实体的培育方法：当灵芝菌丝体长满整个罗汉果，继续在室温为25-28度，湿度为85-90%及光照环境下继续培育至罗汉果内长出灵芝子实体，继而得到另一种罗汉果石斛灵芝综合体。
实施例二：
1、采集干的罗汉果为原料。
2、罗汉果的采集及处理方法是：采集果皮无破损的干罗汉果为载体，然后按照100斤水放5-10斤糯米粉的比例，将糯米放置于水中并加热熬制成米糊，然后把罗汉果果实浸泡于米糊中浸泡1-2分钟，再自然晾干备用，有效的提高罗汉果果皮的韧性提高，果皮不易破损。
3、铁皮石斛的采集及处理方法如下：
（1）铁皮石斛采集及处理：采集两年生以上的新鲜铁皮石斛为原料，然后将铁皮石斛烘或晒干至物料含水量低于15%备用；
（2）铁皮石斛切段处理：将铁皮石斛切成5厘米的节段备用。
4、灵芝菌种的培育方法如下：
（1）灵芝菌种采集：采集本领域常用的灵芝菌种作为菌源；
（2）制备试管种：马铃薯200克、铁皮石斛20-30克、罗汉果10-20克、葡萄糖10克、琼脂20克、水2000毫升，先将铁皮石斛切成0.5-1厘米的节段，把罗汉果破碎成小片，把马铃薯去皮后切成小块，再把马铃薯、铁皮石斛和罗汉果一起放置到2000毫升清水中，接着加热至水沸腾，并持续加热至2000毫升水减少至1000毫升得营养液，往营养液里添加葡萄糖和琼脂并分装于试管中，然后灭菌制成斜面试管，最后往斜面试管中接入灵芝菌种培育得试管种；
（3）制备液体菌种：马铃薯20000克、铁皮石斛4000-6000克、罗汉果2000-4000克、白糖1000克、蛋白胨200-500克、水200000毫升，先将铁皮石斛切成0.5-1厘米的节段，把罗汉果破碎成小片，把马铃薯去皮后切成小块，再把马铃薯、铁皮石斛和罗汉果一起放置到200000毫升清水中，接着加热至水沸腾，并持续加热至200000毫升水减少至100000毫升得营养液，再往营养液里添加白糖和蛋白胨后分装于三角瓶中，最后灭菌、接入试管种、旋转培养得灵芝液体菌种。
5、灵芝菌丝体及灵芝子实体的培育方法如下：
（1）制备营养液：麦麸20000克、白糖1000克、蛋白胨200-500克、水200000毫升，把麦麸放置到200000毫升清水中，接着加热至水沸腾，并持续加热至200000毫升水减少至100000毫升，再添加白糖和蛋白胨后得营养液；
（2）果体装培养基：把铁皮石斛放置于营养液中浸泡10-12个小时后捞出，再用适量的黄豆粉拌入铁皮石斛拌中，使铁皮石斛都均匀的粘上黄豆粉，将罗汉果果实的一头削掉，并用工具将罗汉果果实扎透几个洞，再将粘有黄豆粉的铁皮石斛灌入罗汉果果体内得罗汉果铁皮石斛混合体；
（3）灭菌接种：按照常规方法将罗汉果铁皮石斛混合体进行灭菌，然后把经过灭菌的罗汉果放置到接种室内，在无菌环境下把适量的灵芝液体菌种接入到罗汉果内的铁皮石斛基质中；
（4）灵芝菌丝体培育方法：将接好灵芝菌种的罗汉果放置于室温是22-25度、湿度是60-77及暗光的环境下培养6-10天，使灵芝菌丝体长满整个罗汉果，继而得到一种罗汉果石斛灵芝综合体；
（5）草子实体的培育方法：当灵芝菌丝体长满整个罗汉果，继续在室温为25-28度，湿度为85-90%及光照环境下继续培育至罗汉果内长出灵芝子实体，继而得到另一种罗汉果石斛灵芝综合体。
以上所述，对于本领域的普通技术人员来说，可以根据本发明的技术方案和技术构思作出其他各种相应的改变，而所有这些改变都应属于本发明后附的权利要求保护范围。