一种用于种间互作研究的下胚轴嫁接方法与流程

1.本发明涉及一种用于种间互作研究的下胚轴嫁接方法。


背景技术：

2.嫁接是解决土传病害等连作障碍问题、提高植株耐逆性、提高水肥利用率的有效绿色栽培技术，同时也是砧穗互作等物种间或材料间互作研究的重要技术手段。嫁接不仅可以调控植株的长势、花期、水肥吸收能力、光合作用，还可以调控激素平衡、营养物质吸收及合成转运，同时砧穗间还存在rna、蛋白质等分子交流。
3.现有的嫁接方法多留有砧木子叶，易在嫁接过程中萌发砧木新的萌孽，同时现有的嫁接方法多为一个砧木嫁接一个接穗，而研究过程中，砧穗互作仅可研究地上部和地下部的相互作用，难以研究砧木和接穗两种物种或同一物种不同材料间的互作，对物种间或材料间互作研究不够全面。
4.这就要求发明一种新的种间研究方法，使之不仅可以解决萌孽问题，还可以提供两个接穗地上部的互作或砧木与接穗地下部的互作研究途径。尽管现在已有无萌孽的下胚轴嫁接、用于砧穗互作研究的下胚轴嫁接以及一砧双穗等嫁接方法可解决萌孽问题及一个砧木接多个接穗的方法存在，但目前尚无用于物种间互作全面研究的无萌孽多接穗及多砧木嫁接方法。


技术实现要素：

5.本发明的目的是提供一种用于种间互作研究的下胚轴嫁接方法，以解决上面的问题。
6.本发明通过如下技术方案实现：一种用于种间互作研究的下胚轴嫁接方法，包括将培育好的砧木、接穗进行下胚轴嫁接，然后进行嫁接后管理即可进行种间互作研究；所述下胚轴嫁接为：对砧木进行切割、对接穗进行斜削后采用合接的方式嫁接，即接穗削好后切口要在主要成分为6
‑
苄氨基嘌呤、芸苔素内酯以及砍瓜浸提液的溶液中浸泡1
‑
3秒后，再嫁接到砧木上，用嫁接夹进行夹持，将砧木和接穗进行固定。
7.进一步的，所述接穗、砧木的培育为：选取饱满的接穗、砧木种子分别进行育苗，当砧木第一片真叶未完全展开，接穗下胚轴直立到子叶平展前时进行嫁接，砧木比接穗早播种5
‑
7天；进一步的，所述嫁接后管理：嫁接头三天，覆盖砧木接穗，保证湿度在90％以上；睛天时要遮阴，以免阳光直照苗床；为防止病害和产生高脚苗，第三天开始通风降湿和炼苗，头一天早晚打开覆盖物透气，第四天后逐渐延长通风时间，但不能让风直接吹向苗床，以免脱水萎蔫；嫁接后的5～7天，应避免强光直射苗床，睛天要遮阴；一般嫁接后第三天起，早晚不用遮阳，中午遇强光照时再遮阳；以后逐步增加见光的时间和强度，但必须保证嫁接苗不凋萎，保持硬挺状态；如发生萎蔫，应及时浇水和遮光；嫁接后10天，要及时摘除砧木的侧
芽；嫁接后5天淋施肥料，7～10天后追肥一次。
8.进一步的，所述合接为在砧木下胚轴处切割呈45
‑
60度的斜面，完全去掉砧木子叶和生长点；在接穗子叶下方向下斜削得一切口，切口尺寸与斜面贴合，接穗切口要在主要成分为6
‑
苄氨基嘌呤、芸苔素内酯及砍瓜浸提液的溶液中浸泡1
‑
3秒后，再嫁接到砧木上，用嫁接夹进行夹持，将砧木和接穗进行固定。
9.进一步的，所述合接为在砧木子叶下方从相对的两边向中间斜向上切割或者从中间斜向下进行切割，完全去掉砧木子叶和生长点，在砧木下胚轴处形成相对的两个长0.5
‑
1.5cm呈45
‑
60度的斜面；用刀片在接穗子叶下方0.5
‑
1cm处向下斜削一刀，把苗茎削成单斜面形切口，切口长0.5
‑
1.5cm，与砧木切口长度一致，接穗切口要在主要成分为6
‑
苄氨基嘌呤、芸苔素内酯和砍瓜浸提液的溶液中浸泡1
‑
3秒后，再嫁接到砧木上，用嫁接夹进行夹持，将砧木和接穗进行固定。
10.进一步的，所述合接为在砧木下胚轴处切割呈45
‑
60度的斜面，完全去掉砧木子叶和生长点；在这一切口下方间距0.5cm以上位置，用刀片向下切割呈45
‑
60度的另一个切口，另一切口顶端距下胚轴另一面的距离占下胚轴粗细的1/3
‑
1/5；用刀片再切割两个接穗，其中用于上部嫁接的接穗在子叶下方下胚轴上斜向下切割1刀，切面长度与砧木上部切口相同，用于下部嫁接的接穗在子叶下方下胚轴上相对方向斜向下切割2刀，切面长度与砧木下部切口相同；接穗切口要在主要成分为6
‑
苄氨基嘌呤、芸苔素内酯和砍瓜浸提液的溶液中浸泡1
‑
3秒后，再分别嫁接到砧木相应位置上，分别用嫁接夹进行夹持，将砧木和接穗进行固定。
11.进一步的，所述合接为将两个砧木在相同的下胚轴高度处分别切成一个与下胚轴成45
‑
60度的斜切面，接穗切成与砧木斜切面对应的斜切口，接穗切口要在主要成分为6
‑
苄氨基嘌呤、芸苔素内酯及砍瓜浸提液的溶液中浸泡1
‑
3秒后再，嫁接到砧木上，用嫁接夹进行夹持，将砧木和接穗进行固定。
12.进一步的，6
‑
苄氨基嘌呤、芸苔素内酯和砍瓜浸提液的溶液中三者质量浓度为1
‑
3％，2
‑
6％及4
‑
12％。
13.进一步的，6
‑
苄氨基嘌呤、芸苔素内酯及砍瓜浸提液的溶液中三者质量比为1∶2∶4。
14.进一步的，6
‑
苄氨基嘌呤和芸苔素内酯的溶液为主要成分为2％的6
‑
苄氨基嘌呤、4％的芸苔素内酯和8％砍瓜浸提液的溶液。
15.进一步的，所述6
‑
苄氨基嘌呤、芸苔素内酯以及砍瓜浸提液的溶液为将称取的6
‑
苄氨基嘌呤、芸苔素内酯以及砍瓜浸提液加水混合而得到；其中所述砍瓜浸提液为将砍瓜浸到8～10倍纯净水中，浸泡1h后，控制加热温度90～95℃浸提1h，抽取上清液；再加入8～10倍纯净水重复浸提1h，去渣，合并两次浸提上清液所得。
16.本发明的有益效果为：1、提供了无萌孽的两个接穗地上部间的互作或两个砧木地下部间的互作及砧木和接穗地上部与地下部间的互作研究途径；2、同时，同一砧木嫁接不同接穗的方法还可以应用于嫁接企业的嫁接苗生产，解决砧木长势不齐时嫁接苗大小不一致的情况，以及插接、贴接等方法应用时要花劳动力去萌孽的问题以及嫁接苗成活时间不一致的问题；3、可以通过完全去掉子叶，减少嫁接苗子叶处有水等产生病害，嫁接苗完全一致，发病率较原始的5％
‑
10％降低至0
‑
3％，每万株苗用工可减少3
‑
5个工；4、本方法进行的
两个接穗嫁接较常规的一砧双穗嫁接方法可以提早成活1
‑
2天，且成活率提高5
‑
10％，降低两个不同接穗间长势差异导致的长势强接穗对长势弱接穗的抑制；5、同一砧木上下两个切面嫁接不同接穗时，两个切口的方向可以是相对的，也可以是其它任意方向，只要嫁接成活后，接穗生长到一定程度时对茎蔓生长方向进行调整即可。
附图说明
17.图1为本发明方法中砧木接穗嫁接的结构示意图。
18.其中图1a为单个砧木嫁接单个接穗，图1b为单个砧木顶端嫁接两个接穗，图1c为单个砧木阶梯式嫁接两个接穗；图1d是两个砧木嫁接一个接穗。
19.图中，1、砧木；2、接穗。
具体实施方式
20.本发明的用于种间互作研究的下胚轴嫁接方法，包括接穗2、砧木1的培育；下胚轴嫁接；嫁接后管理及砧穗互作的研究等几个步骤。
21.其中接穗2、砧木1的培育为：选取饱满的接穗2、砧木1种子进行烫种、浸种、催芽，催芽好后播种出苗，当砧木1第一片真叶未完全展开，接穗2下胚轴直立到子叶平展前时进行嫁接。砧木1比接穗2早播种5
‑
7天。
22.接穗2与砧木1的嫁接为：对砧木1进行切割、对接穗2进行斜削后采用合接的方式嫁接，接穗2削好后在主要成分为6
‑
苄氨基嘌呤、芸苔素内酯和砍瓜浸提液的溶液中浸泡1
‑
3秒后，再嫁接到砧木1上，用嫁接夹进行夹持，将砧木1和接穗2进行固定。这里的合接为在砧木1下胚轴处切割呈45
‑
60度的斜面，完全去掉砧木1子叶和生长点；在接穗2子叶下方向下斜削得一切口，切口可与斜面贴合，接穗2切口要在主要成分为6
‑
苄氨基嘌呤、芸苔素内酯和砍瓜浸提液的溶液中浸泡1
‑
3秒后，再嫁接到砧木1上，用嫁接夹进行夹持，将砧木1和接穗2进行固定。6
‑
苄氨基嘌呤、芸苔素内酯和砍瓜浸提液的溶液中三个组分的浓度分别为1
‑
3％，2
‑
6％及4
‑
12％，优选三者比例为1∶2∶4，更优选为溶液中含有2％的6
‑
苄氨基嘌呤、4％的芸苔素内酯和8％的砍瓜浸提液。所述6
‑
苄氨基嘌呤、芸苔素内酯以及砍瓜浸提液的溶液为将称取的6
‑
苄氨基嘌呤、芸苔素内酯以及砍瓜浸提液加水混合而得到；其中所述砍瓜浸提液为将砍瓜浸到8～10倍纯净水中，浸泡1h后，控制加热温度90～95℃浸提1h，抽取上清液；再加入8～10倍纯净水重复浸提1h，去渣，合并两次浸提上清液所得。
23.其中一种合接方式为单砧木1顶端同时嫁接双接穗2，即在砧木1子叶下方从中间斜向下进行切割或者从相对的两边向中间斜向上切割(即斜面组成正v型或倒v型)，完全去掉砧木1子叶和生长点，在砧木1下胚轴处形成相对的两个0.5
‑
1cm左右呈45
‑
60度的斜面；用刀片在接穗2子叶下方0.5
‑
1cm处向下斜削一刀，把苗茎削成单斜面形切口，切口长约0.5
‑
1cm，接穗2切口要在主要成分为6
‑
苄氨基嘌呤、芸苔素内酯和砍瓜浸提液的溶液中浸泡1
‑
3秒后，再嫁接到砧木1上，用嫁接夹进行夹持，将砧木1和接穗2进行固定。
24.另一种合接方式为单砧木1阶梯嫁接双接穗2，即在砧木1下胚轴处切割呈45
‑
60度的切口，完全去掉砧木1子叶和生长点；然后在该斜面下方约0.5cm以上位置，用刀片向下切割呈45
‑
60度的另一个切口，另一个切口顶端距下胚轴另一面的距离占下胚轴粗细的1/3
‑
1/5。将两个接穗2分别在下胚轴下约1cm位置斜向下切，切面分别与砧木1的上下两个切口
切面相同，其中用于砧木1下部切口嫁接的接穗2在相对的方向切割两刀，形成两个切面，切面长度与砧木1切口相同，接穗2切面要在主要成分为6
‑
苄氨基嘌呤、芸苔素内酯和砍瓜浸提液的溶液中浸泡1
‑
3秒后，再嫁接到砧木1上，用嫁接夹进行夹持，将砧木1和接穗2进行固定。
25.再一种合接方式为双砧木1嫁接单接穗2，所述合接为将两个砧木1在相同的下胚轴高度处分别切成一个与下胚轴成45
‑
60度的斜切面，接穗2切成与砧木1斜切面对应的斜切口，接穗1切口要在主要成分为6
‑
苄氨基嘌呤、芸苔素内酯和砍瓜浸提液的溶液中浸泡l
‑
3秒后，再嫁接到砧木1上，用嫁接夹进行夹持，将砧木1和接穗2进行固定。
26.对比示例为单砧木1嫁接单接穗2，单砧木1嫁接单接穗2也可以采用上述方式切割砧木1和斜削接穗2，只不过是限定砧木1为一根，接穗2也为一根。
27.嫁接后管理为：嫁接头三天，覆盖砧木接穗2，保证湿度在90％以上。睛天时要用遮阳网遮阴，以免阳光直照苗床。为防止病害和产生高脚苗，第三天开始通风降湿和炼苗，头一天早晚打开覆盖物(优选为小拱棚)透气，第四天后逐渐延长通风时间，但不能让风直接吹向苗床，以免脱水萎蔫。嫁接后的5～7天，应避免强光直射苗床，睛天要用遮阳网遮阴。一般嫁接后第三天起，早晚不用遮阳，中午遇强光照时再遮阳。以后逐步增加见光的时间和强度，但必须保证瓜苗不凋萎，保持硬挺状态。如发生萎蔫，应及时浇水和遮光。嫁接后10天，要及时摘除砧木1的侧芽。嫁接后5天淋施肥，7～10天后追肥一次。这里的肥料优选为主要成分为磷酸二氢钾与尿素加水混合得到的混合溶液，两者中磷酸二氢钾与尿素的质量比为(0.5
‑
1.5)∶(0.5
‑
1.5)，优选为1∶1，更优选为肥料为主要成分为0.1％磷酸二氢钾和0.1％尿素的混合液。
28.待嫁接苗生长至2
‑
3叶1心成活时，在人工气候箱内进行6℃，12/12h低温处理2天，鉴定低温耐性情况，结果按照黄瓜冷害6级分级法(逯明辉，娄群峰，陈劲枫.黄瓜的冷害及耐冷性综述.植物学通报，2004，21(5)∶578
‑
586)来实行。
29.本发明的嫁接方法主要是在现有的下胚轴嫁接方法的基础上做以下改进：1、同一砧木1嫁接两个接穗2嫁接时，砧木1下胚轴切成相对呈45
‑
60度的两个斜面，两个接穗2分别与砧木1两个斜面切口贴合，用嫁接夹进行固定，这两个斜面可以是倒v型或正v型；2、同一砧木1嫁接两个接穗2嫁接时，砧木1子叶下方切成一个呈45
‑
60度左右角度的切面，切面下方1
‑
3cm处与顶端切面相对方向向下45
‑
60度左右斜切一个切口，切口深度过下胚轴中心，用于上部切面嫁接的接穗2切出与顶端切面贴合的切面，用于中部切面嫁接的接穗2切出两个切面，分别于中部切口上下的切面贴合，然后分别用嫁接夹将两个接穗2和砧木1在两个切口处固定。
30.3、两个砧木1嫁接一个接穗2嫁接时，两个砧木1在相同的下胚轴高度处分别切成一个与下胚轴呈45
‑
60度左右的斜切面，接穗2下胚轴处在相对的方向切成两个可以与两个砧木1斜切面贴合的斜切面，将接穗2的两个斜切面分别与两个砧木1的斜切面贴合，用嫁接夹进行固定。
31.实施例1利用黄瓜本砧嫁接黄瓜进行耐低温砧穗互作研究试验以宁波市农业科学研究院选育，宁波丰登种业科技有限公司销售的耐低温的黄瓜本砧品种皇砧2号为砧木1，砧木1材料皇砧2号及购自浙江勿忘农种业股份有限公司的相对不耐低温的水果黄瓜品种碧翠20为
接穗2，通过下胚轴嫁接方法进行嫁接；以皇砧2号砧木通过下胚轴嫁接法嫁接两个皇砧2号接穗2；以皇砧2号为砧木1嫁接碧翠20及碧翠20为砧木1嫁接两个碧翠20接穗2为对照，研究两个材料间的低温耐性互作。步骤如下：1.1、嫁接育苗2020年秋季在宁波高新农业技术实验园区育苗温室进行嫁接育苗。
32.选取饱满一致的黄瓜砧木1种子，70℃热水烫种消毒15分钟，不断搅拌，浸种完毕，清洗种子，再放于室温下清水浸2～4小时，其间搓洗2次。浸种后用湿毛巾包裹种子保湿，置于培养箱内，保持在26
‑
28℃左右催芽。其间要加水保湿。等种子露白后挑种并分批播种。播种前1天浇透底水，种子平放，胚根朝下，一钵一粒，盖1.5cm厚的盖籽泥，覆地膜。出苗前育苗床温度保持25～30℃，不得超过30℃，并保持湿度，减少带帽现象。顶土时及时揭除地膜，50％出苗后要降低苗床温度，防止下胚轴徒长。夜间覆盖小拱棚。出苗后白天温度20～25℃，夜间不低于15℃。砧木1出土后要及时脱帽。注意砧木1长势及病害的发生，若出现缺肥及病害，应在嫁接前5天施肥及防病一次。嫁接前3～4天要浇透水。嫁接前1～2天，控水并适当通风，以提高砧木1的适应性和下胚轴粗壮。
33.黄瓜接穗2种子选取饱满一致的种子，先在55℃温水中浸15分钟，不断搅拌，再在室温下浸清水2～4小时，其间搓洗1次。然后将种子用湿毛巾包裹种子保湿，置于培养箱内，保持26～28℃催芽。其间用清水洗1～2次并加水保湿。等50％以上种子露白(胚根长1mm)后及时播种。播种时种子要平放，胚根朝下，播距1cm见方，盖上1cm厚的盖籽泥，浇透水，覆地膜。出苗前育苗床温度保持25～30℃，不要超过30℃，出苗后要及时揭除地膜。出苗后白天温度在20～25℃，夜间不低于15℃，及时脱壳。嫁接前1天适当让其徒长。
34.1.2、嫁接当黄瓜砧木1第一片真叶未完全展开，黄瓜接穗2下胚轴直立到子叶平展前时进行嫁接。砧木1比接穗2早播种5
‑
7天。
35.参见图1b，采用下胚轴无子叶法进行嫁接，在砧木1子叶下方约1cm处从中间斜向下进行切割，完全去掉砧木1子叶和生长点，在砧木1下胚轴处形成相对的两个1cm左右的斜面。削好砧木1后，从方盘拔取接穗2苗，用拇指、中指捏住接穗2两片子叶，并使接穗2的茎搭在食指肚上，用刀片在接穗2子叶下方0.5
‑
1cm处向下斜削一刀，把苗茎削成单斜面形，斜面长约1cm。接穗2削好后，切口在主要成分为6
‑
苄氨基嘌呤、芸苔素内酯和砍瓜浸提液的溶液中浸泡1
‑
3秒，溶液浓度见表1。然后将砧木1和两个接穗2的斜切面贴合，用嫁接夹进行夹持，将砧木1和接穗2进行固定。然后尽快把嫁接苗放入小拱棚内，浇水，盖严保湿保温。切接穗2时，切口角度与下胚轴呈50度左右的斜面，接穗2的切口要宽阔，使接穗2与砧木1的接触面大。嫁接时刀片要锋利，一般使用2
‑
3天后就要更换。
36.对于皇砧2号单嫁接碧翠20，可参照图1a的方式切割砧木1，只需保证接穗2的切口与砧木1的斜面相贴合即可。
37.1.3嫁接后处理嫁接头三天，用小拱棚覆盖，保证湿度在90％以上。睛天时要用遮阳网遮阴，以免阳光直照苗床。为防止病害和产生高脚苗，第三天开始通风降湿和炼苗，头一天早晚打开小拱棚透气10分钟左右，第四天后逐渐延长通风时间，但不能让风直接吹向苗床，以免脱水萎
蔫。一般嫁接7天后，就会长出真叶，长时间打开覆盖膜不萎蔫，就可不盖膜，加大炼苗。嫁接后的5～7天，应避免强光直射苗床，睛天要用遮阳网遮阴。否则嫁接口易失水干枯，难以愈合。如遇阴雨天气，则不要遮阳，充分利用自然光照提高棚内温度，促进愈合。一般嫁接后第三天起，早晚不用遮阳，中午遇强光照时再遮阳。以后逐步增加见光的时间和强度，但必须保证瓜苗不凋萎，保持硬挺状态。如发生萎蔫，应及时浇水和遮光。嫁接后10天，要及时摘除砧木的侧芽。嫁接后5天淋施0.1％磷酸二氢钾加0.1％尿素的混合液，7～10天后追肥一次。
38.表1本实施例中发明方法的重要参数选择1.4性能测试待嫁接苗生长至2
‑
3叶1心成活时，在人工气候箱内进行6℃，12/12h低温处理2天，鉴定低温耐性情况，结果按照黄瓜冷害6级分级法呈现(逯明辉，娄群峰，陈劲枫.黄瓜的冷害及耐冷性综述.植物学通报，2004，21(5)∶578
‑
586)，具体如下表所示。
39.表2、实施例1中不同砧木
‑
接穗组合所得的性能测试结果编号砧木接穗冷害等级mda含量提高％1皇砧2号2个皇砧2号2级23.3和24.82碧翠202个碧翠204级45.1和47.63皇砧2号碧翠203级30.94皇砧2号皇砧2号+碧翠201级和2级14.4和26.5从表中可以看出，皇砧2号为砧木1嫁接两个皇砧2号的材料冷害等级均为2级，碧翠20为砧木1嫁接两个碧翠20的材料冷害等级均为4级，皇砧2号嫁接碧翠20冷害等级为3级，皇砧2号为砧木1双嫁接皇砧2号和碧翠20冷害等级分别为1级和2级。同时对对照和处理的不同嫁接的材料接穗叶片取样，考察mda(丙二醛)含量，结果皇砧2号为砧木1嫁接两个皇砧2号的材料mda含量分别提高23.3％和24.8％，碧翠20为砧木嫁接两个碧翠20的材料分别提高45.1％和47.6％，皇砧2号嫁接碧翠20的材料提高30.9％，皇砧2号为砧木1双嫁接皇砧2号和碧翠20分别提高14.4％和26.5％。
40.单就编号为1、4的性能测试结果对比可知，皇砧2号结合碧翠20作为接穗2时，皇砧
2号接穗2所得到的冷害等级和mda含量提高比例都是最低的，且都比编号为1的结果低，表明两个接穗2之间发生了材料间相互作用，表明本方法的材料间互作与对照的下胚轴嫁接方法存在一定差异，表明本发明可以用来研究材料间互作。
41.实施例2、利用印中杂交南瓜类型砧木1嫁接两个不同颜色的甜瓜以宁波市农业科学研究院选育，宁波丰登种业科技有限公司销售的印中杂交南瓜类型砧木1思壮7号为砧木，白皮橙肉甜瓜甬甜5号，绿皮橙肉甜瓜丰登蜜25为接穗2，通过下胚轴嫁接方法进行嫁接生产。
42.步骤如下：1.1嫁接育苗2020年秋季在宁波高新农业技术实验园区育苗温室进行嫁接育苗。
43.选取饱满一致的南瓜砧木1种子，70℃热水烫种消毒15分钟，不断搅拌，浸种完毕，清洗种子，再放于室温下清水浸4～6小时，其间搓洗2次。浸种后用湿毛巾包裹种子保湿，置于培养箱内，保持在26
‑
30℃左右催芽。其间要加水保湿。等种子露白后挑种并分批播种。播种前1天浇透底水，种子平放，胚根朝下，一钵一粒，盖1.5cm厚的盖籽泥，覆地膜。出苗前育苗床温度保持25～30℃，不得超过30℃，并保持湿度，减少带帽现象。顶土时及时揭除地膜，50％出苗后要降低苗床温度，防止下胚轴徒长。夜间覆盖小拱棚。出苗后白天温度20～25℃，夜间不低于15℃。砧木1出土后要及时脱帽。注意砧木1长势及病害的发生，若出现缺肥及病害，应在嫁接前5天施肥及防病一次。嫁接前3～4天要浇透水。嫁接前1～2天，控水并适当通风，以提高砧木1的适应性和下胚轴粗壮。
44.甜瓜接穗2种子选取饱满一致的种子，先在55℃温水中浸15分钟，不断搅拌，再在室温下浸清水2～4小时，其间搓洗1次。然后将种子用湿毛巾包裹种子保湿，置于培养箱内，保持26～28℃催芽。其间用清水洗1～2次并加水保湿。等50％以上种子露白(胚根长1mm)后及时播种。播种时种子要平放，胚根朝下，播距1cm见方，盖上1cm厚的盖籽泥，浇透水，覆地膜。出苗前育苗床温度保持25～30℃，不要超过30℃，出苗后要及时揭除地膜。出苗后白天温度在20～25℃，夜间不低于15℃，及时脱壳。嫁接前1天适当让其徒长。当南瓜砧木1第一片真叶未完全展开，甜瓜接穗2下胚轴直立到子叶平展前时进行嫁接。砧木1比接穗2早播种3
‑
5天。
45.1.2嫁接参见图1b，采用下胚轴无子叶法进行嫁接，在砧木1子叶下方约1cm处从中间斜向下进行切割，完全去掉砧木1子叶和生长点，在砧木1下胚轴处形成相对的两个0.5cm左右的斜面。削好砧木1后，从方盘拔取接穗2苗，用拇指、中指捏住接穗2两片子叶，并使接穗2的茎搭在食指肚上，用刀片在接穗2子叶下方0.5
‑
1cm处向下斜削一刀，把苗茎削成单斜面形，斜面长约0.5cm。接穗2削好后，切口在主要成分为3
‰
的6
‑
苄氨基嘌呤、6％的芸苔素内酯和12％的砍瓜浸提液的溶液中浸泡1
‑
3秒，然后将砧木1和两个接穗2的斜切面贴合，用嫁接夹进行夹持，将砧木1和接穗2进行固定。然后尽快把嫁接苗放入小拱棚内，浇水，盖严保湿保温。接穗2的切口要宽阔，使接穗2与砧木1的接触面大。嫁接时刀片要锋利，一般使用2
‑
3天后就要更换。
46.单砧木嫁接单接穗2对照可参照图1a的方式切割砧木，只需保证接穗2的切口与砧木1的斜面相贴合即可。
47.1.3嫁接后处理嫁接头三天，用小拱棚覆盖，保证湿度在90％以上。睛天时要用遮阳网遮阴，以免阳光直照苗床。为防止病害和产生高脚苗，第三天开始通风降湿和炼苗，头一天早晚打开小拱棚透气10分钟左右，第四天后逐渐延长通风时间，但不能让风直接吹向苗床，以免脱水萎蔫。一般嫁接7天后，就会长出真叶，长时间打开覆盖膜不萎蔫，就可不盖膜，加大炼苗。嫁接后的5～7天，应避免强光直射苗床，睛天要用遮阳网遮阴。否则嫁接口易失水干枯，难以愈合。如遇阴雨天气，则不要遮阳，充分利用自然光照提高棚内温度，促进愈合。一般嫁接后第三天起，早晚不用遮阳，中午遇强光照时再遮阳。以后逐步增加见光的时间和强度，但必须保证瓜苗不凋萎，保持硬挺状态。如发生萎蔫，应及时浇水和遮光。嫁接后10天，要及时摘除砧木的侧芽。嫁接后5天淋施0.1％磷酸二氢钾加0.1％尿素的混合液，7～10天后追肥一次。
48.表3本实施例中发明方法的重要参数选择待嫁接苗生长至2
‑
3叶1心时即可移栽到田间进行定植，甜瓜果实成熟后即可作为观光旅游进行展示，同一个根可以生长出两种不同样子的瓜，且两种甜瓜果实可溶性固形物含量可较常规嫁接方法提高1％
‑
2％，果实大小与常规嫁接一致。由此也表明发明的用于研究材料间、物种间相互作用的方法也能适用于农业生产。
49.实施例3利用宁波市农业科学研究院选育，宁波丰登种业科技有限公司销售的葫芦类型砧木甬砧1号嫁接购自浙江勿忘农种业股份有限公司的西瓜早佳，分别设甬砧1号为砧木1双嫁接甬砧1号，甬砧1号为砧木1单嫁接早佳，早佳为砧木1双嫁接早佳共三组对照，同时以甬砧1号为砧木1双嫁接甬砧1号和早佳，嫁接成活后放入人工气候箱进行4℃低温处理和常温对照，处理2天后，分别取作为接穗2的甬砧1号和早佳叶片，考察丙二醛(mda)含量。嫁接前育苗及嫁接后管理均同实施例1。单砧木嫁接单接穗2对照可参照图1a的方式切割砧木1，只需保证接穗2的切口与砧木1的斜面相贴合即可。单砧木1嫁接双接穗2的嫁接方法与实施例1的区别在于砧木1形成高度不同的两个切口，参见图1c，具体为：在砧木1子叶下方约1cm处切割一个的切面，然后在该切面下方1cm处相对的一面斜向下切割一个切口，切口顶点距下胚轴另一面距离占下胚轴粗的3/4。用于上部切面嫁接的接穗2切割成角度和切面长度与砧木1相同的切面。用于下部切面嫁接的接穗2在下胚轴相对的两侧分别切割成与砧木1下部切口上下面角度和长度相同的切面，相应的切面贴合在一起，用嫁接夹分别进行固定。
50.表4本实施例中发明方法的重要参数选择
结果如下表所示。
51.表5实施例3中不同砧木
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接穗组合所得的性能测试结果结果表明早佳为砧木1嫁接2个的早佳mda含量变化最高，两个接穗2较常温对照分别提高42.8％和43.1％。其次为甬砧1号为砧木1双嫁接的甬砧1号，mda含量较常温对照分别提高24.2％和24.4％.然后是甬砧1号单接的早佳，mda含量较常温对照提高18.8％，再后是甬砧1号为砧木1双嫁接甬砧1号和早佳中的早佳，mda含量较常温对照提高15.0％，最低的为甬砧1号为砧木1双嫁接甬砧1号和早佳中的甬砧1号，mda含量较常温对照提高13.6％。
52.单看编号为2、4的两个测试结果，4号中的甬砧1号的mda含量远低于2号中的甬砧1号的mda含量，由此表明4号中的两个接穗2甬砧1号与早佳之间发生了物种间的相互作用。表明本发明可以用来研究材料间互作。
53.实施例4利用印中杂交类型砧木1和葫芦类型砧木同时嫁接西瓜进行嫁接对西瓜耐低温性影响的砧穗互作研究。
54.以宁波市农业科学研究院选育，宁波丰登种业科技有限公司销售的印中杂交类型砧木1思壮7号和葫芦类型砧木1甬砧1号为砧木1，以购自浙江勿忘农种业股份有限公司的西瓜种子早佳为接穗，通过两个砧木1以下胚轴嫁接方法嫁接同一接穗2，进行低温耐性的砧穗互作研究。
55.具体步骤如下：1.1嫁接育苗甬砧1号较思壮7号提早2天浸种催芽，出芽后32孔穴盘播种，每孔分别播种1粒甬砧1号和1粒思壮7号，其他浸种、催芽、播种和育苗方法同实施例1和2。砧木1心叶出现后，方盘播种西瓜接穗2早佳，接穗2子叶展开前进行嫁接。
56.1.2嫁接参见图1d，采用下胚轴无子叶法进行嫁接，在砧木1子叶下方约1cm处从2份砧木1外侧向相对的方向从一边斜向下进行切割，完全去掉砧木1子叶和生长点，在砧木1下胚轴处形成一个1cm左右的斜面。削好砧木1后，从方盘拔取接穗2苗，用拇指、中指捏住接穗2两片子叶，并使接穗2的茎搭在食指肚上，用刀片在接穗2子叶下方0.5
‑
1cm处分别从相对的两边向中间向下斜削一刀，把苗茎削成相对的双斜面形，斜面长1cm左右。接穗2削好后，切口在主要成分为6
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苄氨基嘌呤、芸苔素内酯和砍瓜浸提液的溶液中浸泡1
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3秒，浓度见表6。然后将2个砧木1和接穗2的2个斜切面分别贴合，用嫁接夹进行夹持，将2个砧木1和接穗2进行固定。嫁接后的嫁接苗管理方法同实施例2。对照为分别以思壮7号、甬砧1号、早佳为砧木1，早佳为接穗2按照图1a的下胚轴嫁接法获得的单嫁接早佳材料。
57.1.3嫁接后管理同实施例1。
58.表6本实施例中发明方法的重要参数选择待嫁接苗生长至2
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3叶1心成活时，在人工气候箱内进行6℃，12/12h低温处理2天，鉴定低温耐性情况，结果按照冷害6级分级法表示，同时测定mda含量，结果如表3所示。
59.表7实施例4中不同砧木
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接穗组合所得的性能测试结果编号砧木接穗冷害等级根部mda含量提高％1思壮7号早佳3级32.22甬砧1号早佳2级24.33思壮7号+甬砧1号早佳1级23.7，18.54
‑‑
早佳实生苗5级47.7从上表中可以看出，对于冷害等级，思壮7号嫁接早佳为3级，甬砧1号嫁接早佳为2级，早佳实生苗为5级，思壮7号和甬砧1号共同嫁接早佳为1级。同时对照和处理的不同嫁接的材料接穗2根部取样，考察mda含量，结果思壮7号和甬砧1号共同嫁接早佳的两个根部分
别提高23.7％和18.5％，思壮7号嫁接早佳的根部提高32.2％，甬砧1号嫁接早佳的根部提高24.3％，早佳实生苗的根部提高47.7％。
60.将编号1、2的例子与编号4的例子对比，可以知道使用砧木1嫁接对单独的早佳实生苗有很大的改善作用，对比编号1、2、3的情况，可以看出双砧木1嫁接早佳的结果比任何一个砧木1品种单独嫁接早佳的结果都要好，这表明双砧木1间发生了相互作用，即不同物种间存在一定的互作作用。同时与单砧木1嫁接的砧穗互作作用存在一定差异，表明本发明可以用来研究物种间或同一物种不同材料间的互作。
61.本技术的用于物种间/材料间互作研究的方法还可以应用于嫁接企业的嫁接苗生产，解决砧木长势不齐时嫁接苗大小不一致的情况，以及插接、贴接等方法应用时要花劳动力去萌孽的问题以及嫁接苗成活时间不一致的问题。
62.另外还可以通过完全去掉子叶，减少嫁接苗子叶处有水等产生病害。应用本方法后，嫁接苗完全一致，发病率较原始的5％
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10％降低至0
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3％，每万株苗用工可减少3
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5个工。
63.本方法进行的两个接穗嫁接较常规的一砧双穗嫁接方法可以提早成活1
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2天，且成活率提高5
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10％，降低两个不同接穗间长势差异导致的长势强接穗对长势弱接穗的抑制。