一种非妇科细胞样本保存液及其应用的制作方法

1.本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种非妇科细胞样本的保存液及其应用。


背景技术：

2.近年来，由于细胞学的发展和应用，异常细胞的检出率较过去明显提高。而薄层液基细胞学检测技术，它具有细胞收集量多、背景干净清晰、细胞分布均匀、染色效果良好、镜下细胞易于观察等优点，因而被广泛应用于妇科和非妇科肿瘤的筛查。在此之前，样本较多是以直接涂片为主要方法，而涂片则要靠制片员的经验挑取一小部分标本进行检查，且标本中经常含有大量黏液，甚至脓液、血液，以及上皮细胞过度重叠使异常细胞被遮盖。导致观察困难，影响诊断，假阴性增多，检查的准确性受到一定程度的影响。
3.在细胞或组织离体后如果固定不及时，就会释放出溶酶体酶将细胞溶解，导致组织自溶，丧失原有结构。因此，细胞采集后应选用合适的样本保存液对其进行固定，使细胞尽可能保持原有的形态结构和所含的各种物质成分。细胞固定的好坏会直接影响后续的制片和染色，进而影响细胞学诊断的准确性。
4.血性标本在制片染色后，通常背景都会含有大量的红细胞或血样碎片，对于细胞量少的标本如：囊肿液、尿液及尿道冲洗物，玻片背景下的红细胞会影响标本中有效细胞的判读，难以观察，影响诊断。
5.如何研发一种可使样本在镜下观察更加清晰，避免血细胞影响的样本保存液，是亟待要解决的技术问题。


技术实现要素：

6.为此，本发明提供一种非妇科细胞样本保存液及其应用。
7.为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
8.本发明实施例提供一种非妇科细胞样本保存液，所述细胞样本保存液组成如下：按照质量百分数计，固定剂30％～50％、磷酸二氢钠0.1％～0.3％、无机盐0.5％～0.9％、甲醛0.3％～3％、proclin 0.01％～0.05％，余量为水；
9.所述固定剂选自甲醇、乙醇、乙二醇、异丙醇或丙三醇中的至少三种；
10.所述无机盐选自氯化钠、醋酸钠、碳酸氢钠、硫酸钠或乙二胺四乙酸二钠中的至少二种。
11.本发明的一个实施例中，所述样本保存液组成如下：固定剂34％、磷酸二氢钠0.15％、无机盐0.82％、甲醛0.4％、proclin 300 0.05％，余量为水。
12.本发明的一个实施例中，所述固定剂为甲醇14％、异丙醇12％和乙二醇8％；
13.所述无机盐为氯化钠0.50％、醋酸钠0.32％。
14.本发明的一个实施例中，所述保存液的ph值为7.20～7.60。
15.本发明的一个实施例中，所述保存液的ph值为7.50。
16.本发明的一个实施例中，所述非妇科细胞样本包括：体腔积液、灌洗液、囊肿液、尿
液、脑脊液和乳头溢液。
17.上述所述的非妇科细胞样本保存液在保存生物样本中的应用，也属于本发明的保护范围。
18.本发明的一个实施例中，所述生物样本为含有血红蛋白的生物样本。
19.本发明具有如下优点：
20.本发明的样本保存液处理血性样本后，能够有效祛除红细胞，使得制成的玻片背景干净，细胞分布均匀，具有足量的细胞成分，且在玻片上分布范围小，易于阅片，细胞结构清晰，异常细胞在镜下十分鲜明，便于观察诊断，故阳性率能有显著提高。
21.本发明的样本保存液处理的标本保存时间长，并且不会产生絮状沉淀物，久置后仍可进行标本制片染色。
附图说明
22.为了更清楚地说明本发明的实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。显而易见地，下面描述中的附图仅仅是示例性的，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图引伸获得其它的实施附图。
23.本说明书所绘示的结构、比例、大小等，均仅用以配合说明书所揭示的内容，以供熟悉此技术的人士了解与阅读，并非用以限定本发明可实施的限定条件，故不具技术上的实质意义，任何结构的修饰、比例关系的改变或大小的调整，在不影响本发明所能产生的功效及所能达成的目的下，均应仍落在本发明所揭示的技术内容得能涵盖的范围内。
24.图1为本发明实施例提供的样本保存液1
‑
5进行全血样本，溶血后久置72小时的情况，a：样本保存液1；b：样本保存液2；c：样本保存液3；d：样本保存液4；e：样本保存液5；f：本发明实施1的样本保存液。
25.图2为本发明实施例提供的血性胸腹水样本离心后底部红细胞的情况；
26.图3为本发明实施例提供的实施例1样本保存液处理血性胸腹水样本离心后底部红细胞的情况；
27.图4为本发明实施例提供的经实施例1样本保存液处理后的标本背景(100x倍镜)；
28.图5为本发明实施例提供的经实施例1样本保存液处理后的标本背景(400x倍镜)；
29.图6为本发明实施例提供的经某品牌保存液处理后的标本背景(100x倍镜)；
30.图7为本发明实施例提供的经某品牌保存液处理后的标本背景(400x倍镜)。
具体实施方式
31.以下由特定的具体实施例说明本发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点及功效，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
32.实施例1
33.本实施例提供一种非妇科细胞样本保存液，该样本保存液的溶剂为水，该样本保存液中各组分的质量百分比为：甲醇6％、乙二醇7％、异丙醇20％、磷酸二氢钠0.15％、氯化
钠0.60％、醋酸钠0.22％、甲醛0.7％、proclin 300 0.05％，保存液的ph值为7.40。
34.本实施例的非妇科细胞样本保存液的制备方法为：
35.向纯化水中加入氯化钠，得到质量百分比为0.60％氯化钠溶液，再向氯化钠溶液中加入醋酸钠和磷酸二氢钠，醋酸钠的质量百分比为0.22％、磷酸二氢钠的质量百分比为0.15％，混合均匀，得到混合溶液；在上述混合溶液中加入异丙醇、甲醇、乙二醇、甲醛和proclin 300(sigma)，异丙醇的质量百分比为20％，甲醇的质量百分比为6％，乙二醇的质量百分比为7％、甲醛的质量百分比为0.7％，proclin 300质的量百分比为0.05％，搅拌，混合均匀，得到上述非妇科细胞样本保存液。
36.实施例2
37.本实施例提供一种非妇科细胞样本保存液，该样本保存液的溶剂为水，该样本保存液中各组分的质量百分比为：甲醇14％、异丙醇12％、乙二醇8％、磷酸二氢钠0.15％、氯化钠0.50％、醋酸钠0.32％、甲醛0.4％、proclin 300 0.05％，保存液的ph值为7.5。
38.本实施例的非妇科细胞样本保存液的制备方法为：
39.向纯化水中加入氯化钠，氯化钠的质量百分比为0.50％，再向氯化钠溶液中加入醋酸钠和磷酸氢二钠，醋酸钠的质量百分比为0.32％、磷酸二氢钠质量百分比为0.15％，混合均匀，得到混合溶液；在上述混合溶液中加入异丙醇、甲醇、乙二醇、甲醛和proclin 300，异丙醇的质量百分比为12％，甲醇的质量百分比为14％，乙二醇的质量百分比为8％、甲醛的质量百分比为0.4％，proclin 300的质量百分比为0.05％，搅拌，混合均匀，得到上述非妇科细胞样本保存液。
40.实施例3
41.本实施例提供一种非妇科细胞样本保存液，该样本保存液的溶剂为水，该样本保存液中各组分的质量百分比为：甲醇9％、异丙醇18％、乙二醇10％、磷酸二氢钠0.2％、氯化钠0.40％、醋酸钠0.30％、甲醛0.8％、proclin 300 0.03％。保存液的ph值为7.2。
42.本实施例的非妇科细胞样本保存液的制备方法为：
43.向纯化水中加入氯化钠，氯化钠的质量百分比为0.40％，再向氯化钠溶液中加入醋酸钠、磷酸二氢钠，醋酸钠的质量百分比为0.30％、磷酸二氢钠的质量百分比为0.2％，混合均匀，得到混合溶液；在上述混合溶液中加入异丙醇、甲醇、乙二醇、甲醛和proclin 300，异丙醇的质量百分比为18％，甲醇的质量百分比为9％，乙二醇的质量百分比为10％、甲醛的质量百分比为0.8％，proclin 300的质量百分比为0.03％，搅拌，混合均匀，得到上述非妇科细胞样本保存液。
44.实施例4
45.本实施例提供一种非妇科细胞样本保存液，该样本保存液的溶剂为水，该样本保存液中各组分的质量百分比为：甲醇8％、乙二醇7％、异丙醇19％、磷酸二氢钠0.15％、氯化钠0.62％、醋酸钠0.2％、甲醛2％、proclin 300 0.03％，保存液的ph值为7.3。
46.本实施例的非妇科细胞样本保存液的制备方法为：
47.向纯化水中加入氯化钠，氯化钠的质量百分比为0.62％，再向氯化钠溶液中加入醋酸钠和磷酸二氢钠，醋酸钠质量百分比为0.2％、磷酸二氢钠的质量百分比为0.15％，混合均匀，得到混合溶液；在上述混合溶液中加入异丙醇、甲醇、乙二醇、甲醛和proclin 300，异丙醇的质量百分比为19％，甲醇的质量百分比为8％，乙二醇的质量百分比为7％、甲醛的
质量百分比为2％，proclin 300的质量百分比为0.03％，搅拌，混合均匀，得到上述非妇科细胞样本保存液。
48.实施例5
49.本实施例提供一种非妇科细胞样本保存液，该样本保存液的溶剂为水，该样本保存液中各组分的质量百分比为：甲醇23％、异丙醇8％、乙二醇8％、磷酸二氢钠0.15％、氯化钠0.50％、醋酸钠0.22％、甲醛4％、proclin 300 0.05％。保存液的ph值为7.4。
50.本实施例的非妇科细胞样本保存液的制备方法为：
51.向纯化水中加入氯化钠，氯化钠的质量百分比为0.50％，再向氯化钠溶液中加入醋酸钠、磷酸二氢钠，醋酸钠质量百分比为0.22％、磷酸二氢钠质量百分比为0.15％，混合均匀，得到混合溶液；在上述混合溶液中加入异丙醇、甲醇、乙二醇、甲醛和proclin 300
52.异丙醇的质量百分比为8％，甲醇的质量百分比为23％，乙二醇的质量百分比为8％、甲醛的质量百分比为4％，proclin 300的质量百分比为0.05％，搅拌，混合均匀，得到上述非妇科细胞样本保存液。
53.实施例1至实施例5的样本保存液可保存的非妇科样本包括：体腔积液、灌洗液、囊肿液、尿液及尿道冲洗物、脑脊液、乳头溢液。
54.试验例1
55.实施例1的样本保存液：该样本保存液的溶剂为水，该样本保存液中各组分的质量百分比为：甲醇6％、乙二醇7％、异丙醇20％、磷酸二氢钠0.15％、氯化钠0.60％、醋酸钠0.22％、甲醛0.7％、proclin 300 0.05％，保存液的ph值为7.40。
56.样本保存液1至样本保存液的溶剂均为水。
57.样本保存液1含有以下组分：氯化钠的质量百分比为0.55％溶液、醋酸钠的质量百分比为0.23％、磷酸二氢钠质量百分比为0.20％；甲醇的质量百分比为20％，乙二醇的质量百分比为6.5％、proclin 300的质量百分比为0.05％，搅拌均匀，得到样本保存液1。
58.样本保存液2含有以下组分：氯化钠质量百分比为0.60％、质醋酸钠量百分比为0.15％、磷酸二氢钠质量百分比为0.13％、乙醇的质量百分比为24％，乙二醇的质量百分比为7％、proclin 300的质量百分比为0.05％。
59.样本保存液3含有以下组分：氯化钠质量百分比为0.65％、醋酸钠的质量百分比为0.15％、磷酸二氢钠的质量百分比为0.15％、异丙醇的质量百分比为20％，乙二醇的质量百分比为6.5％、proclin 300的质量百分比为0.05％。
60.样本保存液4含有以下组分：氯化钠质量百分比为0.60％、醋酸钠质量百分比为0.22％、磷酸二氢钠的质量百分比为0.15％、异丙醇的质量百分比为20％，甲醇的质量百分比为6％，乙二醇的质量百分比为7％、proclin 300的质量百分比为0.05％。
61.样本保存液5含有以下组分：氯化钠的质量百分比为0.65％、醋酸钠的质量百分比为0.18％、磷酸二氢钠的质量百分比为0.13％、乙醇的质量百分比为23％，异丙醇的质量百分比为5％，乙二醇的质量百分比为7％、proclin 300的质量百分比为0.05％；搅拌均匀上述溶液。
62.以样本保存液1
‑
5和实施例1的样本保存液进行全血样本溶血实验，每2ml样本保存液中加入100μl的全血样本，观察溶液澄清的时间，以及久置72小时后的清澈度与絮状物生成情况，如表1所示。
63.表1
[0064][0065]
如表1和图1所示，本发明利用实施例1的样本保存液和样本保存液1
‑
5的进行全血样本溶血，进行全血样本溶血后久置72小时的情况，从左至右分别是样本保存液1、样本保存液2、样本保存液3、样本保存液4、样本保存液5、实施例1的样本保存液，
[0066]
样本保存液1中加入全血样本后，在久置时间较长时也能有溶血的效果，样本保存液1
‑
5在溶血后均生成了血红蛋白的絮状物，样本保存液1至样本保存液5中没有可以稳定红细胞破碎后的蛋白质的物质。而实施例1的样本保存液在放置72小时后，仍可以保持溶液澄清且无絮状物，因此，本发明实施例1的样本保存液能够稳定红细胞破碎后的蛋白质，能长期储存全血溶血样本且可保持溶血样本不变质。
[0067]
试验例2
[0068]
某品牌的样本保存液，其生产批号为2020
‑
11
‑
01，有效期至2022
‑
10
‑
31。
[0069]
利用实施例1的样本保存液和某品牌的样本保存液，对血性胸腹水样本进行处理，观察其样本在制片染色后的显微镜下图。
[0070]
图2为血性胸腹水样本离心后底部红细胞的情况，如图3为实施例1的样本保存液对样本溶血的情况；图4为经实施例1样本保存液处理后的标本背景(100x倍镜)；图5为经实施例1样本保存液处理后的标本背景(400x倍镜)；图6为经某品牌样本保存液处理后的标本背景(100x倍镜)；图7为经某品牌样本保存液处理后的标本背景(400x倍镜)。
[0071]
在显微镜里，实施例1保存液处理血性胸腹水样本未见样本中的血粘块，而在某品牌样本保存液处理的血性胸腹水样本中则存在血粘块背景，本发明的实施例1的样本保存液对样本的溶血效果更显著。
[0072]
由本发明样本保存液保存的标本，其细胞形态完整、分布均匀、数量适宜、背景干净，尤其对血细胞的处理效果好，利于观察和诊断，同时能使标本储存时间加长。
[0073]
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施例对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。