一种三倍体桉树新品种“京桂一号桉”的组培快繁方法与流程

1.本发明涉及一种桉树组培技术领域，特别涉及一种三倍体桉树新品种“京桂一号桉”的组培快繁方法。


背景技术：

2.多倍体是指植物体细胞内包含有三套或三套以上染色体组的个体。在植物物种形成和进化过程中，多倍化具有重要作用。植物体在经历多倍化的过程中，细胞核内染色体数目增加，机体形态增大，其基因活力和酶的多样性都在不断增强，因而可以在维持较低转录水平的同时，保证较强的光合效率，并且提高植物的抗逆性。植物细胞核内染色体组加倍以后，通常会带来形态和生理上的变化，在提高生长速度、增进品质、增强抗性以及提高目的代谢物含量等方面具有优势。
3.桉树是二倍体植株(2n＝2x＝22)，是世界上重要的用材树种，在我国的种植面积已超过6750万亩，每年为我国提供四分之一以上的木材产量，桉树在林业生产及生态建设中具有重要的突出地位。但桉树生殖隔离难，以及传统人工杂交育种的局限性，导致多年来在遗传改良方面未取得重大性进展，引入兼具杂交优势和倍性优势的多倍体育种技术，对桉树的遗传改良具有重大的意义。新品种三倍体桉树“京桂一号桉”是广西国有东门林场和北京林业大学技术合作，以尾叶桉作为诱变母本，利用秋水仙碱和高温处理处于分裂期的大孢子母细胞，获得二倍体雌配子，经天然自由授粉与单倍体雄配子结合，获得三倍体种子，播种成苗，经过倍性检测后确定是三倍体植株。“京桂一号桉”在三年期生长量测定中，其干形通直，分枝角度小，无畸形、无病虫害，抗逆性好，具有极大的发展潜力。
4.在获得三倍体植株过程中，染色体数目发生了变异，导致三倍体植株的可育性降低，很难继续通过有性生殖的方式进行繁殖，并且难以将三倍体植株优良性状保持。因此，只能采用无性繁殖，而扦插、嫁接、压条等无性繁殖方法繁殖速度慢，不利于短时间内大量推广这一新品种，所以组培快繁才是最佳选择。王沛琦开展白杨杂种三倍体离体快繁研究，建立了茎段再生体系及叶片不定芽诱导再生技术体系；邓仁菊等人开展了三倍体枇杷组培技术研究，建立了再生体系，为其遗传改良奠定了基础；元秀慧开展了三倍体毛白杨组培技术研究，培养出了质量好，移栽成活率高的工厂化生产标准的组培苗。植物组织快繁技术属于生物技术的分支，是生物工程的重要组成部分，用此技术繁殖“京桂一号桉”这一“名、优、新、特、稀”品种是十分合适的。据统计，目前世界上已有60余种桉树组织培养获得成功，国内主要有雷林1号桉(1981年)、巨尾桉(1989年)、赤桉(1992年)、尾赤桉(2012年)、粗皮桉(2017年)、大花序桉(2017年)等。然而，完成组织培养并大规模工业化育苗的主要有巨尾桉、尾赤桉等少数品种。因为林木组织培养成功后，到大量快速繁殖的实现还受到多种因素的制约。一是培养材料的再分化类型：经过愈伤组织分化成苗途径获得的苗木需要经过脱分化过程，在这个过程中苗木个体易变异，种植后易分化，从而导致林相不整齐。二是林木品种本身特性：不同品种的快繁难易程度差别很大，需要研制专一的不同的培养基配方及管理方法。三是组培快繁技术水平以及生产条件：如继代增殖率低或成功率不高，或培养材
22天，将长成2.0-2.5cm的无菌芽，切成带茎节的切段，将芽丛切分成小芽丛，转入到新配制的继代培养基，以促进丛生芽增殖和单芽伸长，然后如此反复继代培养，无菌芽数量不断增多，继代增值系数为4.5；
13.(5)生根培养：从步骤(4)扩繁的继代苗切取生长健壮的芽条，插入到生根培养基jg3中培养，培养后的第7-9天的光照强度为1000lux，当有短根从切口处冒出时，提高光照至3000lux，培养温度26-35℃；培养25-35天，根长1.5-2.0cm，苗高2.5-3.0cm时，炼苗；
14.(6)炼苗：将预移栽的生根瓶苗，连同瓶一起搬至大棚温室，增强光照至5000lux以上，提高苗木光合作用，增强自养能力，促进苗木木质化；临移栽前3-5天，将生根瓶盖揭开，降低瓶内湿度，增强苗木对自然环境的适应能力，同时，灌注30-50ml纯净水或冷开水入瓶，防止培养基干燥变硬；
15.(7)移栽：取出经炼苗的生根瓶苗，洗去粘附在根上的培养基，移栽至经高锰酸钾溶液消毒的黄心蛭土石基质育苗杯或轻型基质育苗袋中培养，做好遮荫及保湿、病虫害防治等管护工作，培养20-25天；
16.(8)壮苗培养：按照苗木的高度及地径大小进行分级，当苗长至15-20cm，地径为2.4-2.7mm时，转移至苗间距更大的育苗托中培养，苗木密度由625株/m2降至356株/m2；苗高12-15cm，地径2.1-2.3mm的小苗留在原育苗托中，扩大光照空间，并及时淘汰少量长势较弱的苗木，全光照自然状态下，培养40-60天，苗高25-30cm时，出圃造林；
17.上述三倍体桉树“京桂一号桉”的组培快繁方法步骤(3)中，所述初代培养基jg1组成为：以ms培养基为基础，对其改良，所述的改良为调整大量元素氮磷钾的含量质量比为8:1:13，其中大量元素中kh2po4浓度调整为270mg/l，形成适合“京桂一号桉”生长的专用基础培养基，再添加n6苄基腺嘌呤(6-ba)1.0mg/l+kt 0.5mg/l+naa0.5 mg/l+维生素c 2.0mg/l+核黄素7.0mg/l，以市售优质白糖30g/l作为碳源，琼脂粉3.75g/l作支撑物，ph值调整为5.8-6.0，即为初代培养基jg1；
18.上述三倍体桉树“京桂一号桉”的组培快繁方法步骤(4)中，所述继代培养基jg2为：在jg1的基础上，提高大量元素中氮磷钾元素含量，氮、磷、钾元素分别提高质量百分数17.3％、10.0％、19.0％，形成适合三倍体桉树“京桂一号桉”继代增殖专用基础培养基；再添加n6苄基腺嘌呤(6-ba)0.5mg/l+naa0.2 mg/l+维生素c 2.0mg/l+核黄素7.0mg/l；以市售优质白糖30g/l作为碳源，琼脂粉3.75g/l作支撑物，ph值调整为5.8-6.0，即为继代培养基jg2；
19.上述三倍体桉树“京桂一号桉”的组培快繁方法步骤(5)中，所述的生根培养基jg3为：1/3ms培养基结合h培养基，添加h培养基中的生物素0.05mg/l、烟酸0.5mg/l，并去掉抑制生根的离子nh
4+
，形成“京桂一号桉”专用的生根基础培养基，再添加植物生长调节剂abt
1 1.2mg/l+iba0.2 mg/l+iaa0.1 mg/l+1.2％氨基寡糖素，以市售白糖15g/l作碳源，琼脂粉4.0g/l作支撑物，ph值调整为6.0-6.2，即为生根培养基jg3。
20.优选地，步骤(2)中所述的新洁尔灭菌液质量浓度为0.1％；所述的酒精体积浓度为75％，浸泡5-8s；所述的次氯酸钠溶液质量浓度为2％，消毒20分钟；所述的升汞溶液质量浓度为0.1％，消毒3分钟。
21.优选地，步骤(3)中全暗培养8-10天，萌芽后移至光照强度为1000lux条件下培养，培养温度26
±
2℃。
22.优选地，步骤(4)中继代培养温度26
±
2℃。
23.与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
24.本发明初代培养基中的激素kt，促进细胞分裂作用比6-ba弱，而且见光易分解，但能促进芽苗节间伸长和茎的增粗，与6-ba协调使用，利于无菌芽萌发启动，增强苗质；维生素c和核黄素主要起到抗氧化作用，防止褐化并促进芽苗生长；本发明生根培养基中植物生长调节剂abt1能通过强化调控植物内源激素含量、重要酶的活性，促进生物分子合成，诱导植物不定根或不定芽的形态建成，调节植物代谢作用强度，提高组培苗生根率；iba能促进植物主根生长，提高发芽率及成活率；iaa是植物生长素，能促进植株生根及高的生长，通常情况下见光或加热后变性失活，但实际应用中效果较好；氨基寡糖素具有提高芽苗抗逆性及抑菌作用，在生根培养基中使用有利于减少杂菌污染，以上多种生根促进剂联合使用，能有效提高生根率和苗质；本发明采用这些化合物，对三倍体桉树新品种“京桂一号桉”最为合适，是经过多次调试筛选后确定的，使用后有稳定一致的效果。
附图说明
25.图1是本发明外植体原材料培育。
26.图2是本发明外植体诱导无菌芽。
27.图3是本发明无菌芽增殖。
28.图4是本发明继代培养。
29.图5是本发明生根培养。
30.图6是本发明步骤(7)的小苗移栽。
31.图7是本发明步骤(8)的壮苗培养。
具体实施方式
32.下面结合附图具体实施方式进行详细描述，但应当理解本发明的保护范围并不受具体实施方式的限制。实施例中采用的原料、试剂若无特殊说明，皆为市售所得。本发明其他培养基中化合物可以从化学词典或农作物栽培的教科书检索到其名称和作用。
33.实施例1
34.一种三倍体桉树新品种“京桂一号桉”的组培快繁方法，具体操作步骤如下：
35.(1)优质外植体原材料培育：将三倍体桉树“京桂一号桉”植株截去稍段，促使萌芽，移至大棚温室培养，当萌芽长出后，人工控制光照、温度、湿度，并采取病虫害防治措施，当萌芽生长到6厘米，节上芽眼饱满但尚未萌生侧芽时，在晴天的上午采下芽条，去除叶片，得到外植体材料，带回实验室备用；
36.(2)外植体消毒：用纯净水清洗3次步骤(1)所得外植体材料再用质量浓度为0.1％的新洁尔灭菌液浸泡2分钟，用纯净水清洗3次，预处理后移至超净工作台上，在无菌条件下，剪切成长1.5厘米、保留有1个潜伏芽的半木质化切段，用体积浓度为75％酒精浸泡5s，无菌水清洗3次，沥干水液，置于质量浓度为2％次氯酸钠溶液中消毒20分钟，无菌水清洗3次，用无菌滤纸吸干表面水分，置于质量浓度为0.1％升汞溶液，消毒3分钟并轻轻摇动，让外植体表面与升汞溶液充分接触，随后倒去升汞溶液，用无菌水清洗外植体5次，每次8分钟；
37.(3)初代培养：将步骤(2)消毒好的外植体表面水分用无菌滤纸吸干，切去两端留存长1.0厘米茎段接种到初代培养基jg1上，接种后全暗培养8天，萌芽后移至光照强度为1000lux条件下培养，培养温度26
±
2℃，光照时间10-12h/d，光源为自然散射光；
38.(4)继代培养：经初代培养的外植体萌芽后，侧芽形成丛生芽，培养15天，选取生长健壮、无污染的无菌芽，切割后转入到继代培养基jg2上，培养温度26
±
2℃，光照时间10-12h/d，光源为自然散射光，阴雨天光照不足时，用人工光源补充；在光照强度2000lux条件下培养18天，将长成2.0cm的无菌芽，切成带茎节的切段，将芽丛切分成小芽丛，转入到新配制的继代培养基，以促进丛生芽增殖和单芽伸长，然后如此反复继代培养，无菌芽数量不断增多，继代增值系数为4.5；
39.(5)生根培养：从步骤(4)扩繁的继代苗切取生长健壮的芽条，插入到生根培养基jg3中培养，培养后的第7-9天的光照强度为1000lux，当有短根从切口处冒出时，提高光照至3000lux，培养温度26-35℃，培养30天，根长1.5cm，苗高2.5cm时，炼苗；
40.(6)炼苗：将预移栽的生根瓶苗，连同瓶一起搬至大棚温室，增强光照至5000lux以上，提高苗木光合作用，增强自养能力，促进苗木木质化；临移栽前3天，将生根瓶盖揭开，降低瓶内湿度，增强苗木对自然环境的适应能力，同时，灌注30ml纯净水入瓶，防止培养基干燥变硬；
41.(7)移栽：取出经炼苗的生根瓶苗，洗去粘附在根上的培养基，移栽至经高锰酸钾溶液消毒的黄心土蛭石基质育苗杯中培养，搭小拱棚，覆盖透光度为70％的遮阳网，做好遮荫，保持湿度90％以上，并使用广谱杀菌剂防治病虫害，经常观察虫害情况，出现虫害时及时消灭，做好遮荫及保湿、病虫害防治等管护工作，培养20天，小苗逐渐长高；
42.(8)壮苗培养：按照苗木的高度及地径大小进行分级，当苗高长至15-20cm，地径为2.4-2.7mm时，转移至苗间距更大的育苗托中培养，苗木密度由625株/m2降至356株/m2；苗高12-15cm，地径2.1-2.3mm的小苗留在原育苗托中，并及时淘汰少量长势较弱的苗木，全光照自然状态下，培养45天，苗高25cm时，出圃造林；
43.上述三倍体桉树“京桂一号桉”的组培快繁方法步骤(3)中，初代培养基jg1组成为：以ms培养基为基础，对其改良，所述的改良为调整大量元素氮磷钾的含量质量比为8:1:13，其中kh2po4浓度调整为270mg/l，形成适合“京桂一号桉”生长的专用基础培养基，再添加n6苄基腺嘌呤(6-ba)1.0mg/l+kt 0.5mg/l+naa0.5 mg/l+维生素c 2.0mg/l+核黄素7.0mg/l；以市售优质白糖30g/l作为碳源，琼脂粉3.75g/l作支撑物，ph值调整为5.8-6.0，即为初代培养基jg1；
44.上述三倍体桉树“京桂一号桉”的组培快繁方法步骤(4)中，所述继代培养基jg2为：在jg1的基础上，提高大量元素中氮磷钾元素含量，氮、磷、钾元素分别提高质量百分数17.3％、10.0％、19.0％，形成适合三倍体桉树“京桂一号桉”继代增殖专用基础培养基；再添加n6苄基腺嘌呤(6-ba)0.5mg/l+naa0.2 mg/l+维生素c 2.0mg/l+核黄素7.0mg/l；以市售优质白糖30g/l作为碳源，琼脂粉3.75g/l作支撑物，ph值调整为5.8-6.0，即为继代培养基jg2；
45.上述三倍体桉树“京桂一号桉”的组培快繁方法步骤(5)中，所述的生根培养基jg3组成为：1/3ms培养基结合h培养基，添加h培养基中的生物素0.05mg/l、烟酸0.5mg/l，并去掉抑制生根的离子nh
4+
，形成“京桂一号桉”专用的生根基础培养基，再添加植物生长调节剂
abt
1 1.2mg/l+iba0.2mg/l+iaa0.1 mg/l+1.2％氨基寡糖素，以市售白糖15g/l作碳源，琼脂粉4.0g/l作支撑物，ph值调整为6.0-6.2，即为生根培养基jg3。
46.实施例2
47.一种三倍体桉树新品种“京桂一号桉”的组培快繁方法，具体操作步骤如下：
48.(1)优质外植体原材料培育：将三倍体桉树“京桂一号桉”植株截去稍段，促使萌芽，移至大棚温室培养，当萌芽长出后，人工控制光照、温度、湿度，并采取病虫害防治措施，当萌芽生长到8厘米，节上芽眼饱满但尚未萌生侧芽时，在晴天的上午采下芽条，去除叶片，得到外植体材料，带回实验室备用；
49.(2)外植体消毒：用纯净水清洗3次步骤(1)所得外植体材料，再用质量浓度为0.1％的新洁尔灭菌液浸泡2分钟，用纯净水清洗3次，预处理后移至超净工作台上，在无菌条件下，剪切成长2.0厘米、保留有2个潜伏芽的半木质化切段，用体积浓度为75％酒精浸泡8s，无菌水清洗3次，沥干水液，置于质量浓度为2％次氯酸钠溶液中消毒20分钟，无菌水清洗3次，用无菌滤纸吸干表面水分，置于质量浓度为0.1％升汞溶液，消毒3分钟并轻轻摇动，让外植体表面与升汞溶液充分接触，随后倒去升汞溶液，用无菌水清洗外植体6次，每次5分钟；
50.(3)初代培养：将步骤(2)消毒好的外植体表面水分用无菌滤纸吸干，切去两端留存长1.5厘米茎段接种到初代培养基jg1上，接种后全暗培养10天，萌芽后移至光照强度为1000lux条件下培养，培养温度26
±
2℃，光照时间10-12h/d，光源为自然散射光；
51.(4)继代培养：经初代培养的外植体萌芽后，侧芽形成丛生芽，培养20天，选取生长健壮、无污染的无菌芽，切割后转入到继代培养基jg2上，培养温度26
±
2℃，光照时间10-12h/d，光源为自然散射光，阴雨天光照不足时，用人工光源补充；在光照强度2000lux条件下培养22天，将长成2.5cm的无菌芽，切成带茎节的切段，将芽丛切分成小芽丛，转入到新配制的继代培养基，以促进丛生芽增殖和单芽伸长，然后如此反复继代培养，无菌芽数量不断增多，继代增值系数为4.5；
52.(5)生根培养：将步骤(4)扩繁的继代苗切取生长健壮的芽条，插入到生根培养基jg3中培养，培养后的第7-9天的光照强度为1000lux，当有短根从切口处冒出时，提高光照至3000lux，培养温度35℃，培养25天，根长2.0cm，苗高3.0cm时，炼苗；
53.(6)炼苗：将预移栽的生根瓶苗，连同瓶一起搬至大棚温室，增强光照至5000lux以上，提高苗木光合作用，增强自养能力，促进苗木木质化；临移栽前3天，将生根瓶盖揭开，降低瓶内湿度，增强苗木对自然环境的适应能力，同时，灌注50ml冷开水入瓶，防止培养基干燥变硬；
54.(7)移栽：取出经炼苗的生根瓶苗，洗去粘附在根上的培养基，移栽至经高锰酸钾溶液消毒的黄心蛭土石基质育苗杯或轻型基质育苗袋中培养，搭小拱棚，覆盖透光度为70％的遮阳网，做好遮荫，保持湿度90％以上，并使用广谱杀菌剂防治病虫害，经常观察虫害情况，出现虫害时及时消灭，做好遮荫及保湿、病虫害防治等管护工作，培养25天，小苗逐渐长高；
55.(8)壮苗培养：按照苗木的高度及地径大小进行分级，当苗高长至15-20cm，地径为2.4-2.7mm时，转移至苗间距更大的育苗托中培养，苗木密度由625株/m2降至356株/m2，扩大光照空间；苗高12-15cm，地径2.1-2.3mm的小苗留在原育苗托中；并及时淘汰少量长势较弱
的苗木，全光照自然状态下，培养45天，苗高25cm时，出圃造林；
56.上述三倍体桉树“京桂一号桉”的组培快繁方法步骤(3)中，初代培养基jg1组成为：以ms培养基为基础，对其改良，所述的改良为调整大量元素氮磷钾的含量质量比为8:1:13，其中大量元素中kh2po4浓度调整为270mg/l，形成适合“京桂一号桉”生长的专用基础培养基，再添加n6苄基腺嘌呤(6-ba)1.0mg/l+kt 0.5mg/l+naa0.5 mg/l+维生素c 2.0mg/l+核黄素7.0mg/l；以市售优质白糖30g/l作为碳源，琼脂粉3.75g/l作支撑物，ph值调整为5.8-6.0，即为初代培养基jg1；
57.上述三倍体桉树“京桂一号桉”的组培快繁方法步骤(4)中，所述继代培养基jg2为：在jg1的基础上，提高大量元素中氮磷钾元素含量，氮、磷、钾元素分别提高质量百分数17.3％、10.0％、19.0％，形成适合三倍体桉树“京桂一号桉”继代增殖专用基础培养基；再添加n6苄基腺嘌呤(6-ba)0.5mg/l+naa0.2 mg/l+维生素c 2.0mg/l+核黄素7.0mg/l；以市售优质白糖30g/l作为碳源，琼脂粉3.75g/l作支撑物，ph值调整为5.8-6.0，即为继代培养基jg2；
58.上述三倍体桉树“京桂一号桉”的组培快繁方法步骤(5)中，所述的生根培养基jg3组成为：1/3ms培养基结合h培养基，添加h培养基中的生物素0.05mg/l、烟酸0.5mg/l，并去掉抑制生根的离子nh
4+
，形成“京桂一号桉”专用的生根基础培养基，再添加植物生长调节剂abt
1 1.2mg/l+iba0.2mg/l+iaa0.1 mg/l+1.2％氨基寡糖素，以市售白糖15g/l作碳源，琼脂粉4.0g/l作支撑物，ph值调整为6.0-6.2，即为生根培养基jg3。
59.实施例3
60.一种三倍体桉树新品种“京桂一号桉”的组培快繁方法，具体操作步骤如下：
61.(1)优质外植体原材料培育：将三倍体桉树“京桂一号桉”植株截去稍段，促使萌芽，移至大棚温室培养，当萌芽长出后，人工控制光照、温度、湿度，并采取病虫害防治措施，当萌芽生长到7厘米，节上芽眼饱满但尚未萌生侧芽时，在晴天的上午采下芽条，去除叶片，得到外植体材料，带回实验室备用；
62.(2)外植体消毒：用纯净水清洗3次步骤(1)所得外植体材料，再用质量浓度为0.1％的新洁尔灭菌液浸泡2分钟，用纯净水清洗3次，预处理后移至超净工作台上，在无菌条件下，剪切成长1.8厘米、保留有2个潜伏芽的半木质化切段，用体积浓度为75％酒精浸泡5-8s，无菌水清洗3次，沥干水液，置于质量浓度为2％次氯酸钠溶液中消毒20分钟，无菌水清洗3次，用无菌滤纸吸干表面水分，置于质量浓度为0.1％升汞溶液，消毒3分钟并轻轻摇动，让外植体表面与升汞溶液充分接触，随后倒去升汞溶液，用无菌水清洗外植体6次，每次7分钟；
63.(3)初代培养：将步骤(2)消毒好的外植体用无菌滤纸吸干水分，切去两端留存长1.0-1.5厘米茎段接种到初代培养基jg1上，接种后全暗培养9天，萌芽后移至光照强度为1000lux条件下培养，培养温度26
±
2℃，光照时间10-12h/d，光源为自然散射光；
64.(4)继代培养：经初代培养的外植体萌芽后，侧芽形成丛生芽，培养15-20天，选取生长健壮、无污染的无菌芽，切割后转入到继代培养基jg2上，培养温度26
±
2℃，光照时间10-12h/d，光源为自然散射光，阴雨天光照不足时，用人工光源补充；在光照强度2500lux条件下培养20天，将长成2.3cm的无菌芽，切成带茎节的切段，将芽丛切分成小芽丛，转入到新配制的继代培养基，以促进丛生芽增殖和单芽伸长，然后如此反复继代培养，无菌芽数量不
断增多，继代增值系数为4.5；
65.(5)生根培养：从步骤(4)扩繁的继代苗切取生长健壮的芽条，插入到生根培养基jg3中培养，培养的第7-9天的光照强度为1000lux，当有短根从切口处冒出时，提高光照至3000lux，培养温度30-32℃，培养32天，根长1.8cm，苗高3.0cm时，炼苗；
66.(6)炼苗：将预移栽的生根瓶苗，连同瓶一起搬至大棚温室，增强光照至5000lux，提高苗木光合作用，增强自养能力，促进苗木木质化；临移栽前3-5天，将生根瓶盖揭开，降低瓶内湿度，增强苗木对自然环境的适应能力，同时，灌注40ml纯净水入瓶，防止培养基干燥变硬；
67.(7)移栽：取出经炼苗的生根瓶苗，洗去粘附在根上的培养基，移栽至经高锰酸钾溶液消毒的黄心蛭土石基质育苗杯或轻型基质育苗袋中培养，搭小拱棚，覆盖透光度为70％的遮阳网，做好遮荫，保持湿度90％以上，并使用广谱杀菌剂防治病虫害，经常观察虫害情况，出现虫害时及时消灭，做好遮荫及保湿、病虫害防治等管护工作，培养20-25天，小苗逐渐长高；
68.(8)壮苗培养：按照苗木的高度及地径大小进行分级，当苗高长至15-20cm，地径为2.4-2.7mm时，转移至苗间距更大的育苗托中培养，苗木密度由625株/m2降至356株/m2，扩大光照空间；苗高12-15cm，地径2.1-2.3mm的小苗留在原育苗托中；并及时淘汰少量长势较弱的苗木，全光照自然状态下，培养50天，苗高25-30cm时，出圃造林；
69.上述三倍体桉树“京桂一号桉”的组培快繁方法步骤(3)中，初代培养基jg1组成为：以ms培养基为基础，对其改良，所述的改良为调整大量元素氮磷钾的含量质量比为8:1:13，其中大量元素中kh2po4浓度调整为270mg/l，形成适合“京桂一号桉”生长的专用基础培养基，再添加n6苄基腺嘌呤(6-ba)1.0mg/l+kt 0.5mg/l+naa0.5 mg/l+维生素c 2.0mg/l+核黄素7.0mg/l；以市售优质白糖30g/l作为碳源，琼脂粉3.75g/l作支撑物，ph值调整为5.8-6.0，即为初代培养基jg1；
70.上述三倍体桉树“京桂一号桉”的组培快繁方法步骤(4)中，所述继代培养基jg2为：在jg1的基础上，提高大量元素中氮磷钾元素含量，氮、磷、钾元素分别提高质量百分数17.3％、10.0％、19.0％，形成适合三倍体桉树“京桂一号桉”继代增殖专用基础培养基；再添加n6苄基腺嘌呤(6-ba)0.5mg/l+naa0.2 mg/l+维生素c 2.0mg/l+核黄素7.0mg/l；以市售优质白糖30g/l作为碳源，琼脂粉3.75g/l作支撑物，ph值调整为5.8-6.0，即为继代培养基jg2；
71.上述三倍体桉树“京桂一号桉”的组培快繁方法步骤(5)中，所述的生根培养基jg3组成为：1/3ms培养基结合h培养基，添加h培养基中的生物素0.05mg/l、烟酸0.5mg/l，并去掉抑制生根的离子nh
4+
，形成“京桂一号桉”专用的生根基础培养基，再添加植物生长调节剂abt
1 1.2mg/l+iba0.2mg/l+iaa0.1 mg/l+1.2％氨基寡糖素，以市售白糖15g/l作碳源，琼脂粉4.0g/l作支撑物，ph值调整为6.0-6.2，即为生根培养基jg3。
72.下表为本发明方法得到的三倍体桉树新品种“京桂一号桉”组培繁育结果：
[0073][0074]
上表可以看出，本发明三倍体桉树新品种“京桂一号桉”组培快繁方法能有效诱导外植体萌芽，继代增值系数高，苗质好，接种生根后生根率超过95％，移栽成活率90％以上，能够规模化生产苗木，成功实现三倍体桉树的组培快繁。
[0075]
本发明培养材料的消毒过程中所用的药剂，其中新洁尔灭菌液是医疗上常用的消毒剂，在培养材料预处理过程低浓度使用可以使部分菌类失活，避免菌类在外植体着生。体积浓度75％酒精具有杀菌作用，但又不能彻底灭菌，主要利用其湿润作用，消除材料上的空气，让其他消毒剂能全覆盖灭菌。酒精穿透力强，易杀伤材料，所以要求消毒时间短。次氯酸钠以分解产生的氯气杀菌，易于清洗除去其对材料无毒害作用，效果好，但在实际应用中，仍然难以彻底灭菌。升汞有剧毒，灭菌彻底，问题在于消毒后难以去除残留的汞，对材料有毒害作用，而且表现得迟。因此，使用升汞时需要尽量缩短消毒时间并彻底清洗。以上几种消毒剂结合使用，多次消毒，逐层灭菌，能灭杀材料上的病菌，且不损伤或仅仅轻微损伤材料。
[0076]
前述对本发明的具体示例性实施方案的描述是为了说明和例证的目的。这些描述并非想将本发明限定为所公开的精确形式，并且很显然，根据上述教导，可以进行很多改变和变化。对示例性实施例进行选择和描述的目的在于解释本发明的特定原理及其实际应用，从而使得本领域的技术人员能够实现并利用本发明的各种不同的示例性实施方案以及各种不同的选择和改变。本发明的范围意在由权利要求书及其等同形式所限定。