一种含柠檬酸的复方泡沫型长效消毒剂及其制备方法与应用

1.本发明属于畜禽养殖中生物安全防护用品领域，具体涉及一种含柠檬酸的复方泡沫型长效消毒剂及其制备方法与应用。


背景技术：

2.畜禽重大疫病不仅严重危害养殖业发展，还时刻威胁着人类健康和公共卫生安全。加强对动物重大疫病和外来动物疫病的防控，是保障畜禽产品供应安全及国家生物安全的重大需求。
3.生物安全防控产品在疫病防控中发挥着极其重要的作用，消毒剂是生物安全防控产品的重要组成。然而，现有生物安全防控产品存在着一些突出问题，现有产品存在杀菌效率低、安全性差、持久性差等问题，缺乏突破性的创新技术。
4.问题一：杀菌效率低
5.目前在养殖环境中存在的动物源致病微生物包括细菌、病毒、支原体、真菌等，往往不能一种消毒剂产品可以有效杀灭所有的病原微生物，常用的季铵盐类消毒剂对细菌的芽孢和支原体等，杀灭效果不佳。因此，常常需要根据消毒剂不同的杀菌谱来进行复方配比，来解决杀菌效率低的问题；
6.问题二：安全性差
7.养殖场消毒是个持续的过程，产品消耗量大，为了追求成本的降低，往往采用火碱(活性成分为氢氧化钠)、醛类(甲醛、戊二醛)、酚类(苯酚)等毒性较大的消毒产品，一方面对场区动物造成了伤害，也对养殖场消毒使用的工人具有潜在的毒性影响。因为消毒剂过度使用或使用不当造成动物死亡的案例也多有报道。开发绿色、环保、安全性高的消毒剂非常必要；
8.问题三：持久性差
9.目前消毒剂在使用过程中一般为溶液剂，喷洒在畜禽栏杆、食槽或畜舍地面的物体上，由于溶液的高流动性，在不规则表面，如栏杆、凸凹不平地面等，其附着性和持久性都很差，很难充分与物体接触，同样也造成了杀菌效率低，需要提高消毒频次而造成了消毒剂的过度消耗。这个问题可以开发一种具有持久泡沫的消毒产品，增加黏附和附着性，起到持久杀灭作用。
10.因此，亟需开发绿色、高效、安全、低成本的生物安全防控产品，并实现产业化推广应用，促进我国畜牧业绿色持续健康发展。


技术实现要素：

11.针对现有技术中存在的问题，本发明提供了一种环保、高效、低价、无残留、杀菌效果好、运输方便的一种含柠檬酸的复方泡沫型长效消毒剂及其制备方法。
12.本发明所提供的含柠檬酸的复方泡沫型长效消毒剂，包括下述质量百分含量的组
13.进一步的，所述含柠檬酸的复方泡沫型长效消毒剂，包括下述质量百分含量的组
14.优选的，所述戊二醛的质量与所述苯扎溴铵和癸甲溴铵质量之和的比可为1：2 及以上，进一步优选为1：(2-4)，具体如1：2或1：3或1：4；
15.优选的，所述苯扎溴铵和癸甲溴铵的质量比可为1：(1-4)，进一步优选为1： (1-3)，具体如1：1或1：2或1：3或1：4；
16.优选的，所述的助溶剂可选自含2-10个碳的醇类溶剂中的一种或多种，如乙醇、丙二醇、丁醇、异丁醇、辛醇等醇类溶剂的一种或多种混合物；
17.优选的，所述的渗透剂可选自乙醇、甘油三油酸酯、三辛酸甘油酯、脂肪酸聚氧乙烯醚-9、脂肪酸聚氧乙烯醚-7、脂肪酸聚氧乙烯醚-5等中的一种或多种混合物；
18.优选的，所述的泡沫乳化剂可选自十二烷基二甲基氧化胺、癸基葡萄糖苷、椰子油二乙醇酰胺、十六烷基三甲基溴化铵中的一种或多种混合物；具体的，所述泡沫乳化剂为癸基葡萄糖苷，其质量含量优选为1％；所述泡沫乳化剂为椰子油二乙醇酰胺或十六烷基三甲基溴化铵，其质量含量优选为3％。
19.优选的，所述稳定剂选自可与柠檬酸形成缓冲体系的盐，如柠檬酸盐、磷酸氢二
钠、磷酸氢二钾、磷酸氢钠等。
20.本发明还提供了上述含柠檬酸的复方泡沫型长效消毒剂的制备方法。
21.本发明所提供的含柠檬酸的复方泡沫型长效消毒剂的制备方法，包括如下步骤：
22.(1)向部分所述灭菌水中通入氮气；
23.(2)向所述步骤(1)处理后的灭菌水中加入所述助溶剂并搅拌；
24.(3)向所述步骤(2)得到的体系中加入所述癸甲溴铵和苯扎溴铵并低速 (《150rpm)搅拌至完全溶解；
25.(4)向所述步骤(3)得到的体系中加入所述渗透剂和所述泡沫乳化剂并低速 (《150rpm)搅拌，形成体系a；
26.(5)另取部分所述灭菌水中通入氮气；
27.(6)向所述步骤(5)处理后的灭菌水中加入所述戊二醛和聚六亚甲基双胍并低速(《150rpm)搅拌至完全溶解；
28.(7)向步骤(6)得到的体系中加入所述柠檬酸和稳定剂，并低速(《150rpm) 搅拌至完全溶解；形成体系b；
29.(8)将体系b转入体系a中，低速(《150rpm)搅拌均匀，用所述灭菌水按质量定容至100％，保持体系ph值在3.0-5.0之间。
30.上述方法中，所述的低速搅拌的转速均《150rpm。
31.上述方法步骤(4)中，所述搅拌的时间可为20-60min。
32.本发明所提供的含柠檬酸的复方泡沫型长效消毒剂，可有效杀灭畜牧养殖环境中地面、栏杆、食槽等常见的致病微生物，如细菌、病毒、支原体、芽孢、真菌等。
33.所述病毒具体可为猪瘟病毒(如thiveral株猪瘟病毒)、鸡新城疫病毒(如lasota 株鸡新城疫病毒)等。
34.所述芽孢具体如枯草芽孢杆菌。
35.本发明还保护一种消毒剂组合物。
36.本发明所保护的消毒剂组合物，包括柠檬酸、苯扎溴铵、癸甲溴铵、戊二醛和聚六亚甲基双胍。
37.其中，所述戊二醛的质量与所述苯扎溴铵和癸甲溴铵质量之和的比为1：2及以上，优选为1：(2-4)；
38.所述苯扎溴铵和癸甲溴铵的质量比为1：(1-4)，优选为1：(1-3)；
39.所述聚六亚甲基双胍与戊二醛的质量比为1：(0.5-5)，优选1：(1-3)；
40.所述柠檬酸与戊二醛的质量比为1：(1-10)，优选1：(1-8)。
41.针对目前消毒剂杀菌效率低的问题。本发明提供了一种复方型组方，组方之间协同作用，可以有效解决单方杀菌效率低的问题。组方中各成分的作用解析如下：
42.1、苯扎溴铵与癸甲溴铵是两种阳离子表面活性剂，通过富集于细胞壁表面，从而干扰微生物细胞膜的滤过作用，使细菌细胞通透性变大，水分渗入菌体内造成物质外泄，影响细菌的新陈代谢从而破坏细胞结构，最终导致细菌死亡。这类消毒剂毒性低，
43.去污能力强，对金属材料无腐蚀性，具有协同杀菌作用，对常见的动物源细菌都具有良好的杀灭能力，但对细菌芽孢效果不佳。
44.2、戊二醛对微生物的杀灭作用主要依靠醛基，主要作用于菌体蛋白的疏基、羟基、
羧基和氨基，可使之烷基化，引起蛋白质凝固造成细菌死亡，对病毒、细菌芽孢、真菌及其孢子等微生物，具有很好的杀灭作用。
45.3、聚六亚甲基双胍属于环保型消毒剂，胍基有很高的活性，能使聚合物成正电性，很容易被呈负电性的各类细菌等所吸附，从而抑制细菌等的分裂功能，使其丧失生殖能力。
46.4、柠檬酸，又名枸橼酸，分子式为c6h8o7，是一种重要的有机酸，为无色晶体，无臭，有很强的酸味，易溶于水，可作为ph调节剂，在发明人前期试验研究中，发现其在较低浓度条件下(0.5％～1.0％)，即对动物源支原体具有良好的杀灭作用。
47.经试验结果发现，以上组方成分可以互相协同，杀灭覆盖养殖环境中存在的动物源致病微生物包括细菌、病毒、支原体、真菌等一切病原微生物，杀菌效率100％。
48.针对目前消毒剂杀菌安全性差的问题。本发明中，只有戊二醛属于醛类产品，具有一定刺激和腐蚀性，但由于互相协同，复方中戊二醛的使用浓度较单方下降60％～80％以上，毒性试验结果表明，本组方产品使用安全、有效、无刺激。
49.针对目前消毒剂杀菌持久性差的问题。本发明组方中，含有渗透剂的sf渗透剂、助溶剂、稳定剂、成泡剂，特别是聚六亚甲基双胍是一种高分子聚合物，将产品形成一种高分子溶液状态，很容易与呈负电性的各类细菌等吸附，使用时通过发泡枪或发泡机形成丰富泡沫，附着于消毒物体表面，起到长效、持久消毒作用。
50.与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
51.(1)杀菌范围广。由于复配的消毒剂存在协同或相加作用，复方后总杀菌能力有所增强。季铵盐类单方一般不能杀死细菌芽孢，而醛类消毒剂对细菌芽孢杀灭效果良好。本发明将季铵盐类、醛类、酸类及胍类化合物协同作用，可杀灭覆盖养殖环境中存在的动物源致病微生物包括细菌、病毒、支原体、真菌等一切病原微生物，杀菌效率100％。
52.(2)长效、持久。本发明组方中，含有渗透剂的sf渗透剂、助溶剂、稳定剂、成泡剂，特别是聚六亚甲基双胍是一种高分子聚合物，将产品形成一种高分子溶液状态，很容易与呈负电性的各类细菌等吸附，使用时通过发泡枪或发泡机形成丰富泡沫，附着于消毒物体表面，起到长效、持久消毒作用，与现有技术相比，可以节约消毒剂的使用量。
53.(3)安全性高。醛类消毒剂具有皮肤刺激性和急性毒性，在本发明中，通过有效组方协同，戊二醛的使用量大大降低，仅为原来的20％，对人体无毒副作用，动物毒理试验显示，该组方高效、安全、无毒。
54.(4)可有效杀灭支原体。支原体作为一种病原，其具有垂直，水平和机械传播能力，其感染途径也复杂多样，在养殖环境中依附有机生物质广泛存活。与现有技术相比，本发明中可有效杀灭养殖环境中的支原体，对有效控制养殖场支原体病的传播具有重要的作用。
55.(5)生产工艺简单，稳定性好，易于扩大化生产，现场消毒效果显著，具有极高的推广价值。
具体实施方式
56.下面结合具体实施例对本发明作进一步阐述，但本发明并不限于以下实施例。所述方法如无特别说明均为常规方法。所述原材料如无特别说明均能从公开商业途径获得。
57.实施例1、
58.(1)戊二醛与季铵盐含量协同筛选
59.将戊二醛与癸甲溴铵、苯扎溴铵原料药恢复室温，其中癸甲溴铵、苯扎溴铵的配比(质量比)为1：1，以pbs溶液为溶媒，按照表1分别配制不同消毒剂组别，以枯草芽孢杆菌cmcc(b)63501为指示菌，进行悬液定量杀菌试验，以杀菌率作为筛选依据。
60.表1戊二醛与季铵盐配比试验结果
[0061][0062][0063]
注：以上结果为3次试验的平均值；试验条件均为20
±
2℃；消毒剂1：2倍稀释，作用时间为1h。
[0064]
结果表明：第8组，单独季铵盐，杀灭芽孢的能力非常低(7.8％)，1％戊二醛复配质量浓度为0.1％-4％季铵盐溶液，随着季铵盐含量的增加杀菌率随之增大。试验结果得出戊二醛与季铵盐配比为等于或大于1：2及以上，其杀菌率可达到大于99.90％以上，消毒效果合格。
[0065]
(2)两种季铵盐含量协同筛选
[0066]
将戊二醛与癸甲溴铵、苯扎溴铵原料药恢复室温，按照表2分别配制实验用消毒剂混合液分组，以枯草芽孢杆菌63501为指示菌进行悬液定量杀菌试验。结果如下：
[0067]
表2苯扎溴铵与癸甲溴铵配比试验结果
[0068][0069]
注：以上结果为3次试验的平均值；试验条件均为20
±
1℃℃；消毒剂1：2倍稀释，作用时间为1h。
[0070]
结果表明：在1％戊二醛与2％季铵盐总含量一定的情况下，杀菌率随着癸甲溴铵比例的增大而升高。癸甲溴铵与苯扎溴铵的杀菌比例等于1：1时，杀菌率为99.92％，在等于2：1时，杀菌率为99.98％，等于3：1时，杀菌率等于100％，消毒效果均合格。
[0071]
(3)聚六亚甲基双胍含量协同筛选
[0072]
筛选聚六亚甲基双胍含量，按照表3分别配制实验用消毒剂混合液分组，以枯草芽孢杆菌63501为指示菌进行悬液定量杀菌试验。结果如下：
[0073]
表3聚六亚甲基双胍配比试验结果(％)
[0074][0075][0076]
结果表明：聚六亚甲基双胍含量在0.5％～1.5％之间，各组别的杀菌率均大于 99.9％，消毒效果均合格。
[0077]
(4)柠檬酸含量协同筛选
[0078]
筛选柠檬酸含量，按照表4分别配制实验用消毒剂混合液分组，以10株临床牛源支原体病原菌(bs1738-bs1748)为指示菌进行悬液定量杀菌试验。结果如下：
[0079]
表4体系中柠檬酸含量筛选结果(％)
[0080][0081]
结果表明：柠檬酸含量在0.5％～4.0％之间，各组别的杀菌率均大于99.9％，消毒效果均合格。
[0082]
(5)泡沫乳化剂筛选
[0083]
分别对含量1％～3％的椰子油二乙醇酰胺、癸基葡萄糖苷、十六烷基三甲基溴化铵乳化剂进行筛选。试验结果。1％癸基葡萄糖苷的泡沫丰富细腻，且泡沫持续时间长达60min。而1％椰子油二乙醇酰胺、1％十六烷基三甲基溴化铵泡沫稀少持续时间短，且在60min时1％椰子油二乙醇酰胺泡沫完全消退。3％椰子油二乙醇酰胺、3％十六烷基三甲基溴化铵，可以满足泡沫持续时间长达60min的要求。
[0084]
实施例2、含柠檬酸的复方泡沫型长效消毒剂
[0085]
处方组成如下表所示。
[0086][0087][0088]
按以上组分及含量(w/w)，配制1.0kg复方泡沫型长效消毒剂，具体步骤为：
[0089]
(1)向部分所述灭菌水中通入氮气；
[0090]
(2)向所述灭菌水中加入丙二醇并搅拌；
[0091]
(3)向步骤(2)得到的体系中加入所述癸甲溴铵和苯扎溴铵并低速(《150rpm) 搅拌至完全溶解；
[0092]
(4)向步骤(3)得到的体系中加入脂肪酸聚氧乙烯醚-9和癸基葡萄糖苷并低速(《150rpm)搅拌20min，形成体系a；
[0093]
(5)另取部分所述灭菌水中通入氮气；
[0094]
(6)向所述灭菌水中加入戊二醛和聚六亚甲基双胍并低速(《150rpm)搅拌至完全溶解；
[0095]
(7)向步骤(6)得到的体系中加入所述柠檬酸和柠檬酸钠，并低速(《150rpm) 搅拌至完全溶解；形成体系b；
[0096]
(8)将体系b转入体系a中，低速(《150rpm)搅拌20min，余量用所述灭菌水按质量定容，测定体系ph在3.0～5.0之间。
[0097]
实施例3、含柠檬酸的复方泡沫型长效消毒剂
[0098]
处方组成如下表所示。
[0099]
柠檬酸0.5％苯扎溴铵1.5％癸甲溴铵3.0％戊二醛0.5％聚六亚甲基双胍1.0％丙二醇+乙醇5.0％+5.0％脂肪酸聚氧乙烯醚-90.3％十六烷基三甲基溴化铵3.0％磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲体系ph 3.0～5.0之间灭菌水补充至余量
[0100]
按以上组分及含量(w/w)，配制1.0kg复方泡沫型长效消毒剂，具体步骤为：
[0101]
(1)向部分所述灭菌水中通入氮气；
[0102]
(2)向所述灭菌水中加入丙二醇和乙醇并搅拌；
[0103]
(3)向步骤(2)得到的体系中加入所述癸甲溴铵和苯扎溴铵并低速(《150rpm) 搅拌至完全溶解；
[0104]
(4)向步骤(3)得到的体系中加入脂肪酸聚氧乙烯醚-9和十六烷基三甲基溴化铵并低速(《150rpm)搅拌20min，形成体系a；
[0105]
(5)另取部分所述灭菌水中通入氮气；
[0106]
(6)向所述灭菌水中加入戊二醛和聚六亚甲基双胍并低速(《150rpm)搅拌至完全溶解；
[0107]
(7)向步骤(6)得到的体系中加入所述柠檬酸和磷酸氢二钠，并低速(《150rpm) 搅拌至完全溶解；形成体系b；
[0108]
(8)将体系b转入体系a中，低速(《150rpm)搅拌20min，余量用所述灭菌水按质量定容，测定体系ph在3.0～5.0之间。
[0109]
实施例4、含柠檬酸的复方泡沫型长效消毒剂
[0110]
处方组成如下表所示。
[0111]
柠檬酸1.0％苯扎溴铵1.0％癸甲溴铵2.0％戊二醛0.5％聚六亚甲基双胍1.0％丙二醇7.5％脂肪酸聚氧乙烯醚-90.25％癸基葡萄糖苷1.0％柠檬酸钠-柠檬酸缓冲体系ph 3.0～5.0之间灭菌水补充至余量
[0112]
按以上组分及含量(w/w)，配制1.0kg复方泡沫型长效消毒剂，具体步骤为：
[0113]
(1)向部分所述灭菌水中通入氮气；
[0114]
(2)向所述灭菌水中加入丙二醇并搅拌；
[0115]
(3)向步骤(2)得到的体系中加入所述癸甲溴铵和苯扎溴铵并低速(《150rpm) 搅拌至完全溶解；
[0116]
(4)向步骤(3)得到的体系中加入脂肪酸聚氧乙烯醚-9和癸基葡萄糖苷并低速(《150rpm)搅拌20min，形成体系a；
[0117]
(5)另取部分所述灭菌水中通入氮气；
[0118]
(6)向所述灭菌水中加入戊二醛和聚六亚甲基双胍并低速(《150rpm)搅拌至完全溶解；
[0119]
(7)向步骤(6)得到的体系中加入所述柠檬酸和柠檬酸钠，并低速(《150rpm) 搅拌至完全溶解；形成体系b；
[0120]
(8)将体系b转入体系a中，低速(《150rpm)搅拌20min，余量用所述灭菌水按质量定容，测定体系ph在3.0～5.0之间。
[0121]
实施例5、含柠檬酸的复方泡沫型长效消毒剂
[0122]
处方组成如下表所示。
[0123]
柠檬酸1.0％苯扎溴铵1.5％癸甲溴铵3.0％戊二醛0.5％聚六亚甲基双胍1.5％丙二醇+乙醇5.0％+5.0％脂肪酸聚氧乙烯醚-70.25％癸基葡萄糖苷3.0％磷酸氢二钾-柠檬酸缓冲体系ph 3.0～5.0之间灭菌水补充至余量
[0124]
按以上组分及含量(w/w)，配制1.0kg复方泡沫型长效消毒剂，具体步骤为：
[0125]
(1)向部分所述灭菌水中通入氮气；
[0126]
(2)向所述灭菌水中加入丙二醇和乙醇并搅拌；
[0127]
(3)向步骤(2)得到的体系中加入所述癸甲溴铵和苯扎溴铵并低速(《150rpm) 搅拌至完全溶解；
[0128]
(4)向步骤(3)得到的体系中加入脂肪酸聚氧乙烯醚-7和癸基葡萄糖苷并低速(《150rpm)搅拌20min，形成体系a；
[0129]
(5)另取部分所述灭菌水中通入氮气；
[0130]
(6)向所述灭菌水中加入戊二醛和聚六亚甲基双胍并低速(《150rpm)搅拌至完全溶解；
[0131]
(7)向步骤(6)得到的体系中加入所述柠檬酸和磷酸氢二钾，并低速(《150rpm) 搅拌至完全溶解；形成体系b；
[0132]
(8)将体系b转入体系a中，低速(《150rpm)搅拌20min，余量用所述灭菌水按质量定容，测定体系ph在3.0～5.0之间。
[0133]
实施例6、含柠檬酸的复方泡沫型长效消毒剂的实施效果
[0134]
(1)对猪瘟病毒的杀灭试验研究
[0135]
采用悬液定量法，测定该消毒剂在不同浓度下分别作用3min、5min、7min、 10min、15min对thiveral株猪瘟病毒的灭活率。结果发现，1：600稀释的具体实施例4制备的复方长效泡沫消毒剂，对猪瘟病毒thiveral株作用10min，灭活率可达 100％。1：500稀释的复方长效泡沫消毒剂对猪瘟病毒thiveral株作用3min，灭活率达70.4％，当作用时间延长至7min，对猪瘟病毒thiveral株灭活率提高到95.2％；当延长作用时间至10min，对猪瘟病毒thiveral株灭活率提高到100％，灭活效果达标。当以1：400稀释时，消毒剂对猪瘟病毒thiveral株仅作用3min，灭活率即可达 100％。因此，复方长效泡沫消毒剂对猪瘟病毒t株杀灭效果良好，具备良好的杀病毒性能。
[0136]
表5消毒剂对猪瘟病毒t株灭活效果
[0137][0138]
注：试验条件均为20
±
2℃，以上结果为3次试验的平均值；此处消毒剂稀释液为标准硬水(ws/t 798-2022)。
[0139]
(2)对鸡新城疫病毒的杀灭试验研究
[0140]
采用悬浮杀灭试验，以鸡胚感染方法，测定该消毒剂在不同浓度下分别作用5 min、10min、15min对lasota株鸡新城疫病毒的灭活率。结果发现，具体实施例4制备的消毒剂在稀释倍数最高为1：400时，最短作用时间5min，对新城疫病毒lasota株灭活率为100％，并随作用时间的延长，作用10min、15min，灭活率稳定保持在100％，低于以上浓度时，效果不佳。该复方长效泡沫消毒剂稀释倍数为1：400时对新城疫病毒lasota株有良好的消毒效果。
[0141]
表6消毒剂对鸡新城疫病毒的灭活效果
[0142][0143][0144]
注：此处消毒剂稀释液为标准硬水(ws/t 798-2022)。
[0145]
(3)对临床自然菌表面现场消毒效果研究
[0146]
根据《兽用消毒剂鉴定技术规范》要求，选择在1个月内未使用过任何消毒剂的两个畜禽饲养场的4个以上动物圈舍进行，圈舍面积平均不得小于50m2。用于开展消毒剂现场消毒效果试验。
[0147]
表7临床试验分组
[0148][0149]
每个试验圈舍预先画定3个采样部位(5
×
5cm2的地面、栏杆、食槽)，每个部位各采样3次，采样部位相邻而不相同。将无菌棉拭子用中和剂浸润后，在面积5
×
5cm2区域内横直各用力擦拭10次，并不断转换拭子擦拭面，将拭子棉花端剪入10ml无菌离心管内，封好，做好标记。分别在消毒前、消毒后30min、60min、90min进行采样。将样品带回实验室后，分别加入无菌生理盐水2ml，涡旋1min，尽量充分洗脱，再用生理盐水梯度稀释到适宜浓度，在含有5％的小牛血清的lb培养皿中做细菌技术培养，进行菌落计数，并计算杀菌率。
[0150]
表8消毒剂对临床自然菌的杀灭效果
[0151][0152]
结果表明，具体实施例4制备的复方长效泡沫消毒剂对畜禽圈舍中地面、食槽和栏杆的杀菌效果随着浓度增加而增加，中浓度即可满足临床杀菌达到90％的要求。与对照药物组相比，杀菌更持久，效果更显著。
[0153]
本发明提供的其他具体实施例，均可实现以上消毒效果。
[0154]
(4)消毒剂安全性评价试验
[0155]
在glp实验室开展实施例的安全性评价，包括大鼠经口急性毒性试验、家兔急性皮肤刺激性、家兔急性眼刺激性试验。
[0156]
参照《兽药急性毒性(ld50测定)指导原则，使用sd大鼠评价实施例中消毒剂的急性经口毒性。以1009mg/kg b.w.、1453mg/kg b.w.、2093mg/kg b.w.、3014mg/kg b.w.、 4340mg/kg b.w.、6250mg/kg b.w.、9000mg/kg b.w.的剂量分别对10只sd大鼠(雌雄各半)经口灌胃染毒。染毒当天(第0天)染毒前、第7天称量体重和第14天称量体重。第0天染毒前、
染毒后大约20分钟、2小时和4小时分别进行详细症状观察，第1天至第 14天每天一次症状观察。所有染毒动物进行大体解剖。
[0157]
参照《消毒技术规范》(2002年版)以日本大耳白兔为试验动物，对消毒剂进行家兔急性皮肤刺激性/腐蚀性试验。使用3只雄性家兔用于试验，每天将试验样品原液 0.5ml均匀涂在3只动物的背部右侧皮肤上，左侧皮肤作为对照，不加试验样品，暴露时间4h。每天涂抹一次，连续涂抹14d。给药前1天和给药第1天，每天进行一次临床观察，之后在每次涂抹后24h进行临床观察。每天给药后24h观察给予试验样品部位的皮肤反应，并根据皮肤刺激反应评分标准进行评分。
[0158]
参照《消毒技术规范》(2002年版)以日本大耳白兔为试验动物，对消毒剂进行家兔急性眼刺激性/腐蚀性试验。使用3只雄性家兔用于试验，每只动物右眼给予0.1ml 试验样品，左眼作为对照。染毒后每天一次临床观察。在染毒后1h、24h、48h、72h 进行眼检查，计算每只动物在不同观察时间(24h、48h、72h)角膜损害、虹膜损害、结膜充血和结膜水肿四个方面的“平均评分”(即每只动物的24h、48h、72h评分之和除以观察数3)。分别以动物的眼角膜、虹膜和结膜充血、水肿的平均评分和恢复时间进行，按眼刺激反应分级标准判定试验样品对眼睛的刺激强度。
[0159]
结果如下：
[0160]
表9消毒剂安全性评价试验结果
[0161][0162][0163]
注：ld
50
为半数致死率，其单位为：mg/kg b.w.
[0164]
经口急性毒性试验中，所有实施例中第一组到第五组动物均未见死亡，部分实施例从第六组(6250mg/kg b.w.)开始出现动物死亡情况，根据95％置信区间计算，实施例2-实施例5中消毒剂对雌性小鼠和雄性小鼠的半数致死率均大于5000mg/kg b.w.，说明消毒剂无毒。
[0165]
皮肤刺激性中，所有试验动物在连续暴露14天后，未见皮肤损伤，说明无皮肤刺激。
[0166]
眼刺激性试验中，所有试验动物在染毒24h、48h、72h后，右眼角膜损害、虹膜损害、结膜充血、结膜水肿均未见，说明无眼刺激。