一种提高丽蝇蛹集金小蜂抗寒性的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种提高丽蝇蛹集金小蜂抗寒性的方法，具体涉及丽蝇蛹集金小蜂幼 虫的滞育、寄主滞育以及寄主饲料的调整。
【背景技术】
[0002] 膜翅目寄生蜂属寄生性天敌昆虫，其在农林业生产中发挥着不可替代的重要作 用，对田间害虫具有良好的防控效果。利用寄生蜂防治害虫不但有利于减少化学农药的使 用，保护环境，维持生态平衡和保护生物多样性，而且其扩繁和利用也是害虫可持续综合治 理的手段之一。
[0003]目前，存在于国内外天敌昆虫大规模生产中的关键问题如产品贮藏，长距离运输 及引入后定殖力等常是决定天敌昆虫能否成功应用的重要因素。昆虫在低温条件下提高其 抗寒性的能力可保证其正常越冬或在严寒条件下的存活。这一抗寒特性对延长天敌昆虫的 产品货架期，实现长距离运输以及提高天敌昆虫在新释放地的定殖能力等具有重要意义。
[0004] 丽蝇蛹集金小蜂Nasoniavitripennis(Walk.)属于膜翅目金小蜂科，是一种 蝇类的蛹期特异性寄生蜂，为世界广布型种类，主要分布在北美，欧洲及亚洲北部地区 (Wolschin and Gadau，2009)，可寄生多种蝇类，如丝光绿蝇、棕尾别麻蝇、黑尾黑麻蝇及巨 尾阿丽蝇等，对丽蝇科和麻蝇科种类的控制能力尤为显著（Whit ing，1967)。该蜂具有寄 主范围广，种群数量大，控制能力强，世代周期短并易于人工繁殖等许多优点，因此是一种 极具应用潜力的天敌昆虫。此外，金小蜂早在20世纪40年代就已成为理想的模式实验昆 虫，目前随着金小蜂基因组序列的测定完成，更为研究其他昆虫的生物学，生理学及遗传学 特性等提供了可能（The Nasoniagenome working group, 2010)。
[0005] 近年来，随着许多天敌昆虫包括寄生蜂在内的开发及应用，天敌昆虫工业化生产 中存在的许多问题逐渐成为限制其发展的瓶颈。研究寄生蜂的抗寒性，将为解决天敌昆虫 产品的贮藏，运输及应用等提供重要的技术方法参考。
【发明内容】
[0006] 针对现有技术中存在的问题，本发明提供了一种提高丽蝇蛹集金小蜂抗寒性的方 法，通过操控寄主及寄主饲料，如寄主滞育状态，寄主饲料添加外源潜在抗寒物质等处理措 施，实现丽蝇蛹集金小蜂抗寒性的提高，从而解决寄生蜂产品货架期短，不易长途运输及定 殖力低等问题。
[0007] 本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：
[0008] -种提高丽蝇蛹集金小蜂抗寒性的方法，该方法包括以下阶段：
[0009] 1)将寄主从成虫期开始调控饲养，对成虫饲养环境的每天光照时长、温度的组合 进行调控，饲养至产幼虫；
[0010] 2)对第1)阶段所产寄主幼虫调控饲养，对幼虫饲养环境的每天光照时长、温度的 组合进行调控，选取该阶段预定天数所形成的蛹作为滞育寄主；
[0011] 3)将丽蝇蛹集金小蜂从羽化成蜂期开始调控饲养，将成蜂置于黑暗条件下，对饲 养环境的温度进行调控，饲养预定天数；
[0012] 4)丽蝇蛹集金小蜂产卵时，选取第3)阶段成对雌雄成蜂，按照成蜂对与蝇蛹1:1 的比例接入置有第2)阶段所形成寄主蛹的容器内进行饲养；
[0013] 5)对第4)阶段饲养环境的每天光照时长、温度的组合进行调控，预定时间后除去 成蜂；将寄主蛹在相同条件下发育，至发育出丽蝇蛹集金小蜂幼虫。
[0014] 进一步，所述寄主采用麻蝇，所述第1)阶段中，将成虫置于25°C、光周期9L:iro条 件下饲养至产幼虫期，所述第2)阶段中，收集幼虫置于20°C、光周期8L: 16D条件下饲养，选 取进入滞育第20天的蝇蛹作为滞育寄主。
[0015] 进一步，所述丽蝇蛹集金小蜂的羽化成蜂，选择在室内25°C、光周期14L:10D条件 下以麻蝇作为寄主连续饲养形成的稳定世代。
[0016] 进一步，所述第3)阶段中，将羽化24h内的成蜂置于10°C黑暗条件下5-10天。
[0017] 进一步，所述第5)阶段中，寄主蛹的容器采用透明容器，将其置于25°C、光周期 14L: 10D条件下饲养；24h后除去成蜂。
[0018] 进一步，所述第1)阶段中，在寄主成虫期饲养饲料中添加l〇-l〇〇mg/g比例的外源 抗寒物质。
[0019] 进一步，所述饲料为经搅拌机搅拌的牛肝，选定的外源抗寒物质为丙氨酸，首先将 牛肝磨碎搅拌均匀，然后按照80mg/g的比例称取丙氨酸和牛肝，并混合搅拌均匀。
[0020] 进一步，所述饲料按照"10g/20头寄主幼虫"的比例饲养。
[0021] 采用上述技术特征的提高丽蝇蛹集金小蜂抗寒性的方法具有以下优点：
[0022] 通过该方法可显著提高丽蝇蛹集金小蜂的抗逆境胁迫能力，包括增加体重，降低 体内含水量，提高耐低温能力，从而实现延长天敌昆虫产品货架期，有助于天敌昆虫产品的 长距离运输，以及增强外来引入天敌昆虫的定殖能力等。
【附图说明】
[0023] 图1-4是不同寄主对不同发育态丽蝇蛹集金小蜂体重、含水量及过冷却点的影响 统计图（不同小写字母代表P〈〇. 05的差异显著性）；
[0024] 图5-8是不同寄主配合不同寄主饲料对滞育丽蝇蛹集金小蜂体重、含水量及过冷 却点的影响统计图（不同小写字母代表P〈〇. 05的差异显著性）。
【具体实施方式】
[0025] 为更进一步阐述本发明为达到预定技术目的所采取的技术手段及功效，以下结合 附图和较佳实施例，对本发明的结构、工作流程详细说明如下。
[0026] 昆虫的抗寒性受诸多生物和非生物因子的影响，如营养，休眠状态及外部环境因 子等。在温带地区生活的许多昆虫通常会选择进入滞育进行越冬，滞育是一种发育抑制状 态常常伴随着昆虫抗寒性的提高。寄主作为寄生蜂最重要的营养来源，可对寄生蜂的生物 学、生理学及其他表观学等产生显著影响。寄主及其寄主饲料的变化也有可能通过改变寄 生蜂的生理和生化状态从而影响其抗寒性。因此，通过操控昆虫的发育状态，寄主发育状态 及寄主饲料等，或可实现对昆虫抗寒性的控制，从而为天敌昆虫生物防治产业提供技术支 持。
[0027] 本发明所描述的一种提高丽蝇蛹集金小蜂抗寒性的方法，该方法包括以下阶段：
[0028] 1)将寄主从成虫期开始调控饲养，对成虫饲养环境的每天光照时长、温度的组合 进行调控，饲养至产幼虫；
[0029] 2)对第1)阶段所产寄主幼虫调控饲养，对幼虫饲养环境的每天光照时长、温度的 组合进行调控，选取该阶段预定天数所形成的蛹作为滞育寄主；
[0030] 3)将丽蝇蛹集金小蜂从羽化成蜂期开始调控饲养，将成蜂置于黑暗条件下，对饲 养环境的温度进行调控，饲养预定天数；
[0031] 4)丽蝇蛹集金小蜂产卵时，选取第3)阶段成对雌雄成蜂，按照成蜂对与蝇蛹1:1 的比例接入置有第2)阶段所形成寄主蛹的容器内进行饲养；
[0032] 5)对第4)阶段饲养环境的每天光照时长、温度的组合进行调控，预定时间后除去 成蜂；将寄主蛹在相同条件下发育，至发育出丽蝇蛹集金小蜂幼虫。
[0033] 上述寄主采用麻蝇，所述第1)阶段中，将成虫置于25°C、光周期9L:1?条件下饲 养至产幼虫期，所述第2)阶段中，收集幼虫置于20°C、光周期8L: 16D条件下饲养，选取进入 滞育第20天的蝇蛹作为滞育寄主。
[0034] 上述丽蝇蛹集金小蜂的羽化成蜂，选择在室内25°C、光周期14L:10D条件下以麻 蝇作为寄主连续饲养形成的稳定世代。
[0035] 上述第3)阶段中，将羽化24h内的成蜂置于10°C黑暗条件下5-10天。
[0036] 上述第5)阶段中，寄主蛹的容器采用透明容器，将其置于25°C、光周期14L:10D条 件下饲养；24h后除去成蜂。
[0037] 上述第1)阶段中，在寄主成虫期饲养饲料中添加10-100mg/g比例的外源抗寒物 质。
[0038] 上述饲料为经搅拌机搅拌的牛肝，选定的外源抗寒物质为丙氨酸，首先将牛肝磨 碎搅拌均匀，然后按照80mg/g的比例称取丙氨酸和牛肝，并混合搅拌均匀。
[0039] 上述饲料按照"10g/20头寄主幼虫"的比例饲养。
[0040] 本发明所做实验
[0041] 针对本发明提高丽蝇蛹集金小蜂抗寒性方法的确定，申请人做了以下实验，本发 明的各个阶段均可以从以下实验中得到验证。
[0042] 实验1:金小蜂滞育及寄主滞育状态对金小蜂抗寒性的影响。
[0043] 材料与方法
[0044] 1. 1供试虫源及饲养方法：
[0045] 寄主麻蝇Sarcophagacrassipalpis为本实验室室内世代饲养的种群，饲养方法 如前人所述Oenlinger，1972)。非滞育的麻蝇蛹于25°C、光周期15L :9D条件下饲养得到， 选取化蛹第4d的非滞育蝇蛹作为供试非滞育寄主。滞育的麻蝇蛹通过将成虫于25°C、光周 期9L:1?条件下饲养至产幼虫期，然后收集幼虫并将其转移至滞育条件下（20°C、光周期 8L:16D)饲养得到，选取进入滞育第20天的蝇蛹作为供试滞育寄主。
[0046] 金小蜂采自中国农科院廊坊实验基地，并在实验室内25°C，光周期14L:10D条件 下以麻蝇S. crassipalpis作为寄主连续饲养形成稳定世代后用于后续实验。非滞育金小 蜂通过将羽化24h内的成蜂对与蝇蛹按照1:1的比例置于玻璃管（30X 100cm)内24h后， 除去成蜂，并将寄生过的蝇蛹饲养在原条件下得到，选取产卵后发育6天的末龄金小蜂幼 虫作为供试非滞育虫源。滞育金小蜂幼虫通过将羽化24h内的成蜂置于10°C黑暗条件下 5-10天，从第5天开始，每天取成对金小蜂成蜂按照1:1的比例接入置有麻蝇蛹的玻璃管 内，然后将其置于25°C、光周期14L: 10D条件下饲养，24h后除去成蜂，寄生过的蝇蛹继续在 此条件下发育，至产卵后的第17天（25°C下金小蜂由卵发育至末龄幼虫需6-7天，滞育金小 蜂发育至末龄幼虫后将停留在幼虫期不再继续发育，产卵后的第17天为金小蜂幼虫进入 滞育的第10天），选取金小蜂幼虫作为供试滞育虫源。
[0047] 1. 2实验设计
[0048] 设两因素四水平的重复性实验，以非滞育和滞育的蝇蛹寄主分别饲养得到非滞育 和滞育的金小蜂，测定金小蜂自身滞育及寄主滞育对金小蜂抗寒性的影响。实验中所用供 试寄主及金小蜂如1. 1所述。
[0049] 1. 3金小蜂体重和含水量的测定
[0050] 鲜重：用超微量电子天平（Mettler UMT