一种台湾牛樟无性繁殖技术的制作方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及农业生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种台湾牛樟无性繁殖技术。
【背景技术】
[0002]■墻X Cinnamomum kanehirae ZfejO,又名黑樟,为樟科樟属植物,原产台湾。主要分布于亚热带和热带交界处的天然阔叶林带，其植物组成主要以樟科及壳斗科为主，植物生态学上称为樟栎群落。树干通直、树体高耸及初生叶颜色多变，深具观赏价值，是极具发展潜力的景观树种。其果实呈僧帽状，木材以含松油醇为主，具有特殊的香味，且不易腐朽，材质细致，纹理交错，且刨削容易，为高价值的家具及木刻艺品用材，一直是台湾雕刻神像的最佳素材。牛樟因树型粗壮坚实而得名，与榉木、红豆杉、桧木、红桧木及肖楠并称六大名木。并与台湾榉、乌心石、毛柿及黄连木合称台湾产阔叶五大木。此外，部分牛樟树头结瘤，其横断面生成不同形状之疤痕(如猫蹄形、山水形等)，俗称花樟，极具装饰价值，其自从发现牛樟芝仅存在于老龄牛樟树树干腐朽的心材内壁，或者存在于枯死倒伏的牛樟木材阴暗潮湿的表面，而不会生长在一般樟树、白樟、阴阳木等类似树种上，因而牛樟树木价格上涨，有时更是一木难求。
[0003]目前牛樟天然林因往昔的过度开发以及人为盗伐，仅分布在交通不便之高海拔地区，且多为高龄老树，结实量少，母树甚为分散，授粉极为不易，种子的采集也是一项困难工作，因树体高大不易攀爬，即便获得种子，其发芽率也不高。台湾特有的牛樟树已经瀬临灭绝危机，已经被台湾当局列为一级保育类树种。近年来，由于内地多地引种台湾牛樟，造成市场上台湾牛样苗木供不应求的局面。本发明以台湾牛樟带腋芽茎段为外植体，通过外植体消毒、诱导培养、增殖培养、生根培养、炼苗移栽等过程成功获得了台湾牛样离体再植株，建立台湾牛樟组织培养快速繁殖技术体系，对加快这一优良景观树种在内地应用具有重要的促进作用。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于提供出一种台湾牛樟无性繁殖技术，本发明以台湾牛樟带腋芽茎段为外植体，通过外植体消毒、诱导培养、增殖培养、生根培养、炼苗移栽等过程成功获得了台湾牛样离体再植株，建立台湾牛樟组织培养快速繁殖技术体系，从而实现了本发明的目的。
[0005]本发明的一种台湾牛樟无性繁殖技术，包括以下的步骤:
(I)外植体消毒:选取牛樟当年生，半木质化，生长健壮、无病虫害的带芽茎段于流水下冲洗I?3h，浸泡于3%?5%洗衣粉溶液5?10分钟，用软毛刷3%?5%洗衣粉溶液轻轻刷洗材料，再用自来水以滴水的形式冲洗60?90min。在超净工作台中以70%?80%乙醇溶液浸泡20?60s,无菌水冲洗3?5次,再用0.1%?0.5%升萊溶液消毒5?15min,然后用无菌水冲洗外植体至无泡沫为止。用无菌滤纸吸干表面的水分后备用。
[0006](2)诱导培养:剪取步骤(I)获得的外植体的带芽茎段并接种到诱导培养基进行不定芽诱导培养。接种后置于每天光照12?14小时，光照强度为1000?15001x，置于培养温度为25?28°C，空气相对湿度为75%?80%的条件下培养30天后统计诱导情况。
[0007](3)增殖培养:转接步骤(2)诱导培养得到的不定芽接至增殖培养基进行不定芽增殖培养。接种后置于每天光照12?14小时，光照强度为1000?20001χ，置于培养温度为25?28°C，空气相对湿度为75%?80%的条件下培养45天后统计增殖情况。
[0008](4)生根培养:从基部切取步骤(3)增殖培养中获的不定芽并以垂直方式插入至生根培养基中进行诱导生根。接种后置于每天光照12?14小时，光照强度为2000?30001x,置于培养温度为25?28°C，空气相对湿度为75%?80%的条件下培养30天后统计生根情况。
[0009](5)炼苗移栽:将生根培养基上获得的具备移栽条件的瓶苗进行炼苗，瓶苗移至常温下4?5天后，打开瓶盖2?3天，然后洗去附着于苗根系上的培养基，移栽至盛有由泥炭土:蛭石=1:1组成的移栽培养基质的容器袋中进行培养，移栽前5天用0.3%?0.5%高猛酸钾溶液对基质喷淋消毒并加盖薄膜，3天后打开薄膜，翻动基质，移栽前I天将基质淋透水。移栽时需将基质压实，并进行单株套袋，早晚喷雾，保证生长环境潮湿。移栽7天后剪去塑料袋两角，14天后完全脱袋移栽，移栽30天后统计成活率。
[0010]上述步骤(2)所述的诱导培养基为:WPM+0.1?1.0mg/L IBA+1.0?3.0mg/L6-BA+15 ?30g/L 蔗糖 +3.5 ?6.0g/L 琼脂，pH 为 5.4 ?5.8。
[0011]上述步骤(3 )所述的增殖培养基为:WPM+1.0?5.0mg/L6-BA+0.1?0.5mg/LIBA+15 ?30g/L 蔗糖 +3.5 ?6.0g/L 琼脂 +1.0 ?5.0g/L 蛋白胨，pH 为 5.4 ?5.8。
[0012]上述步骤(4)所述的生根培养基为:WPM+1.0?3.0mg/L ΙΒΑ+0.1?1.0mg/LΝΑΑ+0.1 ?0.5mg/L KT+15 ?30g/L 蔗糖 +3.5 ?6.0g/L 琼脂，pH 为 5.4 ?5.8。
[0013]本发明的优点是:一种台湾牛樟无性繁殖技术，牛樟(Cinnamomum kanehiraeHay)为樟科樟属植物，为台湾特有常绿阔叶大乔木，树干通直、树体高耸及初生叶颜色多变，深具观赏价值，是一种极具发展潜力的景观树种。以台湾牛樟带腋芽茎段为外植体，通过外植体消毒、诱导培养、增殖培养、生根培养、炼苗移栽等过程成功获得了台湾牛樟离体再植株，建立台湾牛樟组织培养快速繁殖技术体系，对加快这一优良景观树种在内地应用具有重要的促进作用。
【具体实施方式】
[0014]以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。
[0015]实施例1
(I)外植体消毒:选取牛樟当年生，半木质化，生长健壮、无病虫害的带芽茎段于流水下冲洗lh，浸泡于3%洗衣粉溶液5分钟，用软毛刷3%洗衣粉溶液轻轻刷洗材料，再用自来水以滴水的形式冲洗60min。在超净工作台中以75%乙醇溶液浸泡45s，无菌水冲洗3次，再用0.1%升汞溶液消毒5min，然后用无菌水冲洗外植体至无泡沫为止，用无菌滤纸吸干表面的水分后备用。
[0016](2)诱导培养:剪取步骤(I)获得的外植体的带芽茎段并接种到诱导培养基进行不定芽诱导培养。接种后置于每天光照13小时，光照强度为ΙΟΟΟΙχ，置于培养温度为25°C，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后诱导率为87.9%。所述的诱导培养基为:ffPM+0.3mg/L IBA+1.5mg/L 6_BA+25g/L 蔗糖 +4.5g/L 琼脂，pH 为 5.5。
[0017](3)增殖培养:转接步骤(2)诱导培养得到的不定芽接至增殖培养基进行不定芽增殖培养。接种后置于每天光照12小时，光照强度为ΙΟΟΟΙχ，置于培养温度为25°C，空气相对湿度为75%的条件下培养45天后增殖系数为3.2。所述的增殖培养基为:WPM+3.0mg/L6-BA+0.3mg/L IBA+23g/L 蔗糖 +4.5g/L 琼脂 +2.0g/L 蛋白胨，pH 为 5.5。
[0018](4)生