一种获得羽衣甘蓝耐寒植株的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种获得羽衣甘蓝耐寒突变体植株的方法，属于植物培育技术领域。 技术背景
[0002] 观赏羽衣甘蓝（Brassicaoleraceavar.acephalaf.tricolorHort.)是十字花 科芸薹属甘蓝种的一个变种，原产欧洲地中海至北海沿岸，两年生草本植物，观叶为主，其 叶片形态美观多变，心叶色彩绚丽如花，园艺品种形态多样。在华东地区观赏羽衣甘蓝是 深秋、冬季和早春观赏的首选花卉，具有较高的观赏价值和经济效益。在北方广大地区，羽 衣甘蓝只能秋季和春季观赏栽培，冬季的低温和冰冻是羽衣甘蓝在北方栽培的主要障碍， 尤其是皱叶品种的羽衣甘蓝耐寒性相对较差，在冬季低温来临时冻害严重，制约了品种的 进一步推广应用。因此获得耐寒性较强的羽衣甘蓝品种，扩大羽衣甘蓝推广种植地区和延 长观赏时间，是很有必要性的。
【发明内容】
[0003] 为了克服现有技术的不足，本发明的目的是提供一种获得具有较强抗寒性、观赏 性状优良的羽衣甘蓝植株的方法，该方法能显著缩短培育时间，获得的耐寒植株新品系能 扩大羽衣甘蓝种植区域。
[0004] 为实现上述目的，本发明采取的技术方案如下：
[0005] 获得羽衣甘蓝耐寒植株的方法，步骤为：
[0006] (1)、羽衣甘蓝播种育苗，然后选取8-10片叶、生长健壮旺盛无病虫害的幼苗；
[0007] (2)、选取的幼苗均匀喷施浓度为0.1-0. 15%，pH值=7的硫酸二乙酯溶液进行初 次诱变，每株幼苗喷施量为8-10mL ;
[0008](3)、把喷施硫酸二乙酯溶液的幼苗移入15_20°C的光照培养箱内内生长一周，重 复步骤（2)的喷施步骤；
[0009](4)、把喷施过两次诱变剂溶液的幼苗植株移入1-5°C的光照培养箱内生长10-12 天，然后移入15-20°C的光照培养箱内内生长3-4天；
[0010] (5)、选取褐变、萎蔫和畸形部分占整个幼苗植株比列小于25%的植株，取每一株 幼苗上部位一致或相近的无损伤叶片，用于抗寒生理指标的测定，测定叶片内丙二醛，过氧 化物酶和游离脯氨酸的含量，选取12-15个幼苗单株，要求丙二醛含量低，而过氧化物酶和 游离脯氨酸含量高；（具体而言是丙二醛含量低于对照组5倍以上，而过氧化物酶和游离脯 氨酸含量高于对照组50%以上）；
[0011] (6)将选出的幼苗露地栽培，在田间自然越冬，在一年中最冷的时候，在每个植株 的心叶部位采取叶片（取一致或相近部位的叶片），测定丙二醛、过氧化物酶和游离脯氨酸 的含量；选取3-5个最优秀的突变体单株，花期套袋，自交结实。种荚变黄褐色时，收获种 子；选择突变体单株的依据是叶片中丙二醛含量低，而过氧化物酶和游离脯氨酸含量高，结 合田间观赏性状优良；（具体而言是丙二醛含量低于对照7倍以上，而过氧化物酶和游离脯 氨酸含量高于对照70%以上）；
[0012] (7)上述植株收获的种子和对照一起播种育苗，在75-80天苗龄时选取旺盛健壮 生长一致的植株，放入-10~-5°C的低温光照培养箱内处理3-4天，后移入5_10°C的光照 培养箱内内生长一周左右，没有冻害现象发生，对照植株有不同程度的冻害发生。选取每个 植株心叶部位的叶片（取一致或相近部位的叶片），测定丙二醛，过氧化物酶和游离脯氨酸 的含量。结果显示诱变植株丙二醛含量低于对照植株10倍以上，而诱变植株的过氧化物酶 (P0D)和游离脯氨酸分别比对照的植株增加120%和95%以上。
[0013] 发明人通过化学试剂（硫酸二乙酯）诱变结合低温处理，获得观赏性状优良、抗寒 性较强的突变体植株，且突变体植株的抗寒性能稳定遗传给后代，拓宽了羽衣甘蓝推广种 植的地域范围。
[0014] 丙二醛、过氧化物酶（P0D)和游离脯氨酸是鉴定植株抗寒性的重要指标，耐寒性 强的品种在低温条件下植株体内的丙二醛含量较低，而过氧化物酶（P0D)和游离脯氨酸含 量较高。本发明通过生理指标测定和田间观察品比及耐寒性鉴定，证实本发明获得的观赏 羽衣甘蓝新株系比常规育种获得新品种耐寒性大大提高。
【具体实施方式】
[0015] 以下将结合实施例具体说明本发明的技术方案，在以下实施例中所使用的观赏羽 衣甘蓝材料，红色皱叶羽衣甘蓝为经市售获得，化学试剂硫酸二乙酯为市售获得。
[0016] 实施例1
[0017] 获得羽衣甘蓝耐寒植株的方法，步骤如下：
[0018] (1)、8月初羽衣甘蓝播种育苗，可以采用营养钵或花盆育苗（既方便处理幼苗，又 能保证足够的营养生长空间），选取8-10片叶，生长健壮旺盛无病虫害的幼苗600株。
[0019] (2)组别设置：共设置6组，其中5组为实验组，另一组为对照组，每组100株；
[0020] 实验组：喷施硫酸二乙酯（DES，诱变剂）溶液（pH值=7)，每组浓度分别是，A组： 0.05% ;B 组：0? 1% ;C 组：0? 15% ;D 组：0.2% ;E 组：0.25%;
[0021] 对照组：喷施8-10ml清水；
[0022] 实验组和对照组的喷施用量以每个植株全株叶面均湿润为宜（每株幼苗喷施量 为 8-10ml) 〇
[0023] (3)、把实验组和对照组的幼苗移入15-20°C的光照培养箱内内生长一周左右。观 察发现实验组E浓度处理的幼苗65%死亡，剩余幼苗多数植株叶片畸形；D浓度处理的幼苗 52%死亡，20%植株叶片畸形；C浓度处理幼苗37%死亡，14%植株叶片畸形；B浓度处理幼 苗24%死亡，9%植株叶片畸形；A浓度处理幼苗11 %死亡，5%植株叶片畸形。对照幼苗生 长正常。
[0024] (4)、重复步骤（2)。
[0025](5)、把经过步骤（2)第二次喷施的实验组和对照组的植株移入1_5°C的光照培养 箱内生长10-12天，然后移入15-20°C的