大白花杜鹃无菌苗菌根化技术的制作方法
【技术领域】
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[0001]本发明涉及一种大白花杜鹊(Rhododendron decorum)无菌苗菌根化方法，特别是一种将大白花杜鹃和真菌共培养形成菌根苗的方法。，属于植物和真菌共生形成菌根的生物技术领域。
【背景技术】
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[0002]大白花杜鹊(Rhododendron decorum)属于杜鹊花科杜鹊花属植物。其树姿优美，花色洁白，味清香，集观赏与食用价值于一身，在杜鹃花栽培过程中，杜鹃花极易因根系不发达而导致植株死亡，所以在引种驯化和产业化过程中，杜鹃花由于根系差而影响营养生长和株型，导致质量下降的情况屡见不鲜。
【发明内容】
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[0003]本发明的目的是提供大白花杜鹊(Rhododendron decorum)无菌苗菌根化方法，使之形成发达根系，提高植株成活率，保证在栽培过程中植株能够正常生长，为提高杜鹃花商品质量提供理论指导和技术支撑。
[0004]为了实现本发明的目的，本发明提供了如下的技术方案:
[0005]大白花杜鹃无菌苗菌根化技术，其特征在于先选取大白花杜鹃的种子进行无菌苗的培育，再接种菌粒的培养，最后加入菌粒和杜鹃类接种菌剂建立一个共培养体系，用于菌根苗的合成。，
[0006]取健康、饱满的大白花杜鹃种子先用无菌水冲洗后，再采用0.1%升汞溶液进行表面消毒3-5分钟，然后无菌水冲洗7-8遍，放入灭菌的培养皿中进行萌发。
[0007]从已纯化的菌种中挑取的菌丝加入液体真菌培养基中，养基为马铃薯葡萄糖培养基(PDA):200g/l去皮马铃薯+20g/l葡萄糖+3g/l磷酸二氢钾+1.5g/l硫酸镁+10mg/l维生素ΒρρΗδ.8 ;封口后放于国产回旋振荡器HY-5中，在黑暗，21-25°C条件下培养一个月得到用于接种的菌粒。
[0008]待无菌苗发芽长出两片真叶后，无菌条件下将其移栽至装有0.5%水琼脂的培养瓶中，然后加入菌粒，同时倒入液体真菌培养基，PH自然，培育菌根苗合成，培养菌根苗合成10天后，即可取小苗根系观察菌根的形成情况。
[0009]所述种子发芽、接种菌剂培养及菌根苗合成的温度为20_25°C，湿度30-45%，光照条件为自然光2000-2500LUX+人工辅助光1500-2000LUX。
[0010]一种大白花杜鹃无菌苗菌根化技术组培繁殖及菌根苗合成方法，其特征在于选取健康、饱满的大白花杜鹃种子，先用无菌水冲洗后，再采用0.1%升汞溶液进行表面消毒3-5分钟，然后无菌水冲洗7-8遍，放入灭菌的培养皿中进行萌发；
[0011 ] 从已纯化的菌种中挑取一定量的菌丝加入液体真菌培养基中，封口后放于国产回旋振荡器HY-5中，在黑暗，21-25°c条件下培养一个月得到用于接种的菌粒；
[0012]待无菌苗发芽长出两片真叶后，无菌条件下将其移栽至装有0.5%水琼脂的培养瓶中，然后加入菌粒，同时倒入少量液体真菌培养基，从而建立了一套完整的共培养体系，用于合成菌根苗；培养10天后即可取小苗根系来观察菌根的形成情况。
[0013]本发明技术方案的提出是基于下述的研究基础:大白花杜鹃具很高的观赏和食用价值。杜鹃花为须根系，在栽培过程中极易因根系不发达影响营养生长和株型，导致质量下降甚至植株死亡。但是杜鹃花在生长过程中会与真菌形成一种互惠共生体，即菌根。菌根可以促进杜鹃花对水和营养物质的吸收，从而增强植物生存竞争的能力和耐性，使植物在恶劣条件下仍能存活。为提高杜鹃花引种驯化的成功率，培养出根系发达的高品质商品，推动我国花卉产业的发展，需要进行大白花杜鹃和真菌的菌根合成培养实验，摸索出合适的培养条件，并形成一套专门的菌根合成技术体系。
[0014]由于大白花杜鹃花种子苗的根系生长初期较细弱，易导致吸收水分和营养的能力不佳，本发明的优点在于:
[0015]1.通过接种菌根真菌，使幼苗根系发达，促进水分和营养吸收，为营养生长奠定良好的基础。
[0016]2.菌根苗在生存竞争能力和耐性方面远优于未形成菌根的植株，从而保证了植株的正常生长。
[0017]3.菌根苗的营养生长得到改善，可以极大地提高杜鹃花作为商品的质量和价格，为花卉产业化提供理论依据和技术支持。
[0018]本发明试验程序简便易行，杜鹃花无菌种子苗接种菌根真菌后，最快的在第5天即可培养出菌根苗，一个月后90%以上的杜鹃花苗根系可以形成菌根，极大地提高了幼苗菌根化的程度，增强了幼苗吸收营养水分的能力和恶劣条件下的耐性，为其健康生长提供了保证。
【具体实施方式】
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[0019]以下实施例用来进一步说明本发明的实质性内容。根据本发明技术方案和实施例的描述，也许同领域技术人员在本发明的基础上还可以对本发明技术方案进行一些修改和改进。因此，在不偏离本发明主要技术方案基础上所做的修改和改进，均应属于本发明所要求保护的范围。
[0020]大白花杜鹃无菌苗菌根化技术，包括无菌苗的培育、菌剂的培养及菌根苗的合成步骤，其特征在于取健康、饱满的大白花杜鹃种子，无菌条件下进行萌发；培养菌剂的培养基为马铃薯葡萄糖培养基(PDA):200g/l去皮马铃薯+20g/l葡萄糖+3g/l磷酸二氢钾+1.5g/l硫酸镁+10mg/l维生素B1, ρΗ5.8 ;培育菌根苗的培养基为0.5%的水琼脂，pH自然。
[0021]所述种子消毒先用无菌水冲洗后，再用0.1%升汞溶液进行表面消毒3-5分钟，然后无菌水冲洗7-8遍，放入灭菌的培养皿中。
[0022]所述液体菌剂培养采用液体真菌培养基，放于国产回旋振荡器HY-5中，在黑暗，21-25 °C条件下培养一个月。
[0023]所述合成培养方法为将长出两片真叶的无菌苗移栽至装有0.5%水琼脂的培养瓶中，然后加入菌粒，同时倒入少量液体真菌培养基。
[0024]所述种子发芽和菌根苗合成的温度为20-25°C，湿度30-45%，光照条件为自然光2000-2500LUX+ 人工辅助光 1500-2000LUX。
[0025]本发明的方法可具体描述为:选取健康、饱满的大白花杜鹃种子，先用无菌水冲洗后，再采用0.1 %升汞溶液进行表面消毒3-5分钟，然后无菌水冲洗7-8遍，放入灭菌的培养皿中进行萌发；从已纯化的菌种中挑取少量的菌丝加入液体真菌培养基中，封口后放于国产回旋振荡器HY-5中，在黑暗，21-25°C条件下培养一个月得到菌粒；待无菌苗发芽长出两片真叶后，无菌条件下将其移栽至装有0.5%水琼脂的培养瓶中，然后加入菌粒，同时倒入