一种达乌里芯芭组织培养繁育方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种植物繁殖方法，特别是一种达乌里芯芭组织培养繁育方法。
【背景技术】
[0002]达乌里芯色Cymbaria dahurica L.，为玄参科芯色属植物，也称大黄花、白蒿茶，蒙药名“阿拉坦-阿给”，是蒙医专用药芯芭的基源植物之一，多生于海拔620-110米之间的荒漠草原及山地草原上，主要分布于内蒙古、黑龙江、河北等地。全草入药，具有燥“协日乌素”，清热，祛风湿、利尿、止血等功效，用于治疗风湿关节炎、吐血、衄血、便血、外伤出血、肾炎水肿、黄水疮等症。
[0003]目前，市场上的芯芭药材主要来自野生资源，随着其药用价值的提高，市场对药材的需求量增大，导致达乌里芯芭被过渡采挖，野生资源蕴藏量也日趋减少，资源濒临枯竭。虽然近年来国内外对蒙药的关注不断增加，蒙药芯芭也引起了诸多学者的重视，研究报道不断增加，但主要集中在资源分布、定性鉴别、化学成分及药理作用研究上。到目前为止，针对芯芭的人工种植、种苗繁育技术的相关研究未见报道。达乌里芯芭一般通过种子进行繁殖，但在初步的种苗繁育工作中发现，达乌里芯芭的种子繁殖存在发芽率低、发芽不整齐、种苗质量不稳定等问题，严重制约了达乌里芯芭的规范化种植和生产。采用生物技术组织培养技术，可以有效快速地提高达乌里芯芭种苗的繁殖速度和质量，实现达乌里芯芭优质种苗的工厂化育苗，以满足生产上的需要。
【发明内容】
[0004]本发明的目的是提供一种达乌里芯芭组织培养繁育方法，它能够快速繁殖出大量适合移栽的优良达乌里芯芭种苗、满足生产需要。
[0005]本发明通过以下技术方案达到上述目的:一种达乌里芯芭组织培养繁育方法，其特征在于:该方法包括以下步骤:
[0006](I)外植体的选择与消毒:取达乌里芯芭饱满果实，剥去果皮后取出种子作为外植体，依次用2v/v%洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15_30min、添加了 2_3滴吐温-20的100毫升0.1?八％升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3_5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到无菌外植体；
[0007](2)外植体初代诱导获得无菌试管苗:将步骤⑴得到的无菌外植体接种到MS培养基中，在培养温度为23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为8_10小时/天的条件下培养45天得到无菌试管苗，其中MS培养基中添加1.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6_BA、0.lmg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8 ;
[0008](3)试管苗丛生芽快速繁殖培养:将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为8_10小时/天的条件下培养75天得到试管苗丛生芽，其中MS繁殖培养基中添加0.5-2.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、
0.1-ο.3mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1-1.0mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。
[0009]本发明的突出优点在于:
[0010](I)采用生物技术对达乌里芯芭进行组织培养快速繁殖，通过达乌里芯芭丛生芽的繁殖，能够在短时间内培育出大量适合栽培种植的达乌里芯芭幼苗，保障达乌里芯芭种苗的增殖系数和种苗质量，实现规模化生产，满足生产上的需要。
[0011](2)采用本发明得到的达乌里芯芭丛生芽增殖系数达到15-25倍，丛生芽健壮，接种到生根培养基后容易生根。
【具体实施方式】
[0012]下面结合实施例对本发明的技术方案进一步说明。
[0013]实施例1
[0014]本发明所述的达乌里芯芭的组织培养快速繁殖方法的一个实例，包括以下步骤:
[0015](I)外植体的选择与消毒:取达乌里芯芭饱满果实，剥去果皮后取出种子作为外植体，将外植体依次用2v/v%洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15_30min、添加入2-3滴吐温-20的100毫升0.lv/v%升萊消毒8_10min、无菌水冲洗3_5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到无菌外植体；
[0016](2)外植体初代诱导获得无菌试管苗:将步骤⑴得到的无菌外植体接种到MS培养基中，在培养温度为23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为8_10小时/天的条件下培养45天得到无菌试管苗，其中MS培养基中添加1.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6_BA、0.lmg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8 ;
[0017](3)试管苗丛生芽快速繁殖培养:将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为8_10小时/天的条件下培养75天得到试管苗丛生芽，其中MS繁殖培养基中添加0.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6_BA、0.1mg/L的吲哚乙酸IAA,0.lmg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，生长倍率为7.0倍，丛生芽增殖系数为15.5。
[0018]实施例2
[0019]本发明所述的达乌里芯芭的组织培养快速繁殖方法的另一个实例，包括以下步骤:
[0020](I)外植体的选择与消毒:取达乌里芯芭饱满果实，剥去果皮后取出种子作为外植体，将外植体依次用2v/v%洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15_30min、添加入2-3滴吐温-20的100毫升0.lv/v%升萊消毒8_10min、无菌水冲洗3_5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到无菌外植体；
[0021](2)外植体初代诱导获得无菌试管苗:将步骤⑴得到的无菌外植体接种到MS培养基中，在培养温度为23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为8_10小时/天的条件下培养45天得到无菌试管苗，其中MS培养基中添加1.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6_BA、0.lmg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8 ;
[0022](3)试管苗丛生芽快速繁殖培养:将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为8_10小时/天的条件下培养75天得到试管苗丛生芽，其中MS繁殖培养基中添加1.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.3mg/L的吲哚乙酸IAA,0.lmg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，生长倍率为18.1倍，丛生芽增殖系数为20.5。
[0023]实施例3
[0024]本发明所述的达乌里芯芭的组织培养快速繁殖方法的再一个实例，包括以下步骤:
[0025](I)外植体的选择与消毒:取达乌里芯芭饱满果实，剥去果皮后取出种子作为外植体，将外植体依次用2v/v%洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15_30min、添加入2-3滴吐温-20的100毫升0.lv/v%升萊消毒8_10min、无菌水冲洗3_5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到无菌外植体；
[0026](2)外植体初代诱导获得无菌试管苗:将步骤⑴得到的无菌外植体接种到MS培养基中，在培养温度为23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为8_10小时/天的条件下培养45天得到无菌试管苗，其中MS培养基中添加1.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6_BA、0.lmg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8 ;
[0027](3)试管苗丛生芽快速繁殖培养:将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为8_10小时/天的条件下培养75天得到试管苗丛生芽，其中MS繁殖培养基中添加1.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.3mg/L的吲哚乙酸IAA,0.5mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为
5.8，生长倍率为15.8倍，丛生芽增殖系数为19.2。
[0028]实施例4
[0029]本发明所述的达乌里芯芭的组织培养快速繁殖方法的又一个实例，包括以下步骤:
[0030](I)外植体的选择与消毒:取达乌里芯芭饱满果实，剥去果皮后取出种子作为外植体，将外植体依次用2v/v%洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15_30min、添加入2-3滴吐温-20的100毫升0.lv/v%升萊消毒8_10min、无菌水冲洗3_5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到无菌外植体；
[0031](2)外植体初代诱导获得无菌试管苗:将步骤⑴得到的无菌外植体接种到MS培养基中，在培养温度为23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为8_10小时/天的条件下培养45天得到无菌试管苗，其中MS培养基中添加1.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6_BA、0.lmg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8 ;
[0032](3)试管苗丛生芽快速繁殖培养:将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为8_10小时/天的条件下培养75天得到试管苗丛生芽，其中MS繁殖培养基中添加2.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6_BA、0.3mg/L的吲哚乙酸IAAU.0mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，生长倍率为20.3倍，丛生芽增殖系数为24.5。
【主权项】
1.一种达乌里芯芭组织培养繁育方法，其特征在于:该方法包括以下步骤: (1)外植体的选择与消毒:取达乌里芯芭饱满果实，剥去果皮后取出种子作为外植体，依次用2v/v%洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15_30min、添加了 2_3滴吐温-20的100毫升0.1￥八％升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到无菌外植体 (2)外植体初代诱导获得无菌试管苗:将步骤(I)得到的无菌外植体接种到MS培养基中，在培养温度为23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为8_10小时/天的条件下培养45天得到无菌试管苗，其中MS培养基中添加1.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6_BA、0.lmg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8 ; (3)试管苗丛生芽快速繁殖培养:将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为8-10小时/天的条件下培养75天得到试管苗丛生芽，其中MS繁殖培养基中添加0.5-2.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、.0.1-ο.3mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1-1.0mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。
【专利摘要】一种达乌里芯芭组织培养繁育方法，包括如下步骤：(1)取达乌里芯芭种子作为外植体进行消毒；(2)将消毒后的外植体置于MS基本培养基中诱导得到无菌试管苗；(3)将所述无菌试管苗置于MS繁殖培养基中进行试管苗快速繁殖培养获得丛生芽。采用本发明得到的达乌里芯芭丛生芽增殖系数达到15-25倍，能够在短时间内提供成活率高的达乌里芯芭优质种苗，有效解决达乌里芯芭的规模化育苗问题。
【IPC分类】A01H4/00
【公开号】CN105145371
【申请号】CN201510658610
【发明人】韦坤华, 李旻辉, 李林轩, 徐建平, 缪剑华, 张乐, 朱虹, 韦莹, 肖冬, 李翠, 王一诺
【申请人】广西壮族自治区药用植物园
【公开日】2015年12月16日
【申请日】2015年10月12日