一种伞房花耳草茎段成苗的快速繁殖方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种植物繁殖方法，特别是一种伞房花耳草茎段成苗的快速繁殖方法。
【背景技术】
[0002]伞房花耳草，拉丁学名Oldenlandia corymbosa L.，又名蛇舌草、水线草，为茜草科耳草属植物，分布于我国南方各省，产量较大，其干燥全草入药，药材中含有多种三萜类化合物，其中乌索酸含量最高，为其主要活性成分。药理研究发现，乌索酸具有抗肿瘤、抗肝炎、抗病毒、抑菌等多种药理作用，具有重要的开发应用价值。目前伞房花耳草药材及种苗主要来源于野生资源，还没有人工繁育及人工种植技术的报道。
【发明内容】
[0003]本发明的目的是提供一种伞房花耳草茎段成苗的快速繁殖方法，它能够提高伞房花耳草种苗的繁殖速度和质量，实现伞房花耳草优质种苗的工厂化育苗，以满足生产上的需要。
[0004]本发明通过以下技术方案达到上述目的:一种伞房花耳草茎段成苗的快速繁殖方法，包括以下步骤:
[0005](1)茎段分化繁殖获得丛生芽:取伞房花耳草无菌试管苗的幼嫩茎段，平铺在MS繁殖培养基上，在培养温度为23-27°C，光照强度lOOOlux，光照时间为6_8小时/天的条件下培养30天得到试管苗丛生芽，其中MS繁殖培养基为MS基本培养基中加入1.0-3.0mg/L的苄基腺嘌呤6-BA、0.1-0.3mg/L的吲哚丁酸IBA、0.1-1.0mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8 ;
[0006](2)丛生芽壮苗培养:将步骤(1)中得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中，在培养温度为23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为10-12小时/天的条件下培养20天得到健壮丛生芽，其中MS壮苗培养基为MS基本培养基中加入0.5-2.5mg/L的苄基腺嘌呤6-BA、0.1-0.5mg/L 的吲哚乙酸 ΙΑΑ、0.1-1.0mg/L 的激动素 KT、30g/L 蔗糖和 3.4g/L 的琼月旨，培养基的pH值为5.8 ;
[0007](3)丛生芽生根培养:将步骤(2)中得到的健壮丛生芽切成带顶芽或叶芽的茎段，置于1/2MS生根培养基中，在培养温度23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为12-14小时/天的条件下培养30天得到带根的完整植株，其中1/2MS生根培养基为1/2MS基本培养基中加入0.1-1.0mg/L的萘乙酸NAA、0.1-0.3mg/L吲哚乙酸ΙΑΑ、0.1-0.3mg/L的生根粉ΑΒΤ、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。
[0008]本发明的突出优点在于:
[0009](1)采用组织培养技术繁育伞房花耳草种苗具有繁殖速度快、种苗质量均一，且不受时间、空间、季节限制的突出优点，缩短了种苗繁育周期，提高了种苗质量。
[0010](2)通过幼嫩茎段为外植体诱导分化获得大量的丛生芽，为伞房花耳草组培苗的获得提供了新的途径。
[0011](3)采用本发明所述的培养方法得到的伞房花耳草丛生芽增殖系数达到25-30倍，丛生芽健壮，接种到生根培养基后容易生根，生根率可达98%以上，炼苗后移栽苗床成活率达到90% ;快速、便捷、高效地进行伞房花耳草组织培养，实现伞房花耳草组培种苗的规模化生产。
【具体实施方式】
[0012]下面结合实施例对本发明的技术方案进一步说明。
[0013]实施例1
[0014]本发明所述的伞房花耳草茎段成苗的快速繁殖方法的一个实例，包括以下步骤:
[0015](1)茎段分化繁殖获得丛生芽:取伞房花耳草无菌试管苗的幼嫩茎段，平铺在MS繁殖培养基上，在培养温度为23-27°C，光照强度lOOOlux，光照时间为6_8小时/天的条件下培养30天得到试管苗丛生芽，其中MS繁殖培养基为MS基本培养基中加入1.0mg/L的苄基腺嘌呤6-BA、0.2mg/L的吲哚丁酸IBA、0.lmg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼月旨，培养基的pH值为5.8。丛生芽增殖系数为26.9。
[0016](2)丛生芽壮苗培养:将步骤(1)中得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中，在培养温度为23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为10-12小时/天的条件下培养20天得到健壮丛生芽，其中MS壮苗培养基为MS基本培养基中加入0.5mg/L的苄基腺嘌呤6-BA、0.lmg/L的吲哚乙酸IAA、1.0mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。壮苗培养增殖系数为26.2。
[0017](3)丛生芽生根培养:将步骤(2)中得到的健壮丛生芽切成带顶芽或叶芽的茎段，置于1/2MS生根培养基中，在培养温度为23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为12-14小时/天的条件下培养30天得到带根的完整植株，其中1/2MS生根培养基为1/2MS基本培养基中加入0.lmg/L的萘乙酸NAA、0.lmg/L吲哚乙酸IAA、0.2mg/L的生根粉ABT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。生根率为97.0%。
[0018]实施例2
[0019]本发明所述的伞房花耳草叶片成苗的快速繁殖方法的另一个实例，包括以下步骤:
[0020](1)茎段分化繁殖获得丛生芽:取伞房花耳草无菌试管苗的幼嫩茎段，平铺在MS繁殖培养基上，在培养温度为23-27°C，光照强度lOOOlux，光照时间为6_8小时/天的条件下培养30天得到试管苗丛生芽，其中MS繁殖培养基为MS基本培养基中加入2.0mg/L的苄基腺嘌呤6-BA、0.lmg/L的吲哚丁酸IBA、0.5mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼月旨，培养基的pH值为5.8。丛生芽增殖系数为27.2。
[0021](2)丛生芽壮苗培养:将步骤(1)中得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中，在培养温度为23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为10-12小时/天的条件下培养20天得到健壮丛生芽，其中MS壮苗培养基为MS基本培养基中加入1.5mg/L的苄基腺嘌呤6-BA、0.5mg/L的吲哚乙酸IAA、1.0mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。壮苗培养增殖系数为26.4。
[0022](3)丛生芽生根培养:将步骤(2)中得到的健壮丛生芽切成带顶芽或叶芽的茎段，置于1/2MS生根培养基中，在培养温度为23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为12-14小时/天的条件下培养30天得到带根的完整植株，其中1/2MS生根培养基为1/2MS基本培养基中加入0.lmg/L的萘乙酸NAA、0.3mg/L吲哚乙酸IAA、0.2mg/L的生根粉ABT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。生根率为97.0%。
[0023]实施例3
[0024]本发明所述的伞房花耳草茎段成苗的快速繁殖方法的另一个实例，包括以下步骤:
[0025](1)茎段分化繁殖获得丛生芽:取伞房花耳草无菌试管苗的幼嫩茎段，平铺在MS繁殖培养基上，在培养温度为23-27°C，光照强度lOOOlux，光照时间为6_8小时/天的条件下培养30天得到试管苗丛生芽，其中MS繁殖培养基为MS基本培养基中加入3.0mg/L的苄基腺嘌呤6-BA、0.3mg/L的吲哚丁酸IBA、0.lmg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼月旨，培养基的pH值为5.8。丛生芽增殖系数为28.1。
[0026](2)丛生芽壮苗培养:将步骤(1)中得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中，在培养温度为23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为10-12小时/天的条件下培养20天得到健壮丛生芽，其中MS壮苗培养基为MS基本培养基中加入2.5mg/L的苄基腺嘌呤6-BA、0.3mg/L的吲哚乙酸IAA、0.5mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。壮苗培养增殖系数为27.3。
[0027](3)丛生芽生根培养:将步骤(2)中得到的健壮丛生芽切成带顶芽或叶芽的茎段，置于1/2MS生根培养基中，在培养温度为23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为12-14小时/天的条件下培养30天得到带根的完整植株，其中1/2MS生根培养基为1/2MS基本培养基中加入1.0mg/L的萘乙酸NAA、0.2mg/L吲哚乙酸IAA、0.3mg/L的生根粉ABT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。生根率为98.0%。
[0028]实施例4
[0029]本发明所述的伞房花耳草叶片成苗的快速繁殖方法的另一个实例，包括以下步骤:
[0030](1)茎段分化繁殖获得丛生芽:取伞房花耳草无菌试管苗的幼嫩茎段，平铺在MS繁殖培养基上，在培养温度为23-27°C，光照强度lOOOlux，光照时间为6_8小时/天的条件下培养30天得到试管苗丛生芽，其中MS繁殖培养基为MS基本培养基中加入1.0mg/L的苄基腺嘌呤6-BA、0.2mg/L的吲哚丁酸IBA、1.0mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼月旨，培养基的pH值为5.8。丛生芽增殖系数为27.6。
[0031](2)丛生芽壮苗培养:将步骤(1)中得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中，在培养温度为23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为10-12小时/天的条件下培养20天得到健壮丛生芽，其中MS壮苗培养基为MS基本培养基中加入1.5mg/L的苄基腺嘌呤6-BA、0.3mg/L的吲哚乙酸IAA、0.lmg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。壮苗培养增殖系数为25.9。
[0032](3)丛生芽生根培养:将步骤(2)中得到的健壮丛生芽切成带顶芽或叶芽的茎段，置于1/2MS生根培养基中，在培养温度为23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为12-14小时/天的条件下培养30天得到带根的完整植株，其中1/2MS生根培养基为1/2MS基本培养基中加入0.5mg/L的萘乙酸NAA、0.3mg/L吲哚乙酸IAA、0.lmg/L的生根粉ABT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。生根率为97.4%。
【主权项】
1.一种伞房花耳草茎段成苗的快速繁殖方法，其特征在于:该方法包括以下步骤: (1)茎段分化繁殖获得丛生芽:取伞房花耳草无菌试管苗的幼嫩茎段，平铺在MS繁殖培养基上，在培养温度为23-27°C，光照强度lOOOlux，光照时间为6_8小时/天的条件下培养30天得到试管苗丛生芽，其中MS繁殖培养基为MS基本培养基中加入1.0-3.0mg/L的苄基腺嘌呤6-BA、0.1-0.3mg/L的吲哚丁酸ΙΒΑ、0.1-1.0mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和.3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8 ; (2)丛生芽壮苗培养:将步骤(1)中得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中，在培养温度为23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为10-12小时/天的条件下培养20天得到健壮丛生芽，其中MS壮苗培养基为MS基本培养基中加入0.5-2.5mg/L的苄基腺嘌呤6-BA、.0.l-0.5mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1-1.0mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8 ; (3)丛生芽生根培养:将步骤(2)中得到的健壮丛生芽切成带顶芽或叶芽的茎段，置于.1/2MS生根培养基中，在培养温度23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为12-14小时/天的条件下培养30天得到带根的完整植株，其中1/2MS生根培养基为1/2MS基本培养基中加入 0.1-1.0mg/L 的萘乙酸 NAA、0.1-0.3mg/L 吲哚乙酸 ΙΑΑ、0.1-0.3mg/L 的生根粉 ABT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。
【专利摘要】一种伞房花耳草茎段成苗的快速繁殖方法，包括如下步骤：(1)取伞房花耳草无菌试管苗的茎段，置于MS繁殖培养基中培养，诱导愈伤形成，并分化获得丛生芽；(2)将所述丛生芽置于MS壮苗培养基中进行壮苗培养得到健壮植株；(3)将所述健壮植株置于MS生根培养基中培养得到完整的带根苗。采用本发明所述的培养方法得到的伞房花耳草丛生芽增殖系数达到25-30倍，获得的组培苗生根率在98％以上，移栽苗床成活率在90％以上，有效解决了伞房花耳草的规模化育苗问题。
【IPC分类】A01H4/00
【公开号】CN105284624
【申请号】CN201510785322
【发明人】蔡锦源, 熊建文, 韦剑锋, 张佳艳, 卢杰, 覃仲欣, 李正阳
【申请人】广西科技大学鹿山学院
【公开日】2016年2月3日
【申请日】2015年11月16日