一种从砗磲外套膜中提取虫黄藻的方法
【专利摘要】本发明公开了一种从砗磲外套膜中提取虫黄藻的方法。a、取鲜活砗磲的外套膜上颜色较深的部分，然后剪成小块，再放置于盛有新鲜海水榨汁机中进行粉碎，使得组织块粉碎，得粉碎液；b、将粉碎液利用500目筛绢网过滤滤液，丢弃滤渣，留下滤液；c、将步骤b的滤液移到玻璃容器中，常温静止8?12h，虫黄藻与组织液分层，之后倒掉滤液，留下沉淀物，加入新鲜海水，重悬；即可获得鲜活虫黄藻。利用本发明的方法可以获得纯度96％以上的鲜活虫黄藻，从而为砗磲幼体培育提供饵料，为虫黄藻纯化培养提供原料，为研究砗磲与虫黄藻共生机制研究提供实践基础。
【专利说明】
_种从碎碟外套膜中提取虫黄藻的方法
技术领域
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[0001]本发明属于海洋农业中生物饵料培养技术领域，具体涉及一种从砗磲外套膜中提取虫黄藻的方法。
【背景技术】
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[0002]虫黄藻(Zooxanthe I Ia;复数Zooxanthel Iae)是海藻的一种，是多种海洋动物和原生动物内的一种金黄色细胞间共生菌，特别是珊瑚纲生物，如石珊瑚和热带海葵等常见。据估计，每mm3的珊瑚组织内有3万个虫黄藻，它们与珊瑚虫互惠共存。虫黄藻大多数都是自养生物，并会为宿主提供易位式还原碳化物，如:葡萄糖、甘油、氨基酸等光合作用的产物。虫黄藻亦有在其他原生动物和一些无脊椎动物共生，如砗磲、foraminiferans和放射虫等。
[0003]砗磲主要分布在印度洋、太平洋海域。特别在印尼、缅甸、马来西亚、菲律宾、澳大利亚等国的低潮区附近的珊瑚礁间或较浅的礁内较多。它们都生活在热带海域的珊瑚礁环境中。我国的台湾、海南、西沙群岛及其它南海岛屿也有分布，分别为库氏砗磲、无鳞砗磲、鳞砗磲、长砗磲、番红砗磲、砗蠔等。砗磲常与大量虫黄藻(Zooxanthellae)共生。这种单胞藻可在砗磲体内循环，并可进行光合作用，供砗磲丰富的营养。砗磲的外套膜边缘有一种叫玻璃体的结构，能聚合光线，可使虫黄藻大量繁殖。传统意义上，绝大部分单胞藻游离在海水中，不与其他有机体共生;而虫黄藻与砗磲组织互惠共生，为其提供主要营养来源，具有独特的生活方式。那么，如何研发一种快速、简便高效的方法从砗磲的组织内将虫黄藻提取出来，成为本发明的主要创新点。
【发明内容】
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[0004]本发明的目的是提供一种快速、简便高效的从砗磲外套膜中提取虫黄藻的方法。本发明能从砗磲外套膜中提取到鲜活虫黄藻，从而为砗磲幼体培育提供饵料，为虫黄藻纯化培养提供原料，为研究砗磲与虫黄藻共生机制研究提供实践基础。
[0005]本发明的从砗磲外套膜中提取虫黄藻的方法，其特征在于，包括以下步骤:
[0006]a、取鲜活砗磲的外套膜上颜色较深的部分，然后剪成小块，再放置于盛有新鲜海水棒汁机中进行粉碎，使得组织块粉碎，得粉碎液；
[0007]b、将粉碎液利用用500目筛絹网过滤滤液，丢弃滤渣，留下滤液；
[0008]C、将步骤b的滤液移到玻璃容器中，虫黄藻密度控制在300万个/ml以下，常温静止8-12h，虫黄藻与组织液分层，之后倒掉滤液，留下沉淀物，加入新鲜海水，重悬即可以获得纯度96%以上的鲜活虫黄藻。
[0009]优选，所述的取鲜活砗磲的外套膜上颜色较深的部分，然后剪成小块，再放置于盛有新鲜海水榨汁机中进行粉碎，使得组织块粉碎，得粉碎液优选是以鲜活的砗磲外套膜作为材料，利用解剖剪剪取砗磲外套膜上颜色较深部分，再利用解剖剪将颜色较深部分的外套膜剪成小块，再放置于盛有新鲜海水榨汁机中，采用涡旋搅拌器粉碎2-3min，使得组织块完全粉碎，得到粉碎液。
[0010]优选，所述的取鲜活砗磲的外套膜上颜色较深的部分，其取的部位是外层外套膜，因为砗磲外套膜分为两层，外层颜色深，虫黄藻含量高，内层颜色较浅，虫黄藻含量低。
[0011]优选，所述的放置于盛有新鲜海水榨汁机中优选是在每毫升新鲜海水中加入0.Ι-ο.2g 的剪成小块的外套膜的量加入。因为组织块过多 ，会出现大量粘稠状碎沫 ，不利于虫黄藻完全过滤，组织块过少，虫黄藻获得密度太小。
[0012]优选，所述的采用榨汁机的涡旋转速为15000-18000转/min，转数过低不利于组织全完粉碎;转数过高，容易破坏虫黄藻。
[0013]所述的500目筛絹网过滤，是为了尽力去除杂质，还要保证虫黄藻提取效率，因为虫黄藻大小在5_6μπι，确保虫黄藻能够完全留在滤液中。
[0014]利用本发明的方法可以获得纯度96%以上的鲜活虫黄藻，从而为砗磲幼体培育提供饵料，为虫黄藻纯化培养提供原料，为研究砗磲与虫黄藻共生机制研究提供实践基础。
【具体实施方式】
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[0015]以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
[0016]实施例1:
[0017]a、外套膜剪取:于2014年5月，从海南采集6个鳞砗磲空运至中国科学院南海海洋研究所热带海洋生物与生态重点实验，利用培育珊瑚的海盐配制盐度为32ppt的海水，水温控制在26-28 °C，微充气暂养鳞砗磲3天。以这些鲜活的砗磲外套膜作为材料，利用解剖剪剪取颜色较深部分，即剪取砗磲的外层外套膜；
[0018]b、组织粉碎:利用解剖剪将步骤a中的砗磲的外层外套膜剪成小块，之后放置于盛有新鲜海水榨汁机中，小块的外层外套膜的密度为0.15g/ml，即每ml新鲜海水中含有0.15g的小块的外层外套膜，采用涡旋搅拌器粉碎，15000转/min，3min，组织块100%粉碎，得到粉碎液；
[0019]C、过滤:将粉碎液利用25微米网孔(500目)筛絹网过滤滤液，丢弃滤渣，留下滤液；
[0020]d、重悬:转移步骤(C)中的滤液至玻璃容器中，虫黄藻密度为300万个/ml，静止8h，虫黄藻与组织液分层，之后倒掉滤液，留下沉淀物，加入新鲜海水，重悬；即可以获得纯度96%以上的鲜活虫黄藻。
[0021]实施例2
[0022]a、外套膜剪取:于2014年10月，从海南采集9个长砗磲空运至中国科学院南海海洋研究所热带海洋生物与生态重点实验，利用培育珊瑚的海盐配制盐度为33ppt的海水，水温控制在27-28 °C，微充气暂养长砗磲2天。以这些鲜活的砗磲外套膜作为材料，利用解剖剪剪取颜色较深部分，即剪取外层外套膜；
[0023]b、组织粉碎:利用解剖剪将步骤a中的外层外套膜剪成小块，之后放置于盛有新鲜海水榨汁机中，小块的外层外套膜的密度为0.2g/ml，即每ml新鲜海水中含有0.2g的小块的外层外套膜，采用榨汁机，涡旋转速为18000转/min，搅拌2min，组织块10 %粉碎，得到粉碎液；
[0024]c、过滤:将粉碎液利用25微米网孔(500目)筛絹网过滤滤液，丢弃滤渣，留下滤液；
[0025]d、重悬:转移步骤(C)中的滤液至玻璃容器中，虫黄藻密度为240万个/ml，静止1h，虫黄藻与组织液分离，之后倒掉滤液，留下沉淀物，加入新鲜海水，重悬;既可以获得纯度98%以上的鲜活虫黄藻。
[0026]实施例3
[0027]a、外套膜剪取:于2015年3月，从海南采集13个番红砗磲空运至中国科学院南海海洋研究所热带海洋生物与生态重点实验，利用培育珊瑚的海盐配制盐度为33ppt的海水，水温控制在26-27°C，微充气暂养番红砗磲I天。以这些鲜活的砗磲外套膜作为材料，利用解剖剪剪取颜色较深部分，即剪取外层外套膜；
[0028]b、组织粉碎:利用解剖剪将步骤a中的外层外套膜剪成小块，之后放置于盛有新鲜海水榨汁机中，小块的外层外套膜的密度为0.lg/ml，即每ml新鲜海水中含有0.1g的小块的外层外套膜，采用榨汁机粉碎，涡旋转速为18000转/min，3min，组织块100 %粉碎，得到粉碎液；
[0029]c、过滤:将粉碎液利用25微米网孔(500目)筛絹网过滤滤液，丢弃滤渣，留下滤液；
[0030]d、重悬:转移步骤(C)中的滤液至玻璃容器中，虫黄藻密度为200万个/ml，静止12h，虫黄藻与组织液分层，之后倒掉滤液，留下沉淀物，加入新鲜海水，重悬；即可以获得纯度近乎100%的鲜活虫黄藻。
【主权项】
1.一种从砗磲外套膜中提取虫黄藻的方法，其特征在于，包括以下步骤: a、取鲜活砗磲的外套膜上颜色较深的部分，然后剪成小块，再放置于盛有新鲜海水榨汁机中进行粉碎，使得组织块粉碎，得粉碎液； b、将粉碎液利用500目筛絹网过滤滤液，丢弃滤渣，留下滤液； c、将步骤b的滤液移到玻璃容器中，虫黄藻密度控制在300万个/ml以下，常温静止8-12h，虫黄藻与组织液分层，之后倒掉滤液，留下沉淀物，加入新鲜海水，重悬；即可获得鲜活虫黄藻。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的取鲜活砗磲的外套膜上颜色较深的部分，然后剪成小块，再放置于盛有新鲜海水榨汁机中进行粉碎，使得组织块粉碎，得粉碎液是以鲜活的砗磲外套膜作为材料，利用解剖剪剪取砗磲外套膜上颜色较深部分，再利用解剖剪将颜色较深部分的外套膜剪成小块，再放置于盛有新鲜海水榨汁机中，粉碎2_3min，使得组织块完全粉碎，得到粉碎液。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述的取鲜活砗磲的外套膜上颜色较深的部分，其取的部位是外层外套膜。4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述的放置于盛有新鲜海水榨汁机中是以每毫升新鲜海水中加入0.1 -0.2g的剪成小块的外套膜的量加入。5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的榨汁机的涡旋转速为15000-18000转/min0
【文档编号】A23K50/80GK105876275SQ201610261535
【公开日】2016年8月24日
【申请日】2016年4月25日
【发明人】张跃环, 肖述, 李军, 喻子牛
【申请人】中国科学院南海海洋研究所