专利名称：三七总皂苷口服剂型的制作方法
所属领域本发明涉及口服药物剂型。
背景技术：
三七总皂苷是从三七中提取的有效成份，是一类与人参皂苷类似的化合物，主要成份为人参皂苷Rb1、Rd、Re、Rg1、Rh1及七叶胆苷，还含有少量的三七皂苷R1、R2、R3、R4、R6等。药理研究表明，三七总皂苷具有抗心肌缺血、抗缺血性脑损伤、抑制血小板聚集、降低血粘度、抗体内外血栓形成等作用，对心脑血管缺血性疾病疗效较好，并且对心、肝、脾、肺、肾和胃功能无损害，也无毒副作用。以三七总皂苷为有效成份的“血塞通片”、“血塞通颗粒”、“血塞通胶囊”、“血塞通软胶囊(商品名理洫王)”、“血塞通注射液”、“血塞通粉针(商品名络泰)”已由卫生部批准生产。但上述剂型或生物利用度低，或携带及给药、服用不方便、不利于推广应用。
发明内容
本发明的目的是提供一种三七总皂苷口服给药剂型，它以滴丸剂型使用，能够满足该类剂型药物在生物利用度、稳定性、疗效性、方便性方面的要求。
本发明提供的药物剂型根据国家药品监督管理局制定的新药审批办法之规定属于新药(中药)四类。提供的口服药物，含有有效剂量的三七总皂苷作为有效成分，与适量的基质掺合起来制成滴丸剂。该剂型按重量每粒含有三七总皂苷1-50mg和适量的基质。基质选自水溶性基质。口服剂型是滴丸剂。
水溶性基质可采用聚乙二醇、硬脂酸钠、甘油明胶等。
本发明提供的口服剂型药物的制备方法取三七总皂苷研细，过180目筛，加蒸馏水适量于100℃水浴上搅拌均匀，备用。取聚乙醇置100℃水浴中溶化，在不停搅拌下加入上述三七总皂苷，待混合均匀即倒入已预热的滴丸机内(内温保持80-85℃)以每分钟50-60滴的速度滴入冷却的液体石蜡(4-10℃)中，制成滴丸，选丸，包装即得。
本发明按上述方法制备，其详细组份由下列实施例给出，但本发明的保护范围，不局限于此。
实施例1组分 量(克/粒)三七总皂苷 0.005聚乙二醇0.035总重0.04g实施例2组分量(克/粒)三七总皂苷 0.01聚乙醇 0.03总重0.04g实施例3组分量(克/粒)三七总皂苷 0.008聚乙二醇0.032总重0.04g实施例4组分 量(克/粒)三七总皂苷 0.005聚乙二醇 0.020总重0.025g
实施例9组分 量(克/粒)三七总皂苷 0.01聚乙二醇 0.02总重0.03g实施例10组分 量(克/粒)三七总皂苷 0.005聚乙二醇 0.025总重0.03g实施例11组分 量(克/粒)三七总皂苷 0.006聚乙二醇 0.024总重0.03g实施例12组分 量(克/粒)三七总皂苷 0.0075聚乙二醇 0.0225总重0.03g根据新药(中药)稳定性试验滴丸剂项下的要求，对三七总皂苷滴丸三批样品在室温放置三个月以上，进行质量观察，并测定了各项数据，结果如下
批号990211 表批号990212
批号990213 本发明通过下面试验证明其性能一、急性毒性试验昆明种小鼠；雌雄各半，体重20.46±0.97g，三七总皂苷滴丸。动物随机分成给药组与对照组，给药后观察7日，结果显示给药后7日内，动物未见死亡，一般状况良好，饮食，二便正常，小鼠体重增长正常，未见其它明显异常反应，其灌胃给药的最大给药量为16g/kg，相当于临床人用量的400倍。
二、长期毒性试验(一)试验材料1、药品三七总皂苷滴丸粉。
2、动物SD大鼠，雌雄各半；雄性平均体重为83.74±4.33g，雌性平均体重为81.93±6.51g。
(二)试验方法
1、分组给药试验所用80只大鼠随机分为4组对照组，三七总皂苷大、中、小剂量组。每组20只，雌雄各半。对照组灌胃等容积0.5％CMC；三七总皂苷大剂量组灌胃给予2400mg/kg的三七总皂苷滴丸粉，相当于人临床用量的60倍；三七总皂苷中剂量组给予1200mg/kg的三七总皂苷滴丸粉，相当于人临床用量的30倍；三七总皂苷小剂量组给予400mg/kg的三七总皂苷滴丸粉，相当于人临床用量的10倍。每周7日，连续3个月，给药容量为1ml/100g体重。给药3个月后，每组杀检14只(雌、雄各7只)，进行各项指标检测，观察有无毒性反应。剩余大鼠停止给药2周后杀检，以观察有无继发性不良反应。
(三)结论三七总皂苷高剂量300mg/kg(相当于临床人用量的60倍)，中剂量150mg/kg(相当于临床人用量的30倍)，小剂量50mg/kg(相当于临床人用量的10倍)，连续灌胃3个月和停药2周后均未发现明显毒性反应，动物外观行为、体重、血象、肝肾功能、主要脏器病理组织检查均未发现与药物有关的毒性病变。
三、药效学实验(一)三七总皂苷滴丸对垂体后叶素致豚鼠心肌缺血性心电图的影响动物豚鼠，雌雄各半，231±克。
药品1、三七总皂苷滴丸。
2、三七总皂苷片(血塞通片)。
3、垂体后叶素。
4、化学试剂羧甲基纤维素钠、氯化钠、乌拉坦。
1、分组与给药模型对照组豚鼠10只，采用0.5％CMC(羧甲基纤维素钠)灌胃。
血塞通滴丸1组，剂量为50mg三七总甙/kg，为临床用量的16倍。
血塞通滴丸2组，内含三七总甙40mg/kg，为临床用量的8倍。
三七总甙片(血塞通片)1组，剂量为80mg三七总甙/kg，为临床用量的16倍。给药量为10ml/kg。
三七总甙片(血塞通片)2组，剂量为40mg三七总甙/kg，为临床用量的8倍。给药量为10mg/kg。
上述药物均灌胃给药，连续给药4天。
2、实验方法与结果麻醉，按1g/kg剂量给豚鼠腹腔注射20％乌拉坦溶液。
豚鼠背位固定，安插针状电极，描记正常心电图；分离一侧颈静脉，按0.5u/kg剂量静脉推注垂体后叶素。注入垂体后叶素立即描记心电图。
剪下心电图纸，测量各时间段描记的心电图ST段的变化，记录2分钟内ST段的变化。
3、结论(1)三七总皂苷滴丸和片剂的高剂量组与对照组相比，ST段抬高有显著性差异(P＜0.05)。说明80mg/kg滴丸和片剂均有抗垂体后叶素所致心肌缺血作用。
(2)三七总皂苷滴丸和片剂的低剂量组与对照组相比，ST段抬高没有显著性差异。
(二)三七总皂苷滴丸对三氯化铁致大鼠大脑中动脉栓塞性脑缺血损伤的影响动物Wistar大鼠，雌雄各半，体重207.28±6.84g。
药品1、三七总皂苷滴丸。
2、三七总皂苷片(血塞通片)。
3、天保宁。
4、化学试剂FeCl3·6H2O、TTC。
1、分组及给药实验动物随机分为六组，即假手术对照组、MCAT模型组、血塞通滴丸90mg/kg组、30mg/kg组、10mg/kg组，分别相当于临床人用量的18、6和2倍、血塞通片30mg/kg组。预先连续灌胃给药两天，其中假手术组和血栓模型组灌服等量的0.5％CMC，第五次给药后60分钟施行手术，术后继续给药三天。
2、造模症状计分标准在术后不同时间(24h，72h)，对动物进行行为评分。1、提鼠尾离开地面约一尺，观察前肢屈曲情况。2、将动物置于平滑桌面上，分别推双肩向对侧移动，检查阻力。3、将动物两前肢置一金属网上，提鼠尾向后拉，观察两前肢的肌张力。4、提鼠尾离开地面约一尺，观察动物旋转情况。
结果显示，假手术组未见行为异常改变，模型组大鼠在术后24h，72h出现偏瘫样症状，主要表现为手术对侧前肢内收，肩内旋，前肢和肩肌张力降低。给药组大鼠在术后24h，72h其神经症状均有不同程度的改善。
4、对脑梗塞范围的影响动物经末次行为评分后断头取脑，去掉嗅球、小脑和低位脑干，剩余部份在4℃以下冠状切成5片。迅速将脑片置于TTC染液中，37℃避光温孵30分钟，再取出，置于10％甲醛液中避光保存。经染色后非缺血区为玫瑰红色，梗塞区为白色。将白色组织仔细挖下称重，以梗塞组织重量占总脑重量的百分比作为脑梗塞范围。
结果显示，术后72h，除假手术组未见梗塞灶外，模型组大鼠均有不同程度梗塞灶，高、中剂量给药组可明显减少其梗塞范围，与模型组相比具有明显差异。
5、对脑组织水含量的影响造模方法、分组与给药同上，术后72小时后断头取脑，切除嗅球、小脑及脑干，保留前脑，并沿矢状缝将前脑均分成左右两半，分别称量左、右脑重量，105℃烘烤48小时至恒重，精确称取干重，计算脑水含量。
结果显示，术后72h，除假手术组未见左右侧大脑含水量异常改变外，模型组、给药组大鼠手术侧均有不同程度脑水肿，即手术侧脑含水量增加。给药组手术侧血塞通滴丸90mg/kg组脑含水量与模型组脑含水量相比具有显著差异。
6、结论(1)大脑中动脉梗塞模型神经症状分值和脑梗塞比均明显增高，说明造模成功。
(2)三七总皂苷滴丸除小剂量外，均能明显改善神经症状，并降低梗塞比，且有一定的量效关系。
(3)三七总皂苷滴丸只有大剂量组能明显改善手术侧脑含水量。
(4)阳性对照药三七总皂苷片能明显改善动物神经症状，并降低梗塞范围，但不能降低手术侧脑含水量。
(三)三七总皂甙滴丸抗大鼠血栓形成作用的实验研究动物Wistar大鼠，♀♂各半，体重220-250g。
药品1、三七总皂苷滴丸。
2、三七总皂苷片(血塞通片)。
3、肝素。
1、分组与给药实验用大鼠♀♂各半，分组与给药剂量见表。连续3天，分上下午给药，浓度稀释1倍，对照组给0.5％CMC，给药5次，于第3天实验前禁食12h，给药后1小时进行试验。
2、方法大鼠用1.5％戊巴比妥钠按35mg/kg麻醉，颈部正中切口，分离右侧颈总动脉及左颈外静脉，在三段聚乙烯管的中段放入手术丝线，将肝素生理盐水溶液(5u/ml)充满聚乙烯管，将其一端插入右侧颈总动脉，另一端插入左颈外静脉，打开动脉夹，血液从右颈总动脉经聚乙烯管返回左颈外静脉。开放血流20分钟，中断血流，迅速取出丝线称重，总重量减去丝线重，即为血栓湿重，然后放后烤箱(60℃)中烤1小时，冷却后立即称重，即为血栓干重。
3、结论(1)三七总皂苷滴丸高、中剂量组均可明显降低血栓湿重和干重，且有一定的量效关系。
(2)三七总皂苷片30mg/kg可明显降低血栓湿重和干重。
(四)三七总皂苷滴丸对大鼠在体血栓形成后溶栓作用的实验研究动物Wistar大鼠，♀♂各半，体重240-260g。
药品1、三七总皂苷滴丸。
2、三七总皂苷片(血塞通片)3、蚓激酶胶囊
1、分组与给药试验用大鼠♀♂各半，随机分为7组，正常对照组，三七总皂苷滴丸90mg/kg、30mg/kg、10mg/kg三个剂量组，三七总皂苷片90mg/kg和30mg/kg组，蚓激酶胶囊组。造模后第二天开始灌胃给药，连续3天(分2次/天给药)。
2、造模采用颈总动脉温度测定法，大鼠用1.5％戊巴比妥钠按35mg/kg麻醉，颈部正中切口，分离右侧颈总动脉，在近心端放刺激电极，远心端放温度传感电极，打开仪器开关，直流电刺激7分钟，将电流表指针拨到0位置，当血流完全阻断时，温度突然下降，仪器自动报警，显示堵塞时间OT值，即为血栓形成时间。然后缝合颈部创口，回笼饲养。待大鼠清醒后，按上述药物剂量灌胃给药，每日剂量分上、下午2次给药，连续给药5次。
3、取材于末次给药后1小时，麻醉，分离颈总动脉，小心完整剪取含血栓的颈总动脉，置20％福尔马林标本瓶中固定，4小时后，将动脉段置滤纸上1小时，分别称量含血管血栓重量和等长度的血管重量，计算血栓重量和溶栓率，并测血栓长度。
4、结论(1)模型组血栓重量明显高于蚓激酶组；血栓长度亦明显长于蚓激酶组，说明模型可靠。
(2)三七总皂苷滴丸和三七总皂苷片90mg/kg组灌胃给药，可使血栓重量明显降低，但只有滴丸组可使血栓长度明显降低(p＜0.01)。
(五)三七总皂苷滴丸对MCAT大鼠血小板聚集性及凝血因子的影响动物Wistar大鼠，雌雄各半，体重200.2±6.8。
药品1、三七总皂苷滴丸。
2、三七总皂苷片(血塞通片)。
3、ADP。
4、胶原。
5、枸橼酸钠。
6、PT、TT、APTT试剂。
1、分组与给药分组与给药同试验(二)。
2、造模造模同试验(二)。
3、采血及测试血小板聚集测定(Bom比浊法)于末次给药后1小时大鼠腹腔注射10％水合氯醛溶液(350mg/kg)麻醉，颈总动脉放血，以3.8％枸橼酸钠(V/V为1∶9)抗凝，轻轻混匀后，离心10分钟，剩余血浆继续离心10分钟，将血小板聚集凝血因子分析仪按钮打到“聚集”档，以PPP调零，取PRP399μL，加入比浊管，37℃温育5分钟，分别加入诱导剂300μmol/LADP20μl和胶原20μl，ADP聚集5分钟，胶原聚集10分钟，记录最大聚集率。
凝血因子测定凝血酶原时间(PT)测定，将血小板聚集凝血因子分析仪按钮打到“血凝”档，取PPP300μl置于检测杯中温浴2min(37℃)。将测试杯置于检测孔中，加入PT试剂100μl，按Start键检测PT。
凝血酶时间(TT)测定，检测方法同PT，不同点是加入TT试剂100μl，按Start键检测TT。
部分凝血活酶时间(APTT)测定将血小板聚集血因子分析仪按钮打到“血凝”档，取PPP300μl置于检测杯中，加入APTT试剂100μl，37℃温浴min。将检测杯置于检测孔中，加入0.025mol/LCcCL2100μl，按Start键检测APTT。
4、结论(1)对ADP和胶原诱导的假手术组及模型组血小板最大聚集率均达到50％以上，模型符合要求。
(2)三七总皂甙滴丸90mg/kg/日、30mg/kg/日对ADP和胶原所诱发的MCAT大鼠血小板聚集有明显的抑制作用(P＜0.05，P＜0.01)。10mg/kg/日对胶原诱导的MCAT大鼠血小板聚集有明显抑制作用(p＜0.05)，但对ADP诱导的MCAT大鼠血小板聚集无明显抑制作用。
(3)三七总皂甙滴丸90mg/kg/日对MCAT大鼠TT、PT、APTT均有明显延长作用(p＜0.05，p＜0.01)。30mg/kg/日、10mg/kg/日仅对MCAT大鼠TT有明显延长作用(p＜0.01，p＜0.05)。
(六)三七总皂苷滴丸对高龄小鼠凝血时间的影响动物昆明种8-10个月龄小鼠，♀♂各半，体重41-48g。
药品1、三七总皂甙滴丸。
2、三七总皂甙片(血塞通片)。
3、天保宁。
1、分组与给药取小鼠124只，随机分成7组，给药剂量见表，按0.1mg/10g体重剂量灌胃，对照组给0.5％CMC，连续5天，分上下午给药。
2、方法于第5天，实验前禁食不禁水12h，在末次给药1小时后毛细管刺入小鼠眼内眦球后静脉丛，深约4-5mm，轻轻转动再抽回。自血液流入管内开始记时，血流流满后取出毛细血管平放于实验台上，每隔30s分别先后从两端折断0.5cm，并缓缓向两侧分开，观察断处是否有血凝丝，自计时开始至血凝丝出现为凝血时，记录并计算统计组间差异。
3、结论(1)阳性对照药天保宁可明显延长小鼠凝血时。
(2)三七总皂甙滴丸大、中剂量组，三七总皂甙片中剂量组对小鼠毛细血管凝血时有明显延长作用。
(七)三七总皂苷滴丸预防给药对急性应激性大鼠血液流变学的影响动物Wistar大鼠，雄性，体重190-210g。
药品1、三七总皂甙滴丸。
2、三七总皂甙片(血塞通片)。
3、盐酸肾上腺素注射液。
4、肝素。
5、化学试剂红细胞变形性试剂。
1、分组与给药分组与给药剂量见表，每日分两次给与，连续给药五次，于末次给药后造模，造模后再给药两次，于末次给药后1h采血。
2、造模除假手术组皮下注射NS0.1ml/kg外，其余各组皮下注射Adr0.1mg/kg，2次，间隔4小时，期间于8℃冰水中浸泡5min。
3、采血及检测造模24h后，麻醉大鼠，颈总动脉采血，置于肝素化的试管中进行各项指标的检测。
取血样0.04ml加入红细胞变形性试剂1ml混匀，测其变形性。以红细胞最大变形指数(MAXDI)和曲线下面积(SSS)表示红细胞变形性。
取血样0.8ml，测其聚集性。以红细胞最大聚集指数(MAXD)和曲线下面积(SS)表示红细胞聚集性。
取血样0.8ml，测其高切、中切、和低切的全血粘度。
取剩余血样，以2000转/分离心8分钟，取血浆0.8ml，测其100转/分的血浆粘度。
4、结论(1)结果显示，造模后24h，假手术组与血瘀模型组相比红细胞变形性和聚集性有明显改变，说明模型成功，三七总皂甙滴丸组、三七总皂甙片组的大鼠红细胞聚集性均明显降低，各给药组对大鼠红细胞变形性无明显的改善作用。
(2)造模24小时，模型组与假手术组相比，大鼠全血粘度与血浆粘度均有明显升高，说明血瘀模型成立，三七总皂甙滴丸各剂量组和三七总皂甙片对全血粘度有不同程度的降低作用，对中切和低切作用明显，只有高、中剂量滴丸组对血浆粘度有明显降低作用。
本试验采用了腹腔注射垂体后叶素致豚鼠心肌缺血模型和三氯化铁致大鼠大脑中动脉血栓栓塞性脑缺血损伤模型，观察到三七总皂甙滴丸不同剂量组使缺血性心电图ST段明显降低；大鼠神经症状得以改善，脑梗塞范围明显减少，脑水含量有所减轻。结果显示，三七总皂甙滴丸具有抗心、脑血管缺血作用。抗栓、溶栓试验结果显示三七总皂甙滴丸具有抗血栓形成作用。分析研究显示，此种抗栓、溶栓作用与三七总皂甙滴丸抑制血小板聚集和改善血瘀状态大鼠的血液流变学有关。上述药理作用与三七总皂甙滴丸主治心、脑血管缺血性疾病密切相关。
权利要求
1.一种含有三七总皂苷有效成份的口服剂型，其特征在于该剂型按重量每粒含三七总皂苷1-50mg和适量的基质。
2.根据权利要求1所述的口服剂型，其特征在于上述的基质选自水溶性基质。
3.根据权利要求1所述的口服剂型，其特征在于口服剂型是滴丸剂。
4.根据权利要求2所述的口服剂型，其特征在于水溶性基质可采用聚乙二醇、硬脂酸钠、甘油明胶等。
全文摘要
本发明提出具有三七总皂苷有效成分的滴丸剂，按重量配比含有有效剂量的三七总皂苷作为有效成分，与适量的基质掺合起来制成滴丸剂，该剂型按重量每粒(丸)含三七总皂苷1－50mg和适量的基质，该类剂型药物在生物利用度、稳定性、疗效性、方便性方面的要求。
文档编号A61K9/20GK1404839SQ0213398
公开日2003年3月26日 申请日期2002年10月28日 优先权日2002年10月28日
发明者陈臻 申请人:陈臻