专利名称：冷冻式巴氏涂片检测方法
技术领域：
本发明涉及一种冷冻式巴氏涂片检测方法。
背景技术：
目前，传统巴氏涂片技术的应用已有近50年，为世界范围内宫颈癌的防治作出了极其重要的贡献。它采用的方法是应用棉签及刮板等采样器在宫颈处采集细胞样本，直接涂沫于玻片上并及时固定后直接进行染色。虽然其简便快捷，成本低廉。但该其仍存在以下缺点1)、细胞收集不全面，涂片细胞重叠，应用高浓度乙醇或乙醇乙醚混合固定液固定后细胞收缩明显，粘液变性固化，染色过程中染色剂不易穿透粘液变性膜，致使粘液包裹的细胞着色不良，核浆染色欠佳，尤其是涂片较厚，细胞重叠显著的区域细胞分辨很差，严重影响观察，易造成漏诊误诊；2)、当固定的细胞未能及时染色处理则细胞容易变形，后续染色效果将受到严重影响。为此，虽然医学专家相继发明了多种细胞学改良技术，对于解决传统巴氏涂片部分缺陷具有一定作用，如TCT、LCT、LPT等技术，但这些技术操作复杂，需要具备特殊设备及专用耗材，成本高昂，难于普遍推广，实际应用中具有很大的局限，特别是在进行大批量细胞涂片时，上述技术缺陷表现得更为突出。
发明内容
为了解决上述现有技术中存在的不足，本发明的目的在于提供一种成本低廉，细胞着色良好，操作简单，实用性强的冷冻式巴氏涂片检测方法。
本发明的技术方案是冷冻式巴氏涂片检测方法，包括以下步骤
a)、先用细胞专用的采样器在宫颈处采集细胞样本；b)、然后将采样器采集的细胞样本涂沫于洁净的玻片上；c)、再把上述涂沫有细胞样本的玻片放置于醋酸乙醇混合固定液中，待玻片上的细胞样本被固定后，取出；d)、将上述取出的玻片上的细胞样本沉浸于细胞变性恢复液中1-5分钟，取出；e)、再将上述玻片放入冷冻器中冷冻，使细胞样本内渗入的水份形成冰晶；f)、最后，将经冷冻处理的带细胞样本的玻片取出，并在常温下直接进行HE染色或巴氏涂片染色、镜下观察诊断。
所述醋酸乙醇混合固定液为含0.1％-5％醋酸的醋酸乙醇混合液。
所述玻片放置于醋酸乙醇混合固定液中15至30分钟或以上。
所述玻片放入冷冻器内冷冻30分钟以上。
所述冷冻器是电冰箱。
所述变性恢复液是浓度在0.1％-10％之间的醋酸液。
本发明的有益效果是本发明的冷冻式巴氏涂片检测方法，1)、由于经固定的带细胞的玻片经变性恢复液处理，并在低温下(零度以下)冰箱内速冻，细胞各成分渗透性明显增强，因而经过上述处理后，附有细胞的玻片直接进入染色剂内染色，细胞着色显著改善，核浆及细胞各成分清晰，细胞与细胞之间境界清楚，分辨较佳，核浆着色分明，显著地改善了传统巴氏涂片细胞染色不佳的状态，即使涂片具有一定的重叠，细胞的轮角仍然清晰可辨，特别适用于大批量妇检时由于细胞玻片未能及时处理而长时间干燥留置后玻片细胞的修复处理，对恢复变性细胞形态及保持良好的染色效果起到重要作用；2)、而使用该技术无需特殊设备及耗材，其成本低廉，操作简单，实用性强，利于全面推广，具有很强的应用价值。
具体实施例方式
冷冻式巴氏涂片检测方法，包括以下步骤a)、先用细胞专用的采样器在宫颈处采集细胞样本；b)、然后将采样器采集的细胞样本涂沫于洁净的玻片上；c)、再把上述涂沫有细胞样本的玻片放置于醋酸乙醇混合固定液中，待玻片上的细胞样本被固定后，取出；d)、将上述取出的玻片上的细胞样本沉浸于细胞变性恢复液中1-5分钟，取出；e)、再将上述玻片放入冷冻器中冷冻，使细胞样本内渗入的水份形成冰晶；f)、最后，将经冷冻处理的带细胞样本的玻片取出，并在常温下直接进行HE染色或巴氏涂片染色、镜下观察诊断。
而醋酸乙醇混合固定液是采用含0.1％-5％以上的醋酸乙醇混合液。玻片放置于醋酸乙醇混合固定液中15至30分钟或以上。
而经细胞变性恢复液沉浸玻片再放入冷冻器内冷冻30分钟以上。所述冷冻器是电冰箱。所述变性恢复液是浓度在0.1％-10％之间的醋酸液，该液体较易穿透变性的粘液及细胞膜及细胞核内，达到进一步固定，增强粘液及细胞的渗透性，起到冰冻膨胀性裁体的作用而恢复细胞的形态和促进细胞染色，有利于对细胞形态的观察。
技术的原理经过醋酸乙醇混合固定液固定后的粘液及细胞，在这些固定液的作用下起到保持细胞活时的良好形态，其粘液内的蛋白分子发生构变，形成一层较为致密的膜状物粘附并包裹于细胞的周围，细胞固定后细胞内的各种成分亦发生形态同步性浓缩构变，尽管起到相对保持细胞形态的作用，但细胞及细胞内成分收缩明显，变形的粘液分子发生绞连，致密地封闭在细胞的周围，经醋酸乙醇混合液固定的细胞玻片或干燥变性的细胞玻片经变性恢复液进一步处理后，由于变性恢复液本身具有较强的渗透作用而迅速进入粘液及细胞内，在低温下(零度以下)冰箱内速冻，应用水性液体在冰体状态下体积机械性膨胀扩张的原理，渗透入粘液及细胞内的液体在冷冻状态下形成冰晶，在细胞内膨胀直至细胞膜达到张力自限时恢复细胞生活时的形态及体积，粘液内浸入变性恢复液后在冷冻状态下冰晶膨胀于具有一定程度变性绞连的糖蛋白粘液分子之间，致使绞连分子解开绞合，各种细胞及细胞成分以及粘液分子布散于恢复液形成的冰晶之间，形态上粘液变得松散稀薄，粘液分子与细胞之间黏附松解，细胞各成分渗透性明显增强。经过上述处理后，附有细胞的玻片直接进入染色剂内染色，细胞着色显著改善，核浆及细胞各成分清晰，细胞与细胞之间境界清楚，分辨较佳，核浆着色分明，显著地改善了传统巴氏涂片细胞染色不佳的状态，即使涂片具有一定的重叠，但细胞的轮角仍然清晰可辨，特别适用于大批量妇检时由于细胞玻片未能及时处理而长时间干燥留置后玻片细胞的修复处理，对恢复变性细胞形态及保持良好的染色效果起到重要作用。
权利要求
1.冷冻式巴氏涂片检测方法，其特征是，包括以下步骤a)、先用细胞专用的采样器在宫颈处采集细胞样本；b)、然后将采样器采集的细胞样本涂沫于洁净的玻片上；c)、再把上述涂沫有细胞样本的玻片放置于醋酸乙醇混合固定液中，待玻片上的细胞样本被固定后，取出；d)、将上述取出的玻片上的细胞样本沉浸于细胞变性恢复液中1-5分钟，取出；e)、再将上述玻片放入冷冻器中冷冻，使细胞样本内渗入的水份形成冰晶；f)、最后，将经冷冻处理的带细胞样本的玻片取出，并在常温下直接进行HE染色或巴氏涂片染色、镜下观察诊断。
2.根据权利要求1所述冷冻式巴氏涂片检测方法，其特征是，所述醋酸乙醇混合固定液的浓度为含0.1％-5％醋酸的醋酸乙醇混合液。
3.根据权利要求1或2所述冷冻式巴氏涂片检测方法，其特征是，所述玻片放置于醋酸乙醇混合固定液中15至30分钟或以上。
4.根据权利要求2所述冷冻式巴氏涂片检测方法，其特征是，所述玻片放入冷冻器内冷冻30分钟以上。
5.根据权利要求1或4所述冷冻式巴氏涂片检测方法，其特征是，所述冷冻器是电冰箱。
6.根据权利要求2所述冷冻式巴氏涂片检测方法，其特征是，所述变性恢复液是浓度在0.1％-10％之间的醋酸液。
全文摘要
本发明公开了一种冷冻式巴氏涂片检测方法，其包括以下步骤a)先用细胞专用的采样器在宫颈处采集细胞样本；b)然后将采样器采集的细胞样本涂沫于洁净的玻片上；c)再把上述涂沫有细胞样本的玻片放置于醋酸乙醇混合固定液中，待玻片上的细胞样本被固定后，取出；d)将上述取出的玻片上的细胞样本沉浸于细胞变性恢复液中1－5分钟，取出；e)再将上述玻片放入冷冻器中冷冻，使细胞样本内渗入的水分形成冰晶；f)最后，将经冷冻处理的带细胞样本的玻片取出，并在常温下直接进行HE染色或巴氏涂片染色、镜下观察诊断，因而具有成本低廉，细胞着色良好，操作简单，实用性强的优点。
文档编号A61B10/00GK1854709SQ20051003432
公开日2006年11月1日 申请日期2005年4月29日 优先权日2005年4月29日
发明者毛荣军 申请人:佛山市顺德区桂洲医院