专利名称：一种防治骨质疏松及抑郁症的丹参有效部位群提取工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及用于治疗骨质疏松症和抑郁症的药物提取工艺，该提取工艺的药物是中药丹参，该提取工艺提取的丹参水溶性有效部位群中其主要标志性成分丹参素的含量是传统工艺提取的38倍以上。
背景技术：
丹参为唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根及根茎，其水溶性部分在化学成分、药理作用方面已被广泛研究。丹参水溶性部分主要含酚酸类成分，具有抗心绞痛，增加冠脉血流量和对抗ADP所致血小板凝集等作用，临床可用于防治心脑血管疾病如冠心病，高血压，脑卒中，动脉粥样硬化等，同时还用于治疗肝纤维化，消化性溃疡，白内障，癌症，记忆缺失，爱滋病等疾病。我们的研究发现丹参的水溶性部分有明显防治肾上腺糖皮质激素导致的骨质疏松的作用，同时也发现了丹参的水溶性部分有明显防治抑郁症的作用。我们对丹参的水溶性成分进行了系列的实验研究，发现了用酸水热提法可使丹参的水溶性有效成分明显提高，本申请就该生产工艺提出发明申请。
目前对丹参水溶性成份的提取工艺主要有传统水煎法，乙醇回流法，动态温浸法，超声波法，渗漉法以及水醇综合提取工艺等，有人做了系统的研究和比较，证明了这些方法提取的丹参素等主要活性成分，以传统水煎法较好[刘重芳等，丹参不同提取工艺比较，中成药，1999，21(8)38]，文献报道的有关丹参素提取的得率不一，一般在0.2~2.8‰，即每公斤丹参药材可提取0.2~2.8克的丹参素。我们发明的酸水热提法可使丹参素的得率增加到20‰，即每公斤丹参药材可提取20克的丹参素，比传统工艺增加7到70倍。
发明内容
我们通过大量的实验研究和筛选，建立了丹参水溶性有效部位群的酸水热提法，该方法的主要技术是；取丹参原药材，粉碎成20到100目左右的细粉，用酸水渗泡，然后，加热提取，提取时间45～180分钟。过滤，保存滤液，药渣继续用10倍左右的酸水，水或碱水提，提取时间45～180分钟。过滤，保存滤液，合并两次滤液，浓缩，干燥，按常规工艺制成可供药用的制剂。
本发明中丹参水溶性有效部位群的酸水热提法的提取工艺所提到的酸是指在盐酸或醋酸，酸水是指在水溶液中加入盐酸或醋酸，酸与水的重量比是0.1～4％，酸水渗泡，是指丹参药材粉碎后放在上述酸水中渗泡1～48小时，酸水热提是指把丹参原药材粉碎后渗泡在酸水中加热至85～100℃，45～180分钟。
本发明药渣第二次提取，可以采用酸水提取，酸为盐酸或醋酸，也可采用碱水提，碱为氢氧化钠，碳酸钠或碳酸氢钠。
实施例一取丹参原药材粉碎成40目，按1克丹参加10ml 1％HCL的比例投料进行酸水渗泡2小时，加热提取，从水沸后，保持微沸提取70分钟，过滤，保留上清液，滤渣再按1克丹参加10ml水的比例进行第二提取，保持微沸60分钟，过滤，保留上清液，合并两次上清液，用NaOH调节PH值至中性，浓缩。
同时，另取同一批丹参做水提两次对照。
两批产品用高效液相色谱分析，检测方法色谱柱ODS2 C18柱，25℃；波长281nm；流速1ml/min；流动相A1％乙酸溶液，B1％乙酸甲醇。梯度洗脱B由10％开始加至35％洗脱30min。
上样条件进样量均为5微升。标样配制原儿茶醛0.0013克，丹参素0.0026克，丹酚酸B 0.0045克，加1％乙酸配制成25ml。
检测丹参素，原儿茶醛和丹酚酸B标准品的高效液相色谱指纹图见说明书附图1，丹参水提对照的高效液相色谱指纹图谱见说明书附图2，本发明的酸水热提法的高效液相色谱指纹图谱见说明书附图3。
与对照品比较，计算出丹参水提对照法提取的丹参素的含量为2.83mg/g生药，原儿茶醛的含量为0.132mg/g生药，丹酚酸B含量为23.38mg/g生药。
用本发明的酸水热提法工艺提取的丹参素含量为201.35mg/g生药，原儿茶醛的含量为0.256mg/g生药，丹酚酸B含量为12.82mg/g生药。
丹参酸水热提法丹参素的得率为丹参水提对照的71倍，原儿茶醛约为2倍，丹酚酸B约为0.5倍。
实施例二取丹参原药材粉碎成40目，按1克丹参加10ml 1％HCL的比例投料进行酸水渗泡2小时，加热提取，从水沸后，保持微沸提取70分钟，过滤，保留滤液，滤渣再按1克丹参加10ml水的比例加0.3％NaOH进行碱提取，保持微沸60分钟，过滤，保留上清液，合并两次滤液，浓缩。
同时，另取同一批丹参做水提对照，第二次提取按1克丹参加10ml水的比例加0.3％NaOH进行碱提取，进行比较。两批产品用高效液相色谱分析，检测丹参素，原儿茶醛和丹酚酸B的含量，方法同实施例一，丹参加碱水提对照的高效液相指纹图谱见说明书附图4，本发明的酸水热提法的高效液相色谱指纹图谱见说明书附图5。
丹参水提对照丹参素的含量为3.41mg/g生药，原儿茶醛的含量为0.228mg/g生药，丹酚酸B含量为24.81mg/g生药。
丹参酸水热提法丹参素的含量为171.17mg/g生药，原儿茶醛的含量为0.217mg/g生药，丹酚酸B含量为14.57mg/g生药。
丹参酸水热提法丹参素的得率为丹参水提对照的50倍，原儿茶醛约为0.95倍，丹酚酸B约为0.6倍。
实施例三取丹参原药材粉碎成40目，按1克丹参加10ml 1％HCL的比例投料进行酸水渗泡2小时，加热提取，从水沸后，保持微沸提取70分钟，过滤，保留滤液，滤渣再按1克丹参加10ml水的比例加2％NaOH进行碱第二提取，保持微沸60分钟，过滤，保留滤液，合并两次滤液，用HCL调节PH值至中性，浓缩。
同时，另取同一批丹参做水提对照，第二次提取按1克丹参加10ml水的比例加2％NaOH进行碱提取，进行比较。两批产品用高效液相色谱分析，检测丹参素，原儿茶醛和丹酚酸B的含量，方法同实施例一。丹参加碱水提对照的高效液相指纹图谱见说明书附图6，酸水热提法的高效液相色谱指纹图谱见说明书附图7。
丹参碱水提对照丹参素的含量为2.93mg/g生药，原儿茶醛的含量为0.326mg/g生药，丹酚酸B含量为5.67mg/g生药。
丹参酸水热提法丹参素的含量为168.27mg/g生药，原儿茶醛的含量为0.177mg/g生药，丹酚酸B含量为6.52mg/g生药。
丹参酸水热提法丹参素的得率为丹参水提对照的57倍，原儿茶醛约为0.5倍，丹酚酸B约为1.15倍。
实施例四本发明的丹参酸热水提工艺称取过40目筛的丹参粉末100g，加入含40ml盐酸的水溶液1000ml，于蒸馏瓶中蒸馏，加热回流70min。抽滤，收集滤液，药渣加入1000ml蒸馏水，加热回流60min，抽滤，收集滤液。合并两次滤液，浓缩。
丹参水提对照工艺称取过40目筛的丹参粉末100g，加入蒸馏水1000ml，于蒸馏瓶中蒸馏，加热回流70min。抽滤，收集滤液，药渣加入1000ml蒸馏水，加热回流60min，抽滤，收集滤液。合并两次滤液，浓缩备用。
两批产品用高效液相色谱分析，检测方法色谱柱ODS2 C18柱，波长281nm；流速1ml/min；流动相A5％乙酸溶液，B甲醇。梯度洗脱0min A∶B＝90％∶10％；5min A∶B＝90％∶10％；10min A∶B＝65％∶35％；30min A∶B＝90％∶10％。检测结果丹参素，原儿茶醛和丹酚酸B标准品出峰时间分别为丹参素4.7min，原儿茶醛7.1min，丹酚酸B20.4min。各组的成分含量见下述。丹参水提对照的高效液相指纹图谱见说明书附图8，酸水热提法的高效液相色谱指纹图谱见说明书附图9，丹参药材对照品的高效液相指纹图谱见说明书附图10，丹参素，原儿茶醛，丹酚B标准品对照高效液相图谱见说明书附图11。
丹参水提对照丹参素的含量为1.137mg/g生药，原儿茶醛的含量为0.937mg/g生药，丹酚B含量为55.2mg/g生药。
丹参酸水热提法丹参素的含量为42.933mg/g生药，原儿茶醛的含量为0.637mg/g生药，丹酚酸B含量为8.45mg/g生药。
丹参酸水热提法丹参素的得率为丹参水提对照的38倍，原儿茶醛约为0.8倍，丹酚酸B约为0.15倍。
研究证明，按上述工艺提取的丹参水溶性有效部位群制成的制剂，对各种骨质疏松症有明显的预防和治疗作用，特别是对糖皮质激素造成的骨质疏松有明显的防治作用。同时，研究还发现，按上述工艺提取的丹参水溶性有效部位群可以保护脑组织，特别是脑组织的海马部位的神经元细胞，使其不被其他不良刺激损伤，可用于预防和治疗抑郁症等神经精神性疾病。用本工艺提取的丹参水溶性有效部位群制备的各种制剂，还可用于临床丹参可治疗的各种疾病如心脑血管疾病等。
本发明专利使丹参的主要有效成分丹参素的得率提高38~70倍，可用于制药企业制备含丹参的制剂，可大大降低成本，提高药效。本发明专利提供的相关的高效液相色谱指纹图谱，可作为制药企业控制质量的质量标准应用。
图1丹参素，原儿茶醛和丹酚酸B标准品的高效液相色谱图；图2丹参按传统工艺水提对照的高效液相色谱指纹图谱；图3丹参用本发明的酸水热提法工艺的高效液相色谱指纹图谱；图4丹参加碱水提对照的高效液相指纹图谱；图5丹参用本发明的酸水热提法工艺的高效液相色谱指纹图谱；图6丹参加碱水提对照的高效液相指纹图谱；图7丹参用本发明的酸水热提法的高效液相色谱指纹图谱；图8丹参水提对照的高效液相指纹图谱；图9丹参用本发明的酸水热提法的高效液相色谱指纹图谱；图10丹参药材对照品的高效液相指纹图谱；图11丹参素，原儿茶醛，丹酚酸B标准品对照高效液相图谱。
权利要求
1.一种丹参水溶性有效部位群的提取工艺，其特征在于该提取工艺是把原药材粉碎后先用酸水热提法进行首次提取，之后再按传统工艺进行提取，过滤，浓缩，干燥，制备成可供药用的制剂。
2.如权利要求1所述的一种丹参水溶性有效部位群的提取工艺，其特征是该提取工艺所提到的酸是指盐酸或醋酸，酸水是指在水溶液中加入盐酸或醋酸，酸与水的重量比是0.1～4％，酸水渗泡，是指丹参药材粉碎后放在上述酸水中渗泡1～48小时，酸水热提是指把丹参原药材粉碎后渗泡在酸水中加热至85～100℃，45～180分钟。
3.如权利要求1所述的一种丹参水溶性有效部位群的提取工艺，其特征是该提取工艺是指下述工艺①取丹参原药材粉碎成40目，按1克丹参加10ml 1％HCL的比例投料进行酸水渗泡2小时，加热提取，从水沸后，保持微沸提取70分钟，过滤，保留滤液，滤渣再按1克丹参加10ml水的比例进行第二次提取，保持微沸60分钟，过滤，保留滤液，合并两次滤液，用NaOH调节PH值至中性，浓缩。②取丹参原药材，粉碎成40目，按1克丹参加10ml 1％HCL的比例投料进行酸水渗泡2小时，加热提取，从水沸后，保持微沸提取70分钟，过滤，保留滤液，滤渣再按1克丹参加10ml水的比例加0.3％NaOH进行碱提取，保持微沸60分钟，过滤，保留滤液，合并两次滤液，浓缩。③取丹参原药材粉碎成40目，按1克丹参加10ml 1％HCL的比例投料进行酸水渗泡2小时，加热提取，从水沸后，保持微沸提取70分钟，过滤，保留滤液，滤渣再按1克丹参加10ml水的比例加2％NaOH进行碱第二次提取，保持微沸60分钟，过滤，保留滤液，合并两次滤液，用HCL调节PH值至中性，浓缩。④称取过40目筛的丹参粉末100g，加入含40ml盐酸的水溶液1000ml，于蒸馏瓶中蒸馏，加热回流70min。抽滤，收集滤液，药渣加入1000ml蒸馏水，加热回流60min，抽滤，收集滤液。合并两次滤液，浓缩。
4.如权利要求1所述的一种丹参水溶性有效部位群的提取工艺，可用于制备各种含有丹参的可供药用的制剂。
5.如权利要求1所述的一种丹参水溶性有效部位群的提取工艺制备的可供药用的制剂，可用于临床骨质疏松，抑郁症，神经精神性疾病，老年性痴呆，心脑血管疾病的预防和治疗。
6.如权利要求3所述的丹参水溶性有效部位群的提取工艺，其附图所示的高效液相色谱指纹图谱可作为其药品鉴别与质量标准的图谱。
全文摘要
本发明公开了一种防治骨质疏松及抑郁症的中药有效部位群的提取工艺，该提取工艺的药物是丹参，该提取工艺提取的丹参水溶性有效部位群中其主要标志性成分是丹参素，原儿茶醛和丹酚酸B。该工艺提取的丹参素的含量是传统工艺提取的38～71倍。该提取工艺的特征是用酸水热提。该法提取的丹参水溶性有效部位群可制备成可供药用的各种制剂。这些制剂可用于预防和治疗骨质疏松症，抑郁症，神经精神性疾病以及心脑血管疾病等。
文档编号A61P19/00GK1887309SQ20061007443
公开日2007年1月3日 申请日期2006年4月9日 优先权日2006年4月9日
发明者崔燎, 吴铁, 孙宇, 林坚涛 申请人:广东医学院