一种治宫颈炎的中药组合物及其制备方法

专利名称：一种治宫颈炎的中药组合物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种中药组合物及其制备方法和质量检测方法，特别涉及一种治疗宫颈炎的中药组合物及其制备方法和质量检测方法。
背景技术：
本处方为中医临床经验方，一直以汤剂在临床应用，为了更广泛使用，便于患者服用，便于携带，便于运输，进一步降低服用剂量，进行成药的研制。宫颈炎在临床属慢性病，且易反复发作，故需选择口服固体制剂，较为适宜。胶囊剂质量稳定，而且生产工艺简单，机械化程度高，生产成本低，便于储藏、运输、携带和服用，生产成本低，患者容易接受，故选择制成胶囊剂。
益母草具有活血调经，利尿消肿的功效，用于月经不调，痛经，闭经，恶露不尽，水肿尿少。主要含有生物碱、黄酮类、环烯醚萜类、二萜类、丹宁、脂肪酸、皂甙、强心甙和挥发油等成分。据现代药理学研究报道益母草对子宫有兴奋作用，益母草总碱对豚鼠离体子宫有兴奋作用。益母草对血小板聚集、微血栓形成、纤维蛋白血栓形成及红细胞的聚集性均有抑制作用，使血栓形成时间延长，血栓长度缩短，益母草碱有显著的降低血液粘度的作用，是一种良好的活血化瘀药。预实验研究表明益母草总碱可明显增加离体及在体动物子宫的活动能力，低剂量8mg表现为子宫活动的振幅和频率加快，张力变化不明显(不引起强直性痉挛)；大剂量则表现为抑制作用。同时益母草总碱可增加整体动物子宫颈的血流量。
据文献报道其提取条件主要为水提醇沉或一定浓度的乙醇提取。本实验根据益母草中总生物碱水溶性大，易与酸成盐的理化性质，确定以水煮提，浓缩至干，稀酸溶解，强酸型离子交换树脂进一步精制的工艺路线。
广东紫珠的化学成分未见报道，预试验结果表明有黄酮类、缩合鞣质、酚性化合物、糖类的化学反应。广东紫珠的药理作用亦未见报道，同属的紫珠、华紫珠、杜虹花、裸花紫珠(Callicarpa nudiflora Hook.et Arn.)报道较多。紫珠有明显的止血作用和升高血小板作用，其醇提物对小鼠具有明显的镇痛作用。裸花紫珠可加快创面愈合，减少疤痕形成并具有延缓衰老的作用，裸花紫珠片对金黄色葡萄球菌、伤寒沙门氏菌、肺炎球菌有不同程度的抑菌作用，是一个药理作用较广泛的抗菌消炎药。华紫珠与杜虹花对金黄色葡萄球菌及沙门氏菌有高度的抑菌作用，对白色念珠菌、寒伤杆菌及福氏痢疾杆菌有较强的抑菌作用。蒋惠锑等测定了该属植物中的紫珠、华紫珠、枇把叶紫珠(C.kochiana)、日本紫珠、大叶紫珠、老鸦糊(C.giraldii)的体外抗氧化作用。文献报道华紫珠、杜虹花与裸花紫珠的毒性较小，临床口服用药安全范围较大。广东紫珠苦、涩、凉，归肝、肺、胃经，具收敛止血、清热解毒之功效。临床用于咯血、便血等各种出血及咽喉肿痛、热毒疮疡。常用于治疗宫颈糜烂出血、阴道炎、宫颈炎等妇科疾病。根据黄酮类化合物溶于水、乙醇中的性质，确定以水煮，醇沉除去杂质；大孔树脂精制黄酮类化合物，为了提高疗效降低服用量，所以选择大孔树脂进一步精制广东紫珠中的黄酮类化合物。

发明内容
本发明目的在于提供一种中药组合物及其制剂的制备方法，本发明另一目的在于提供该中药组合物制剂的质量检测方法及用途。
本发明目的是通过如下技术方案实现的本发明中药组合物的原料药组成如下益母草7-60重量份 广东紫珠7-60重量份上述原料药的优选重量配比如下益母草7重量份 广东紫珠55重量份上述原料药的优选重量配比如下益母草60重量份广东紫珠15重量份上述原料药的优选重量配比如下益母草40重量份广东紫珠40重量份本发明中药组合物原料药，加入常规辅料，按照常规工艺，制成临床可接受的剂型，如胶囊剂、丸剂、片剂、颗粒剂、口服液体、内服膏剂、栓剂、外用膏剂、泡腾片、外用洗剂、气雾剂或喷雾剂。
本发明组合物的具体制备工艺如下取益母草药材，加8-12倍量水，提取2-4次，每次1-2h，合并提取液，过滤，浓缩至50℃-70℃相对密度1.00-1.15的稠膏，加0.1mol/L-1mol/L盐酸溶解，用浓盐酸调pH为1-3，然后用0.1mol/L-1mol/L盐酸稀释至1mL药液相当于1-2g药材，即50℃-70℃相对密度1.00～1.20，经离心或滤过后，取上清液上强酸型离子交换树脂柱，吸附0.5-2h，用蒸馏水洗脱至流出液无色，用氨水碱化树脂PH8-9，用30-95％氨性乙醇或2mol氨水洗脱，使流出液pH8-12，收集10倍柱体积流出液，回收乙醇，浓缩至干，真空干燥，得干浸膏，备用；取广东紫珠药材，粉碎成段，加8-12倍量水，提取2-4次，每次1-2h，合并提取液，过滤，浓缩至1mL药液相当于1.5g药材，即50℃-70℃相对密度为1.00～1.02，加95％乙醇使含醇量为50-70％，冷藏放置24h，滤过，回收乙醇，使1mL药液相当于1.5g药材，即50℃-70℃相对密度为1.00～1.02，将药液过大孔树脂，吸附0.5-2h，用蒸馏水洗脱至流出液近无色，用10％-80％乙醇洗脱，收集5BV洗脱液，回收乙醇，浓缩至干，真空干燥，得干浸膏；将干浸膏加常规辅料，按常规方法制成胶囊剂、丸剂、片剂、颗粒剂、口服液体、内服膏剂、栓剂、外用膏剂、泡腾片、外用洗剂、气雾剂或喷雾剂。
本发明组合物的优选制备工艺如下取益母草药材，加10倍量水，提取3次，每次1.5h，合并提取液，过滤，浓缩至60℃相对密度1.05的稠膏，加0.1mol/L盐酸溶解，用浓盐酸调pH为1，然后用0.1mol/L盐酸使1mL药液相当于1g药材，即60℃相对密度为1.00～1.02，经离心后，取上清液上001×7型离子交换树脂柱，吸附1h，用蒸馏水洗脱至流出液无色，用氨水碱化树脂PH8-9，75％或95％氨性乙醇或2mol氨水洗脱，使流出液pH9-10，收集10倍柱体积流出液，回收乙醇，浓缩至干，真空干燥，得干浸膏，备用；取广东紫珠药材，粉碎成段，加10倍量水，提取3次，每次1.5h，合并提取液，过滤，浓缩至1mL药液相当于1.5g药材，即60℃相对密度为1.00～1.02加95％乙醇使含醇量为60％或70％，冷藏放置24h，滤过，回收乙醇，使1mL药液相当于1.5g药材，即60℃相对密度为1.00～1.02，将药液过HPD 100、HPD 400或HPD 300大孔树脂，吸附1h，用蒸馏水洗脱至流出液近无色，用50％、60％或70％乙醇洗脱，收集5倍柱体积洗脱液，回收乙醇，浓缩至干，真空干燥，得干浸膏；将干浸膏加常规辅料，按常规方法制成胶囊剂、丸剂、片剂、颗粒剂、口服液体、内服膏剂、栓剂、外用膏剂、泡腾片、外用洗剂、气雾剂或喷雾剂。
本发明的质量检测方法包括如下鉴别和/或含量测定鉴别方法包括如下鉴别中的一种或几种A.取本药物组合物固体制剂成人日服用剂量的1/3(相当于生药量10g)加乙醇5ml，超声提取30min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取盐酸水苏碱对照品，加乙醇制成每1ml含5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以4∶1∶0.5正丁醇-盐酸-水为展开剂，展开，取出，凉干，喷以稀碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；B.取本药物组合物固体制剂成人日服用剂量的1/3(相当于生药量30g)，加乙醇5ml，超声提取30min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取过60目筛的广东紫珠粉末1g，用70％乙醇50mL回流提取0.5h，提取液滤过，水浴蒸干，残渣加5ml蒸馏水使溶解，用10ml水饱和的正丁醇分2次萃取，萃取液合并，减压回收正丁醇后，残渣加510mL甲醇使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照品溶液各2μl，分别点于同一聚酰胺薄层板上，以4∶1∶0.5乙醇-水-冰醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％AlCl3乙醇溶液，热风吹至斑点在365nm波长下显黄色荧光；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
质量检测方法中的含量测定如下色谱条件与系统适用性试验3.5μm，250×4.6mm LC-SCX色谱柱，以流动相0.05mol/LNa2HPO4-0.05mol/L NaH2PO4，pH5.5，流速1mL/min，检测波长为192nm，柱温为35℃；理论板数按盐酸水苏碱峰计算应不低于1500；对照品溶液的制备称取105℃干燥3小时的盐酸水苏碱对照品适量，加0.05mol/LNa2HPO4制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；供试品溶液的制备将本药物组合物固体制剂成人日服用剂量的1/3(相当于生药量10g)，置具塞三角瓶中，加乙醇25ml，称定重量，超声提取30ml，放冷，再称定重量，用乙醇补足所失的重量，摇匀，滤过；取续滤液10mL，水浴蒸干，用0.05mol/LNa2HPO4 10mL溶解，加活性炭0.5g，水浴加热半分钟，搅拌，滤过，滤液置于25mL量瓶中，加0.05mol/LNa2HPO4溶液至刻度；测定法分别精密吸取对照品溶液5μl与供试品溶液5～10μl，注入高效液相色谱仪，测定，计算，即得；药物组合物每单位制剂(按胶囊每粒，片剂每片、颗粒剂每袋、口服液体每10毫升等常规制剂单位计)含盐酸水苏碱C7H13NO2计，不得少于0.03mg。
本发明药物组合物制剂成人日服用剂量相当于生药量30g。
组合物胶囊剂药效学实验表明组合物胶囊可明显改善苯酚和大肠杆菌所致的宫颈病理损伤，使局部炎症反应得到缓解，并减轻苯酚刺激引起的大鼠阴道潜血。组合物胶囊可明显降低上述宫颈炎模型动物IL-1β、IL-2、TNFα、铜兰蛋白、PGE2、等与炎症有关的炎性介质和细胞因子含量。组合物胶囊体外对于多种宫颈炎致病菌具有抑制或杀灭作用。组合物胶囊对二甲苯致小鼠耳肿胀、角叉菜胶致大鼠足肿胀以及大鼠棉球肉芽肿的形成均有显著抑制作用，表明其具有显著抗炎作用。组合物胶囊可明显抑制醋酸致小鼠扭体反应，具有镇痛作用。组合物胶囊可降低大肠杆菌所致的宫颈炎模型大鼠的血液粘度，显示具有一定活血化淤作用。
下述实验和实施例用于进一步说明但不限于本发明。
实验例1 益母草提取工艺实验1、水提条件的优选采用正交试验的方法，选择四因素三水平正交试验表，以加水量、煎煮时间、煎煮次数为三因素，每因素设计三个水平，以出膏率、总生物碱提取的百分含量为指标，采用L9(34)正交设计表安排实验，因素水平见表1
表1益母草水提因素水平表

提取方法根据正交表中的实验设计，每份称取药材50g进行煎煮，提取液滤过，浓缩，真空干燥，称重，测定含量。
表2益母草总碱正交实验优选结果

表3出膏率的方差分析表

方差分析表3结果表明，因素A、B对出膏率无显著性影响，因素C有显著性影响(P＜0.05)，各因素对出膏率的影响程度从大到小依次为C＞B＞A；在A因素中A3＞A2＞A1；在B因素中B3＞B2＞B1；在C因素中C2＞C3＞C1。
表4总生物碱的方差分析表

方差分析表4结果表明因素A、B对出膏率无显著性影响，因素C有显著性影响(P＜0.05)，各因素对出膏率的影响程度从大到小依次为C＞A＞B；在A因素中A2＞A3＞A1；在B因素中B2＞B3＞B1；在C因素中C3＞C2＞C1，。综合以上两个方差分析结果，结合具体操作条件，优选益母草水提的工艺路线为A2B2C3，即加水量10倍，煎煮1.5小时，煎煮3次。
2、强酸型阳离子交换树脂精制总生物碱的工艺研究不同型号阳离子交换树脂的选择分别取各型树脂20ml，每型3份，湿法装入规格相同的柱中，，加入样品液20ml(1ml药液相当于1.0g药材)，放置30min，，先用蒸馏水冲洗至流出液近无色，用2mol的氨水40ml碱化树脂，使流出液PH值为9-10，用氨性乙醇(PH9-10)洗脱，使洗脱速率为1-2ml/min，收集有色洗脱液100ml。
表5不同型号离子交换树脂对总生物碱的吸附量(n＝3)

实验结果表明在相同条件下，007型强酸型离子交换树脂对总生物碱的吸附量最大，故选择007型强酸型离子交换树脂。
洗脱溶媒的选择取强酸型阳离子交换树型7型20ml上柱，加样品液10ml(1ml药液相当于1g药材)，放置0.5h后，用蒸馏水洗至流出液近无色，水液弃去，用氨水碱化树脂PH8-9，依次用2mol氨水、氨性乙醇30％、50％、70％、95％洗脱，使流出速率为1-2ml/min，收集各部分洗脱液，蒸干后，用0.molM盐酸10ml溶解，各加0.5g活性炭，水浴加热1min后，滤过，分别用改良碘化铋钾、硅钨酸试液，新鲜配制的雷氏盐试液作鉴别实验。实验结果见表6。
表6洗脱溶媒的考察

注-代表阴性，+代表阳性根据实验结果，选择95％氨性乙醇为洗脱溶剂氨性乙醇洗脱体积的考察取强酸型阳离子交换树型7型20ml上柱，加样品液10ml(1ml药液相当于1g药材样品液)，放置0.5h后，用蒸馏水洗至流出液近无色，水液弃去，用氨水碱化树脂PH8-9，氨性乙醇95％洗脱，使流出速率为1-2ml/min，收集洗脱液每25ml为一份，连续收集6份，蒸干后，用0.1M盐酸10ml溶解，各加0.5g活性炭，水浴加热1min后，滤过，分别用改良碘化铋钾、硅钨酸试液，新鲜配制的雷氏盐试液检查。实验结果见表7。
表7乙醇洗脱体积的考察

实验结果表明，氨性乙醇洗脱体积为100ml，10ml/g最佳交换时间的考察取007型离子交换树脂4份，各20ml，分别湿法装入规格相同的柱中，均加入样品液10ml(1ml药液相当于1g药材)，分别放置0.5、1、2、6h后，先用蒸馏水冲洗至流出液近无色，再用2mol的氨水碱化树脂，使流出液pH值为9-10，然后用碱性乙醇(pH9-10)洗脱，使洗脱速率1-2ml/min，收集有色洗脱液100ml。样品液的制备及总生物碱的含量测定同上。实验结果见表8。
表8最佳交换时间的考察

实验研究结果表明，时间短或太长，均使测定结果偏低，究其原因，交换时间短，部分生物碱离子来不及与树脂结合或结合不牢固，易被蒸馏水洗脱下去，交换时间太长，部分生物碱离子与树脂结合非常牢固，不易被洗脱下来，从而使过柱收得率降低。因此，使用离子交换树脂，掌握交换时间十分关键，根据实验研究结果，选择交换时间为1h。
最大吸附量的测定取7型强酸型阳离子交换树脂6份，各20ml，湿法装入规格相同的柱中，分别加入样品液6ml、8ml、10ml、12ml、14ml、16ml(1ml药液相当于1g药材)，1h后，先用蒸馏水冲洗至流出液近无色，水液弃去，用2mol的氨水碱化树脂，使流出液PH值为9-10，用氨性乙醇(PH9-10)洗脱，使洗脱速率1-2ml/min，收集有色洗脱液100ml。
样品液的制备及总生物碱的含量测定同上。实验结果见表9。
表9最大吸附量的考察

经实验测定，体积为20ml的7型强酸阳离子交换树脂最大的交换容量为104.55mg，也就是1ml树脂可交换0.7g药材中的生物碱。即比上样量为1.4/g。
小结经对强酸型阳离子交换树脂交换益母草总生物碱的影响因素的考察，实验结果表明7型强酸型阳离子交换树脂交换益母草总生物碱的性能最好，其洗脱溶剂为95％的氨性乙醇，最佳交换时间为1h，每毫升最大吸附量为0.7g药材，即比上样量为1.4/g，在此条件下，上柱保留率为98.05％。
实验例2 广东紫珠提取工艺的研究实验1、提取工艺条件的优选为了优选广东紫珠提取工艺条件，以加水量、煎煮时间、煎煮次数为三因素，每因素设计三个水平，以出膏率、总黄酮提取的百分含量为指标，采用L9(34)正交设计表安排实验，结果见表10。
表10总黄酮水提正交实验表头

提取方法根据正交表中的实验设计，每份称取药材50g进行水提，提取液滤过，浓缩，真空干燥，称重。
正交优选实验结果表11表11广东紫珠总黄酮的正交实验结果

表12出膏率的方差分析表

方差分析表12结果表明，因素A、B和C对出膏率无显著性影响，各因素对出膏率的影响程度从大到小依次为C＞B＞A；在A因素中A3＞A1＞A2；在B因素中B2＞B1＞B3；在C因素中C3＞C2＞C1。
表13以总黄酮在药材中百分含量为指标的方差分析表

方差分析表13结果表明，因素B对总生物碱提出率无显著性影响，因素A、C有显著性影响(P＜0.05)，各因素对出膏率的影响程度从大到小依次为C＞A＞B；在A因素中A2＞A1＞A3；在B因素中B2＞B3＞B1；在C因素中C3＞C2＞C1。综合表25、26的方差分析结果，结合具体操作条件，确定最佳有提取工艺为A2B2C3，即加水量10倍，煎煮1.5小时，煎煮3次。
2、醇沉工艺的考察不同醇沉浓度的考察取药材200g，按选定的提取工艺提取，浓缩至200ml，(1ml药液相当于1g药材)等分为四份，每份50m1，用95％的乙醇使含醇量分别为50％，60％，70％，80％，放置24小时后，滤过，回收乙醇，浓缩，真空干燥，精密称定，研成粉末后装入密封塑料袋内保存备用。取各醇沉浓度的干浸膏粉约1g(平行两份)，置索氏提取器内，用70％乙醇80ml提取至无色，并定容于100ml容量瓶内。精密吸取5ml于50ml容量瓶内，蒸馏水定容。含量测定方法按3.2.1.2项下测定各醇沉条件下所得干浸膏中总黄酮的含量，实验结果见表14表14不同醇沉浓度的考察

注总黄酮的百分含量以每50g药材含总黄酮的百分含量计总黄酮在药材中的百分含量的结果表明，60％醇沉条件较好，选择70％醇沉条件，损失0.09％的总黄酮，可是出膏率降低1.54％，确定醇沉条件为含醇量70％更为合理。
不同浓缩程度的考察称取药材150g，按选定的条件提取，将煎液合并滤过，浓缩至150ml，等分为3份，其中两份再分别浓缩至1g药液相当于1.5、2.0药材。分别加95％乙醇使含醇量为70％，置冰箱中放置24小时后，滤过，回收乙醇，浓缩，真空干燥，精密称定重量。取各醇沉浓度的干浸膏粉约1g(平行两份)，精密称定。置索氏提取器内，用70％乙醇80ml提取至无色，定容于100ml容量瓶内。精密吸取5ml于50ml容量瓶内，蒸馏水定容。含量测定方法按3.2.1.2项下操作测定。实验结果见表15。
表15不同浓缩程度对总黄酮含量影响的考察结果

注总黄酮的百分含量以每50g药材含总黄酮的百分含量计结果表明，以出膏率为评价指标，浓缩比例为1∶2时最低，但损失总黄酮较多；以总黄酮的含量为评价指标，浓缩比例为1∶1含量最高。选择浓缩比例为1∶1.5，其出膏率比1∶1时低1.2％，和1∶2时相近，而总黄酮含量与1∶1时相近，故选择浓缩比例为1∶1.5。
3、大孔树脂柱吸附净化工艺的研究药液的制取按前面优选的提取条件提取，既加水量10倍，每次1.5小时，煎煮3次，合并煎液，浓缩至1ml药液相当于1.5g药材，加入95％乙醇使含醇量为70％，置冰箱中放置24小时后，滤过，回收乙醇，浓缩至使1ml药液相当于1.5g药材。
不同型号的大孔树脂对广东紫珠总黄酮吸附量的考察量取处理好备用的各型大孔树脂，每型20ml湿法装入相同规格的柱中，每柱加入样品液15ml时达到过量吸附，用蒸馏水冲洗至流出液近无色，水液弃去，用70％的乙醇洗脱，调节流出速率1-2ml/min，收集洗脱液。将收集的洗脱液浓缩适量，用70％的乙醇溶解，并定容于100ml容量瓶内，取5ml于50ml容量瓶内，蒸馏水定容。取5ml于25ml容量瓶内，按3.2.1.2项下操作测定总黄酮含量。
表16不同型号大孔树脂对广东紫珠的吸附量

根据实验研究结果，选择HPD-300型大孔树脂。
大孔树脂乙醇洗脱浓度的考察4、定性考察实验选择了水、10％乙醇、30％乙醇、50％乙醇、70％乙醇、95％乙醇依次洗脱吸附在树脂上的总黄酮，收集各洗脱液，浓缩至干，95％乙醇溶解，盐酸镁粉反应、三氯化铝乙醇液检测。实验结果见表17。
表17乙醇洗脱浓度对总黄酮洗脱能力的定性检查

注+表示阳性反应，-表示阴性反应，实验结果表明70％乙醇可将总黄酮全部洗脱下来。
5、定量考察量取处理好备用HPD-300的大孔树脂20ml，湿法装柱，用蒸馏水冲洗后，上样10ml(1ml相当于1.5g药材)，放置30min，，用蒸馏水冲洗至流出液近无色，依次用10％、30％、50％、70％、95％的乙醇洗脱，使洗脱速率1-2ml/min收集洗脱液100ml。将收集的洗脱液浓缩适量，用70％的乙醇定容于100ml容量瓶内，取5ml于50ml容量瓶内，蒸馏水定容至刻度。取5ml于25ml容量瓶内，测定总黄酮含量。实验结果见表18。
表18乙醇洗脱浓度对总黄酮洗脱能力的定量检查

根据实验研究结果确定70％乙醇为洗脱溶剂。
大孔树脂乙醇洗脱体积的考察量取处理好备用的大孔树脂HPD-300型20ml，湿法装柱，上样10ml(1ml相当于1.5g药材)，放置30min后用蒸馏水冲洗至流出液近无色，弃去水液，用70％乙醇洗脱200ml洗脱，使洗脱速率1-2ml/min，每收集50ml为一份，收集4份，共200ml。将收集的洗脱液用70％的乙醇定溶于100ml容量瓶内，取5ml于50ml容量瓶内，蒸馏水定容至刻度。总黄酮的含量测定同前，实验结果结果见表19。
表19洗脱溶剂用量的考察

研究结果表明，70％乙醇100ml可将20ml大孔树脂吸附的广东紫珠总黄酮完全洗脱下来，相当于5BV70％的乙醇洗脱。
吸附时间的考察量取处理好备用的大孔树脂HPD-300型20ml，取4份，湿法装柱，上样品液10ml(1ml相当于1.5g药材)，使放置0.5、1.0、2.0、6.0小时，使洗脱速率1-2ml/min用蒸馏水冲洗至流出液近无色，水洗脱液弃去，用70％乙醇洗脱洗脱，分别收集洗脱液100ml，水浴浓缩适量，70％乙醇定容于100ml容量瓶内，精密量取10ml，浓缩，真空干燥后，精密称定重量。分别另取5ml于50ml容量瓶内，蒸馏水定溶。总黄酮的含量测定同前。实验结果见表20。
表20吸附时间的考察

注总黄酮的百分含量以每15g药材含总黄酮的百分含量计实验研究结果分析吸附时间越长，出膏率越低，相应的总黄酮的损失也越大。吸附时间为1h，其出膏率比0.5低0.1％，总黄酮含量很接近，吸附时间越长，其出膏率虽然降低，但是总黄酮损失较大，故选择吸附时间为1h。
最大上样量的考察量取处理好备用的大孔树脂HPD-300型6份，每份20ml，湿法装柱，分别上样4、6、8、10、12、14ml样品液(1ml相当于1.5g药材)，均吸附1.0小时后，用蒸馏水冲洗至流出液近无色，水液弃去，用70％乙醇100ml洗脱，使洗脱速率1-2ml/min，分别收集洗脱液，水浴浓缩适量，70％乙醇定容于100ml容量瓶内，精密量取10ml，浓缩，真空干燥后，精密称定重量。分别另取5ml于50ml容量瓶内，蒸馏水定容。总黄酮的含量测定同前，实验结果见表21。
表21大孔树脂HPD-300型最大吸附量的考察

注总黄酮百分含量相当于以药材中含总黄酮的百分含量计实验研究结果分析随着上样量的增大，大孔树脂吸附量成比例的增加，到上样量为12、14ml时，不随上样量的增加而增加，而且总黄酮在药材中的含量下降了幅度较大，表明总黄酮有较大损失。上样量为10ml，结果表明总黄酮基本无损失，故选择最大上样量为10ml(1m药液相当于1.5g药材)，相当于每ml大孔树脂吸附总黄酮量相当于0.75g药材中所含的总黄酮。即比上样量为1.33ml/g。
实验例3 对苯酚致宫颈炎模型大鼠保护作用的实验1.对苯酚致宫颈炎模型大鼠阴道隐血的影响模型组动物有明显的阴道黏膜出血，隐血阳性反应程度显著增强，与对照组比较P＜0.001。受试药物高、中剂量组可明显抑制动物阴道隐血，使阳性反应程度减轻，与模型组比较P＜0.05。地塞米松也降低动物阴道隐血阳性反应程度，与模型组比较P＜0.05。抗宫炎片抑制阴道隐血作用不明显。结果见表22。
表22药物组合物胶囊对苯酚致宫颈炎模型大鼠阴道隐血的影响(x±s)

2.对苯酚致宫颈炎模型大鼠宫颈形态的影响镜下观察结果显示，正常对照组宫颈粘膜及颈管粘膜各层结构清晰，宫颈粘膜下及颈管粘膜内少量淋巴细胞散在浸润；模型组宫颈粘膜之鳞状上皮细胞大量水肿，宫颈粘膜下及颈管粘膜内多量淋巴细胞及少量嗜酸性白细胞浸润，亦见组织细胞及血管反应性增生；地塞米松及抗宫炎片组宫颈粘膜之鳞状上皮水肿减轻，宫颈粘膜下及颈管粘膜内淋巴细胞明显减少，伴少许嗜酸性白细胞浸润；12g/kg剂量组宫颈粘膜之鳞状上皮水肿明显，宫颈粘膜下及颈管粘膜内有较多淋巴细胞及少量嗜酸性白细胞浸润，亦见组织细胞及血管反应性增生；6、3g/kg剂量组宫颈粘膜之鳞状上皮水肿明显减轻，部分区域消失，宫颈粘膜下及颈管粘膜内少许淋巴细胞及嗜酸性白细胞浸润，组织细胞及血管反应不明显；1.5g/kg组宫颈粘膜之鳞状上皮水肿区域明显，宫颈粘膜下及颈管粘膜内较多淋巴细胞及嗜酸性白细胞浸润，组织细胞及血管反应性改变较明显。结果见表23。
表23药物组合物胶囊对苯酚致宫颈炎大鼠宫颈炎症程度的影响

Kruskal-Wallis H检验结果如下

Kruskal-Wallis Test

3.对苯酚模型大鼠血浆铜兰蛋白活力的影响模型组铜兰蛋白活力相对于空白组显著升高(P＜0.01)；地塞米松组和抗宫炎片组均可显著抑制铜兰蛋白活力的升高(P＜0.05)；药物组合物1.5、12.0g/Kg灌胃给药均可显著降低铜兰蛋白活力(P＜0.05)，其中以12.0g/Kg作用最强(P＜0.001)，1.5g/Kg次之，而3.0、6.0g/Kg组均对铜兰蛋白活力没有显著的影响。结果见表24。
表24药物组合物对苯酚致宫颈炎大鼠血浆铜兰蛋白活力(CP)的影响(x±s)

注与模型对照组比较*P＜0.05、**P＜0.01、***P＜0.0014.对苯酚致宫颈炎模型大鼠血浆PGE2含量的影响与对照组比较，模型组动物血浆中PGE2明显升高，药物组合物胶囊较模型组血浆中PGE2明显降低，各剂量组均有显著性差异(p＜0.001)；地塞米松组和抗宫炎片组也都有显著性差异(p＜0.001)。结果见表25。
表25药物组合物胶囊对苯酚致宫颈炎模型大鼠血浆中PGE2含量的影响(X±SD)

与模型组比较*p＜0.05；**p＜0.01；***p＜0.001。
5.对苯酚致宫颈炎模型大鼠血清中IL-1β含量的影响与对照组比较，模型组血清IL-1β明显升高，有统计学差异(p＜0.05)；抗宫炎片优化处方组高、中剂量组较模型组血清IL-1β无差异；中低剂量组和低剂量组较模型组血清IL-1β减少，有差异，其中中低剂量组有较显著差异(p＜0.01)；地塞米松组也具较显著差异(p＜0.01)；抗宫炎片组较模型组有统计学差异(p＜0.05)。结果见表26。
表26药物组合物胶囊对苯酚致宫颈炎模型大鼠血清中IL-1β含量的影响(X±SD)

与模型组比较*p＜0.05；**p＜0.01；***p＜0.001。
6.对苯酚致宫颈炎模型大鼠血清中TNF含量的影响模型组与对照组比较，模型组血清TNF显著升高，有显著性统计学差异(p＜0.01)；优化处方组中高剂量组与中低剂量组血清TNF含量减少，较模型组有统计学差异(p＜0.05)，其中高剂量组有显著性差异(p＜0.01)；地塞米松组也有统计学差异(p＜0.05)。见表27。
表27药物组合物胶囊对苯酚致宫颈炎模型大鼠血清中TNF含量的影响(X±SD)

与模型组比较*p＜0.05；**p＜0.01。
讨论与结论局部粘膜损伤和病原微生物感染是导致宫颈炎的两大主要原因，本试验结果显示，将化学刺激性物质苯酚或致病性大肠杆菌经阴道反复给与可诱发类似人类宫颈炎样病理改变，并伴有炎性介质和相关细胞因子的异常改变。
本试验结果显示，药物组合物胶囊对苯酚及致病性大肠杆菌引起的宫颈组织病理改变均有明显抑制作用，并可减少炎性介质及相关细胞因子的产生。为其临床治疗宫颈炎提供了依据。
实验例4 抗炎作用实验研究1、药物组合物胶囊对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响与模型组比较，受试药物高剂量组、中剂量组有显著的抑制小鼠耳肿胀的作用(p＜0.01)；中低剂量组作用次之(p＜0.05)；低剂量组、抗宫炎片组未观察到抑制小鼠耳肿胀的药效作用，受试药物组之间有量效关系。说明受试药物具有抑制小鼠耳肿胀的药效作用。结果见表28。
表28抗宫炎片优化处方对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响(X±SD)

注与模型对照组比较**p＜0.01，*p＜0.05
2、药物组合物胶囊对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀的影响大鼠足跖皮内注射角叉菜胶后，鼠爪呈红、肿、热、痛等早期急性炎症反应。阳性对照药抗宫炎片与地塞米松均可明显降低角叉菜胶致炎大鼠足跖肿胀度和肿胀率(P＜0.05-0.001)。药物组合物3.0、6.0及12.0g/Kg灌胃给药均可显著减轻大鼠角叉菜胶致炎后1h、2h、4h、6h及8h的急性炎症反应，使足跖肿胀度和肿胀率显著降低(P＜0.05-0.001)，除外3.0g/Kg大鼠角叉菜胶致炎后4h的足跖肿胀度；1.5g/Kg对大鼠足跖肿胀度和肿胀率无显著影响(P＞0.05)。结果见表29。
表29A药物组合物对角叉菜胶致大鼠左足跖肿胀度的影响(x±s)

注与模型对照组比较*P＜0.05、**P＜0.01、***P＜0.001。
表29B药物组合物对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀率的影响(x±s)

注与模型对照组比较*P＜0.05、**P＜0.01、***P＜0.001。
3、药物组合物对大鼠棉球肉芽肿形成的影响在大鼠两侧腹股沟皮下植入灭菌棉球，14天后产生肉芽增生现象。阳性对照药地塞米松与抗宫炎片均可显著降低棉球的干重、湿重(P＜0.001)，抗炎作用显著。药物组合物1.5、3.0、6.0及12.0g/Kg灌胃给药均可显著抑制大鼠棉球肉芽肿形成，减轻慢性炎症反应，使棉球的干重与湿重显著降低(P＜0.05)，其中以6.0及12.0g/Kg最为显著。结果见表30。
表30药物组合物对大鼠棉球肉芽肿形成的影响(x±s)

注与模型对照组比较*P＜0.05、**P＜0.01、***P＜0.001讨论与结论试验结果显示，药物组合物胶囊对急、慢性实验性炎症均有抑制作用，为临床治疗宫颈炎改善症状提供了依据。
实验例4 镇痛作用实验研究受试药物与阳性对照药作用趋势一致。说明本次试验药物剂量选择的比较合适，但无量效关系，但抗宫炎片未观察到阳性结果。受试药物中低剂量组药效作用最强，与模型对照组相比，有极显著性统计差异(p＜0.01)；其它各组也都具有显著性统计差异(p＜0.05)。结果表明受试药物具有减轻醋酸所致小鼠扭体次数的药效作用，即有一定镇痛的作用。结果见表31。
表31药物组合物胶囊的镇痛作用(X±SD)

注各给药组与模型对照组比较**p＜0.01；*p＜0.05
试验结果显示，药物组合物可减少醋酸致小鼠扭体反应的次数，表明具有一定的镇痛作用，为临床治疗宫颈炎改善疼痛症状提供了依据。
实验例5对血液流变学影响的实验研究模型组全血粘度明显高于正常对照组(P＜0.01)。药物组合物1.5、3.0、12.0g/Kg灌胃给药均可显著降低大鼠的全血粘度(P＜0.05~0.01)。阳性对照药抗宫炎片可显著降低大鼠的全血粘度(P＜0.05)。结果见表32。
表32药物组合物对大鼠全血粘度的影响(x±s)

注与模型对照组比较*P＜0.05、**P＜0.01、***P＜0.001讨论与结论结果显示，药物组合物胶囊可降低大肠杆菌致宫颈炎模型大鼠血液粘度，对改善炎症局部的血流供应、促进炎症的吸收有一定意义。
上述实验例的药物组合物实验用药均按实施例1制备胶囊剂，下述实施例均能实现上述实验例的效果。
具体实施例方式
实施例1胶囊剂的制备益母草 7kg广东紫珠 55kg取益母草药材，加10倍量水，提取3次，每次1.5h，合并提取液，过滤，浓缩至60℃相对密度1.05的稠膏，加0.1mol/L盐酸溶解，用浓盐酸调pH为1，然后用0.1mol/L盐酸使1mL药液相当于1g药材，即60℃相对密度为1.02，经离心后，取上清液上001×7型离子交换树脂柱，吸附1h，用蒸馏水洗脱至流出液无色，用氨水碱化树脂，用氨性乙醇洗脱，使流出液pH9-10，收集10倍柱体积流出液，回收乙醇，浓缩至干，真空干燥，得干浸膏，备用；
取广东紫珠药材，粉碎成段，加10倍量水，提取3次，每次1.5h，合并提取液，过滤，浓缩至1mL药液相当于1.5g药材，即60℃相对密度为1.02加乙醇使含醇量为70％，冷藏放置24h，滤过，回收乙醇，使1mL药液相当于1.5g药材，即60℃相对密度为1.02，将药液过HPD 300大孔树脂，吸附1h，用蒸馏水洗脱至流出液近无色，用70％乙醇洗脱，收集5倍柱体积洗脱液，回收乙醇，浓缩至干，真空干燥，得干浸膏；将干浸膏中加淀粉100kg，粉碎，过5号筛，得干浸膏粉，加乙醇润湿，制成胶囊剂。
实施例2颗粒剂的制备益母草 60kg广东紫珠 15kg取益母草药材，加8倍量水，提取4次，每次2h，合并提取液，过滤，浓缩至50℃相对密度1.00的稠膏，加0.1mol/L盐酸溶解，用浓盐酸调pH为1，然后用0.1mol/L盐酸使1mL药液相当于1g药材，即70℃相对密度为1.02，经离心后，取上清液上001×7型离子交换树脂柱，吸附2h，用蒸馏水洗脱至流出液无色，用氨水碱化树脂，用氨性乙醇洗脱，使流出液pH10，收集10倍柱体积流出液，回收乙醇，浓缩至干，真空干燥，得干浸膏，备用；取广东紫珠药材，粉碎成段，加12倍量水，提取4次，每次2h，合并提取液，过滤，浓缩至1mL药液相当于1.5g药材，即70℃相对密度为1.00加乙醇使含醇量为70％，冷藏放置24h，滤过，回收乙醇，使1mL药液相当于1.5g药材，即70℃相对密度为1.00，将药液过HPD 300大孔树脂，吸附1h，用蒸馏水洗脱至流出液近无色，用80％乙醇洗脱，收集5BV洗脱液，回收乙醇，浓缩至干，真空干燥，得干浸膏；将干浸膏中加淀粉100kg，粉碎，过5号筛，得干浸膏粉，加乙醇润湿，加常规辅料，按常规方法制成颗粒剂。
实施例3丸剂的制备益母草 40kg广东紫珠 40kg取益母草药材，加12倍量水，提取2次，每次2h，合并提取液，过滤，浓缩至50℃相对密度1.15的稠膏，加0.1mol/L盐酸溶解，用浓盐酸调pH为1，然后用0.1mol/L盐酸使1mL药液相当于1g药材，即70℃相对密度为1.02，经离心后，取上清液上001×7型离子交换树脂柱，吸附2h，用蒸馏水洗脱至流出液无色，用氨水碱化树脂，用氨性乙醇洗脱，使流出液pH9，收集10倍柱体积流出液，回收乙醇，浓缩至干，真空干燥，得干浸膏，备用；取广东紫珠药材，粉碎成段，加12倍量水，提取4次，每次2h，合并提取液，过滤，浓缩至1mL药液相当于1.5g药材，即70℃相对密度为1.02加乙醇使含醇量为70％，冷藏放置24h，滤过，回收乙醇，使1mL药液相当于1.5g药材，即70℃相对密度为1.02，将药液过HPD 300大孔树脂，吸附2h，用蒸馏水洗脱至流出液近无色，用60％乙醇洗脱，收集5倍柱体积洗脱液，回收乙醇，浓缩至干，真空干燥，得干浸膏；将干浸膏中加淀粉100kg，粉碎，过5号筛，得干浸膏粉，加乙醇润湿，加常规辅料，按常规方法制成丸剂。
实施例4片剂的制备益母草 8kg广东紫珠 60kg加常规辅料，按常规方法制成片剂。
实施例5口服液的制备益母草 10kg广东紫珠 50kg加常规辅料，按常规方法制成口服液。
实施例6质量检测中的鉴别方法取实施例1的组合物制剂做鉴别A.取2粒组合物胶囊内容物，称取0.5g，加乙醇5ml，超声提取30min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取盐酸水苏碱对照品，加乙醇制成每1ml含5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以4∶1∶0.5正丁醇-盐酸-水为展开剂，展开，取出，凉干，喷以稀碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；B.取2粒组合物胶囊内容物，称取0.5g，加乙醇5ml，超声提取30min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取过60目筛的广东紫珠粉末1g，用70％乙醇50mL回流提取0.5h，提取液滤过，水浴蒸干，残渣加5ml蒸馏水使溶解，用10ml水饱和的正丁醇分2次萃取，萃取液合并，减压回收正丁醇后，残渣加510mL甲醇使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照品溶液各2μl，分别点于同一聚酰胺薄层板上，以4∶1∶0.5乙醇-水-冰醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％AlCl3乙醇溶液，热风吹至斑点在365nm波长下显黄色荧光；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
实施例7质量检测中的含量测定方法取实施例1的组合物制剂做含量测定色谱条件与系统适用性试验3.5μm，250×4.6mm LC-SCX色谱柱，以流动相0.05mol/LNa2HPO4-0.05mol/L NaH2PO4，pH5.5，流速1mL/min，检测波长为192nm，柱温为35℃；理论板数按盐酸水苏碱峰计算应不低于1500；对照品溶液的制备称取105℃干燥3小时的盐酸水苏碱对照品适量，加0.05mol/LNa2HPO4制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；供试品溶液的制备将药物组合物胶囊剂装量差异项下的粉末0.5g，置具塞三角瓶中，加乙醇25ml，称定重量，超声提取30ml，放冷，再称定重量，用乙醇补足所失的重量，摇匀，滤过；取续滤液10mL，水浴蒸干，用0.05mol/LNa2HPO410mL溶解，加活性炭0.5g，水浴加热半分钟，搅拌，滤过，滤液置于25mL量瓶中，加0.05mol/LNa2HPO4溶液至刻度；测定法分别精密吸取对照品溶液5μl与供试品溶液5～10μl，注入高效液相色谱仪，测定，计算，即得；药物组合物胶囊每粒含盐酸水苏碱C7H13NO2计，不得少于0.03mg。
实施例8质量监测方法取实施例1的组合物制剂做质量检测A.取2粒组合物胶囊内容物，称取0.5g，加乙醇5ml，超声提取30min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取盐酸水苏碱对照品，加乙醇制成每1ml含5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以4∶1∶0.5正丁醇-盐酸-水为展开剂，展开，取出，凉干，喷以稀碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
B.取2粒组合物胶囊内容物，称取0.5g，加乙醇5ml，超声提取30min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取过60目筛的广东紫珠粉末1g，用70％乙醇50mL回流提取0.5h，提取液滤过，水浴蒸干，残渣加5ml蒸馏水使溶解，用10ml水饱和的正丁醇分2次萃取，萃取液合并，减压回收正丁醇后，残渣加510mL甲醇使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照品溶液各2μl，分别点于同一聚酰胺薄层板上，以4∶1∶0.5乙醇-水-冰醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％AlCl3乙醇溶液，热风吹至斑点在365nm波长下显黄色荧光；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
色谱条件与系统适用性试验3.5μm，250×4.6mm LC-SCX色谱柱，以流动相0.05mol/LNa2HPO4-0.05mol/L NaH2PO4，pH5.5，流速1mL/min，检测波长为192nm，柱温为35℃；理论板数按盐酸水苏碱峰计算应不低于1500；对照品溶液的制备称取105℃干燥3小时的盐酸水苏碱对照品适量，加0.05mol/LNa2HPO4制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；供试品溶液的制备将药物组合物胶囊剂装量差异项下的粉末0.5g，置具塞三角瓶中，加乙醇25ml，称定重量，超声提取30ml，放冷，再称定重量，用乙醇补足所失的重量，摇匀，滤过；取续滤液10mL，水浴蒸干，用0.05mol/LNa2HPO410mL溶解，加活性炭0.5g，水浴加热半分钟，搅拌，滤过，滤液置于25mL量瓶中，加0.05mol/LNa2HPO4溶液至刻度；测定法分别精密吸取对照品溶液5μl与供试品溶液5～10μl，注入高效液相色谱仪，测定，计算，即得；药物组合物胶囊每粒含盐酸水苏碱C7H13NO2计，不得少于0.03mg。
实施例9质量监测方法取实施例2的组合物制剂做质量检测A.取组合物颗粒剂，称取5g，加乙醇5ml，超声提取30min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取盐酸水苏碱对照品，加乙醇制成每1ml含5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以4∶1∶0.5正丁醇-盐酸-水为展开剂，展开，取出，凉干，喷以稀碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
B.取组合物颗粒剂，称取5g，称取0.5g，加乙醇5ml，超声提取30min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取过60目筛的广东紫珠粉末1g，用70％乙醇50mL回流提取0.5h，提取液滤过，水浴蒸干，残渣加5ml蒸馏水使溶解，用10ml水饱和的正丁醇分2次萃取，萃取液合并，减压回收正丁醇后，残渣加510mL甲醇使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照品溶液各2μl，分别点于同一聚酰胺薄层板上，以4∶1∶0.5乙醇-水-冰醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％AlCl3乙醇溶液，热风吹至斑点在365nm波长下显黄色荧光；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
色谱条件与系统适用性试验3.5μm，250×4.6mm LC-SCX色谱柱，以流动相0.05mol/LNa2HPO4-0.05mol/L NaH2PO4，pH5.5，流速1mL/min，检测波长为192nm，柱温为35℃；理论板数按盐酸水苏碱峰计算应不低于1500；对照品溶液的制备称取105℃干燥3小时的盐酸水苏碱对照品适量，加0.05mol/LNa2HPO4制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；供试品溶液的制备取组合物颗粒剂，称取5g，置具塞三角瓶中，加乙醇25ml，称定重量，超声提取30ml，放冷，再称定重量，用乙醇补足所失的重量，摇匀，滤过；取续滤液10mL，水浴蒸干，用0.05mol/LNa2HPO4 10mL溶解，加活性炭0.5g，水浴加热半分钟，搅拌，滤过，滤液置于25mL量瓶中，加0.05mol/LNa2HPO4溶液至刻度；测定法分别精密吸取对照品溶液5μl与供试品溶液5～10μl，注入高效液相色谱仪，测定，计算，即得；药物组合物胶囊每粒含盐酸水苏碱C7H13NO2计，不得少于0.03mg。
实施例10质量监测方法取实施例4的组合物制剂做质量检测A.取本药物组合物片剂2片，0.7g，加乙醇5ml，超声提取30min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取盐酸水苏碱对照品，加乙醇制成每1ml含5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以4∶1∶0.5正丁醇-盐酸-水为展开剂，展开，取出，凉干，喷以稀碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；B.取本药物组合物片剂2片，0.7g，称取0.5g，加乙醇5ml，超声提取30min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取过60目筛的广东紫珠粉末1g，用70％乙醇50mL回流提取0.5h，提取液滤过，水浴蒸干，残渣加5ml蒸馏水使溶解，用10ml水饱和的正丁醇分2次萃取，萃取液合并，减压回收正丁醇后，残渣加510mL甲醇使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照品溶液各2μl，分别点于同一聚酰胺薄层板上，以4∶1∶0.5乙醇-水-冰醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％AlCl3乙醇溶液，热风吹至斑点在365nm波长下显黄色荧光；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
色谱条件与系统适用性试验3.5μm，250×4.6mm LC-SCX色谱柱，以流动相0.05mol/LNa2HPO4-0.05mol/L NaH2PO4，pH5.5，流速1mL/min，检测波长为192nm，柱温为35℃；理论板数按盐酸水苏碱峰计算应不低于1500；对照品溶液的制备称取105℃干燥3小时的盐酸水苏碱对照品适量，加0.05mol/LNa2HPO4制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；供试品溶液的制备取本药物组合物片剂2片，0.7g，置具塞三角瓶中，加乙醇25ml，称定重量，超声提取30ml，放冷，再称定重量，用乙醇补足所失的重量，摇匀，滤过；取续滤液10mL，水浴蒸干，用0.05mol/LNa2HPO4 10mL溶解，加活性炭0.5g，水浴加热半分钟，搅拌，滤过，滤液置于25mL量瓶中，加0.05mol/LNa2HPO4溶液至刻度；测定法分别精密吸取对照品溶液5μl与供试品溶液5～10μl，注入高效液相色谱仪，测定，计算，即得；药物组合物胶囊每粒含盐酸水苏碱C7H13NO2计，不得少于0.03mg。
实施例11取益母草10kg，广东紫珠55kg，加辅料，按常规工艺，制成片剂，每片0.35g。
实施例12取益母草55kg，广东紫珠10kg，加辅料，按常规工艺，制成颗粒剂，每袋6g。
实施例13
取益母草20kg，广东紫珠45kg，加辅料，按常规工艺，制成胶囊剂，每粒0.35g。
实施例14取益母草30kg，广东紫珠35kg，加辅料，按常规工艺，制成阴道泡腾片，每片0.5g。
实施例15取益母草40kg，广东紫珠25kg，加辅料，按常规工艺，制成口服液，每支10ml。
实施例16取益母草50kg，广东紫珠15kg，加辅料，按常规工艺，制成栓剂，每粒5g。
权利要求
1.一种治疗宫颈炎的中药组合物，其特征在于该中药组合物的原料药组成为益母草 7-60重量份广东紫珠 7-60重量份。
2.如权利要求1所述的中药组合物，其特征在于该中药组合物原料药重量配比如下益母草 7重量份 广东紫珠 55重量份。
3.如权利要求1所述的中药组合物，其特征在于该中药组合物原料药重量配比如下益母草 60重量份 广东紫珠 15重量份。
4.如权利要求1所述的中药组合物，其特征在于该中药组合物原料药重量配比如下益母草 40重量份 广东紫珠 40重量份。
5.如权利要求1-4任一所述的中药组合物，其特征在于该中药组合物制成胶囊剂、丸剂、片剂、颗粒剂、口服液体、内服膏剂、栓剂、外用膏剂、泡腾片、外用洗剂、气雾剂或喷雾剂。
6.如权利要求1、2、3或4所述的中药组合物的制备方法，其特征在于该方法为取益母草药材，加8-12倍量水，提取2-4次，每次1-2h，合并提取液，过滤，浓缩至50℃-70℃相对密度1.00-1.15的稠膏，加0.1mol/L-1mol/L盐酸溶解，用浓盐酸调pH为1-3，然后用0.1mol/L-1mol/L盐酸稀释至1mL药液相当于1-2g药材，即50℃-70℃相对密度1.00-1.20，经离心或滤过后，取上清液上强酸型离子交换树脂柱，吸附0.5-2h，用蒸馏水洗脱至流出液无色，用氨水碱化树脂PH8-9，用30-95％氨性乙醇或2mol氨水洗脱，使流出液pH8-12，收集10倍柱体积流出液，回收乙醇，浓缩至干，真空干燥，得干浸膏，备用；取广东紫珠药材，粉碎成段，加8-12倍量水，提取2-4次，每次1-2h，合并提取液，过滤，浓缩至1mL药液相当于1.5g药材，即50℃-70℃相对密度为1.00-1.02，加95％乙醇使含醇量为50-70％，冷藏放置24h，滤过，回收乙醇，使1mL药液相当于1.5g药材，即50℃-70℃相对密度为1.00-1.02，将药液过大孔树脂，吸附0.5-2h，用蒸馏水洗脱至流出液近无色，用10％-80％乙醇洗脱，收集5BV洗脱液，回收乙醇，浓缩至干，真空干燥，得干浸膏；将干浸膏加常规辅料，按常规方法制成胶囊剂、丸剂、片剂、颗粒剂、口服液体、内服膏剂、栓剂、外用膏剂、泡腾片、外用洗剂、气雾剂或喷雾剂。
7.如权利要求6所述的中药组合物的制备方法，其特征在于该方法为取益母草药材，加10倍量水，提取3次，每次1.5h，合并提取液，过滤，浓缩至60℃相对密度1.05的稠膏，加0.1mol/L盐酸溶解，用浓盐酸调pH为1，然后用0.1mol/L盐酸使1mL药液相当于1g药材，即60℃相对密度为1.00-1.02，经离心后，取上清液上001×7型离子交换树脂柱，吸附1h，用蒸馏水洗脱至流出液无色，用氨水碱化树脂PH8-9，75％或95％氨性乙醇或2mol氨水洗脱，使流出液pH9-10，收集10倍柱体积流出液，回收乙醇，浓缩至干，真空干燥，得干浸膏，备用；取广东紫珠药材，粉碎成段，加10倍量水，提取3次，每次1.5h，合并提取液，过滤，浓缩至1mL药液相当于1.5g药材，即60℃相对密度为1.00-1.02加95％乙醇使含醇量为60％或70％，冷藏放置24h，滤过，回收乙醇，使1mL药液相当于1.5g药材，即60℃相对密度为1.00-1.02，将药液过HPD 100、HPD 400或HPD 300大孔树脂，吸附1h，用蒸馏水洗脱至流出液近无色，用50％、60％或70％乙醇洗脱，收集5倍柱体积洗脱液，回收乙醇，浓缩至干，真空干燥，得干浸膏；将干浸膏加常规辅料，按常规方法制成胶囊剂、丸剂、片剂、颗粒剂、口服液体、内服膏剂、栓剂、外用膏剂、泡腾片、外用洗剂、气雾剂或喷雾剂。
8.如权利要求5所述的中药组合物的质量检测方法，其特征在于该方法包括如下鉴别中的一种或几种A.取本药物组合物固体制剂成人日服用剂量的1/3，加乙醇5ml，超声提取30min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取盐酸水苏碱对照品，加乙醇制成每1ml含5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以4∶1∶0.5正丁醇-盐酸-水为展开剂，展开，取出，凉干，喷以稀碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；B.取本药物组合物固体制剂成人日服用剂量的1/3，加乙醇5ml，超声提取30min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取过60目筛的广东紫珠粉末1g，用70％乙醇50mL回流提取0.5h，提取液滤过，水浴蒸干，残渣加5ml蒸馏水使溶解，用10ml水饱和的正丁醇分2次萃取，萃取液合并，减压回收正丁醇后，残渣加510mL甲醇使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照品溶液各2μl，分别点于同一聚酰胺薄层板上，以4∶1∶0.5乙醇-水-冰醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％AlCl3乙醇溶液，热风吹至斑点在365nm波长下显黄色荧光；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
9.如利要求5所述的中药组合物的质量检测方法，其特征在于该方法包括如下含量测定色谱条件与系统适用性试验3.5μm，250×4.6mm LC-SCX色谱柱，以流动相0.05mol/LNa2HPO4-0.05mol/L NaH2PO4，pH5.5，流速1mL/min，检测波长为192nm，柱温为35℃；理论板数按盐酸水苏碱峰计算应不低于1500；对照品溶液的制备称取105℃干燥3小时的盐酸水苏碱对照品适量，加0.05mol/LNa2HPO4制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；供试品溶液的制备将本药物组合物固体制剂成人日服用剂量的1/3，置具塞三角瓶中，加乙醇25ml，称定重量，超声提取30ml，放冷，再称定重量，用乙醇补足所失的重量，摇匀，滤过；取续滤液10mL，水浴蒸干，用0.05mol/LNa2HPO4 10mL溶解，加活性炭0.5g，水浴加热半分钟，搅拌，滤过，滤液置于25mL量瓶中，加0.05mol/LNa2HPO4溶液至刻度；测定法分别精密吸取对照品溶液5μl与供试品溶液5～10μl，注入高效液相色谱仪，测定，计算，即得；药物组合物单位制剂含盐酸水苏碱C7H13NO2计，不得少于0.03mg。
10.如权利要求1-4任一所述的中药组合物在制备治疗宫颈炎药物中的应用。
11.如权利要求5所述的中药组合物在制备治疗宫颈炎药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种治疗带下，即宫颈炎、宫颈糜烂等症的中药复方制剂及其制备方法和质量检测方法。该中药组合物主要由益母草、广东紫珠组成。本组合物经过常规工艺直接或间接加入药学上可接受的赋型剂制成临床可接受的剂型，如胶囊剂、片剂、口服液、颗粒剂、内服膏剂、栓剂、泡腾片、外用洗剂、外用膏剂、气雾剂、喷雾剂等，本组合物具有活血通脉，清利湿热的作用。
文档编号A61K9/20GK1903290SQ20061010401
公开日2007年1月31日 申请日期2006年8月1日 优先权日2006年8月1日
发明者杜守颖, 洪缨 申请人:北京中医药大学