专利名称：传输工具的制作方法
传输工具
本发明涉及传输工具，及特别地，虽然不排除其它地，涉及用于将可 传输物质传输到部位特别是创面床的传输工具。优选实施方式涉及用于将
源自生物体丝光绿蝇(/wd/w )的分泌物或排泄物传输到创面床的
创面护理设备形式的传输工具。
例如从WO01/31033、 WO03/075654和WO03/043669中已知，使用绿
蝇(丝光绿蝇)的幼虫形式的蛋白质和/或分泌物和/或排泄物治疗创面。这些 公开描述了将蛋白质和/或分泌物和/或排泄物整合入敷料中，虽然并没有 提供有关敷料性质或如何将可传输物质整合入敷料中的细节。事实上，来 自活生物体的蛋白质或其它天然提取物的整合入是不重要的，因为此类物 质倾向于相对不稳定且易于在相对温和的温度或离子化辐射条件下分解 或变性。因此，将敷料或可用于传输此类天然提取物的其它传输工具灭菌 是困难的，因为灭菌涉及使用易于使提取物分解和/或变性的条件(如高于 60。c和/或暴露于高于40 kV的y辐射)。 本发明一个目的是解决上文提到的问题。特别地，虽然不排除其它地， 本发明的一个目的是提供传输工具，其整合入通常易于分解或变性但在传 输工具中可在适当的灭菌条件下被灭菌的相对不稳定物质。
根据本发明第 一方面，提供一种用于将可传输物质传输到例如创面床 的传输工具，所述传输工具包括水凝胶且所述可传输物质包括
(i) 在所述水凝胶不存在时如果使用加热、电子束辐射或y辐射灭菌 时，分解和/或永久性变性的可分解物质；
(ii) 蛋白质、蛋白质片段、肽或氨基酸；或
(iii) 来自生物体丝光绿掩或黑腹果竭(t/mw/7/2,7a/"e/a"og(3w/w)的分 泌物或排泄物。有利地，发现水凝胶可稳定化和/或保护所述可传输的物质以抵抗分解 和/或变性且因此可使用否则可能使可传输物质分解或变性的条件如相对 高的温度或离子化辐射如Y辐射或电子束辐射，使含有可传输物质的水凝 胶灭菌。
关于(i),可分解的物质可为此类物质在水中(如在主要由水组成的溶 剂中)在所述水凝胶不存在下，如果如所描述地灭菌它分解和/或永久性变
性。例如，在所述水凝胶不存在时，所述可分解的物质如果经历高于100°C 的温度(如在高于120。C持续至少20分钟的蒸汽灭菌中)；至少40 kV持续 至少1分钟的y辐射；或至少18 kV的持续至少1分钟的电子束辐射时， 可分解和/或永久性变性。
所述水凝胶优选地包括任选衍生化的，例如交联的亲水性聚合物。亲 水性聚合物可包括相对亲水区域和相对疏水区域。
所述亲水性聚合物可包括任选衍生化的，如交联的水溶性树胶，例如 阿拉伯树胶、刺梧桐树胶、黄芘胶、印度树胶、瓜尔胶；大豆衍生物例如 刺槐豆胶、罗望子胶；水溶性生物聚合物、例如葡聚糖、黄原胶；水溶性 蛋白质，例如明胶型物质、角叉胶、琼脂和藻酸盐、动物衍生物、酪蛋白、 果胶；淀粉和淀粉衍生物，例如淀粉、改性淀粉、淀粉衍生物；纤维素衍 生物，例如曱基纤维素、羧甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素； 聚乙烯类和马来酐共聚物，例如聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮；各种水溶性 聚乙烯类，例如马来酐共聚物；聚丙烯酸盐及相关体系，例如聚丙烯酸盐、 聚丙烯酰胺；聚亚胺及相关体系，例如聚环氧乙烷、聚乙烯亚胺、聚乙二 醇；表面活性的水溶性聚合物，例如木素磺酸盐及相关物质、褐煤、丹宁 酸。
适合的亲水性聚合物的优选例子包括聚曱基丙烯酸聚合物；聚酰亚 胺；聚乙烯醇及上述物质的共聚物。
所述亲水性聚合物优选地包括含碳原子的骨架。碳原子优选地由C-C 单键连接在一起。骨架优选地不包括其它类型的原子。
所述亲水性聚合物优选地包括羰基部分。此类部分可包括在位于聚合物骨架的侧端的基团中。所述羰基部分可为羧酸或羧酸衍生物的组分。优 选地，羰基部分为酯官能团的组分，例如基团-OCO-R1、其中RW表示任 选取代的烷基或烯基部分，特别是Q—4烷基或烯基部分。R"优选地为未取
代的烷基部分，特别是甲基基团。因此，所述亲水性聚合物优选包括乙酸 酯部分。
所述亲水性聚合物优选地包括羟基基团，其适宜地位于聚合物骨架的 侧端。优选地，羟基基团直接结合到骨架上，优选其碳原子。优选的羟基 基团包括醇官能团。
所述亲水性聚合物优选地包括如所描述的羰基部分和如所描述的羟 基部分两者，其中羰基部分和羟基部分适宜存在于在聚合物骨架侧端的不 同官能团中。
适当地至少50摩尔％ ，优选地至少75摩尔％，更优选地至少95摩尔 %，特别地约100摩尔％的所述亲水性聚合物由包括包含羰基(优选地作为 羧酸或羧酸衍生物官能团的一部分)部分或羟基(特别是醇)部分的官能团 的重复单元组成。适当地，在所述亲水性聚合物中含有羰基的官能团(如羧 酸或羧酸衍生物官能团)和羟基(特别是醇)官能团的摩尔％的总数为至少70 摩尔％,优选地至少卯摩尔％，更优选地至少95摩尔％，特别是约100 摩尔％。因此，在优选的实施方式中，包括上述官能团的亲水性聚合材料 不是包括其它类型的官能团的共聚物。
所述亲水性聚合物优选地包括聚乙烯基聚合物。在所述聚合物中，适 宜地，乙烯基部分的摩尔％为至少70摩尔％，优选地至少90摩尔％,更 优选地至少95摩尔％ ，特别是约100摩尔％。
最优选的水凝胶包括任选衍生化的，例如交联的，聚乙烯醇。优选的 聚乙烯醇包括相对地亲水的羟基官能团和相对地疏水的乙酸酯官能团。
所述水凝胶优选地包括任选衍生化的聚乙烯醇，其适当地主要由乙烯 醇和乙酸乙烯酯官能团组成。适当地，聚乙烯醇在小于100摩尔％的程度 上被水解，优选地小于95摩尔％。它可被水解至至少10摩尔％的程度， 优选地至少25摩尔％,更优选地至少50摩尔％,尤其是至少60摩尔％。
7适当地，在所述聚乙烯醇中，乙烯醇部分对乙酸乙烯酯部分的摩尔％的比 值为至少0.5，优选地至少1,更优选地至少3。比值可小于IO,优选地小于8。
优选的聚乙烯醇具有至少2 mPa.s的粘度(在4%水溶液中在2(TC下测 量)，优选地至少4mPa.s。粘度可小于100mPa.s，优选地小于75 mPa.s。
所述水凝胶的所述亲水性聚合物优选地通过交联工具被交联。
优选的交联工具包括化学交联物质。此物质优选地为具有至少两个能 够与所述亲水性聚合物的官能团反应的多官能团化合物。优选地，所述交 联物质包括羰基、羧基、羟基、环氧基、卣素或氨基官能团中的一个或多 个，其能够与在聚合物骨架上存在的或在亲水性聚合物的聚合物结构中存 在的基团反应。优选的交联物质包括至少两个醛基团。因此，在一个优选 的实施方式中，所述水凝胶包括使用具有至少两个醛基团的物质，通过交 联聚乙烯醇形成的物质。因此，所述水凝胶可包括式I的部分。
其中lJ是所述交联物质的残基。
所述交联物质优选地包括第二个聚合物。所述第二个聚合物优选地包 括式II的重复单元
其中A和B相同或不同，选自任选地取代的芳香和杂芳香基团且至少 一个包括相对极性的原子或基团，且R1和W独立地包括相对非极性的原子或基团。
A和/或B可为多环芳香族或杂芳香族基团。优选地，A和B独立地 选自任选地取代的5元或更优选地6元芳香族和杂芳香族基团。所述杂芳 香族基团的优选杂原子包括氮、氧和硫原子，其中，氧及特别是氮是优选 的。优选的杂芳香族基团仅包括一个杂原子。优选地， 一个杂原子或所述 杂原子位于离杂芳香族基团与聚合物骨架连接的位置最远的位置。例如， 在杂芳香族基团包括6元环的情况下，杂原子优选地位于相对于环与聚合 物骨架的结合位置的4-位处。
优选地，A和B代表不同基团。优选地，A或B中的一个代表任选取 代的芳香基团及另一个代表任选取代的杂芳香基团。优选地，A代表任选 取代的芳香基团及B代表任选取代的杂芳香基团，特别是包括氮杂原子的 杂芳香基团，如吡咬基团。
除非另外说明，本文描述的任选取代的基团，例如基团A和B,可被 卣素原子及任选取代的烷基、酰基、乙缩醛、半乙缩醛、乙缩醛烷氧基、 半乙缩醛烷氧基、硝基、氰基、烷氧基、羟基、氨基、烷基氨基、亚硫酰 基、烷基亚硫酰基、磺酰基、烷基磺酰基、磺酸酯、酰氨基、烷基酰氨基、 烷基羰基、烷氧基羰基、卣代羰基和卣代烷基基团所取代。优选地，多达 3个，更优选地多达1个任选取代基可提供在任选取代的基团上。
除非另外说明，烷基基团可具有多达10个，优选地多达6个，更优 选地多达4个碳原子，其中甲基和乙基基团为特别优选的。
优选地，A和B各自表示极性原子或极性基团-即，优选地在基团A 和B中存在一些电荷分离和/或基团A和B不仅包括碳和氢原子。
优选地，A或B中至少一个包括可经历缩合反应的官能团，例如与所 述亲水性聚合物的反应。优选地，A包括可经历縮合反应的所述官能团。
优选地，基团A和B中 一个包括含有羰基或乙缩醛基团的任选取代基， 其中曱酰基基团为特别优选的。基团A和B中的另一个可包括为烷基基团 的任选取代基，任选地被取代、优选未取代的d—4烷基基团，例如甲基基 团为特别优选的。
9优选地，A代表被甲酰基基团或通式III的基团取代(当A代表任选地 取代的苯基基团时，优选地在相对于聚合物骨架的4-位取代)的基团，例如 芳香族基团，特别是苯基基团。
<formula>formula see original document page 10</formula>
其中，x为从1到6的整数及每个尺3独立地为烷基或苯基基团或共同 形成烯基(alkalene)基团。
优选地，B代表任选地取代的杂芳香族基团，特别是含氮的杂芳香族 (heteraromatic)基团，其在杂原子上被氢原子或烷基或芳烷基基团取代。更 优选地，B代表通式IV的基团
<formula>formula see original document page 10</formula>
其中，114代表氬原子或烷基或芳烷基基团，115代表氢原子或烷基基团 且X—代表强酸离子。它可为有机的(例如烷基)硫酸酯如曱基硫酸酯。
优选地，R1和112独立地选自氢原子或任选取代的、优选地未取代的 烷基基团。优选地，R^和R"代表相同原子或基团。优选地，W和I^代表 氢原子。
优选的第二个聚合材料可按照在W098/12239中描述的方法，从以下 单体中的任何一个被制备，且上述丈件的内容通过引用被合并于本文
a-(对曱酰基苯乙烯基)-吡啶盐、Y-(对曱酰基苯乙烯基)-吡啶盐、a-(间 甲酰基苯乙烯基)-他啶盐、N-曱基-a-(对曱酰基苯乙烯基)-吡啶盐、N-曱基 -卩-(对甲酰基苯乙烯基)-吡啶盐、N-曱基-a-(间曱酰基苯乙烯基)-吡啶盐、 N-甲基-a-(邻曱酰基苯乙烯基)-吡啶盐、N-乙基-a-(对甲酰基苯乙烯基)-吡啶盐、N-(2-羟基乙基)-a-(对曱酰基苯乙烯基)-吡啶盐、N-(2-羟基乙基)个(对 曱酰基苯乙烯基)-吡啶盐、N-烯丙基-a-(对甲酰基苯乙烯基)-吡啶盐、N-曱 基-"(对甲酰基苯乙烯基)-吡啶盐、N-甲基-，(间曱酰基苯乙烯基)-吡啶盐、 N-苯基-a-(对甲酰基苯乙烯基)-吡啶盐、N-苯基个(对甲酰基苯乙烯基)-吡啶 盐和N-氨基甲酰基甲基t(对甲酰基苯乙烯基)-他咬盐。这些季盐可以氢氯 酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、高氯酸盐、四氟硼酸盐、曱硫酸盐、磷酸盐、 硫酸盐、甲烷-磺酸盐和对曱苯基-磺酸盐的形式使用。
同样，单体化合物可为拥有乙缩醛基团的苯乙烯基吡啶盐盐类，其包 括以下<formula>formula see original document page 12</formula><formula>formula see original document page 13</formula>
因此，所述第二乂 可通过提供以下通式的化合物而制备:
.R1
其中，A、 B、 R'和I^如上所描述在水性溶剂中(适宜地，以致所述单 体的分子聚集)并使在所述化合物中的基团C:C彼此反应(例如使用UV辐 射)以形成所述第二个聚合材料。
所述第二个聚合材料可为式V:
<formula>formula see original document page 13</formula>其中，A、 B、 Ri和W如上所描述且n为整数。整数n适于为50或更 少，优选地20或更少，更优选地10或更少，特别是5或更少。整数n适 于为至少1,优选i也至少2 ，更优选i也至少3 。
所述水凝胶(排除任何被所述水凝胶封装的水)的重量％与在所述传输 工具中的所述可传输物质的重量％的比值至少10，优选地至少50，更优选 地至少100。该比值可小于500，优选地小于250，更优选地小于200。
所述水凝胶和所述可传输物质优选地与彼此密切混合。共同地，它们 优选地构成基本上均匀的混合物。
所述传输工具优选地包括水。
所述可传输物质优选地被调整以在传输工具中扩散。在使用中所述可 传输物质可被调整以从传输工具扩散出，例如进入创面床中。
所述传输工具优选地含有至少2重量％，优选地至少25重量％，更优 选地至少50重量％，特别是至少80重量％的水。水的量可小于95重量％。 水的含量可通过任何适合的工具测定，例如通过热重分析仪。
所述传输工具可包括小于10重量％的所述可传输物质。适合地，所述 传输工具包括小于2.5重量％,优选地小于1.0重量％，更优选地小于0.5 重量％,特别是小于0.2重量％的所述可传输物质。在最优选的实施方式中， 所述传输工具包括小于0.1重量％的所述可传输物质。所述传输工具可包 括100 pm -10000 pm,优选地100 pm -5000 ppm，更优选地400 pm -2000 ppm,特别是500 pm -1500卯m的所述可传输物质。
所述传输工具适宜包括小于30重量％的有机聚合材料(例如所述亲水 性聚合物和/或所述第一个和/或第二个聚合材料和/或其反应产物)，优选地 小于20重量％，更优选地小于15重量％，特别是小于12重量％。传输工具可包括至少1重量％,优选地至少2重量％的有机聚合材料。至少一些，
适合地至少50重量％，优选地至少75重量％,更优选地至少90重量％, 特别是至少95重量。/。的所述有机聚合材料选自包括聚乙烯醇和交if关的聚 乙烯醇的组。在所述传输工具中，有机聚合材料的总数的重量％与所述可 传输物质的重量％的比值可至少5，适合地至少10，优选地至少50及更优 选地至少100。该比值可小于500，优选地小于250，更优选地小于200。
提及"有机聚合材料"，适宜地不意为涵盖可传输的物质(即可传输物
所述传输工具可为流体，例如粘性形式或为固体形式，例如为膜或片 的形式。粘性流体可为膏或类似物的形式。水凝胶的物理形式由任选衍生 化的亲水性聚合物的重量。/。，例如亲水性聚合物及因此的交联工具的重量 %所决定。当亲水性聚合物在传输工具中的重量％为约2重量％或更少时， 形成粘弹性流体；当它大于约2重量％时，形成刚性凝胶且凝胶的刚性随 着任选衍生化的亲水性聚合物的重量％的增加而增加。
在一个优选的实施方式中，所述传输工具包括
-0.001到1重量％的所述可传输物质；
-2到30重量％的有机聚合材料；及
- 69到97.999重量％的水。
当所述传输工具为膏时，有机聚合材料的量可在2到4重量％的范围 内，余量为水、其它载体或赋形剂。当所述传输工具为固体形式时(如膜)， 所述传输工具可包括5到30重量％，优选地10到30重量％的有机聚合材料。
适合地，所述传输工具包括
适合地，所述传输工具包括:
0.000001重量％到5重量％的所述可传输物质;
2重量％到30重量％的有机聚合材料；及
15- 0.000001重量％到5重量％的可传输物质；
-5重量％到30重量％的聚乙烯醇和/或交联的聚乙烯醇；
-65重量％到94.999999重量％的水。
在(ii)中描述的可传输物质可为任何蛋白质、蛋白质片断、肽或氨基酸。 所述可传输物质优选地包括一个或多个酰胺键。它可包括单一的蛋白质， 而不是混合物。在(ii)中描述的可传输物质优选为天然存在的物质或天然存 在的物质的类似物。更优选天然存在的。当在(ii)中描述的物质为优选天然 存在的类型时，它可为此类天然存在的物质的合成形式或其修饰。在(ii) 中描述的所述物质可为物质的重组同种型或可包括通过重组技术生成的 修饰的物质。
在(ii)中描述的所述物质可为从生物体丝光绿蝇或黑腹果蝇分泌或排 泄的 一种或多种物质的重组形式。
在(ii)中描述的可传输物质可包括来自自然源的物质的提取物，例如来 自动物或植物，优选来自动物。它优选地包括来自昆虫的提取物，优选地 当在它的幼虫期时。此类提取物可任选地被纯化或衍生化以产生所述可传
输物质。
描述的所述可传输物质可为被生物体丝光绿蝇排泄/分泌的类型。它包 括分离的蛋白质。此类蛋白质在8.0-8.5的pH下对FlTC-酪蛋白可展现最 优化的蛋白水解活性；它可对甲苯磺酰-Gly-Pro-Arg-AMC显现蛋白水解活 性，但对Suc-Ala-Ala-Phe-AMC不展现；它对FITC-酪蛋白和甲苯磺酰 -Gly-Pro-Arg-AMC的蛋白水解活性可被丝氨酸蛋白酶抑制剂PMSF和 APMSF抑制；和/或它可被固定化的氨基苯曱脒结合。它可具有每一个上 述的特性。所述蛋白质可具有约25 kDa的分子量。
在(ii)中描述的所述可传输物质可包括选自由以下组成的组的一种或 多种肽
Ser-Phe-Leu-Leu-Arg-Asn;
Ser-Leu-Ile-Gly-Lys-Val;Thr-Phe-Arg-Gly國Ala-Pro; Gly-Tyr-Pro匿Gly-Gln-Val，及 具有选自以下的N-端序列的肽 Ser-Phe-Leu-Leu-Arg-Asn; Ser-Leu-lle-Gly-Lys-Val; Thr-Phe-Arg-Gly-Ala國Pro;或 Gly-Tyr-Pro-Gly-Gln國Val,
或其被保护的类似物，其被保护以抵御氨基肽酶活性。
如所描述的可传输物质在WO01/31033中被描述，其内容通过引用被 合并于本文。
描述的所述可传输物质可包括具有从丝光绿蝇的分泌物/排泄物获得 的N-酰基高丝氨酸内酯降解活性的物质。所述可传输物质可包括丝氨酸蛋 白酶或糖苷酶或具有抗菌肽样活性的物体，其各自优选地从丝光绿蝇获得 的分泌物/排泄物或其类似物中分离。此类物质在WO03/075654中被描述， 其内容通过引用被合并于本文。
描述的所述可传输物质可包括toll受体配体或其前体，其配体可为半 胱氨酸结(knot)超家族的蛋白质的成员。配体优选为衍生自昆虫的蛋白质或 其活性部分或类似物且适合地衍生自黑腹果蝇或丝光绿蝇。蛋白质的活性 部分可包括C-端的106个氨基酸肽。它在WO03/043669中被描述，其内 容通过引用被合并于本文。
在(iii)中描述的可传输物质的优选地衍生自所描述的生物体的幼虫。 分泌物/排泄物可本质上整体被使用或它可被纯化和/或物质的成分可被分离。
优选地，本文描述的所述分泌物/排泄物来自生物体丝光绿蝇。
所述传输工具可包括其它可传输物质。此类物质可具有抗菌特性，例 如它可为抗生素，例如四环抗生素；它可包括银；它可为中断在细菌集落 (如它可为生物膜)、真菌、霉菌、支原体中的信号传输的分子；它可具有
17细菌抑制特性。当包括其它物质时，所述可传输物质的重量％与所述其它
可传输物质的重量％的比值可在0.1到10的范围内，优选0.2到5。
所述传输工具优选为无菌的。
所述传输工具优选地已经通过加热、电子束辐射或Y辐射被灭菌。
根据本发明第二方面，提供了生产根据本发明第一方面的传输工具的 方法，所述方法包括使根据所述第一方面的可传输物质接触水凝胶或可^皮 调整以形成水凝胶的前体物质。
在第一个实施方式中，包括小于可在其中被封装的最大含量的水的水 凝胶或包括脱水水凝胶的前体物质可与包括所述可传输物质的制剂适合 地接触，以致所述可传输物质被吸收入水凝胶或前体物质中。当前体物质 如所描述^皮接触时，它适合地形成水凝胶。当在水凝胶或前体物质中封装 的水的含量小于可在其中封装的水的最大含量时，可传输物质可与所述水 凝胶或前体物质接触。包含在水凝胶或前体物质中的水的最大含量的重量 %与当与所述可传输物质接触时在水凝胶或前体物质中的水的最大含量的
重量。/。的比值优选大于2，更优选地大于10。当开始与所述可传输物质接 触时，所述水凝胶可基本上脱水和/或所述前体物质可包括组成基本上完全 脱水的水凝胶。
制剂。所述制剂可包括大于90重量％，优选地大于95重量％，更优选地 大于98重量。/。，特别是大于99重量％的水。所述制剂可包括小于2重量 %，优选地小于1.5重量％，更优选地小于1重量％,特别是小于0.5重量 %，最优选地小于0.15重量％的所述可传输物质。可传输物质的量可为至 少0.005重量％,优选地至少0.001重量％，更优选地至少0.05重量％。
有利地，如所描述的所述传输工具的形成不要求可传输物质经受例如 温度或pH的苛刻条件。
适合地，本方法涉及使水凝胶或前体物质与包括O.l到10 mg/ml，优 选地0.25到5 mg/ml，更优选地0.5到2.5 mg/ml的所述可传输物质的水性 制剂接触。接触可在范围为5到50°C,优选的10到35。C的温度，特别的在室温下进行。
水凝胶或前体物质可通过使水凝胶，例如本文描述的或根据下文的第 二个实施方式制备的水凝胶脱水，但排除亲水性聚合物和交联工具与可传 输物质的整合而制备。
在第二个实施方式中，所述可传输物质可与可被调整以形成所述水凝 胶的前体物质^l妄触，且适合地封装所述可传输物质。例如，所述前体物质 可包括如根据第一方面描述的亲水性聚合物和交联工具。适合地在用于催 化在亲水性聚合物和交联工具之间反应的催化剂的存在下，上述前体可与 所述可传输物质接触。
所述亲水性聚合物的重量与在方法中使用的交联工具的重量的比值 优选地在范围10到100之间。适合地，比值至少为15，优选地至少20，
更优选地至少30。比值可小于90,优选地小于80,更优选地小于70。
用于形成水凝胶的有机物质的含量可被调整以改变水凝胶的物理特 性。例如，亲水性聚合物和交联工具的重量％的总和可在0.5重量％到20 重量％的范围内，优选地在1重量％到15重量％的范围内。在范围的较低 端，水凝胶可为粘弹性且可适于整合入膏中，用于局部应用或用于浸渍到 多孔物质中。在范围的较高端，为自身可用作应用中的敷料层的固体凝胶 形式。
在第二个实施方式中，所述可传输物质与前体物质的接触可在多达 99.5重量％的水存在下进行。水的含量可为85重量％到95重量％。第二 个实施方式可涉及选自亲水性聚合物和交联工具的0.5重量％到20重量％ 的有机物质与79.99重量％到99.49重量％的水和至少0.01重量％的可传输 物质的接触。
第二方面所述的方法可包括使水凝胶灭菌的步骤，例如使用加热、电 子束辐射或Y辐射。
根据本发明第三方面，提供了适用于需要治疗的人类或动物身体的创 面、损伤或其它区域的治疗物质，所述治疗物质包括根据第一方面的传输 工具和/或如根据所述第二方面制成的传输工具。所述治疗物质可包括敷料，其中所述传输工具被浸渍到物质中；或所
述传输工具可以片或膜和/或刚性物质的形式被提供；或所述传输工具可为
流体(如膏)的形式。
可传输物质可被整合到根据第一方面所描述的和/或如根据第二方面 所描述的水平。
治疗物质优选地可在使用前，在基本上灭菌的环境中(如包或容器如试
管)被提供。
所述治疗物质优选地为^L料。
当所述物质为敷料时，所述敷料可包括第一个面，可传输物质经由其 被调整以传递以接触需要治疗的人类或动物身体的一部分，且在所述第一 个面的上游所述敷料包括非渗透性的障碍，其基本上阻止流体(如水)通过 其穿过。因此，所述敷料优选地被调整，用于使流体从其本质上以单一方
向穿过。
根据本发明第四方面，提供了治疗需要治疗的人类或动物身体的创 面、损伤和其它区域的方法，所述方法包括将待治疗的区域接触根据第一 方面的传输工具和/或被根据第三方面的治疗物质。
根据本发明第五方面，提供了第一方面的传输工具用于生产用于治疗 需要治疗的人类身体的创面、损伤或其它区域的物质如用于局部应用的敷 料或制剂的用途。
优选地，根据本发明第四和第五方面，创面、损伤和其它区域可在创 面、损伤或其它区域的清创术已经发生之后治疗。因此，根据第四和第五 方面的创面的治疗可包括第一步骤，其包括通过适合地使用包括本文描述
的传输工具以外的物质引发创面、损伤或其它区域的清创术；及第二步骤， 在第一步骤之后，其包括使用如本文描述的传输工具或治疗物质。第一步 骤可包括使用蛆。第二步骤优选地涉及通过使用如本文描述的所述传输工 具和/或治疗物质，促进创面、损伤和其它区域的愈合。
任何本文描述的发明或实施方式的任何方面的任何特性可与本文描 述的已作必要的修正的任何其它发明或实施方式的任何方面的任何特性
20组合。
现在将通过示例的方式描述本发明具体实施方式
，参考附图，其中
图1阐述了在培养基中的活性物质(ES)浓度和创面闭合的比例之间的
闭合响应关系；
图2总结了蛋白酶显色定量分析(colorimetric protease assay)的结果， 用于评估活性物质(ES)从水凝胶物质的释放；
图3总结了在模型创面生长培养基上的研究结果。
下文优选了以下物质
Poval 220 -从Kuraray获得的聚乙烯醇，其具有30.mPa.s的粘度和约 为88%摩尔％水解(皂化)程度，所述粘度在2(TC下在4%水溶液中测试(经 Brookfield 同步4义表^走4争式丰占度i十(synchronised-meter rotary-type viscometer)测定)。分子量约为130,000。
实施例l-幼虫排泄/分泌产物(ES)的制备
根据Horobm等人描述的方法(Horobin A.J, Shakesheff K. M， Woodrow S， Robinson C， Pritchard D.1.(2003) Maggots and wound healing: The Effects of丄wc/7/a ,w"cato Larval Secretions upon Human Dermal Fibroblasts(虫且与创 面愈合丝光绿蝇幼虫分泌物对人类皮肤纤维原细胞的作用).British Journal of Dermatology 148: 923-33)，在粹化之后不久，将来自无菌的丝光 绿蝇幼虫(LarvE, Surgical Materials testing laboratory, Cardiff, UK)的ES 提取在磷酸盐緩冲盐水(0.01MPBS， pH7.3)中。ES溶液随后被冷冻干燥以 储存并随后在用于实验使用的灭菌水中重建，以相当于50pg/ml的蛋白质 浓度用于迁移(migration)研究及相当于1 mg/ml的蛋白质浓度用于释放研 究。幼虫的ES已经在小于65。C的温度下显示了高度的稳定性且活性测试 证实经观察，37 °C的培养温度对在培养基中的ES水平无有害作用。
实施例2-聚(l,4-二""N-曱基吡!^))-2,3-二(4-(l-曱酰基苯基)亚丁基的制
备
此按照PCT/GB97/02529的实施例1中所描述的制备，其内容通过《1<formula>formula see original document page 22</formula>用被合并于本文。在该方法中，通过使SbQ与水在室温下混合，制备大于 1重量％的4-(4-曱酰基苯基乙烯基)-l-曱基吡啶曱基磺酸盐 (methosulphonate)(SbQ)的水溶液。在此条件下，SbQ分子形成聚集体。溶 液随后暴露于紫外光。此导致在聚集体中的毗邻的4-(4-甲酰基苯基乙烯 基)-l-甲基吡啶甲基硫酸盐分子(I)的碳-碳双键之间的光化学反应，产生聚 合物聚(l,4-:(4-(N-曱基吡啶基》-2,3-二(4-(1 -曱酰基苯基)亚丁基甲基磺 酸盐(IT),如在下文的反应流程图中所显示。应该理解的是，为了清楚，已 省略了化合物I和II的阴离子。
、 <formula>formula see original document page 22</formula>向此溶液添加1% W/W的实施例2的亚丁基聚合物。混合物在真空下脱气
且通过温和地，小心避免引入气泡地添加20%w/w的盐酸而^皮聚合，最终 浓度为0.02重量％。将混合物快速倒入非粘性塑料盘中以产生最终深度为 1 mm的凝胶片。12小时后，温和地分离聚合凝胶并用RO水洗涤直到凝 胶表面获得6-7的pH读数(使用平底pH电极测量；Hanna)。直径为5 mm 的板从凝胶片中压出(被设计为当被水合时，符合标准ELISA板孔)。通过 在6(TC下在真空下千燥，使板完全脱水。
实施例4-用于将ES整合入水皿的第一个方法。
实施例3的脱水的板被重新水合在1 mg/ml的在0.01M磷酸盐緩冲盐 水(PBS)， pH7.5中配制的ES中，持续12小时。ES的浓度通过先前的容 量知识被选择以能够用于板的液体吸收且被设计为向细胞培养物给出最 大的50吗/mlES的释放。对照板仅使用PBS重新水合。板随后被PBS漂 洗以除去外源性溶液且被印迹干燥。板在使用前被储存在4'C下。
包括其它浓度ES的板也以相似的方式被制备。
实施例5-含ES的水凝胶板的评价
(i)从水凝胶板释放ES
这通过注入了 ES(l mg/ml)的水凝胶板和未处理板在Tns缓冲盐水， pH8(TBS)中，持续6小时和12小时的悬浮得到证实。为了比较颜色，也 在TBS中制备了 50吗/ml的ES参照溶液。随后在板浸没的6小时和12 小时时，抽取上清液的等分试样且通过添加在TBS中制备的10。/。v/v蛋白 酶底物混合物(Protease Substrate Cocktail I， Calbiochem),测试蛋白酶活性。 此试剂包括对于丝氨酸、半胱氨酸、天门冬氨酸和氨基肽酶蛋白酶的广谱 特异性显色底物。
为了使板浸没在具有对脆弱的细胞单层细胞的最小化机械干扰的模 型创面生长培养基中，使用能够通过500 pm聚酯目插入末端使物体通过 扩散从水凝胶板直接释放到生长培养基上的Costar Netwell⑧孔插入器 (Corning, UK)，使注入ES的水凝胶板和对照板悬浮于在细胞培养物上面 约1 mm处的上清液培养基中。
23(ii)在细胞培养物中的pTyr表达的免疫组织学和免疫细胞化学检测。
在3T3纤维原细胞以(a)ES 50 jxg/ml(b)对照组(c)ES 50貼/ml和在培养 基中稀释了 1/200的蛋白酶底物混合物(PIC; Sigma)培养了 12小时(如上文 所描述)后，在3T3纤维原细胞的贴壁模型创面培养物中，进行磷酸化酪氨 酸(pTyr)的局部化。通过将冰冷的比例为50: 50的甲醇乙酸添加到生长 培养基中，细胞被固定10分钟。在抽取并以洗涤溶液(PBS/0.05。/。 Tween 20) 漂洗之后，细胞培养物以阻滞剂(6%无脂肪的脱脂奶粉的PBS/0.01% Tween 20溶液)在21。C下培养3小时。在抽取并以洗涤溶液漂洗之后，培养物在 2rC下以浓度为1:10,000 mAb pTyr的抗体稀释液(l。/。无脂肪脱脂奶粉的 PBS/0.01% Tween 20溶液)与单克隆小鼠抗-磷酸化酪氨酸-过氧化物酶轭合 物(mAb pTyr-HRP;克隆PT-66; Sigma Aldrich， Poole, Dorset)培养3个小 时。在抽取并以洗涤溶液漂洗数次之后，以享有专利权的四甲基联苯胺 (TMB)过氧化物酶底物(用于膜的TMB液体底物系统，Sigma Aldrich)培养 培养物。此形式的TMB产生不可溶的蓝色反应产物，其作为mAb pTyr-HRP 局部化的标记原位沉积。在允许15分钟以得到最大TMB颜色发展之后， 过量的TMB溶液被抽取且培养物被洗涤溶液漂洗。培养物保持在PBS中 用于显微镜检查。
在以ES 50 pg/mi或对照培养(如上所描述的)3T3纤维原细胞12小时 后，在3T3纤维原细胞的模型创面培养物中，进行磷酸化酪氨酸(pTyr)表 达的定量。使用细胞刮将细胞单层从孔培养物表面剥离且抽去细胞/生长培 养基并通过低速离心(2500 g， 5分钟)而成团。弃去上清液并将细胞重新悬 浮于200 pl冰冻的Phosphosafe Extraction试剂(Calbiochem)中并在21°C 下培养15分钟。通过在15,000 g下离心5分钟，细胞悬浮液,皮成团。上 清液被转移到96孔多孔板上且在21 °C下培养2小时。随后以洗涤溶液漂 洗孔并在21°C下以阻滞剂(6%无脂肪脱脂奶粉的PBS/0.01% Tween 20溶液) 培养孔3个小时。在抽取并以洗涤溶液漂洗之后，孔在21。C下以浓度为 1:60,000 mAb pTyr的抗体稀释液(P/。无脂肪脱脂奶粉的PBS/0.01% Tween 20溶液)与单克隆小鼠抗-磷酸化酪氨酸-过氧化物酶轭合物(mAb pTyr;克 隆PT-66; Sigma Aldrich, Poole, Dorset)被培养3小时。在抽取并用洗涤溶液漂洗数次之后，以享有专利权的四甲基联苯胺(TMB)过氧化物酶底物
(用于ELISA的TMB液体底物系统，Sigma Aldrich)培养孔。在停留15分 钟以得到最大TMB颜色发展之后，使用分光光度计多孔板读取器(Biorad)， 在655 nm下测量吸收读数。
(iii)结果
在ES在培养基中的浓度和在3T3纤维原细胞单层培养物中的创面闭 合速度之间，存在明显的量效关系，50|ig/ml时引发最快的闭合(图1)。在 液体培养基补充了 50 pg/ml蛆提取物的12小时之后，在液体培养基中的 3T3纤维原细胞单层培养物的创面面积被更详细的分析，其证实了显著加 快的闭合速度。
用于评估ES从水凝胶物质的释^:的蛋白酶显色定量分析显示，在板 上清液中ES的增加为时间依赖性(图2)。从水凝胶释放到3T3纤维原细胞 和HaCaT模型创面培养基中的ES的作用的研究显示在以注入ES的板培 养12小时之后，；漠型创面闭合速度的显著(对于两种细胞类型，p<0.001) 增加(图3)。
实施例6-ES制备到水凝胶中的第二种方法
制备包括10重量％ Poval 220聚乙烯醇和实施例2的0.5重量％亚丁基 聚合物的水溶液。用于其制备的典型方法包括将粉末状Poval聚乙烯醇緩 慢溶解在亚丁基聚合物的溶液中且伴随恒定搅拌。通过将溶液保持在60 。C下，持续6小时，完成全部溶解。伴随混合，向制备的溶液中添加ES 溶液。混合物随后被酸化到pH为2.5。酸化的混合物被倒入到100 mm直 径的Petri-盘中，深度为3 mm且被允许凝为胶体，持续48小时。作为结 果，形成整合了 ES的凝胶薄膜。
实施例7-实施例6的凝胶的灭菌
实施例4和实施例6的膜可使用已知方法被灭菌。
整合了 ES的水凝胶可被整合入创面敷料中。例如，它可组成敷料的 层，其在使用中接触创面或它可构成敷料的内层，其在使用中通过一个或 多个其它层与创面相隔。在另一个实施方式中，水凝胶可被整合入多孔载体中。参考实施例6,不同于被倒入盘及形成膜的制剂，该制剂可用于浸 渍多孔物质，例如作为载体的织物。在进一步的实施方式中，制剂可用于 制备用于局部应用于创面的物质，例如膏。在此情况下，聚乙烯醇、亚丁 基聚合物和酸的混合物可与被调整的载体混合以构成乳脂。
本发明不被前述的实施方式所限制。本发明扩展到在本申请(包括任何 附带的权利要求书、摘要和图)中公布的特性的任何新颖实施方式或任何新 颖组合，或此处公布的任何方法和工艺的步骤的任何新颖实施方式或任何 新颖的组合。
权利要求
1. 一种用于将可传输物质传输到例如创面床的传输工具，所述传输工具包括水凝胶且所述可传输物质包括(i)在所述水凝胶不存在时如果使用加热、电子束辐射或γ辐射灭菌时将分解和/或永久性变性的可分解物质；(ii)蛋白质、蛋白质片段、肽或氨基酸；或(iii)来自生物体丝光绿蝇或黑腹果蝇的分泌物或排泄物。
2. 根据权利要求1的传输工具，其中所述可分解的物质为如此在所述水凝胶不存在下，如果经历高于100。C的温度；至少40kV 持续至少1分钟的Y辐射；或至少18kV的持续至少l分钟的电子束辐射 时，将分解和/或永久性变性。
3. 根据权利要求1或2的传输工具，其中所述水凝胶包括任选衍生化 的亲水性聚合物。
4. 根据权利要求3的传输工具，其中所述亲水性聚合物选自聚甲基丙 烯酸聚合物、聚酰亚胺、聚乙烯醇和上述物质的共聚物。
5. 根据前述任一项权利要求的传输工具，其中所述水凝胶包括任选衍 生化的聚乙烯醇。
6. 根据前述任一项权利要求的传输工具，其中所述的水凝胶包括主要 由乙烯醇和乙酸乙烯酯官能团组成的任选衍生化的聚乙烯醇，其中所述聚 乙烯醇在至少25摩尔％且少于95摩尔％的程度上被水解。
7. 根据前述任一项权利要求的传输工具，其中所述水凝胶包括被交联 工具交联的亲水性聚合物。
8. 根据前述任一项权利要求的传输工具，其中所述水凝胶包括通过使 用具有至少两个醛基团的交联物质交联聚乙烯醇而形成的物质。
9. 根据权利要求8的传输工具，其中所述交联物质包括含有下式II 重复单元的聚合物其中A和B相同或不同，选自任选取代的芳香和杂芳香基团且至少一 个包括相对极性的原子或基团，并且R1和f独立地包括相对非极性的原 子或基团。
10. 根据前述任一项权利要求的传输工具，其中所述水凝胶的重量％ 与所述可传输物质的重量％的比值至少为IO且所述比值小于500。
11. 根据前述任一项权利要求的传输工具，其中所述水凝胶和所述可 传输物质彼此密切地混合且构成基本均匀的混合物。
12. 根据前述任一项权利要求的传输工具，其中所述传输工具包括至 少50重量％及小于95重量％的水且包括小于10重量％的所述可传输物质。
13. 根据前述任一项权利要求的传输工具，其包括- 0.000001重量％到5重量％的所述可传输物质；- 2重量％到30重量％的有机聚合物；及 -65重量％到94.999999重量％的水。
14. 一种生产根据前述任一项权利要求的传输工具的方法，所述方法 包括将根据前述任一项权利要求的可传输物质与水凝胶或与可调整以形 成水凝胶的前体物质接触。
15. 根据权利要求14的方法，其中包括少于可封装在其中的最大含量 的水的水凝胶或包括脱水水凝胶的前体物质与包括所述可传输物质的制 剂接触，以致所述可传输物质^皮吸收入所述水凝胶或前体物质中。
16. 根据权利要求14或15的方法，其中可包括在所述水凝胶或前体 物质中的最大含量的水的重量％与当与所述可传输物质接触时在所述水凝 胶或前体物质中的水的重量％的比值大于2。
17. 根据权利要求14到16任一项的方法，其包括使所述水凝胶或前体物质与包括0.1 mg/ml到10 mg/ml所述可传输物质的水性制剂在范围为 5。C到5(TC的温度下接触。
18. 根据权利要求14的方法，其中将所述可传输物质与可调整以形成 所述水凝胶且封装所述可传输物质的前体物质接触。
19. 根据权利要求14到18任一项的方法，其包括灭菌所述水凝胶的 步骤。
20. —种治疗物质，其包括根据权利要求1到13任一项的传输工具和 /或根据权利要求14到19任一项所描述的方法制造的传输工具。
21. —种治疗需要治疗的人类或动物身体的创面、损伤或其它区域的 方法，所述方法包括将待治疗的区域接触根据权利要求1到13任一项的 传输工具和/或根据权利要求20的治疗物质。
22. 根据权利要求1到13任一项的传输工具用于生产用于治疗需要治 疗的人体的创面、损伤或其它区域的物质的用途。
全文摘要
一种用于将可传输物质传输到创面床的传输工具，其包括水凝胶(优选任选地被交联的聚乙烯醇)和可传输物质，其包括(i)可分解物质，其在所述水凝胶不存在时如果使用加热、电子束辐射或γ辐射灭菌将分解和/或永久性变性；(ii)蛋白质、蛋白质片段、肽或氨基酸；或(iii)来自生物体丝光绿蝇或黑腹果蝇的分泌物或排泄物。
文档编号A61L15/16GK101448532SQ200780017873
公开日2009年6月3日 申请日期2007年5月16日 优先权日2006年5月17日
发明者唐纳德·艾格兰德, 尼古拉斯·约翰·克劳瑟, 斯蒂芬·伯瑞特兰德 申请人:Agt科学研究有限公司