一种伤科接骨药物的质量控制方法

专利名称：一种伤科接骨药物的质量控制方法
技术领域：
本发明涉及一种中药制剂的质量控制方法，具体涉及中药伤科接骨药物的 质量控制方法。
背景技术：
药品应具有安全性、有效性、稳定性及可控性。完善的质量控制标准能够 保证药品质量的可靠性和均一性。本发明药物由红花、土鳖虫、朱砂、马钱子 粉、炙没药、三七、炙海星、炙鸡骨、冰片、煅自然铜、炙乳香、甜瓜子十二 味药组成，具有活血化瘀、消肿止痛、舒筋壮骨功效。用于趺打损伤，闪腰岔 气，伤筋动骨，瘀血肿痛，损伤红肿等症，具有较好的治疗效果。在公开号为CN1709463A的中国专利申请文件中公开了一种伤科接骨药物， 由上述十二味药组成，但没有公开其质量控制方法。在公开号为CN1806820A的 中国专利申请文件中也公开了 一种伤科接骨药物，也是由上述十二味药组成， 并公开了其质量控制方法。该质量控制方法中除了具有显微鉴别项外，还增加 了三七药材中人参皂苷Rgl、三七皂苷Rl和乳香药材的薄层色谱鉴别及马钱子 中士的宁和朱砂中硫化汞的含量测定。但该质量控制方法中存在一些不足，如 (1)在三七薄层色谱鉴别中，样品取样量大；且采用人参皂苷Rgl、三七皂苷 Rl作为三七药材薄层鉴别的对照品，按照其公开的方法实验，结果三七阴性 对照溶液的色谱中，在与人参皂苷Rgl对应的位置上存在干扰；且样品色谱中， 在与三七皂苷R1对应的位置上，存在未分开的多个斑点，无法判定是否有对应 斑点，故不适宜用于三七的定性鉴别，见附图2; (2)乳香为进口药材，不同品种的乳香成份是有差异的，故所对应的鉴别方法也不相同，从而对该药味在制 剂中的鉴别方法也不应相同。根据该公开文件中所公开的内容无法确定对照药 材所使用的乳香品种，所以无法选用相应的对照药材进行鉴别试验。另外，该 方法中样品的提取是釆用乙醚超声处理20分钟，污染太大，无法操作(因乙醚沸点低易挥发)；(3)马钱子中士的宁含量测定方法设计有缺陷，如对照品取 量不合适，远超出其所制定的样品含量上限，会增加测定误差；样品前处理后， 残渣用流动相无法完全溶解，故不能定量转移进行含量测定；(4)朱砂中硫化汞含量测定方法存在检出灵敏度低，检验周期长，样品化学反应不完全，易造成检验误差等缺陷，如①样品取样量10g，硫酸仅用了50ml，中药粉末具有质轻体 积大的特点，样品取样量偏大，浸润不完全，会导致测定结果偏低；②该方法中釆用凯氏烧瓶作为容器，并且自始至终未转移至其它合适的容器，该容器不适合化学滴定操作；③按其检验方法"加硫酸50ml与硝酸钾5g，加热使溶 解......"，实际无法达到所述的溶解状态，不具备可操作性。因而无法保证含量测定的准确性。众所周知，马钱子和朱砂均具有毒性，因此精确控制二者的用量极其重要。发明内容本发明在公开号为CN1709463A的中国专利申请文件药物制剂的基础上，提 供了上述发明药物的质量控制方法，通过此方法可以控制该发明药物及含相同 组分伤科接骨药物的质量。本发明所述的伤科接骨药物的中药原料药是由红花、土鳖虫、朱砂、马钱子 粉、炙没药、三七、炙海星、炙鸡骨、冰片、煅自然铜、炙乳香、甜瓜子十二 味药组成，其制剂可为胶囊剂、片剂或丸剂等。该药物的中药原料药的重量份 配比为红花4-15份土鳖虫13-50份朱砂3-15份马钱子粉6-30份炙没药卜6份三七26-100份炙海星13-30份炙鸡骨13-60份冰片0. 5-3份煅自然铜6-30份炙乳香1-5份甜瓜子1-5份优选的，各原料药的重量配比 红花 4-9份 土鳖虫13-30份马钱子粉 6-15份炙没药1-3份 炙海星 13-30份 炙鸡骨13-30份煅自然铜 6-15份 炙乳香 比较优选的，各原料药的重量配比 红花 12份 土鳖虫马钱子粉 20份 炙没药 炙海星 20份 炙鸡骨煅自然铜 20份 炙乳香 更优选的，各原料药的重量配比 红花 6份 土鳖虫马钱子粉 10份 炙没药 炙海星 20份 炙鸡骨煅自然铜 1Q份 炙乳香 2份朱砂 3-7. 5份 三七 26-60份 冰片 Q. 5-1.5'1-3份甜瓜子1-3份40份朱砂io份4份三七80份40份冰片2份4份甜瓜子4份20份朱砂5份2份三七40份20份冰片l份甜瓜子2份以上组成是按照重量份作为配比的，在生产时可按照相应比例增大或减少， 如大规模生产时可以以公斤为单位，或以吨为单位。本发明药物可通过文献公开的方法制得，也可采用以下方法得到，如将上述 配方的原料经过提取或其他加工方式加工，制成药物活性物质，随后，以该物质为原料，需要时加入药物可接受的载体，按照制剂学的常规技术制成胶囊、 片剂、口服液、颗粒剂、丸剂等。所述的活性物质可以通过选自以下方法得到， 如粉碎、压榨、煅烧、研磨、过筛、滲漉、萃取、水提、醇提、酮提、层析 等方法得到，这些活性物质可以是浸膏形式的物质，也可以是干浸膏或者流浸 膏，还可以是高纯度提取物，根据制剂的不同需要决定制成不同的浓度。优选的，本发明药物的制备方法，包括如下步骤(1) 称取所述重量配比的原料药备用；(2) 将除朱砂和冰片外的原料药粉碎，过100-250目筛；(3) 将朱砂制成朱砂极细粉，将冰片研细，都兑入过筛后的上述原料药药 粉中混合均勻，即制得本发明药物。优选的，本发明药物的另一制备方法，包括如下步骤(1) 称取所述重量配比的原料药备用；(2) 将除红花、朱砂和冰片外的原料药粉碎，过100-250目筛；(3) 将红花加6-10倍水煎煮两次，每次l-2小时，合并煎液，过滤，将滤 液浓缩至相对密度为1. 05-1. 35 ( 40-85°C )的浸膏；(4) 将上述浸膏及步骤(2)所制得的药粉混合，干燥成细粉；(5) 将朱砂制成朱砂极细粉，将冰片研细，然后都兑入步骤(4)所制得的 细粉中，混合均匀，即制得本发明药物。优选胶囊剂的制备方法以上十二味药，除朱砂、冰片外，其余红花等十味 粉碎，过條成细粉；朱砂水飞成极细粉，兑入过筛后的细粉中，过筛，混匀； 冰片研细，与上述粉末配研，混匀，装入胶囊，即得。本发明所述可接受的载体包括淀粉、蔗糖、乳糖、糖粉、葡萄糖、甘露醇、 木糖醇、聚乙二醇、异丙醇、土温-80、甘油、丙二醇、微晶纤维素钠、糊精、环糊精、氯化钠、维生素C、半胱氨酸、柠檬酸、硫代硫酸钠、亚硫酸钠、硬脂 酸盐和明胶等常规辅料，制剂的后期制备工艺均属制药领域的常规技术，本发 明对此不作限定，故在此不予详述。为了有效控制所述的伤科接骨药物的质量，本发明人制定了如下所述质量控 制方法的技术方案。所述的质量控制方法适用于本发明十二味药组成的组合物， 也适用于包括各种制剂辅料在内的药物制剂，具体可包括胶囊剂、片剂和丸剂 等。该质量控制方法的特征在于包括如下鉴别方法中的一种、至少两种、至少三种性状鉴别、显微鉴别、薄层色谱鉴别、电泳鉴别；对本发明药物的一种或几种成分进行含量测定，其方法包括气相色谱、高效液相色谱及化学滴定。其中所述性状鉴别包括如下内容 性状鉴别所述伤科接骨药物为片剂时，其片芯为灰褐色至棕褐色；味苦， 腥；所述伤科接骨药物为胶囊剂时，其内容物为浅褐色至褐色；味苦，腥；所 述伤科接骨药物为丸剂时，其丸芯为浅褐色至褐色；味苦，腥。显微鉴别取本发明药物，置显微镜下观察花粉粒类圆形或椭圆形，直径 43-66)im，外壁有齿状突起，具有3个萌发孔；树脂道碎片含棕黄色分泌物； 体壁碎片棕色或棕红色，有圆形毛窝，直径8-24jum，有的具长短不一的刚毛； 不规则细小颗粒暗红棕色，有光泽，边缘暗黑色。非腺毛单细胞，多碎断，壁 极厚，木化，基部膨大似石细胞；不规则形碎片，无色，有光泽，完整者表面 有圆形窝孔，多数碎块边缘呈半圆环状，有突起；或者，取本发明药物，置显微镜下观察树脂道碎片含棕黄色分泌物；体壁 碎片棕色或棕红色，有圆形毛窝，直径8-24jam，有的具长短不一的刚毛；不规 则细小颗粒暗红棕色，有光泽，边缘暗黑色。非腺毛单细胞，多碎断，壁极厚， 木化，基部膨大似石细胞；不规则形碎片，无色，有光泽，完整者表面有圆形窝孔，多数碎块边缘呈半圆环状，有突起。本发明所述的质量控制方法，其特征在于还包括对药物中三七、红花、冰片 和/或马钱子粉的薄层色谱鉴别，包括如下内容，其中对三七的鉴别是釆用三七对照药材作为阳性对照； 对红花的鉴别是釆用红花对照药材作为阳性对照；对冰片的鉴别是釆用冰片对照品作为阳性对照；对马钱子粉的鉴别是釆用士的宁和马钱子碱对照品作为阳性对照。 具体薄层色谱鉴别方法包括如下步骤三七的鉴别取本发明药物粉末1.5-3. 0g，加甲醇10ml，超声处理10-30 分钟(160w、 50kHz),滤过，滤液作为供试品溶液；另取三七对照药材粉末lg, 同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2005版一部，附录VI B) 试验，吸取上述两种溶液各4-8m1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂 的硅胶G薄层板上，以4-6: 2-4: 1-2: 1-2的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开 剂，展开，取出，晾干，喷以1%香草醛硫酸溶液，在95°C-ll(TC加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑 占.优选的三七的鉴别取本发明药物粉末2. 0g,加甲醇10ml,超声处理20 分钟(160w、 50kHz),滤过，滤液作为供试品溶液；另取三七对照药材粉末lg, 同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2005版一部，附录VI B) 试验，吸取上述两种溶液各5)il，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的 硅胶G薄层板上，以5: 3: 1: 1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂，展开， 取出，晾干，喷以1%香草醛硫酸溶液，在105'C加热至斑点显色清晰；供试品 色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；红花的鉴别取本发明药物粉末3. 0-5. 0g,加80%丙酮溶液lOml，密塞， 超声处理15分钟(160w、 50kHz)，滤过，滤液作为供试品溶液；另取红花对照 药材O. 5g,同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2005版一部，附 录VI B)试验，吸取上述两种溶液各lOjal,分别点于同一以羧甲基纤维素钠 为粘合剂的硅胶H薄层板上，以7: 2: 3: 0. 4的乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇为展 开剂，展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上，显相 同颜色的斑点；优选的红花鉴别取本发明药物粉末4. Og，加80%丙酮溶液10ml,密塞， 超声处理15分钟(160w、 50kHz)，滤过，滤液作为供试品溶液；另取红花对照 药材O. 5g,同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2005版一部，附 录VI B)试验，吸取上述两种溶液各lO)al,分别点于同一以羧甲基纤维素钠 为粘合剂的硅胶H薄层板上，以7: 2: 3: 0. 4的乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇为展 开剂，展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上，显相 同颜色的斑点；冰片的鉴别取本发明药物粉末2. 0-4. Og，加三氯甲烷15ml，振摇，浸渍2 小时，滤过，滤液作为供试品溶液；另取冰片对照品，加三氯甲烷每lml约含 2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005版一部，附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各3jal，分别点于同一硅胶G薄层板上，以9: 1 的苯-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105°C 加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同 颜色的斑点；或者，取本发明药物粉末2. 0-4. Og,加三氯甲烷15ml，振摇，超声处理15-30 分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取冰片对照品，加无水乙醇制成每lml约含lmg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005版一部，附 录VI B)试验，吸取供试品溶液4-8 jal，对照品溶液2jal，分别点于同一硅 胶G薄层板上，以15-20: 2-5的环己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾 干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在95-110。C加热至斑点显色清晰；供试品色谱 中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；优选的冰片的鉴别 取本发明药物粉末3. Og，加三氯甲烷15ml，振摇， 超声处理20分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取冰片对照品，加无水乙醇 制成每lml约含lmg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005 版一部，附录VI B)试验，吸取供试品溶液5jul，对照品溶液2yl，分别点 于同一硅胶G薄层板上，以17: 3的环己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出， 晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105i:加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；马钱子粉的鉴别取本发明药物粉末3. 0-5. Og,加9-ll: l的三氯甲烷-乙 醇混合液15ml与浓氨水试液1. 5ml，密塞，超声处理10-30分钟(160w、 50kHz),滤过，滤液作为供试品溶液；另取士的宁和马钱子碱对照品，加三氯甲烷制成每lml各含2mg的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005 版一部，附录vi b)试验，吸取上述供试品溶液10-20 m1、对照品溶液5jul， 分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以3-5: 4-6: 0.5-0.7: 0. 3-0. 5的甲苯-丙酮-乙醇-浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干， 喷以稀碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同 颜色的斑点。优选的马钱子粉的鉴别取本发明药物粉末4. Og,力口 10: 1的三氯甲烷-乙醇混合液15ml与浓氨水试液1. 5ml，密塞，超声处理20分钟(160w、 50kHz),滤过，滤液作为供试品溶液；另取士的宁和马钱子碱对照品，加三氯甲烷制成每lml各含2mg的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005 版一部，附录VI B)试验，吸取上述供試品溶液15m1、对照品溶液5jal，分 别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以4: 5: 0.6: 0.4 的甲苯-丙酮-乙醇-浓氨水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液； 供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。本发明所述的质量控制方法，还包括对海星的鉴别，主要为电泳鉴别，包 括如下步骤提取方法取本发明药物粉末1.5-3. Og和海星对照药材0.2-1. 0 g，分别 加入6ml热水，盖上保鲜膜，IO(TC煮20-40 min，放冷后4000 rpm离心20分 钟，取上清液各5-15jal;照电泳法(中国药典2005版三部，附录IV C)试验， 按下述电泳条件进行SDS-聚丙酰胺凝胶电泳，即得；供试品与对照药材在相应 的位置上显相同的蛋白条带；其中所述的电泳条件分离胶9-14%;浓缩胶4-6%;恒电流30 mA; 电压200 V;电泳时间2-3小时；用考马斯亮蓝R250染色3-5h,摇床脱色。优选的海星电泳鉴别提取方法取本发明药物粉末2. 0g和海星对照药材0. 5g,分别加入6 ml 热水，盖上保鲜膜，10(TC煮30min，放冷后4000 rpm离心20分钟，取上清液 各10jul;照电泳法(中国药典2005版三部，附录IVC)试验，按下述电泳条 件进行SDS-聚丙酰胺凝胶电泳，即得；供试品与对照药材在相应的位置上显相 同的蛋白条带；其中所述的电泳条件分离胶12.5%;浓缩胶5%;恒电流30mA;电 压200 V;电泳时间2小时；用考马斯亮蓝R250染色4h，摇床脱色。本发明伤科接骨药物的质量控制方法中的检查项应符合中国药典胶囊剂、 片剂和丸剂等项下有关的各项规定。本发明所述的质量控制方法，其特征在于还包括对马钱子粉和/或朱砂和/ 或冰片中主要成分进行含量测定，具体包括如下内容马钱子粉中士的宁的含量测定色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈 -0. 01mol/L庚烷磺酸钠与0. 02mol/L磷酸二氢钾等量混合溶液(用10%磷酸调 节pH值2. 8)(21: 79)为流动相，检测波长为260nm,理论板数按士的宁峰计 算应不低于5000;对照品溶液的制备精密称取士的宁对照品10mg,置25ml量瓶中，加三氯 甲烷适量使溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取lml，置25ml量瓶中，用甲醇 稀释至刻度，摇匀，即得，每lml含有士的宁16pg;供试品溶液的制备取本发明药物粉末0.5-1. 5g，精密称定，置具塞锥形 瓶中，加氢氧化钠试液3ml，混匀，放置30分钟，精密加三氯甲烷20ml，密塞， 称定重量，置水洛中回流提取2小时，放冷，再称定重量，用三氯甲烷补足减 失的重量，摇勻，分取三氯甲烷提取液，用铺有少量硫酸钠的滤纸滤过，弃去 初滤液，精密量取5ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度； 测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10nl,注入液相色谱仪，测 定，即得；朱砂中硫化汞的含量测定取本发明药物粉末2. 0-3. Og,精密称定，置250ml烧瓶中，加硫酸20ml与 硝酸钾2.5g,加热使呈黄白色，放冷，加水50ml，滴加1%高锰酸钾溶液至显 粉红色，超声处理5分钟，若粉红色消失，继续滴加高锰酸钾溶液显粉红色至2分钟不消失，再滴加2%硫酸亚铁溶液至红色消失，加硫酸铁铵指示液2ml，用 0. lmol/L硫氰酸铵滴定液滴定，即得； 冰片的含量测定色谱条件与系统适用性试验聚乙二醇(PEG) -20M毛细管柱(柱长30m, 内径0.32 mm,膜厚度0. 5 M m),柱温140 °C。理论板数按龙脑峰计算应不低 于8000;校正因子测定取水杨酸甲酯适量，精密称定，加乙醇制成每lml含O. 25 mg的溶液，作为内标溶液；另取冰片对照品15 mg，精密称定，置50 ml量瓶 中，加内标溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，吸取0.5 m,注入气相色谱仪，测 定，计算校正因子；测定法取本发明药物粉末0.5-2. 0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密 加入内标溶液10ml，混匀，密塞，称定重量，超声处理10-30分钟，放至室温， 再称定重量，用内标溶液补足减失的重量，摇匀，离心10-30分钟，吸取上清 液O. 5pl，注入气相色谱仪，测定，以龙脑、异龙脑峰面积之和计算，即得；优选的，冰片的含量测定色谱条件与系统适用性试验聚乙二醇(PEG) -20M毛细管柱(柱长30 m, 内径0.32 mm,膜厚度0. 5 p m)，柱温140 °C。理论板数按龙脑峰计算应不低 于8000;校正因子测定取水杨酸甲酯适量，精密称定，加乙醇制成每lml含O. 25 rag的溶液，作为内标溶液；另取冰片对照品15 mg，精密称定，置50 ml量瓶 中，加内标溶液溶解并稀释至刻度，摇勻，吸取0.5 W,注入气相色谱仪，测 定，计算校正因子；测定法取本发明药物粉末l.Og,精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液10ml，混勻，密塞，称定重量，超声处理20分钟，放至室温，再称 定重量，用内标溶液补足减失的重量，摇匀，离心20分钟，吸取上清液0.5)i1, 注入气相色谱仪，测定，以龙脑、异龙脑峰面积之和计算，即得。本发明所述的质量控制方法，其特征在于每单位制剂含马钱子以士的宁 (C21H22N202 )计，应为0. 10-0. 20mg,含朱砂以硫化汞(HgS )计，应为7.00-12. OOmg;含冰片(d。HlsO )应不少于O. 60 mg。本发明质量控制方法中包含了对组方中三七、海星等君药的定性鉴别，以 及对贵重药材红花和易挥发药物冰片及有毒药材马钱子的定性鉴别，更大程度 保证该组方药物质量的稳定；同时因为组方中含有马钱子和朱砂两味有毒药材， 因此增加了对这两种药味的含量测定项目，以确保本发明的用药既有效又安全； 此外，还增加了对药物中易挥发成分冰片的含量测定。相对于现已公开的文献, 本发明质量控制的范围更大，方法更简便可靠，易于操作，灵敏度、精密度及 重现性好，体现在产品质量效果上表现为各种成分的检出稳定可靠，可有效地 防止造假行为的发生，更好地保证疗效及用药安全。例如，马钱子中所含的士 的宁既是有效成分也是有毒成分，因而建立其可靠的含量测定标准，对保证用 药安全性及有效性非常重要，可确保产品质量的"安全、均一、稳定、有效、 可控"。同公开文献(公开号为CN1806820A)相比，本发明的优点，在对三七的薄 层色谱鉴别中采用三七对照药材作为对照品，能够检出三七中特征性成分；另 展开系统中无三氯甲垸，展开剂为乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5:3:L1),可即刻 使用，方法快速、简便易行。而在该公开文献中，所用展开剂为三氯甲烷-乙酸 乙酯-甲醇-水(15: 40: 22: 10 )需放置12小时后分取下层，步骤繁瑣，液体还需分离，当天无法检测，还使用了毒性较大的三氯甲烷。综合对比结果，本发明样品用量少(最高取样量为3. 0g)，提取试剂甲醇用量少(为10ml),检验周期短，结果重现性好，检出结果灵敏度高，参见图l。而在该对比公开文献，按照样品取样量为8-12g;提取甲醇用量为30ml;超声时间30分钟；展开剂 为三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15: 40: 22: 10 ),放置12小时后分取下层； 对照品为人参皂苷Rgl和三七皂苷Rl;点样量为样品10pl，对照品5"1的条 件进行薄层鉴别。该方法检出灵敏度低、样品取样量大、提取试剂甲醇用量多， 按此条件复核结果还发现同板比较，三七阴性对照溶液的色谱中，在与人参皂 苷Rgl对应的位置上存在干扰(Rf值0.45);且样品色谱中，在与三七皂苷R1对应的位置上，存在未分开的多个斑点，无法判定是否有对应斑点Uf值0. 31), 参见附图2。此外，增加了对马钱子粉、冰片、红花的薄层色谱鉴别，增加了对海星的 电泳鉴别，增加了对冰片的含量测定；检测范围大，控制指标多。同时在对马 钱子粉和朱砂的定量检测方法中克服了该公开文献中存在的缺陷。通过本方法制备得到的伤科接骨药物，具有治疗趺打损伤、闪腰岔气、伤筋 动骨、瘀血肿痛、损伤红肿等作用，可用于治疗伤科疾病。同时，本发明所述 的伤科接骨药物的半数致死量LD5。= 3. 9066 ± 0. 2518g/kg，相当于人临床用量的 56倍，临床人用量为0. 07g/kg。


图l本发明三七的薄层色谱鉴别图，其中1:本发明供试品溶液2:三七对照药材溶液3:三七阴性对照溶液 图2公开文献(公开号CN1806820A)中三七的薄层色谱鉴别图，其中1:三七阴性对照溶液2:对比文献供试品溶液3:人参皂苷Rgl和三七皂苷R1对照品混合溶液 4:对比文献供试品溶液5:人参皂苷Rgl和三七皂苷Rl对照品混合溶液 图3本发明对照品士的宁高效液相色谱图 图4本发明供试品高效液相色谱图具体实施方式
以下通过实施例来进一步阐述本发明所述药物的质量控制方法，但并不作 为对本发明的限制。实施例1伤科接骨药物的质量控制方法所述伤科接骨药物中各原料药的重量配比红花 6份 土鳖虫 20份 朱砂 5份马钱子粉 10份 炙没药 2份 三七 40份炙海星 20份 炙鸡骨 20份 冰片 l份煅自然铜 10份 炙乳香 2份 甜瓜子2份性状鉴别对于片剂产品片芯为灰褐色至棕褐色；味苦，腥；对于胶囊 剂产品内容物为浅褐色至褐色；味苦，腥；对于丸剂产品丸芯为浅褐色至 褐色；味苦，腥。显微鉴别取本发明药物，置显微镜下观察花粉粒类圆形或椭圆形，直 径43-66 Mm,外壁有齿状突起，具有3个萌发孔；树脂道碎片含棕黄色分泌物。 体壁碎片棕色或棕红色，有圆形毛窝，直径8-24"m，有的具长短不一的刚毛；不规则细小颗粒暗红棕色，有光泽，边缘暗黑色；非腺毛单细胞，多碎断，壁极厚，木化，基部膨大似石细胞；不规则形碎片，无色，有光泽，完整者表面 有圆形窝孔，多数碎块边缘呈半圆环状，有突起；或者，取本发明药物，置显微镜下观察树脂道碎片含棕黄色分泌物；体 壁碎片棕色或棕红色，有圆形毛窝，直径8-24pm,有的具长短不一的刚毛；不 规则细小颗粒暗红棕色，有光泽，边缘暗黑色；非腺毛单细胞，多碎断，壁极 厚，木化，基部膨大似石细胞；不规则形碎片，无色，有光泽，完整者表面有 圆形窝孔，多数碎块边缘呈半圆环状，有突起；三七的薄层色谱鉴别取本发明药物粉末2. 0g，加甲醇10ml,超声处理20 分钟(160w、 50kHz),滤过，滤液作为供试品溶液；另取三七对照药材粉末lg, 同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2005版一部，附录VI B) 试验，吸取上述两种溶液各5m1,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的 硅胶G薄层板上，以5: 3: 1: 1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂，展开， 取出，晾干，喷以1%香草醛硫酸溶液，在105。C加热至斑点显色清晰；供试品 色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；参见附图l;冰片的薄层色谱鉴别取本发明药物粉末2. 0-4. 0g,加三氯甲烷15ml，振 摇，浸渍2小时，滤过，滤液作为供试品溶液；另取冰片对照品，加三氯甲烷 每lml约含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005版一 部，附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各3jal，分别点于同一硅胶G薄层板 上，以9: l的苯-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液， 在105'C加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；红花的薄层色谱鉴别取本发明药物粉末4. 0g,加80%丙酮溶液10ml,密塞，超声处理15分钟(160w、 50kHz )，滤过，滤液作为供试品溶液；另取红花 对照药材O. 5g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2005版一部， 附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各IOmI,分别点于同一以羧甲基纤维素 钠为粘合剂的硅胶H薄层板上，以7: 2: 3: 0. 4的乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇为 展开剂，展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上，显 相同颜色的斑点；检查符合中国药典胶囊剂、片剂和丸剂等项下有关的各项规定。马钱子粉中士的宁的含量测定色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈 -0. 01mol/L庚烷磺酸钠与0. 02mol/L磷酸二氢钾等量混合溶液(用10%磷酸调 节pH值2.8)(21: 79)为流动相，检测波长为260nm,理论板数按士的宁峰计 算应不低于5000;对照品溶液的制备精密称取士的宁对照品10mg,置25ml量瓶中，加三氯 甲烷适量使溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取lml，置25ml量瓶中，用甲醇 稀释至刻度，摇匀，即得，每lml含士的宁16ng;供试品溶液的制备取本发明药物粉末1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中， 加氢氧化钠试液3ml，混匀，放置30分钟，精密加三氯甲垸20ml，密塞，称定 重量，置水洛中回流提取2小时，放冷，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的 重量，摇匀，分取三氯甲烷提取液，用铺有少量硫酸钠的滤纸滤过，弃去初滤 液，精密量取5ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度；测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10pl，注入液相色谱 仪，测定，即得；结果每片中含马钱子粉以士的宁计，为0.15mg;每粒胶囊含 马钱子粉以士的宁计，为O. 16mg;每丸含马钱子粉以士的宁计，为O. l5mg。照品色谱图和供试品色谱图参见附图3和附图4。 实施例2伤科接骨药物的质量控制方法除了上述实施例1中所述的内容外，还包括如下内容马钱子粉的鉴别取本发明药物粉末4. 0g，加10: 1的三氯甲烷-乙醇混合液15ml与浓氨水 试液1.5ml,密塞，超声处理20分钟U60w、 50kHz)，滤过，滤液作为供试品 溶液；另取士的宁和马钱子碱对照品，加三氯甲烷制成每lml各含2mg的混合 溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005版一部，附录VI B) 试验，吸取上述供试品溶液15|al、对照品溶液5yl，分别点于同一以羧甲基 纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以4: 5: 0.6: 0. 4的甲苯-丙酮-乙醇-浓氨水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液；供试品色谱中， 在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。朱砂中硫化汞的含量测定取本发明药物粉末2. 5g，精密称定，置250ml烧瓶中，加硫酸20ml与硝酸 钾2.5g,加热使呈黄白色，放冷，加水50ml，滴加1%高锰酸钾溶液至显粉红 色，超声处理5分钟，若粉红色消失，继续滴加高锰酸钾溶液显粉红色至2分 钟不消失，再滴加2%硫酸亚铁溶液至红色消失，加硫酸铁铵指示液2ml，用 0. lmol/L硫氰酸铵滴定液滴定，即得；每片含朱砂以硫化汞计，为9. OOmg;每 粒胶囊含朱砂以硫化汞计，为9. 02mg;每丸含朱砂以硫化汞计，为8. 78mg。 实施例3伤科接骨药物的质量控制方法除了实施例2中所述的内容外，还包括海星的鉴别，具体如下 提取方法取本发明药物粉末2. 0g和海星对照药材0. 5g,分别加入6 ml 热水，盖上保鲜膜，10(TC煮30min，放冷后4000 rpm离心20分钟，取上清液各10pl;照电泳法(中国药典2005版三部，附录IVC)试验，按下述电泳条 件进行SDS-聚丙酰胺凝胶电泳，即得；供试品与对照药材在相应的位置上显相 同的蛋白条带；其中所述的电泳条件分离胶12.5%;浓缩胶5%;恒电流30 mA;电压200 V;电泳时间2小时；用考马斯亮蓝R250染色4h，摇床脱色。实施例4伤科接骨药物的质量控制方法除了实施例3中所述的内容外，还包括对冰片的含量测定，具体如下 色谱条件与系统适用性试验聚乙二醇(PEG) -20M毛细管柱(柱长30 m，内径0.32 mm,膜厚度0. 5 m m),柱温140 。C。理论板数按龙脑峰计算应不低于8000;校正因子测定取水杨酸甲酯适量，精密称定，加乙醇制成每lml含0.25 mg的溶液，作为内标溶液；另取冰片对照品15 mg，精密称定，置50 ml容量 瓶中，加内标溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，吸取0.5 m，注入气相色谱仪， 测定，计算校正因子；测定法取本发明药物粉末1. Og,精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入 内标溶液10ml，混匀，密塞，称定重量，超声处理20分钟，放至室温，再称 定重量，用内标溶液补足减失的重量，摇匀，离心20分钟，吸取上清液O. 5pl， 注入气相色谱仪，测定，以龙脑、异龙脑峰面积之和计算，即得；每片含冰片 为1.0mg;每粒胶囊含冰片为1.2mg;每丸含冰片为0. 9mg。实施例5伤科接骨药物的质量控制方法实施例1-4中所述的质量控制方法，其中冰片的鉴别方法可按照如下方 法进行鉴别冰片的鉴别取本发明药物粉末3. 0g,加三氯甲烷15ml，振摇，超声处理 20分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取冰片对照品，加无水乙醇制成每lml 约含lmg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005版一部，附 录VI B)试验，吸取供试品溶液5jul，对照品溶液2pl，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以17: 3的环己垸-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5 %香草醛硫酸溶液，在105C加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品 色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； 实施例6伤科接骨药物的质量控制方法实施例1中所述的内容，其中对三七的薄层色谱鉴别中，可取本发明药物粉末3. Og,加甲醇10ml，超声 处理30分钟，其它条件同实施例l,结果供试品色谱中，在与对照药材色谱相 应的位置上，显相同颜色的斑点；对冰片的薄层色谱鉴别中，可取本发明药物粉末4.0g,其它内容同实施例 1，结果供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；对马钱子粉中士的宁的含量测定方法中，取另外批号的胶囊剂、片剂或丸 剂1.5g,按照实施例l所述的方法进行测定，结果每片含马钱子粉以士的宁计， 为O. 18mg;每粒胶囊含马钱子粉以士的宁计，为O. 18mg;每丸含马钱子粉以士 的宁计，为0. 16mg。实施例7伤科接骨药物的质量控制方法 同实施例1中所述的内容，除了对三七的薄层色谱鉴别中，可取本发明药物粉末1.5g,加甲醇10ml，超声 处理10分钟，其它条件同实施例1,结果供试品色谱中，在与对照药材色谱相 应的位置上，显相同颜色的斑点；对冰片的薄层色谱鉴别中，可取本发明药物粉末2.0g，其它内容同实施例 1,结果供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；对马钱子粉中士的宁的含量测定方法中，取另外批号的胶囊剂、片剂或丸 剂O. 5g，按照实施例1所述的方法进行测定，结果每片中含马钱子粉以士的宁计，为O. 14mg;每粒胶囊含马钱子粉以士的宁计，为O. 15mg;每丸含马钱子粉以士的宁计，为0. 15mg。实施例8伤科接骨药物的质量控制方法同实施例2中所述的内容，除了朱砂中硫化汞的含量测定项中取本发明药 物粉末3. Og外，结果每片含朱砂以硫化汞计，为9. llmg;每粒胶囊中含朱砂以 硫化汞计，应为9. 40mg;每丸中含有朱砂以硫化汞计，为9. "mg。 实施例9伤科接骨药物的质量控制方法同实施例3中的内容，除了取本发明药物粉末3. Og和海星对照药材1. Og， 分别加入6ml热水，盖上保鲜膜，10(TC煮40min，放冷后4000rpm离心20分 钟，取上清液各5m1;照电泳法(中国药典2005版三部，附录IVC)试验， 按下述电泳条件进行sds-聚丙酰胺凝胶电泳，即得；供试品与对照药材在相应 的位置上显相同的蛋白条带；其中所述的电泳条件分离胶14.0%、浓缩胶 6%;恒电流30 mA,电压200 V;电泳时间2小时；用考马斯亮蓝R250染 色6h，摇床脱色。实施例10伤科接骨药物的质量控制方法同实施例3中的内容，海星的鉴别方法如下除了取本发明药物粉末1.5g 和海星对照药材O. 2g，分别加入6ml热水，盖上保鲜膜，10(TC煮20min,放 冷后4000 rpm离心20分钟，取上清液各15m1;照电泳法(中国药典2005版 三部，附录IV C)试验，按下述电泳条件进行sds-聚丙酰胺凝胶电泳，即得；供试品与对照药材在相应的位置上显相同的蛋白条带；其中所述的电泳条件 分离胶9.0°/。、浓缩胶4%;恒电流30mA,电压200 V;电泳时间2小时； 用考马斯亮蓝R250染色3h,摇床脱色。实施例11伤科接骨药物的质量控制方法同实施例5中的内容，冰片的鉴别方法如下取本发明药物粉末4. Og，加三氯甲烷15ml，振摇，超声处理30分钟，滤 过，滤液作为供试品溶液；另取冰片对照品，加无水乙醇制成每lml约含lmg 的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005版一部，附录VI B) 试验，吸取供试品溶液8jul，对照品溶液2jnl，分别点于同一硅胶G薄层板上， 以20: 5的环己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫 酸溶液，在IIO'C加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的 位置上，显相同颜色的斑点。 实施例12伤科接骨药物的质量控制方法同实施例5中的内容，冰片的鉴别方法如下取本发明药物粉末2.0g,加三氯甲烷15ml，振摇，超声处理15分钟，滤 过，滤液作为供试品溶液；另取冰片对照品，加无水乙醇制成每lml约含lmg 的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005版一部，附录VI B) 试验，吸取供试品溶液4"1，对照品溶液2nl，分别点于同一硅胶G薄层板上， 以15: 2的环己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫 酸溶液，在95'C加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的 位置上，显相同颜色的斑点。
权利要求
1. 一种伤科接骨药物的质量控制方法，所述伤科接骨药物是由红花、土鳖虫、朱砂、马钱子粉、炙没药、三七、炙海星、炙鸡骨、冰片、煅自然铜、炙乳香、甜瓜子十二味药组成，其特征在于包括如下鉴别方法中的一种或几种性状鉴别、显微鉴别、薄层色谱鉴别、电泳鉴别；对本发明药物的一种或几种成分进行含量测定，其方法包括气相色谱、高效液相色谱及化学滴定。
2、 根据权利要求1所述的质量控制方法，所述药物的制剂为胶囊剂、片剂和 丸剂。
3、 根据要求2所述的质量控制方法，所述性状鉴别和显微鉴别包括如下内容: 性状鉴别所述伤科接骨药物为片剂时，其片芯为灰褐色至棕褐色；味苦,腥；所述伤科接骨药物为胶囊剂时，其内容物为浅褐色至褐色；味苦，腥；所 述伤科接骨药物为丸剂时，丸芯为浅褐色至褐色；味苦，腥；显微鉴别取本发明药物，置显微镜下观察花粉粒类圆形或椭圆形，直 径43-66iam,外壁有齿状突起，具有3个萌发孔；树脂道碎片含棕黄色分泌物； 体壁碎片棕色或棕红色，有圆形毛窝，直径8-24ym，有的具长短不一的刚毛； 不规则细小颗粒暗红棕色，有光泽，边缘暗黑色；非腺毛单细胞，多碎断，壁 极厚，木化，基部膨大似石细胞；不规则形碎片，无色，有光泽，完整者表面 有圆形窝孔，多数碎块边缘呈半圆环状，有突起；或者，取本发明药物，置显微镜下观察树脂道碎片含棕黄色分泌物；体 壁碎片棕色或棕红色，有圆形毛窝，直径8-24ym，有的具长短不一的刚毛；不 规则细小颗粒暗红棕色，有光泽，边缘暗黑色；非腺毛单细胞，多碎断，壁极 厚，木化，基部膨大似石细胞；不规则形碎片，无色，有光泽，完整者表面有 圆形窝孔，多数碎块边缘呈半圆环状，有突起。
4、 根据权利要求3所述的质量控制方法，其特征在于还包括对本发明药物中三七、红花、冰片和/或马钱子粉的薄层色谱鉴别。
5、 根据权利要求4所述的质量控制方法，其特征在于薄层色谱鉴别包括如下内容其中对三七的鉴别是釆用三七对照药材作为阳性对照； 和对红花的鉴别是釆用红花对照药材作为阳性对照； 和对冰片的鉴别是釆用冰片对照品作为阳性对照； 和/或对马钱子粉的鉴别是釆用士的宁和马钱子碱对照品作为阳性对昭
6、 根据权利要求5所述的质量控制方法，其特征在于薄层色谱鉴别方法包括 如下步骤三七的鉴别取本发明药物粉末1.5-3. 0g，加甲醇10ml,超声处理10-30 分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取三七对照药材粉末lg，同法制成对照 药材溶液；照中国药典2005版一部附录VIB中薄层色谱法试验，吸取上述两 种溶液各4-8y 1,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上， 以4-6: 2-4: 1-2: l-2的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾 干，喷以1%香草醛硫酸溶液，在95-ll(TC加热至斑点显色清晰；供试品色谱 中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；红花的鉴别取本发明药物粉末3.0-5. Og,加80%丙酮溶液10ml,密塞， 超声处理15分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取红花对照药材0.5g，同法 制成对照药材溶液；照中国药典2005版一部附录VIB中薄层色谱法试验，吸 取上述两种溶液各10 ju 1 ，分别点于同 一 以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶H薄 层板上，以7: 2: 3: 0.4的乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇为展开剂，展开，取出， 晾干；供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上，显相同颜色的斑点；冰片的鉴别取本发明药物粉末2. 0-4. 0g,加三氯甲烷15ml，振摇，浸渍2 小时，滤过，滤液作为供试品溶液；另取冰片对照品，加三氯甲烷每lml约含 2mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005版一部附录VI B中薄层色谱 法试验，吸取上述两种溶液各3Ml，分别点于同一硅胶G薄层板上，以9: l的 苯-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105'C加 热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜 色的斑点；或者，取本发明药物粉末2. 0-4. Og,加三氯甲烷15ml，振摇，超声处理15-30 分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取冰片对照品，加无水乙醇制成每lml 约含lmg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005版一部附录VI B中薄层 色谱法试验，吸取供试品溶液4-8jal，对照品溶液2nl，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以15-20: 2-5的环己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干， 喷以5%香草醛硫酸溶液，在95-ll(TC加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；马钱子粉的鉴别取本发明药物粉末3. 0-5. Og,加9-ll: 1的三氯甲垸-乙 醇混合液15ml与浓氨水试液1.5ml，密塞，超声处理10-30分钟，滤过，滤液 作为供试品溶液；另取士的宁和马钱子碱对照品，加三氯甲烷制成每lml各含 2mg的混合溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005版一部附录VI B中薄层 色谱法试验，吸取上述供试品溶液10-20 pl、对照品溶液3-7pl，分别点于同 一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以3-5: 4-6: 0. 5-0. 7: 0. 3-0. 5 的甲苯-丙酮-乙醇-浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试 液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
7、根据权利要求6所述的质量控制方法，其特征在于对三七、冰片和马钱子粉的鉴别方法包括如下步骤三七的鉴别取本发明药物粉末2. 0g,加甲醇10ml，超声处理20分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取三七对照药材粉末lg，同法制成对照药材溶 液；照中国药典2005版一部附录VIB中薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液 各5)al，分别点于以同一羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以5: 3: 1: 1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%香草醛 硫酸溶液，在105。C加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相 应的位置上，显相同颜色的斑点；冰片的鉴别取本发明药物粉末3. Og，加三氯甲烷15ml，振摇，超声处理 20分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取冰片对照品，加无水乙醇制成每lml 约含lmg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005版一部附录VI B中薄层 色谱法试验，吸取供試品溶液5m1，对照品溶液2Ml，分别点于同一硅胶g薄 层板上，以17: 3的环己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5% 香草醛硫酸溶液，在105X:加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色 谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；马钱子粉的鉴别取本发明药物粉末4. Og,加10: 1的三氯甲烷-乙醇混合 液15ml与浓氨水试液1.5ml,密塞，超声处理20分钟，滤过，滤液作为供试品 溶液；另取士的宁和马钱子碱对照品，加三氯甲烷制成每lml各含2mg的混合 溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005版一部附录VI B中薄层色谱法试验， 吸取上述供试品溶液15m1、对照品溶液5jal，分别点于同一以羧甲基纤维素 钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以4: 5: 0.6: 0. 4的甲苯-丙酮-乙醇-浓氨水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对 照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
8、 根据权利要求4所述的质量控制方法，还包括对海星进行电泳鉴别。
9、 根据权利要求8所述的质量控制方法，其特征在于对海星的电泳鉴别包括 如下步骤提取方法取本发明药物粉末1.5-3.0 g和海星对照药材0.2-1. 0g,分别 加入6ml热水，盖上保鲜膜，IO(TC煮20-40 min,放冷后4000 rpm离心20分 钟，取上清液各5-15M1;照电泳法(中国药典2005版三部，附录IV C)试验， 按下述电泳条件进行SDS-聚丙酰胺凝胶电泳，即得；供试品与对照药材在相应 的位置上显相同的蛋白条带；其中所述的电泳条件分离胶9-14%;浓缩胶4-6%;恒电流30 mA; 电压200 V;电泳时间2-3小时；用考马斯亮蓝R250染色3-5h,摇床脱色。
10、 根据权利要求9所述的质量控制方法，其特征在于对海星的电泳鉴别包 括如下步骤提取方法取本发明药物粉末2. Og和海星对照药材0. 5g,分别加入6 ml 热水，盖上保鲜膜，IO(TC煮30 min,放冷后4000 rpm离心20分钟，取上清液 lOul;照电泳法(中国药典2005版三部，附录IV C)试验，按下述电泳条件 进行SDS-聚丙酰胺凝胶电泳，即得；供试品与对照药材在相应的位置上显相同 的蛋白条带；其中所述的电泳条件分离胶12.5%;浓缩胶5%;恒电流30 mA;电 压200 V;电泳时间2小时；用考马斯亮蓝R250染色4h，摇床脱色。
11、 根据权利要求4和8所述的质量控制方法，其特征在于还包括如下马钱 子粉和/或朱砂和/或冰片中主要成分的含量测定方法1)马钱子粉中士的宁的含量测定色谱条件与系统适用性试验以十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂；以21: 79的乙腈-O. 01raol/L庚烷磺酸钠与0. Q2mol/L磷酸二氢钾等量混合溶液为流动相， 检测波长为260nm，理论板数按士的宁峰计算应不低于5000;对照品溶液的制备精密称取士的宁对照品10mg，置"ml量瓶中，加三氯 甲烷适量使溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取lml,置25ml量瓶中，用甲醇 稀释至刻度，摇匀，即得，每lml含士的宁16ng;供试品溶液的制备取本发明药物粉末0.5-1. 5g，精密称定，置具塞锥形 瓶中，加氢氧化钠试液3ml，混匀，放置30分钟，精密加三氯甲垸20ml，密塞， 称定重量，置水洛中回流提取2小时，放冷，再称定重量，用三氯甲烷补足减 失的重量，摇匀，分取三氯甲烷提取液，用铺有少量硫酸钠的滤纸滤过，弃去 初滤液，精密量取5ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度；测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各lO]al，注入液相色谱 仪，测定，即得；2)朱砂中硫化汞的含量测定取本发明药物粉末2. 0-3. 0g,精密称定，置250ml烧瓶中，加硫酸20ml与 硝酸钾2.5g,加热使呈黄白色，放冷，加水50ml，滴加1%高锰酸钾溶液至显 粉红色，超声处理5分钟，若粉红色消失，继续滴加高锰酸钾溶液显粉红色至2 分钟不消失，再滴加2%硫酸亚铁溶液至红色消失，加硫酸铁铵指示液2ml，用 0. lraol/L硫氰酸铵滴定液滴定，即得；3)冰片的含量测定色谱条件与系统适用性试验聚乙二醇(PEG) -20M毛细管柱(柱长30 m， 内径0.32 ,，膜厚度0.5 jam),柱温140 °C。理论板数按龙脑峰计算应不低 于8000;校正因子测定取水杨酸甲酯适量，精密称定，加乙醇制成每lml含O. 25mg的溶液，作为内标溶液；另取冰片对照品15 mg,精密称定，置5G ml量瓶 中，加内标溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，吸取0.5 W，注入气相色谱仪，测 定，计算校正因子；测定法取本发明药物粉末0.5-2. 0g,精密称定，置具塞锥形瓶中，精密 加入内标溶液10ml，混匀，密塞，称定重量，超声处理10-30分钟，放至室温， 再称定重量，用内标溶液补足减失的重量，摇匀，离心10-30分钟，吸取上清 液0. 5pl，注入气相色谱仪，测定，以龙脑、异龙脑峰面积之和计算，即得。 12、 根据权利要求11所述的质量控制方法，其特征在于每单位制剂含马钱子 粉以士的宁(C21H22N202 )计，应为0. 10-0, 20mg，含朱砂以硫化汞(HgS )计，应 为7. 00-12. 00 mg;含冰片(C10H18O )应不少于0. 60 mg。
全文摘要
本发明公开了一种伤科接骨药物的质量控制方法。该方法用薄层色谱法对三七、冰片、红花、马钱子粉进行定性鉴别，用电泳法对海星进行定性鉴别，并分别用高效液相色谱法和气相色谱法对士的宁和冰片进行定量检测，用化学滴定法对硫化汞进行定量检测，扩大了该伤科接骨药物的质量控制范围。本发明质量控制方法简单易行，具有较强的专属性，定量检测方法精密度高、重现性好，确保了该复方药物质量的“均一、稳定、有效、可控”。
文档编号A61K33/26GK101278976SQ200810097488
公开日2008年10月8日 申请日期2008年5月30日 优先权日2008年5月30日
发明者周文波, 伟 姜, 张成海, 李延成, 李晓艳, 罗国良, 心 陈 申请人:大连美罗中药厂有限公司