专利名称：：大黄和附子的混合提取工艺的制作方法
技术领域：
：本发明涉及中药复方消可宁中大黄与附子的混合提取工艺。
背景技术：
：中药复方消可宁由黄芪(RadixAstragli)、大黄(RadixetRhizeomaRhei)禾口附子(RadixAconitiLaterlisPreparata)三味中药组合而成的。其中黄芪为主药，臣药大黄和附子的用药比例为1:1。大黄(RadixetRhizeomaRhei)为蓼科植物掌叶大黄(RheumpalmatumL.)、唐古特大黄(RheumtangguticmMaxim,exBalf.)或药用大黄(RheumofficinaleBail.)的干燥根及根茎。主产于甘肃、青海等地。性苦，寒，有小毒。大黄具有泻下攻积，清热泻火，活血祛淤，解毒之功效。用于大便秘结，胃肠积滞、血热妄行及淤血等证。现代药理研究表明，大黄具有泻下，保肝利胆，利尿、止血等作用，可用于治疗急慢性肾功能减退，急性感染性疾病，各种出血性疾病，便秘及各种急腹症，能够部分改善糖尿病患者的临床症状，因而大黄是中药复方消可宁中一味重要的中药。大黄的根和根茎中主要含有蒽醌衍生物(约占2%5%)及鞣质等。其中蒽醌类以两种形式存在一种与葡萄糖结合成蒽苷；一种为游离形式的苷元，如大黄酸(Rhein)、大黄酚(Chrys叩hnol)、大黄素(Emoadin)、卢荟大黄素(Aloe-emodin)和大黄素甲醚(Physcin)。通常以大黄酸、大黄素作为指标性成分。附子(RadixAconitiLaterlisPr印arata)为毛茛科植物乌头(AconitumcarmichaeliDebx.)子根的加工品，主产于四川、陕西等地。性大热味辛、甘，有毒。有回阳救逆、补火助阳、散寒止痛之功效，用于亡阳证、寒痹证、虚寒性的阳痿宫冷、腕腹冷痛、水肿等证。现代药理研究表明附子有强心、升血压、抗休克、抗心率失常、抗炎镇痛、镇静、局麻等作用。可用于治疗休克，缓慢型心率失常，风湿性关节炎、关节痛、腰腿痛、神经痛等症。附子因其毒性较大，因此在中药复方制剂中并不常用，而且研究较少。附子虽有较好的疗效，但临床应用不安全，必须在产地及使用之前加工处理，方可使用。附子经过炮制后常见的炮制品有盐附子、黑顺片、白附片、炮附片、淡附片等多种。附子经炮制后既保证了临床疗效，又可明显降低其毒性便于内服。本发明中所使用的炮制品为黑顺片，附子根中含总生物碱，其中主要为剧毒的双酯类生物碱，如乌头碱等；在加工炮制的过程中，常失去一分子醋酸及一分子苯甲酸，生成毒性较小的单酯类生物碱及不带酯键的醇胺类生物碱，如中乌头碱、次乌头碱等。故在《药典》中以乌头碱作为限量成分，在单味药及复方制剂中常以总生物碱的含量作为指标成分进行考察。大黄与附子配伍一则大黄可以制约附子的毒性，防止其过热伤阴；二则附子助大黄荡涤污垢，推陈出新。大黄与附子配伍是中药反佐配伍中增效减毒的重要方式。以往，大黄和附子的单味药及其复方制剂的制备方法主要是使用高浓度的有机溶剂进行提取，如甲醇、乙醇、苯、乙醚、氯仿等进行回流提取。这类提取方法受片型影响大、对提取条件的筛选干扰因素多(如浸泡时间、吸水率、粉碎粒度差异、均匀度差异、提取升温时间等)；其次，此类方法使用有机溶剂提取不能用于中药大生产，而且高浓度的乙醇提高了生产成本。若利用传统的水煎煮或回流提取工艺提取效果不佳，而且生产周期较长。微波萃取(MAE)技术是高频电磁波穿透萃取媒质，到达被萃取物料的内部，微波迅速转化为热能使细胞内部温度快速上升，当细胞内部的压力超过细胞壁承受能力时细胞破裂，细胞内有效成分自由流出，在较低的温度下溶解于萃取媒质。在微波辐射作用下，被萃取物料成分加速向萃取溶剂界面扩散，从而使萃取速率提高数倍，同时降低了萃取温度，最大限度保证了萃取的质量。大孔吸附树脂分离技术，采用大孔吸附树脂作为吸附剂，此类吸附剂大多为有机高聚物，为吸附和筛选原理相结合的分离材料。吸附树脂分离技术就是将中药煎煮液通过大孔树脂，吸附其中的有效成分，再经洗脱回收，除掉杂质的一种纯化精制的方法。可根据药液成分的不同、提取成分的不同，选择不同型号的树脂。采用吸附树脂分离技术对中药提取液进行精制具有如下优势有效縮小服用剂量；减少产品的吸湿性；有效去除重金属；实验工艺简便，所需实验设备简单。
发明内容本发明所要解决的技术问题在于提供一种进一步提高大黄和附子的提取效果、增强临床疗效、节约成本，在传统提取工艺的基础上进行优化的大黄和附子的混合提取工艺。本发明解决上述技术问题所采取的技术方案是一种大黄和附子的混合提取工艺，包括下述步骤将大黄和附子的混合粉末在615倍的水中浸泡28小时，再对浸泡液进行微波消解萃取两次，萃取液离心过滤后合并两次萃取的上清液，浓縮至大黄和附子浓度为0.050.5g/ml，加入大孔树脂柱中吸附，大孔树脂柱先用水洗，再用梯度浓度的乙醇多次洗脱，合并浓度在5080%的乙醇洗脱液，回收乙醇，经浓縮制得大黄和附子的混合提取物。本发明是以中医药基础理论为指导，参照中药提取的传统方法，利用微波萃取新技术对大黄和附子进行提取。主要是针对传统提取工艺中存在的生产周期长、对试验结果干扰因素多的缺点，本发明中采用微波萃取技术进行提取。其机理是微波萃取即微波辅助萃取(Microwave-assistedextractionMAE)，用微波倉b加热与样品接触的溶剂，将所需的化合物从样品基体中分离，进入溶剂中的过程。在上述方案的基础上，大黄和附子粉末的混合质量比为1:1，大黄与附子的干燥粉末均过2号药典标准筛。在上述方案的基础上，所述的微波消解萃取的条件为微波频率为300MHz15000MHz，优选在25003500MHz，功率为50015000W，萃取温度为50120°C，时间为540分钟。在上述方案的基础上，最佳方案为大黄和附子的混合粉末在10倍的水中浸泡2小时，微波消解萃取的时间为20分钟，温度为100°C，频率为3000MHz。所述的大黄为产自中国甘肃省、青海省、西藏自治区或四川省的大黄；所述的附子为产自中国四川省、陕西省、湖南省或湖北省的附子。本发明的有益效果是将MAE技术与大分子吸附技术有机的结合，具有提取速率快、纯化精度高的技术特点。本发明首先，体现在微波的选择性，因其对极性分子的选择性加热，从而对其选择性的溶出；其次，MAE大大降低了萃取时间，提高萃取速度。传统方法需要几小时至十几小时，超声提取也需要半个小时到一小时，MAE只需要十几分钟，提取速率提高了几十至几百倍，甚至几千倍，并且克服了传统中药提取中粗、大、黑的缺点；再次，MAE使浸泡时间、提取时间、升温时间、提取温度和溶剂使用量完全数据化，并且片型差异、粉碎粒度差异、颗粒均匀度差异不影响试验结果；最后，MAE受溶剂亲和力限制小，可供选择的溶剂多，同时减少了溶剂的用量。由于生产安全可靠、无污染，生产线组成简单，节省了投资。图1为本发明实施例1正交实验的流程图。图2为本发明实施例1的干膏得率效应曲线图。图3为本发明实施例1的大黄酸含量效应曲线图。具体实施例方式实施例1请参阅图1为本发明实施例1正交实验的流程图所示，称取9批大黄(产地为甘肃)与9批附子(产地为四川)干燥粉末(过2号药典标准筛)，每批各50g，大黄与附子l:l混合，分别均匀分装于9个100ml烧杯中，每烧杯中分装100g。按照正交试验的要求，如附表1所示，9个烧杯中分别加入8，10或12倍的水浸泡2，4或6小时，然后用MDS-2002AT微波消解装置进行微波辅助萃取两次，提取时间为10,20或30分钟，温度为60，80或100。C,微波频率为3000MHz，功率为50015000W。萃取液离心过滤，收集合并两次提取的上清液，浓縮至药材浓度为0.5g/ml，干燥至恒重，称重得干膏得率(％)，干膏加入足够量的水完全溶解，加入到D101大孔树脂柱中(为玻璃柱，内径5cm，柱高50cm)吸附，吸附后，大孔树脂柱先用水洗，再用30%乙醇洗脱，最后用70%乙醇洗脱两次，合并浓度在70%的乙醇洗脱液，回收乙醇，经浓縮后定容，经高效液相测得大黄酸的含量(％)。干膏得率、大黄酸含量列于附表2中，干膏得率、大黄酸的方差分析分别列于附表3、4中。附表l大黄附子微波水提正交试验表头<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>附表2大黄附子微波水提正交试验<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>附表3大黄附子微波水提干膏得率方差分析表<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>由附表2的干膏得率RJ直可知，以干膏得率为考察指标时，各因素影响大小顺序为提取温度>提取时间>加水量>浸泡时间。参照图2为本发明实施例1的干膏得率效应曲线图所示，直观分析得大黄与附子混合提取工艺为A孔GD3，即浸泡2小时、加水10倍、提取时间20min、提取温度100'C。由附表2的大黄酸含量Rs值可知，以大黄酸含量为考察指标时，各因素影响大小顺序为提取时间〉加水量〉浸泡时间〉提取温度。参照图3为本发明实施例1的大黄酸含量效应曲线图所示，直观分析得大黄与附子混合提取工艺为AiBADs,即浸泡2小时，加水10倍，提取时间20min，提取温度10(TC。综合以上两项考察指标，进行优化水平组合，从节能降耗等方面总合考察，两项指标完全吻合，故采用AAC2D3为大黄与附子混合微波提取的最佳组合条件，即浸泡2小时、加水10倍、提取时间20min、提取温度KKTC。采用此工艺条件，微波萃取的干膏得率在40%以上，大黄酸的含量超过0.5mg/g。实施例2一种大黄和附子的混合提取工艺，取大黄和附子干燥粉末(过2号药典标准筛)，大黄与附子l:l混合，混合粉末加入10倍水浸泡2小时，再用MDS-2002AT微波消解装置对浸泡液进行微波辅助萃取两次，每次萃取时间20分钟，温度100°C，萃取液离心过滤后合并两次萃取的上清液，浓縮至药材浓度约为0.lg/ml，加入到D101大孔树脂柱中吸附，大孔树脂柱先用水洗，再用梯度浓度的乙醇多次洗脱先用水洗脱，再用30%乙醇洗脱，最后用70%乙醇洗脱两次，合并浓度在70%的乙醇洗脱液，回收乙醇，经浓縮制得大黄和附子的混合提取物。对比例大黄和附子微波辅助萃取与水回流提取对比试验分别称取大黄与附子干燥粉末各两批，每批均为50g，任意一批大黄与任意一批附子混合均匀，分别用微波萃取或水回流提取的方法进行提取。微波辅助萃取微波提取条件为萃取两次，加水10倍，每次20分钟、浸泡2小时，提取温度100'C;回流提取条件为提取两次，第一次1小时，加水8倍；第二次0.5小时，加水8倍；提取液分别离心后浓縮，经D101大孔树脂柱吸附，回收乙醇、浓縮，高效液相测得大黄酸的含量分别为0.595mg/g和0.426mg/g。以上结果说明以大黄酸为指标成分，微波萃取所得的大黄酸的含量高于回流提取。本研究结果不仅有利于提高大黄与附子的提取效果，提高了消可宁的临床疗效，还为中药的提取工艺改进提供了一个良好的方法。权利要求1、一种大黄和附子的混合提取工艺，包括下述步骤将大黄和附子的混合粉末在6～15倍的水中浸泡2～8小时，再对浸泡液进行微波辅助萃取两次，萃取液离心过滤后合并两次萃取的上清液，浓缩至药材浓度为0.05～0.5g/ml，加入大孔树脂柱中吸附，大孔树脂柱先用水洗，再用梯度浓度的乙醇多次洗脱，合并浓度在50～80％的乙醇洗脱液，回收乙醇，经浓缩制得大黄和附子的混合提取物。2、根据权利要求1所述的大黄和附子的混合提取工艺，其特征在于:大黄和附子粉末的混合质量比为1:1。3、根据权利要求1或2所述的大黄和附子的混合提取工艺，其特征在于所述的微波消解萃取的条件为微波频率为25(K)3500MHz，功率为50015000W，萃取温度为50120°C，时间为540分钟。4、根据权利要求3所述的大黄和附子的混合提取工艺，其特征在于大黄和附子的混合粉末在10倍的水中浸泡2小时，微波消解萃取的时间为20分钟，温度为IO(TC。5、根据权利要求1所述的大黄和附子的混合提取工艺，其特征在于-所述的大黄为产自中国甘肃省、青海省、西藏自治区或四川省的大黄;所述的附子为产自中国四川省、陕西省、湖南省或湖北省的附子。全文摘要本发明涉及中药复方消可宁中大黄与附子的混合提取工艺。一种大黄和附子的混合提取工艺，包括下述步骤将大黄和附子的混合粉末在6～15倍的水中浸泡2～8小时，再对浸泡液进行微波辅助萃取两次，萃取液离心过滤后，合并两次萃取的上清液，浓缩至药材浓度为0.05～0.5g/ml，加入大孔树脂柱中吸附，大孔树脂柱先用水洗，再用梯度浓度的乙醇多次洗脱，合并浓度在50～80％的乙醇洗脱液，回收乙醇，经浓缩制得大黄和附子的混合提取物。本发明将微波辅助萃取技术与大分子吸附技术有机的结合，具有提取速率高、纯化精度高的技术特点，由于生产安全可靠、无污染，生产线组成简单，节省了投资。文档编号A61K36/185GK101439103SQ200810207450公开日2009年5月27日申请日期2008年12月19日优先权日2008年12月19日发明者乔德水,王廷军,高雪芹申请人:江苏万邦生化医药股份有限公司;上海复星医药(集团)股份有限公司