专利名称：板蓝根的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及生物医药领域，具体涉及板蓝根的用途。
背景技术：
板蓝根(radixisatidis)为十字花科植物菘蓝(Isatis indigotica Fort.)的干燥根，是中国传统中药，历代本草均有记载。其药性寒味苦，具有清热解毒、凉血消斑的功效，临床广泛用于抗菌、抗病毒、抗血小板聚集、抗内毒素，能够增强机体的免疫功能。单核/巨噬细胞是一种多功能免疫细胞，在机体的特异性免疫反应中起着重要作用。内毒素(LPS)是革兰氏阴性菌外膜的重要组成部分，是介导系统性炎症反应综合症的主要启动因子。LPS本身并不造成机体的严重损害，它主要通过促使巨噬细胞等释放大量的细胞因子，这些因子通过自分泌、旁分泌相互联系、相互影响，使病变得以发展。若能利用内毒素诱导体外培养的人单核/巨噬细胞分泌白介素等炎症因子，通过考察板蓝根对人单核/巨噬细胞(THP-I)炎症因子表达的影响，同时借助炎症因子抗体芯片检测板蓝根对人单核/巨噬细胞分泌的炎症因子表达的影响，可探讨板蓝根抗炎作用的机制。
发明内容
本发明旨在提供板蓝根在制备内毒素诱导的炎症因子调节剂方面的应用。具体为，将板蓝根应用于制备内毒素诱导的炎症因子调节剂，尤其是制备白介素抑制剂，白介素包括白介素-6和白介素-1 β ；还有制备金属蛋白酶组织抑制剂-2蛋白表达的促进剂。单核/巨噬细胞是一种多功能免疫细胞，在机体的特异性免疫反应中起着重要作用。内毒素(LPS)是革兰氏阴性菌外膜的重要组成部分，是介导系统性炎症反应综合症的主要启动因子。LPS本身并不造成机体的严重损害，它主要通过促使巨噬细胞等释放大量的细胞因子，这些因子通过自分泌、旁分泌相互联系、相互影响，使病变得以发展。本发明选用LPS作为造模药物，通过构建人单核/巨噬细胞炎症模型，考察板蓝根抗炎作用的机制。结果显示，板蓝根可显著抑制内毒素诱导单核细胞分泌白介素_6(IL-6) 的活性，对内毒素诱导单核细胞分泌白介素-1 β (IL-Ιβ)的活性也有一定的抑制作用，同时，对金属蛋白酶组织抑制剂-2蛋白(ΤΙΜΡ-2)表达也有一定的促进作用。这一结果是对板蓝根增强人体免疫力研究的重要补充，为阐明板蓝根的抗炎作用机制提供了可能的研究靶点。
图1为实施例2中，空白对照组、LBS组和LBS+板蓝根组的人炎症抗体因子芯片实验的检测结果图2为IL-6 and IL-I β表达量的炎症抗体检测结果
图3为TIMP-2表达量的炎症抗体检测结果
具体实施例方式药品与试剂1、板蓝根(自制)，将板蓝根药材分别经水回流提取，浓缩，80%乙醇沉淀，制得棕褐色粉末；2、RPMI 1640培养液、高灭活胎牛血清、青、链霉素均购自美国Gibco公司；3、苯甲基磺酰氟(PMSF)、蛋白酶抑制剂均购自美国Sigma公司；细菌内毒素(LPS) 由SIGMA公司生产，大肠杆菌055 :B5，批号:56H4096 ；4、磷酸盐缓冲溶液(PBS)自配；细胞培养用水为新鲜三蒸水；其它所用试剂均为分析纯；5、人炎症因子抗体芯片I购自RayBio公司。细胞培养人单核/巨噬细胞(Human acute monocytic leukemia cells，THP-1)购自中科院上海生化细胞所细胞库。采用RPMI 1640培养液(加入10%牛血清，100U双抗，)，在37°C， 5% CO2条件下培养。实施例1 LPS介导实验分组为空白对照组(无LPS)、LPS组、和LPS+板蓝根组。Control组加入空白培养液，LPS组终末质量浓度为lOOng/ml，LPS+板蓝根组LPS和板蓝根的终末浓度分别为 100ng/ml和lmg/ml。调单核细胞密度为1 X IO6个/孔，LPS+板蓝根组先加入板蓝根，15min 后再加入LPS。各组在37°C，5% CO2条件下培养18h，收集上清液保存待测。实施例2人炎症抗体因子芯片实验根据抗体芯片试剂盒说明，在25°C条件下将芯片膜用2ml封闭缓冲液孵化lh，移去封闭缓冲液，用2ml洗片试剂I在室温下脱色摇床上洗三次，每次5min。用2ml洗片试剂 II在室温下脱色摇床上洗三次，每次5min，弃去多余液体。分别加Iml实施例1所制备的各组上清液于膜的蛋白面，室温孵化1 2h。倾去样品液，用洗片试剂I在室温下脱色摇床上洗三次，每次5min。用細1洗片试剂II在室温下脱色摇床上洗三次，每次5min。取出膜，装入新孔中，将血管生成抗体液用封闭缓冲液稀释至适当浓度加入孔中。 室温下孵育池后，用2ml洗片试剂I在室温下脱色摇床上洗三次，每次5min。用2ml洗片试剂II在室温下脱色摇床上洗三次，每次5min。同上方法准备辣根过氧化物酶稀释液并与膜接触，室温下孵育Ih后，用2ml洗片试剂I在室温下脱色摇床上洗三次，每次5min。用2ml洗片试剂II在室温下脱色摇床上洗三次，每次5min。经化学发光，显影，定影。将胶片用凝胶图象处理系统分析目地斑点的净光密度值，计算蛋白表达量。所有数据均以均数士标准差 士s)表示，采用SPSS 13. 0统计软件进行统计分析，组间均数比较用t检验，多个样本均数比较用单因素方差分析。实验结果表明同空白对照组相比，LPS可以诱导人单核/巨噬细胞分泌IL-I β、 IL-6和IL-8上调。实验结果见图1。炎症因子抗体芯片实验发现，lmg/ml板蓝根+LPS组与LPS组相比，IL-6的表达被显著抑制(P < 0. 01)，对IL-I β的表达也有一定的抑制作用(P < 0. 05)，如表1、图1和图 2 ；但对IL-8的表达无明显影响。结果表明板蓝根可显著抑制内毒素诱导单核细胞分泌白介素-6的活性，对内毒素诱导单核细胞分泌白介素-1 β的活性也有一定的抑制作用。表 权利要求
1.板蓝根在制备内毒素诱导的炎症因子调节剂方面的应用。
2.板蓝根在制备白介素抑制剂方面的应用。
3.权利要求2所述板蓝根在制备白介素抑制剂方面的应用，其特征在于，所述的白介素为白介素-6。
4.权利要求2所述板蓝根在制备白介素抑制剂方面的应用，其特征在于，所述的白介素为白介素_1β。
5.板蓝根在制备金属蛋白酶组织抑制剂-2蛋白表达的促进剂方面的应用。
全文摘要
本发明涉及了板蓝根的应用。选用内毒素作为造模药物，构建人单核/巨噬细胞炎症模型，考察板蓝根抗炎作用的机制，结果显示，可将板蓝根应用于制备内毒素诱导的炎症因子调节剂，尤其是制备白介素抑制剂，白介素包括白介素-6和白介素-1β；还有制备金属蛋白酶组织抑制剂-2蛋白表达的促进剂。这一结果是对板蓝根增强人体免疫力研究的重要补充，为阐明板蓝根的抗炎作用机制提供了可能的研究靶点。
文档编号A61P29/00GK102210727SQ20101013870
公开日2011年10月12日 申请日期2010年4月2日 优先权日2010年4月2日
发明者尚鹏, 裴明 申请人:上海市七宝中学