专利名称：鸡树条荚蒾叶中绿原酸的制备工艺的制作方法
技术领域：
本发明所属医药产品研究开发技术领域。本发明涉及鸡树条荚莲叶中绿原酸的制备工艺。本发明产品主要作用是降压、抗肿瘤、抗氧化、抗衰老、抗肌肉骨骼老化、抗菌、抗病
毒等作用。
背景技术：
本发明涉及鸡树条荚莲叶中绿原酸的制备工艺。鸡树条荚莲Viburnum sargentii Koehne为忍冬科Caprifoliaceae荚莲属Viburnum植物，又名天目琼花、鸡树条，为落叶灌 木，分布于辽宁、吉林、黑龙江、内蒙古、山东、河北、四川、浙江等地，朝鲜、日本、前苏联也有 分布，叶、嫩枝、果实均可入药。鸡树条味甘、苦、平，入肺、肝、脾、肾四经，具有通经活络、祛 风除湿、健脾消食、消肿、驱虫、镇咳祛痰等作用，其天然资源极为丰富，且蕴含量大。目前， 鸡树条荚莲常作园林用途，在民间作“鸡树条”药用，枝入药治风湿痹痛，闪腰岔气，跌打损 伤；叶外用治疮疖，疥癣，皮肤瘙痒；以果实煎汁内服，具有止咳的功效，主治急、慢性支气 管炎、咳嗽。由此可见，鸡树条荚莲具有普遍的医疗价值。绿原酸主要存在于金银花、杜仲叶中，其产品分别为金银花提取物，杜仲提取 物蔷薇科植物英国山楂Crataegus oxyacantha Linn.的果实，千屈菜科植物千屈菜 Lythrumsalicaria L. ^C ^^ ^ ^ Dodonaea viscose (L. ) Jacp. ,
植物欧亚水龙骨Polypodium vulgare L.根茎，马鞭草科植物假败酱Stachytarpheta jamaicensis (L. ) Vahl 根，十字花禾斗植物卷心菜 Brassica oleracea L. var. capitata L.茎、叶，蓼科植物扁蓄Polygonumaviculare L.全草，茜草科植物篷子菜Galium verum L.全草，忍冬科植物蒴翟Sambucusjavanica Reinw.全草均含有绿原酸。绿原酸具有较广 泛的作用，毒性很小，幼大鼠口服的LD50大于lg/kg，腹腔注射大于0. 25g/kg。绿原酸主要 作用是降压、抗肿瘤、抗氧化、抗衰老、抗肌肉骨骼老化、抗菌、抗病毒等。绿原酸提取和纯化有如下方法水提醇沉法利用绿原酸易溶于水的特性，采用水作溶剂，加热煮沸提取，然后用高 浓度醇沉淀蛋白质，多糖等杂质。该方法工艺简单、经济，但是水提取液中杂质较多，醇沉过 程中伴随吸附夹带，使部分绿原酸消失。水提石灰乳沉淀法绿原酸与钙盐生成沉淀，在水提取液中加入石灰乳，是绿原酸 沉淀下来，然后用硫酸分解沉淀。该方法操作简单、经济，其缺点是石灰乳沉淀不完全，硫酸 钙对绿原酸有吸附作用，从而降低产率。醇提铅盐沉淀法采用乙醇溶剂，在醇提液中加入乙酸铅溶液，使绿原酸以铅盐的 形式沉淀下来。优点是可得到较纯绿原酸，缺点是工艺复杂，产量低，并使用有毒金属铅，可 能对绿原酸产品造成一定的污染。超声波法利用超声波能击碎细胞壁，使细胞内组分渗透到溶液中，从而叨叨分离 的目的。该方法综合成本低，污染小，无水提法难以过滤的制约因素，无醇提法中因溶剂使 用带来不利之处，而且绿原酸得率高，但目前仅限于实验室规模。
聚酰胺柱层析法依据聚酰胺对氢键的特殊吸附性来达到物质分离。特别适合分离 酚类、醌类、黄铜等化合物，对鞣质的吸附特强，近乎不可逆。该法能使绿原酸和黄铜获得较 好的分离和提取，吸附剂聚酰胺可反复使用，反复层析可以纯化，纯化度高；但操作麻烦，产 量低，洗脱耗费时间长，主要用于分析研究中。超滤法依照超滤膜物理化学性能，采用超滤可除去水提或醇提液中多糖、蛋白质 等大分子，而绿原酸等小分子则可透过膜的一种提取方法。优点是能有效保留有效成分，无 污染，绿原酸得率较高；但该法对提取液预处理要求高，产量易受超滤条件的影响，而且膜 清洗麻烦。酶法采用纤维素酶和果胶酶分别或联合处理药材(金银花)，然后在醇提。金银花 用纤维素酶处理后，结构致密细胞壁中纤维素水解成水溶性糖类物质，而细胞壁水解有利 于胞内物质(绿原酸)溶出。该方法绿原酸得率比乙醇回流法提高约25. 97%，反应条件温 和；但采用酶法处理，大大增加生产成本，其经济可行性优待于进一步研究。超临界法以超临界CO2为溶剂从药材中提取绿原酸。该方法操作范围广，可有针 对性提取有效成分，同时萃取同蒸馏合为一体，不需要溶剂，无污染，产品纯度高。但设备昂 贵，产业化生产有一定困难。大孔树脂吸附法大孔树脂吸附特别适合水溶性化合物纯化分离。该法具有吸附容 量大，选择性好，易于解吸，机械强度高，再生处理简单，吸附速度快，操作简单，得率恒定， 产品质量稳定，生产成本低等特点，且吸附法仅用少量溶媒洗脱树脂就能达到浓缩目的，但 耗用时间长，吸附树脂清洗困难。目前，对于鸡树条荚莲叶中绿原酸化学成分的研究国内外鲜见报道。
发明内容
1.本发明涉及以鸡树条荚莲叶为原料制备绿原酸，其特征在于制备绿原酸包括以 下过程步骤(一)将鸡树条荚莲叶干燥粗粉加入8-10倍量的乙醇浸泡过夜，滤液减压 回收至无醇味，反复提取4-6次，然后用纱布过滤，得到滤液；步骤(二)将步骤(一)中的滤液合并，浓缩，浓缩液置于6°C冰箱中沉淀48h， 抽滤，除去沉淀的部分色素；步骤(三)将步骤(二)中的浓缩液依次用石油醚、乙酸乙酯萃取三次、由此得 到乙酸乙酯层组分；步骤(四)将步骤(三)中乙酸乙酯层组分溶于无水乙醇中，拌以硅胶(200 300目)，挥干溶剂，通过硅胶(200 300目)柱层析，洗脱溶剂选择石油醚乙酸乙酯 (10 1 1 7)梯度洗脱；步骤(五)将步骤(四)中的所得馏分用薄层色谱TLC检测，合并相同组分，减 压浓缩至小体积，再反复硅胶柱层析；步骤(六)将步骤(五)中的相似流分合并，减压浓缩，得浓缩液，析出晶体；步骤(七)将步骤(六)中的晶体用甲醇重结晶得到绿原酸单体。2.根据本发明所述的制备绿原酸的原料为鸡树条荚莲Viburnum sargentii Koehne 的叶。
根据本发明，本发明中的“ ％ ”是重量百分比。
具体实施例方式本发明所述的涉及以鸡树条荚莲叶为原料制备绿原酸包括以下实施例，下面的实 施例可进一步说明本发明，但不以任何方式限制本发明。实施例1 步骤(一)将鸡树条荚莲叶干燥粗粉IOOOg加入10倍量的乙醇浸泡过夜，滤液 减压回收至无醇味，反复提取4次，然后用纱布过滤，得到滤液；步骤(二)将步骤(一)中的滤液合并，浓缩，浓缩液置于6°C冰箱中沉淀48h， 抽滤，除去沉淀的部分色素；步骤(三)将步骤(二)中的浓缩液依次用石油醚、乙酸乙酯萃取三次、由此得 到乙酸乙酯层组分；步骤(四)将步骤(三)中乙酸乙酯层组分溶于无水乙醇中，拌以硅胶(200 300目)，挥干溶剂，通过硅胶(200 300目)柱层析，洗脱溶剂选择石油醚乙酸乙酯 (10 1 1 7)梯度洗脱；步骤(五)将步骤(四)中的所得馏分用薄层色谱TLC检测，合并相同组分，减 压浓缩至小体积，再反复硅胶柱层析；步骤(六)将步骤(五)中的相似流分合并，减压浓缩，得浓缩液，析出晶体；步骤(七)将步骤(六)中的晶体用甲醇重结晶得到绿原酸单体10. 2g。实施例2 步骤(一)将鸡树条荚莲叶干燥粗粉IOOOg加入8倍量的乙醇浸泡过夜，滤液减 压回收至无醇味，反复提取6次，然后用纱布过滤，得到滤液；步骤(二)将步骤(一)中的滤液合并，浓缩，浓缩液置于6°C冰箱中沉淀48h， 抽滤，除去沉淀的部分色素；步骤(三)将步骤(二)中的浓缩液依次用石油醚、乙酸乙酯萃取三次、由此得 到乙酸乙酯层组分；步骤(四)将步骤(三)中乙酸乙酯层组分溶于无水乙醇中，拌以硅胶(200 300目)，挥干溶剂，通过硅胶(200 300目)柱层析，洗脱溶剂选择石油醚乙酸乙酯 (10 1 1 7)梯度洗脱；步骤(五)将步骤(四)中的所得馏分用薄层色谱TLC检测，合并相同组分，减 压浓缩至小体积，再反复硅胶柱层析；步骤(六)将步骤(五)中的相似流分合并，减压浓缩，得浓缩液，析出晶体；步骤(七)将步骤(六)中的晶体用甲醇重结晶得到绿原酸单体10. 6g。绿原酸结构鉴定白色粉末，mp 207 209°C。25°C水中微溶，热水中溶解度增大。易溶于乙醇及丙 酮，极微溶于醋酸乙酯。ESI-MS :m/z 355 [M+H]+、377 [M+Na]+，分子式C16H1809。1H-WlUeOOMHz, DMS0_d6) δ 7. 43 (1H, d, J = 16. 2Hz, H- β ), 7. 06 (1H, H_2 ' )，6· 96 (1H, d, J = 7. 8Hz, H-6 ')， 6. 74 (1H, d, J = 7. 8Hz, H_5' ) ,6. 21 (1H, d, J = 16. 2Hz, H-α )，5. 16 (1H, H_3)，3. 46 (1H,d, J = 7. 8Hz, H-5) ,3. 89 (1H, H_4)，1. 79 (4H，m, H_2，6)。13C-NMR (150MHz, CD30D) δ 175. 1 (C-7)，166. 7 (C_8)，147. 7 (C_4 ' )，145. 1 (C_3 ' )，144. 9 (C- β )，125. 9 (C_l ')， 121. 0(C-6 ' ), 114. 6(C-2 ' )，113.4(C_5 ' )，113. 3 (C-α )，74. 2 (C_l)，71. 6 (C_4)， 70. 1 (C-3)，69. 4 (C-5)，36. 9 (C_2)，36. 3 (C_6)。经对照[51]，与绿原酸的理化数据和标准图
谱基本一致。 经硅胶薄层层析后，斑点在254nm紫外灯下有荧光，遇碘蒸气显黄色，10%硫酸乙醇溶液喷雾后105°C烤板显黑色，其Rf值与绿原酸标准品的Rf值一致。
权利要求
本发明涉及以鸡树条荚蒾叶为原料制备绿原酸，其特征在于制备绿原酸包括以下过程步骤(一)将鸡树条荚蒾叶干燥粗粉加入8-10倍量的乙醇浸泡过夜，滤液减压回收至无醇味，反复提取4-6次，然后用纱布过滤，得到滤液；步骤(二)将步骤(一)中的滤液合并，浓缩，浓缩液置于6℃冰箱中沉淀48h，抽滤，除去沉淀的部分色素；步骤(三)将步骤(二)中的浓缩液依次用石油醚、乙酸乙酯萃取三次，由此得到乙酸乙酯层组分；步骤(四)将步骤(三)中乙酸乙酯层组分溶于无水乙醇中，拌以硅胶(200～300目)，挥干溶剂，通过硅胶(200～300目)柱层析，洗脱溶剂选择石油醚∶乙酸乙酯(10∶1～1∶7)梯度洗脱；步骤(五)将步骤(四)中的所得馏分用薄层色谱TLC检测，合并相同组分，减压浓缩至小体积，再反复硅胶柱层析；步骤(六)将步骤(五)中的相似流分合并，减压浓缩，得浓缩液，析出晶体；步骤(七)将步骤(六)中的晶体用甲醇重结晶得到绿原酸单体。
2.根据本发明所述的制备绿原酸的原料为鸡树条荚莲Viburnumsargentii Koehne的叶。
全文摘要
本发明所属医药产品研究开发技术领域。本发明涉及鸡树条荚蒾叶中绿原酸的制备工艺。将鸡树条荚蒾叶干燥粗粉加入8-10倍量的乙醇浸泡过夜，反复提取4-6次，浓缩液置于6℃冰箱中沉淀48h，抽滤，除去沉淀的部分色素，浓缩液依次用石油醚、乙酸乙酯各萃取三次，得到乙酸乙酯层组分，将乙酸乙酯层组分溶于无水乙醇中，拌以硅胶(200～300目)，通过硅胶柱层析，采用石油醚与乙酸乙酯梯度洗脱，所得馏分用薄层色谱TLC检测，合并相同组分，所得各组分再反复硅胶柱层析，再经纯化后得到单体化合物绿原酸。本发明产品主要作用是降压、抗肿瘤、抗氧化、抗衰老、抗肌肉骨骼老化、抗菌、抗病毒等。
文档编号A61P9/12GK101823964SQ20101014335
公开日2010年9月8日 申请日期2010年3月12日 优先权日2010年3月12日
发明者孙丽, 张崇禧, 张腾, 李攀登, 杨淑超, 陈晓芳 申请人:山东大学威海分校