专利名称：狗枣猕猴桃叶总黄酮在制备预防与治疗血管性痴呆药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明属于天然药物化学研究领域，更确切地说涉及利用从狗枣猕猴桃叶中提取 分离的总黄酮制备预防与治疗血管性痴呆药物组合物。
背景技术：
随着人口老龄化，老年期痴呆的患病率逐年上升。血管性痴呆(Vascular Dementia VD)和阿尔茨海默病是痴呆最常见的两大病因。血管性痴呆是在多次反复发作的 脑血管病变基础上形成的以智能障碍为主的临床症候群。据流行病学调查，在欧美VD占老 年期痴呆的15% 20%，而在我国高达60%。临床常见的血管性痴呆类型有(1)多发性 梗死性痴呆；(2)单发性梗死性痴呆；(3)小血管疾病引起的痴呆；(4)缺血和缺氧性低灌 注引起的痴呆。其中多发性梗死性痴呆是血管性痴呆的主要类型，病理表现为大脑双侧多 发性梗死。实验研究表明血管性痴呆大鼠脑组织乙酰胆碱酯酶活性明显升高 ’海马CAi区 胆碱乙酰转移酶免疫反应阳性，神经元和纤维数量明显减少；而乙酰胆碱酯酶活性升高及 海马CAi区胆碱乙酰转移酶免疫反应阳性，神经元和纤维数量减少与大鼠的学习记忆障碍 程度呈正相关。大鼠脑缺血再灌后脑组织乙酰胆碱含量降低，给予拟胆碱能药物可改善学 习记忆功能。许多研究证明记忆突触即为胆碱能突触，胆碱能神经通路参与构成记忆痕 迹。海马-边缘系统的传导通路与空间识别、工作记忆有关，基底核-大脑皮质的传导通路 与学习过程的调制、参照记忆有关，这些部位的损伤可导致皮质、海马及基底核细胞萎缩， 胆碱能传导通路受损，从而引起胆碱能缺陷和学习记忆功能障碍。因此，血管性痴呆的记忆 功能障碍与中枢胆碱能系统有着密切的联系。近年来，神经元间突触的改变在血管性痴呆发病中的作用愈来愈受到重视，研究 表明突触损伤是血管性痴呆等神经功能障碍退化性疾病早期的、共同的病理改变，与认知 损害有着密切联系。突触是神经元之间结构和功能的接触点，突触的可塑性是学习记忆的 神经生物学基础，突触形态结构的可塑性和传递效能的可塑性的物质基础都涉及神经元和 突触部位的某些蛋白质、受体、神经递质、离子及信使分子的物理化学变化。狗枣猕猴桃[Actinidiakollomikta(Rupr. et Maxim.)Planch.]是猕猴桃科 (Actinidiaceae)猕猴桃属(Actinidia)落叶藤本植物，野生资源丰富。狗枣猕猴桃叶和果 实均可入药，果实成熟时采摘，鲜用，具有滋养强壮之功效，叶鲜用或晒干备用(长白山植 物药志，吉林人民出版社，1982，983页)。近几年来，本发明者对狗枣猕猴桃叶的化学成分及其生物活性进行了大量的研 究。至今为止，已从狗枣猕猴桃叶中分得了 18个黄酮类化合物(图1，化合物1-18)，其 中7个为新化合物，分别是山柰甲黄素-3-0-芸香糖苷，山柰甲黄素-7-0-(4〃 -0-乙酰 基-鼠李糖基)-3_0-i3-D-吡喃葡萄糖苷，山柰甲黄素-7-0-(4〃 -0-乙酰基-鼠李糖 基)-3-0_芸香糖苷(简称A-F-B)，山柰甲黄素-7-0-(4〃 _0_乙酰基)-鼠李糖苷，4'-甲氧基-槲皮素-7-0-(4〃 -0-乙酰基-鼠李糖基)-3-0-i3_D-吡喃葡萄糖苷，山柰甲黄 素-7-0-(3〃 -0-乙酰基-鼠李糖基)-3-0_芸香糖苷、山柰酚-7-0-(4〃 -0-乙酰基-鼠 李糖基)-3-0-芸香糖苷(高等学校化学学报，2007年，第28卷第11期，2060-2064页；高 等学校化学学报，2009年，第30卷第3期，468-473页)。本发明者还利用HPLC法对狗枣 猕猴桃叶中含量最高的黄酮类成分A-F-B的含量进行了测定(药物分析杂志，2007年.第 27卷第1期，120-122页)同时还测定了不同生长期狗枣猕猴桃叶中A-F-B的含量变化情 况(中国中药杂志，2007年，第32卷第18期，1989-1990页)，同时以A-F-B为指标性成分 建立了狗枣猕猴桃叶总黄酮的制备工艺及质量标准(陆娟.狗枣猕猴桃叶化学成分研究， 吉林大学博士学位论文，2009)。本发明者还对狗枣猕猴桃叶总黄酮的生物活性进行了研究。研究结果表明，狗枣 猕猴桃叶总黄酮对高脂血症大鼠的血脂代谢紊乱具有改善作用(陆娟.狗枣猕猴桃叶化学 成分研究[D]，吉林大学博士学位论文，2009)，对大鼠实验性缺血性心肌细胞具有保护作用 (金永日.狗枣猕猴桃叶黄酮类成分与生物活性研究，吉林大学博士学位论文，2007.)，同 时对发生缺血改变的神经细胞具有保护作用，其机制可能与抑制神经细胞凋亡有关(中国 卒中杂志，2006年，第1卷第12期，842-845)。
发明内容
本发明目的是要提供一种对血管性痴呆具有预防与治疗作用的药物组合物。本发明者在前期研究(中国专利ZL03145194. 2)的基础上通过进一步的深入研 究，发现了狗枣猕猴桃叶总黄酮对血管性痴呆具有明显的预防与治疗作用，进而完成了本 发明。本发明的狗枣猕猴桃叶总黄酮是指从狗枣猕猴桃叶中提取分离的黄酮类化合物 的混合物，属于天然药物有效部位。本发明所用狗枣猕猴桃叶总黄酮是利用在中国专利 ZL03145194. 2的基础上经过筛选得到的最佳制备工艺提取纯化得到。首先使用的狗枣猕猴桃叶是6月份采集的叶子。狗枣猕猴桃叶中山柰甲黄 素-7-0-(4〃 -0-乙酰基-鼠李糖基)-3-0_芸香糖苷(简称A-F-B)不仅是含量最高的成 分，而且也是最主要的活性成分。我们发现6月份中旬采集的狗枣猕猴桃叶中A-F-B含量 较高，故使用6月份采集的叶子，而且最好是6月中旬采集的叶子，也最是说最好是6月10 日至20之间采集的叶子。另外对中国专利ZL03145194. 2提到的制备工艺也进行了改进，在 对提取溶剂乙醇的浓度、使用量、回流次数、回流时间、大孔吸附树脂的种类、吸附条件、解 析条件、硅胶柱层析流动相组成、硅胶用量等参数进行筛选的基础上确定了最佳制备工艺 条件。在此基础上对狗枣猕猴桃叶进行提取分离纯化，得到了总黄酮含量大于80%，A-F-B 含量大于40%的狗枣猕猴桃叶总黄酮。取狗枣猕猴桃叶粉末3份，每份12kg，分别用6倍量90%乙醇回流提取4次，时间 分别为2h、l. 5h、lh、0. 5h，滤过，合并滤液，减压浓缩，加水稀释，得到生药量为200mg · mL—1 的药液，将药液过AB-8大孔吸附树脂吸附，上样液PH值为6，药液流速为6BV -^10吸附完 毕后先用水冲洗至流出液接近无色，然后用90%乙醇洗脱，洗脱液减压浓缩，干燥，即得狗 枣猕猴桃叶总黄酮粗提物。狗枣猕猴桃叶总黄酮粗提物中拌入2倍量硅胶，以乙酸乙酯-乙 醇-水=10 1 0.3为流动相，湿法上柱，干法上样，进行硅胶(10倍样品量)柱层析分离纯化，收集A-F-B前后含黄酮类化合物部分，减压回收溶剂，干燥得到三批样品，批号分 别为 20090511，20090615，20090718。三批狗枣猕猴桃叶总黄酮中A-F-B及总黄酮的含量的测定结果如下。三批狗枣猕猴桃叶总黄酮中A-F-B及总黄酮的含量
"￥￥狗枣猕猴桃叶总A-F-B含量(％)总黄酮含量
黄酮重量(g)--HPLC法 (％)--紫外分光
光度法
2009051132640.989.12009061531842.388.32009071830842.488.6由上表可知，无论是用HPLC法测定的单体化合物A-F-B的含量，还是用紫外分光 光度法测定的总黄酮含量都比原方法(中国专利ZL03145194. 2)得到的狗枣猕猴桃叶总黄 酮有了很大提高，尤其是A-F-B的含量。将三批样品混合均勻后用做活性实验用样品(批 号20090806)，混合后A-F-B的含量为41. 2%，总黄酮含量为88. 2%。
图1是从狗枣猕猴桃叶中分离得到的18个黄酮类化合物的化学结构。
具体实施例方式实验实施例1狗枣猕猴桃叶总黄酮抗血管性痴呆作用实验1狗枣猕猴桃叶总黄酮对大鼠脑原代神经细胞的保护作用1-1药物狗枣猕猴桃叶总黄酮(批号20090806)1-2动物Wistar大鼠，体重220 240g，由吉林大学基础医学院实验动物中心提 供，合格证号SYXK-(吉)2003-0001。将大鼠雌雄合笼饲养。1-3材料剪刀，镊子两套，75 %酒精，碘棉球，平皿，离心管(玻璃或塑料)，吸管 (帽)，200目筛，烧杯，96孔培养板，马血清，DMEM培养基，F12，青霉素G，链霉素，0. 01%多 聚赖氨酸，阿糖胞苷(终浓度为3 5 μ mol/L或4 μ g/ml)，胰蛋白酶0. 125 % 0. 25 %， D-Hanks 液。1-4试验方法预先在96孔培养板中加入0. 01 %多聚赖氨酸，孵育过夜后吸弃，用 D-Hanks液清洗几遍备用。取出生24小时内的同窝Wistar大鼠大脑，进行神经细胞原代培 养。步骤如下(1)新生大鼠75%酒精消毒，剪去头皮颅骨暴露出全脑，将全脑取出，放入装有冰 冷D-Hank’ s液的培养皿内，清洗3次。(2)切取大脑皮层，用眼科镊剔除脑膜和血管，将大脑皮层剪碎，切成 0. 5mm X0. 5mm X0. 5mm 的小块。(3)加入约五倍体积的0. 125%胰蛋白酶，37°C水浴，消化15 20分钟，每隔4分
5钟轻轻振荡一次，使组织充分接触胰酶。(4)小心吸弃胰蛋白酶，加入含有10%马血清的DMEM/F12中止消化。(或者加入 10%马血清的DMEM/F12中止消化后离心，去上清。再加入含有10%马血清的DMEM/F12混 悬细胞)(5)用吹打管反复吹打，直到组织块基本消散为止，成为细胞悬液。(6)过筛网(200目)，收集滤液至尖底离心管中，lOOOr/min离心5min，弃上清。(7)将细胞团块加入含有体积分数10%马血清的DMEM/F12培养基，用细口吸管反 复轻轻吹打成细胞悬液，台盼蓝染色镜下计数活细胞数，调整细胞浓度至2 X 106/ml。(8)接种入预先用0.01%多聚赖氨酸包被过的培养瓶或培养板(皿)内，置37°C、 5% C02、饱和湿度条件培养箱中培养，第2天待细胞贴壁后换液，去除死细胞，以后每2 3 天换液1次。细胞培养至3 4天后，加入阿糖胞苷(终浓度为3 5ym0l./L)培养24h， 以抑制非神经细胞过度增殖。继续培养至7 8天后开始实验。1-4-1过氧化氢(H2O2)损伤模型取培养7 8d的神经细胞，分为①正常对照 组，不加H2O2，其余同模型组；②H2O2模型组，吸去原培养液，加入终浓度为100 μ mol/L H2O2IOO μ L的DMEM培养基在37°C、5% CO2孵箱37°C条件，作用4h后进行实验；③药物处理 组，在H2O2处理前2h分别加入各浓度梯度的药物；④培养液对照组。MTT法检测细胞活力 每孔内加入MTT液10 μ 1 (5mg/mL)，继续培养4h，吸去上清液后，每孔加入DMSO 100 μ L，室 温振荡lOmin。待孔内颗粒完全溶解后，于570nm处测定吸光度值，各组吸光度值-培养液对 照组吸光度值后由公式计算存活率。细胞存活率(％ )=各组OD值/对照组OD值X 100 %。1-4-2氯化钾(KCl)损伤模型取培养7 8d的神经细胞，分为①正常对照组，不 加KCl，其余同模型组；②KCl模型组，吸去原培养液，加入终浓度为30mmol/L KCL 100 μ L 的DMEM培养基在37°C、5% CO2孵箱37°C条件，作用4h后进行实验；③药物处理组，在KCL 处理前2h分别加入各浓度梯度的药物；④培养液对照组。MTT法检测细胞活力每孔内加 入MTT液10 μ L(5mg/mL)，继续培养4h，吸去上清液后，每孔加入DMSO 100 μ L，室温振荡 IOmin0待孔内颗粒完全溶解后，于570nm处测定吸光度值，各组吸光度值-培养液对照组 吸光度值后由公式计算存活率。细胞存活率(％)=各组OD值/对照组OD值X 100%。1-5试验结果大鼠脑原代神经细胞培养的实验结果表明，狗枣猕猴桃叶总黄酮对过氧化氢 (H2O2)及氯化钾(KCl)所致大鼠脑神经细胞的损伤均具有保护作用，见表1。表1.狗枣猕猴桃叶总黄酮对H2O2及KCl所致大鼠脑神经细胞损伤的保护作用细胞存活率(％)
组别
药物浓度
(Hg/ml)
H2O2损伤模型
KCL损伤模型
实验2狗枣猕猴桃叶总黄酮对颈内动脉注射微小栓子致血管性痴呆的治疗作用 2-1药物狗枣猕猴桃叶总黄酮(批号20090806)
2-2动物雄性Wistar大鼠120只，体重360 440g，由吉林大学基础医学院实
验动 物中心提供，合格证号SYXK-(吉)2003-0001。2-3试验方法参考文献(血管性痴呆现代中医临床与研究，人民卫生出版社，2003年10月，第 一版，214页；试验性血管性痴呆大鼠动物模型研究进展，山西医药杂志，2000年，第29卷 第5期，402-403页；多发性脑梗塞痴呆动物模型的制作，青海医药杂志，2000年，第30卷 第7期，53-54页)制作栓塞液，Wistar大鼠无菌自然干燥的血凝块研碎分级过筛，选直径 100 200目的微粒溶于生理盐水中，制成2mg/ml的悬浊液即栓塞液，制作大鼠老年性痴 呆模型。用20%的乌拉糖腹腔注射麻醉大鼠，颈中切开皮肤，暴露左侧颈总动脉及颈内、颈 外动脉，用动脉夹暂时夹闭颈总动脉，从颈外动脉处逆行穿刺插管注入0. 3mL栓塞液(正常 对照组给同容积的生理盐水)，结扎颈外动脉，放开颈总动脉夹，使栓子通过颈内动脉进入 颅内至大脑各动脉，造成多灶性脑梗塞。术后3天分组给药。第①组为正常组，第②组为模 型组，均灌胃给蒸馏水0. 5mL/100g，第③组灌胃狗枣猕猴桃叶总黄酮25mg/kg，第④组灌胃 狗枣猕猴桃叶总黄酮50mg/kg，第⑤组灌胃狗枣猕猴桃叶总黄酮100mg/kg。连续给药20天 后进行水迷宫试验，试验期间继续给药。采用Morris水迷宫实验观测动物学习记忆行为学 功能。Morris水迷宫为不锈钢的圆形水池，直径200cm，高50cm，水深30cm，水温25士 1°C， 池壁标明4个入水点，由此将水池分为4个象限，任选其中1个象限，正中放置1个直径为 11cm，高29cm的平台。迷宫上方装有摄像机及录像机以及显示器连接，自动录入大鼠游泳 轨迹进行分析。水迷宫试验连续7天，前6天，在1、2、3、4象限四个不同的入水点，测定大 鼠到达平台的时间及游程，第7天撤掉平台，测定大鼠在2min内穿越平台的次数，在平台区
的逗留时间及在平台象限内的逗留时间。试验结束后快速取脑固定，进行病理检查。2-4试验结果与正常对照组比，模型组大鼠第2天至第6天到达平台的潜伏期及 到达平台的游程均明显延长(P < 0. 05或P < 0. 01)，第7天大鼠在2min内的穿越平台 的次数，在平台象限的逗留时间及平台区象限内的游程占总游程的百分比均明显降低(P < 0. 05或P < 0. 01)；与模型组比较，狗枣猕猴桃叶总黄酮3个剂量组第2天至第6天达 到平台的潜伏期及游程均不同程度地缩短(P < 0. 05或P < 0. 01)，第7天大鼠在2min内 的穿越平台的次数及在平台区的逗留时间均明显增加(P <0.05)见表2、3、4。表2.狗枣猕猴桃叶总黄酮对颈内动脉注射微小栓子致血管性痴呆大鼠到达平台 潜伏期(s)的影响(η = 10，χ士s) 与模型组比较:*Ρ< 0. 05，**Ρ < 0.01表3.狗枣猕猴桃叶总黄酮对颈内动脉注射微小栓子致血管性痴呆大鼠到达平台 游程(cm)的影响(η = 10，χ士s) 与模型组比较:*P< 0. 05，**P < 0.01表4.狗枣猕猴桃叶总黄酮对颈内动脉注射微小栓子致血管性痴呆大鼠第7天水 迷宫的影响(η = 10，χ士s) 与模型组比较:*Ρ< 0. 05，**Ρ < 0.01病理显示①正常组可见脑膜为正常结构，无明显扩张。大脑皮层神经细胞数多， 细胞胞体大，核大，染色淡，核膜、核仁清楚。海马神经细胞数多，排列整齐，层次清楚，胞体 大、核大，核仁清楚。皮层、海马无软化灶及胶质小结；②模型组可见部分脑膜血管扩张、充 血，大脑皮质及基底节多发、散在灶状坏死，坏死神经细胞核固缩，染色深，核仁不清，局部 区域有较多的胶质细胞增生，胶质小结形成。海马神经细胞数明显减少，噬神经细胞现象明 显增加，局部区域神经细胞节段性坏死，坏死细胞深染，细胞核消失；③狗枣猕猴桃叶总黄酮中、大剂量组均可见脑膜血管不同程度的扩张，大脑皮质及基底节可见少许散在坏死灶， 但比模型组轻，狗枣猕猴桃叶总黄酮小剂量组与模型组无明显差异，病理结果表明狗枣猕 猴桃叶总黄酮对颈内动脉注射微小栓子所致大鼠痴呆的病理改变有减轻作用。实验3 狗枣猕猴桃叶总黄酮对大脑中动脉梗塞(MCAO)拟血管性痴呆的治疗作 用3-1药物狗枣猕猴桃叶总黄酮(批号20090806)3-2动物雄性Wistar大鼠120只，体重280 320g，由吉林大学基础医学院实 验动物中心提供，合格证号SYXK-(吉)2003-0001。3-3试验方法按文献(中国病理生理杂志，2003年，第19卷第8期，1144-1147 页)方法制作大鼠MCAO拟血管性痴呆模型，此方法是在线栓法所致脑缺血再灌注损伤的基 础上改良的。用10%水合氯醛(300mg/kg)腹腔注射麻醉禁食，仰位固定，颈部备毛，用强 力碘消毒后，手术剪剪开皮肤，用蚊氏钳小心钝性分离粘膜及肌层，找到并分离右侧颈总动 脉、颈内动脉及颈外动脉，穿线(0号丝线)备用。结扎颈总动脉及颈外动脉，在颈总动脉分 叉处2mm处剪一小切口，将一端加热成球形的尼龙丝线插入，在入口处用丝线将颈内动脉 及尼龙丝线轻轻结扎固定，然后继续插入尼龙丝线，至划线处(20mm)处时可感觉到有一落 空感，此时再将尼龙丝线稍稍撤回至刻度(18mm)处，即完成大脑中动脉栓塞(MCAO)。然后 及时结扎入口处颈内动脉的丝线以固定插入的尼龙线。在手术视野内洒青霉素少许，缝合 皮肤，将尼龙线留在体外约1cm。2小时后，轻轻提拉留在体外的尼龙丝线至有阻力，此时实 现大脑中动脉再灌注。假手术大鼠仅结扎颈总、颈内及颈外动脉。造模成功后，可见动物出 现对侧前肢倦曲或行走转圈或行走向对侧倒的体征。术后每日给予青霉素抗感染，80万单 位/kg。大鼠正常饮食饮水。术后第10日开始给药。第①组为正常组，第②组为模型组，均 灌胃给蒸馏水0. 5mL/100g，第③组灌胃狗枣猕猴桃叶总黄酮25mg/kg，第④组灌胃狗枣猕 猴桃叶总黄酮50mg/kg，第⑤组灌胃狗枣猕猴桃叶总黄酮100mg/kg。术后第30天，进行水 迷宫练习及测试，期间一直给药。学习记忆行为学与神经功能观测具体方法各组动物在从MCAO造模后第30天， 采用Morris水迷宫实验观测动物学习记忆行为学功能。Morris水迷宫为不锈钢的圆形水 池，直径200cm，高50cm，水深30cm，水温25士 1 °C，池壁标明4个入水点，由此将水池分为4 个象限，任选其中1个象限，正中放置1个直径为11cm，高29cm的平台。迷宫上方装有摄 像机及录像机以及显示器连接，自动录入大鼠游泳轨迹进行分析。水迷宫试验连续7天，前 6天进行定位航行试验将大鼠面向池壁放入水中，上下午各一次，记录其在2min内寻找平 台的时间及游泳路径。若其在2min内未找到平台，则潜伏期为120s，并由实验者用手牵引 其至平台上，让大鼠停留10s，再放回笼内。第7天进行空间探索试验将大鼠从前6天训 练的入水点放入水中，记录其在2min内的游泳轨迹及时间，若其在2min内未找到平台，则 潜伏期为120。并分析大鼠在原平台象限游泳的时间(tP)和路径(dP)与总游泳时间(tT) 和总游泳路径(dT)之比。分析大鼠的空间学习、记忆能力的变化。 水迷宫后，断头取脑，于4 %甲醛溶液中固定，送病理检测。
3-4试验结果与假手术组比较，模型组大鼠第2天至第6天到达平台的潜伏期明 显延长(P < 0. 05或P < 0. 01)，第3天至第6天到达平台的游程明显延长(P < 0. 05)，第 7天大鼠空间探索的tP/tT及dP/dT均明显降低(P <0.05或P <0.01)；与模型组比较，狗枣猕猴桃叶总黄酮中、大剂量组第3天至第6天达到平台的潜伏期明显缩短(P < 0. 05 或P < 0. 01)，第4天至第6天到达平台的游程明显缩短(P < 0. 05)，第7天大鼠空间探索 的 tP/tT 及 dP/dT 均明显增加(P < 0. 05 或 P < 0. 01)，见表 5、6、7。表5.狗枣猕猴桃叶总黄酮对MCAO拟血管性痴呆大鼠到达平台潜伏期(s)的影响 (η = 10，χ 士 s) 与模型组比较:*Ρ< 0. 05，**Ρ < 0.01表6.狗枣猕猴桃叶总黄酮对MCAO拟血管性痴呆大鼠到达平台游程(cm)的影响 (η = 10，χ 士 s) 与模型组比较*P < 0. 05表7.狗枣猕猴桃叶总黄酮对MCAO拟血管性痴呆大鼠tP/tT及dP/dT的影响(η =10，χ 士 s) 与模型组比较:*Ρ< 0. 05，**Ρ < 0.01病理显示①假手术组可见脑膜血管正常，无扩张、充血现象。皮质神经细胞数多， 排列均勻，神经细胞胞体大、核大，染色均勻，核膜、核仁清楚，偶见嗜神经现象。海马神经 细胞数多，胞体大、核大，核仁清楚；②模型组可见皮质神经细胞数减少，多数神经细胞呈固 缩、深染的三角形，核膜、核仁不清，多见神经细胞空泡变性，嗜神经现象较多，可见软化灶 及胶质小结形成。海马神经细胞明显减少，层次不清，排列不整，噬神经细胞现象较多，多见 深染、固缩的三角形细胞；③狗枣猕猴桃叶总黄酮中、大剂量组均可见皮质神经细胞数无明 显减少，核固缩、深染的三角形神经细胞及嗜神经细胞现象较模型组减少，未见软化灶及胶 质小结。海马神经细胞数无明显减少，变性、坏死细胞比模型组少，可见嗜神经细胞现象。病叶总黄酮可不同程度地减轻大脑中动脉梗塞(MCAO)拟血管性痴 呆大鼠的病理性变化，对血管性痴呆有治疗作用。 上述狗枣猕猴桃叶总黄酮对大鼠脑原代神经细胞的保护作用以及狗枣猕猴桃叶 总黄酮对颈内动脉注射微小栓子致血管性痴呆的治疗作用和狗枣猕猴桃叶总黄酮对大脑 中动脉梗塞(MCAO)拟血管性痴呆的治疗作用的实验研究结果表明狗枣猕猴桃叶总黄酮对 血管性痴呆具有显著的预防与治疗作用。
权利要求
狗枣猕猴桃叶总黄酮在制备预防与治疗血管性痴呆药物中的应用。
2.权利要求1所述的狗枣猕猴桃叶总黄酮，其特征在于所述的狗枣猕猴桃叶总黄酮中 山柰甲黄素-7-0-(4〃 -0-乙酰基-鼠李糖基)-3-0-芸香糖苷的含量大于40%。
3.权利要求1所述的狗枣猕猴桃叶总黄酮，其特征在于所述的狗枣猕猴桃叶总黄酮 通过如下制备工艺获得取狗枣猕猴桃叶粉末，用6倍量90%乙醇回流提取4次，时间分 别为2h、1.5h、lh、0. 5h，滤过，合并滤液，减压浓缩，加水稀释，将药液过AB-8大孔吸附树脂 吸附，90 %乙醇洗脱，洗脱液减压浓缩，干燥，得到的狗枣猕猴桃叶总黄酮粗提物以乙酸乙 酯-乙醇-水=10 1 0.3为流动相进行硅胶柱层析分离纯化，收集含黄酮类化合物部 分，减压回收溶剂，干燥即得。
4.权利要求1所述的狗枣猕猴桃叶总黄酮，其特征在于用于制备狗枣猕猴桃叶总黄酮 的狗枣猕猴桃叶是6月份采集的叶子。
全文摘要
本发明公开了狗枣猕猴桃叶总黄酮的一种新的医药用途。利用本发明的制备工艺获得的狗枣猕猴桃叶总黄酮其中山柰甲黄素-7-O-(4″-O-乙酰基-鼠李糖基)-3-O-芸香糖苷的含量大于40％，对血管性痴呆具有显著的预防与治疗作用。
文档编号A61K36/185GK101897738SQ20101017725
公开日2010年12月1日 申请日期2010年5月20日 优先权日2010年5月20日
发明者于晓风, 李绪文, 桂明玉, 睢大员, 金永日 申请人:长春瑞德医药科技有限公司