专利名称：一种脑康泰片的质量检测方法
技术领域：
本发明属于中药制剂的质量控制领域，特别涉及脑康泰片的质量检测方法。
背景技术：
脑康泰片是由麝香0.6g、川芎60g、红花90g、地龙90g、丹参150g、莪术90g、 桃仁90g、三棱90g。以上八味，红花、地龙粉碎成细粉，备用；其余除麝香外的五味分 别加8倍、6倍量水煎煮二次，每次1.5小时，合并煎液，减压浓缩成相对密度为1.10 1.15(70°C)的清膏，与上述细粉和微晶纤维素92.4g进行沸腾制粒，干燥，整粒(过20 目筛)，备用；另取麝香与15.6g微晶纤维素混合粉碎过80目筛，再与颗粒、硬脂酸镁2g 混合，压制成1000片，包薄膜衣，即得。本品为薄膜衣片，除去包衣后显黄褐色至棕褐 色；气香，味微苦。功能主治活血化瘀。用于中风、中经络属瘀血阻络证，证见 半身不遂，语言涩蹇。脑康泰片系由已有国家标准的药品“脑康泰胶囊”改剂型而得。原脑康泰胶囊 质量标准鉴别(2)中以苯-乙酸乙酯-甲酸(4:1: 0.1)为展开剂，其中苯对人体毒害 较大。原剂型标准中含量测定，是检测处方中丹参药材所含的丹参酮IIA.根据资料显示 丹参有效成分为酯溶性的二萜化合物(丹参酮I、丹参酮II A、丹参酮II B等)和水溶性 的酚酸类化合物(丹参素、丹酚酸B等)。其中对心血管系统起作用的主要是丹参的水 溶性成分，检测丹参酮IIA含量难达到原标准含量限度要求(原限度为0.03mg/粒)，低 于万分之一，可见原剂型选择丹参酮IIA作含量测定指标是不合适的。
发明内容
本发明的目的在于克服上述缺点而提供的一种安全、检测准确性高的脑康泰片 的质量检测方法。本发明的一种脑康泰片的质量检测方法，包括如下步骤(1)鉴别A、取本品10片，除去包衣，研细，置显微镜下观察不定形颗粒状物集成的 不规则形团块，淡黄色或淡棕色，团块中包埋有方形、柱形或不规则形晶体；花粉粒类 圆形，直径约60 μ m，有些有3个萌发孔，外壁有齿状突起。有无色肌纤维或淡棕色， 散离或相互依结，大多弯曲或平直；B、取本品20片，除去包衣，研细，取约5g，加乙醚50ml，超声处理(功率 250W,频率34KHZ)1小时，放冷，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶 解，作为供试品溶液。另取阿魏酸对照品，加乙酸乙酯制成每Iml含Img的溶液，作为 对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶 液各5 10 μ 1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚 (30 60°C)_乙醚-冰醋酸(10 10 0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯 (365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。C、取本品20片，除去包衣，研细，取约3g，加80%的丙酮10ml，振摇15分 钟，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。另取红花对照药材0.5g，同法制得对照药材溶 液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5μ1， 分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-水-甲 醇(7 2 3 0.4)为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照药材色谱 相应的位置上，显相同颜色的斑点。(2)含量测定照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID)测定。Α、色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲 醇-乙腈-甲酸-水(30 10 1 59)为流动相；检测波长为286nm。理论板数按丹 酚酸B峰计算应不低于2000 ；B、对照品溶液的制备取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加75%甲醇制成 每Iml含35 μ g的溶液，即得；C、供试品溶液的制备取本品20片，除去包衣，研细，取约0.2g，精密称 定，置具塞锥形瓶中，精密加入75%甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率250W，频 率34KHZ)1小时，放冷，再称定重量，用75%甲醇补足减失的重量，摇勻，滤过，取续 滤液，即得；D、测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ1，注入液相色谱 仪，测定，即得。本品每片含丹参以丹酚酸B (C36H3tlO16)计，不得少于2.0mg。本发明与现有技术相比，具有明显的有益效果，由以上技术方案可知，鉴别中 以石油醚(30 60°C )_乙醚-冰醋酸(10 10 0.5)为展开剂，对人体无害，保证了 安全。选用含量则相当高且对心血管系统起作用的丹参的水溶性成分_丹酚酸B，正好 与本品的制法和功能主治相符合。因此本品将含测指标成分确定为测丹酚酸B。从而保 证了检测结果的准确性。保证用药的安全性，更好的指导生产，使工艺控制更加严格合 理。
具体实施例方式以下通过试验例来进一步说明本发明的脑康泰片的质量检测方法的有益效果试验例(一)鉴别1、仪器、对照品、对照药材、试剂和试药仪器BYCDE薄层自动铺板器；电子天平(万分之一)BS-210S型。试剂乙酸乙酯、甲酸、丙酮、石油醚(60 90°C)、乙醚、冰醋酸、环己烷均 为分析纯。对照品阿魏酸对照品(批号0773-9910)由中国药品生物制品检定所提供。对照药材红花药材、三棱药材、地龙药材、丹参药材，经鉴定合格作为对照 药材使用，由贵阳新天药业股份有限公司提供。试药脑康泰片由贵阳新天药业股份有限公司提供。
2、鉴别(1)本鉴别为显微鉴别参照脑康泰胶囊及2005版《中国药典》一部附 录II C药材及成方制剂显微鉴别法进行鉴别。取本品20片，除去包衣，研细，置显微镜下观察不定形颗粒状物集成的不规 则形团块，黄色或淡棕色，团块中包埋有方形、柱形或不规则形晶体；花粉粒类圆形， 直径约60 μ m，有些有3个萌发孔，外壁有齿状突起。肌纤维无色或淡棕色，散离或相 互依结，大多弯曲或平直。结论本品显微特征明显，故将其列入正文。3、鉴别(2)本鉴别为川芎薄层鉴别。
3.1提取条件的选择参照脑康泰胶囊质量标准鉴别(2)。脑康泰胶囊质量标准鉴别(2)中样品处理方法为取内容物5g，加水30ml，加 热回流2小时，放冷，滤过，滤液加稀盐酸调节pH值至2，再用乙酸乙酯振摇提取2次， 每次20ml，合并乙酸乙酯液，用无水硫酸钠脱水，蒸干，残渣加乙酸乙酯Iml使溶解， 即得。此操作过于复杂，因此将提取条件改为取本品20片，除去包衣，研细，取约 5g，加乙醚50ml，超声处理(功率250W，频率34KHZ) 1小时，放冷，滤过，滤液置水 浴上蒸干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作为供试品溶液；另取阿魏酸对照品适量，加 乙酸乙酯制成每Iml中含Img的对照品溶液。经过试验，该方法分离效果较好，故列入 正文。3.2吸附剂的选择参照脑康泰胶囊质量标准鉴别(2)，选用硅胶G为吸附剂分离 效果较好，故将其列入正文。3.3展开剂的选择脑康泰胶囊质量标准鉴别(2)中以苯-乙酸乙酯-甲酸 (4:1: 0.1)为展开剂，其中苯对人体毒害较大，所以将其改为以石油醚(30 60°C)_乙醚-冰醋酸(10 10 0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，在紫外灯(365nm) 下检视。结果各斑点之间分离效果好，且阴性对照无干扰，因此将该展开剂列入正文。综上所述，确定了正文川芎TLC检查方法，经3批中试样品试验，该方法稳 定、重现性好，且阴性无干扰。4、鉴别(3)本鉴别为方中红花的薄层鉴别。4.1提取条件的选择取本品20片，除去包衣，研细，取约3g，加80%的丙酮10ml，振摇15分钟， 滤过，取续滤液，作为供试品溶液。另取红花药材0.5g，同法制得对照药材溶液。经过 试验，该方法分离效果较好，故列入正文。4.2吸附剂的选择采用羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H板进行分离，效果较 好，故将其列入正文。4.3展开剂的选择以乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇(7:2:3: 0.4)为展开剂， 展开，取出，晾干。结果各斑点之间分离效果好，且阴性对照无干扰，因此将该展开剂 列入正文。综上所述，确定了正文的红花TLC检查方法，经3批中试样品试验，该方法稳 定、重现性好，且阴性无干扰。除此之外，发明人还对方中三棱、地龙、进行了 TLC鉴别，结果方法不可行， 所以未列入质量标准草案正文。
(二)检查1、一般检查1.1装量差异按(中国药典2005年版一部附录ID)片剂项下规定，重量差异限度 应在标示片重(或平均片量)的士5%以内，超出装量差异限度的不得多于2片，并不得 有1片超出限度1倍。依法检查，结果均符合规定。1.2崩解时限按(中国药典2005年版一部附录XII A)崩解时限检查法规定，各 片应在1小时内全部崩解。依法检查，结果均符合规定。1.3微生物限度检查按《中国药典》2005年版一部“微生物限度标准”规定， 片剂细菌数每1克不得过10000个，霉菌、酵母菌数每1克不得超过100个，大肠埃希菌 每1克不得检出，大肠菌群每1克小于100个，活螨不得检出。本制剂检测结果均符合 规定。2、重金属及砷盐检查2.1重金属检查按《中国药典》2005版一部附录IX E重金属检查法第二法检 查。结果小于百万分之十。2.2砷盐检查按《中国药典》2005版一部附录IX F砷盐检查法第一法检查。 结果小于百万分之二。根据以上的检验结果，说明本品中重金属、砷盐都符合规定，且含量都很低， 因此不列入正文。(三)含量测定照高效液相色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VID)测定。本品原剂型标准中含量测定，是检测处方中丹参药材所含的丹参酮II A.根据资 料显示丹参有效成分为酯溶性的二萜化合物(丹参酮I、丹参酮II A、丹参酮II B等)和 水溶性的酚酸类化合物(丹参素、丹酚酸B等)。其中对心血管系统起作用的主要是丹 参的水溶性成分，这与本品的制法和功能主治相符合。我们在丹参药材丹参酮II A含量 合格的情况下，按脑康泰胶囊工艺进行试制，样品分别检测丹参酮IIA和丹酚酸B，结果 前者含量未达到原标准含量限度要求(原限度为0.03mg/粒)，低于万分之一，后者含量 则相当高。我们认为，原剂型选择丹参酮II A作含量测定指标是不合适的，因此本品将 含测指标成分改为测丹酚酸B (检测结果见表1)表 1
—批号丹参酮IIA含量(mg/片)丹酚酸B含量(mg/片)
200601010.004^^
200601020.003^^^ —
200601030.005^^^
^取工艺重复性试验1#^^^ —3.4
^取工艺重复性试验2#^^3.5
^取工艺重复性试验3 * ^^3.31、仪器、对照品、试剂和试药1.1仪器Agilent 1100型高效液 相色谱仪、VWD检测器、Agilent化学工作站；超声波清洗器CX-250型(频率29-34KHZ，功率350W，北京医疗设备二 厂)；电子天平(万分之一)BS-210S型(塞多利斯公司)；电子天平(十万分之一) AE240 型(Mettler 公司)。1.2对照品丹酚酸B对照品(批号111562-200403)供含量测定用，购于中国 药品生物制品检定所。1.3试剂甲酸为分析纯；甲醇、乙腈为色谱纯；水为重蒸馏水。1.4试药脑康泰片样品由贵阳新天药业股份有限公司提供。
2、对照品溶液的制备对照品溶液①精密称取丹酚酸B对照品14.0mg，置IOOml量瓶中，加75%甲醇 溶解并稀释至刻度，摇勻，即得每Iml含140.0 μ g的溶液。对照品溶液②精密量取对照品溶液①5ml，置20ml量瓶中，加甲醇稀释至刻 度，摇勻，即得每Iml含35.0 μ g的溶液。3、色谱条件试验色谱柱十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Diamonsil (TM)钻石C18 250mm X 4.6mm, 5 μ m)流速1.0ml/分钟检测波长286nm3.1流动相的选择取本品20片，除去包衣，研细，取约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密 加入75%甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率34KHZ) 1小时，放冷，再 称定重量，用75%甲醇补足减失的重量，摇勻，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。以甲醇-乙腈-甲酸-水(30 10 1 59)为流动相，分别精密吸取对照品 溶液(C = 35.0 μ g/ml)和供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，记录色谱图。(图谱见 脑康泰片系统适应性试验图谱)。结果从供试品图谱中可以看出，丹酚酸B峰与其它峰之间有良好的分离，且峰 形好、柱效高，表明该流动相及相关色谱条件可作为本实验的色谱条件。4、供试品溶液的制备选择方法1:取本品20片，除去包衣，研细，取约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶 中，精密加入75%甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率34KHZ) 1小时， 放冷，再称定重量，用75%甲醇补足减失的重量，摇勻，滤过，取续滤液，即得。方法2:取本品20片，除去包衣，研细，取约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶 中，精密加入75%甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率34KHZ) 30分钟， 放冷，再称定重量，用75%甲醇补足减失的重量，摇勻，滤过，取续滤液，即得。方法3:取本品20片，除去包衣，研细，取约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶 中，精密加入75%甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率34KHZ) 90分钟， 放冷，再称定重量，用75%甲醇补足减失的重量，摇勻，滤过，取续滤液，即得。方法4:取本品20片，除去包衣，研细，取约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75%甲醇50ml，称定重量，加热回流提取1小时，放冷，再称定重量，用 75%甲醇补足减失的重量，摇勻，滤过，取续滤液，即得。分别精密吸取丹酚酸B对照品溶液①(C = 35.0 μ g/ml)、丹酚酸B对照品溶液 ②(140.0 μ g/ml)和4个供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，记录色谱图，结果见表 2。表权利要求
1.一种脑康泰片的质量检测方法，包括如下步骤(1)鉴别A、取本品10片，除去包衣，研细，置显微镜下观察不定形颗粒状物集成的不 规则形团块，淡黄色或淡棕色，团块中包埋有方形、柱形或不规则形晶体；花粉粒类圆 形，直径约60 μ m，有些有3个萌发孔，外壁有齿状突起；有无色肌纤维或淡棕色，散 离或相互依结，大多弯曲或平直；B、取本品20片，除去包衣，研细，取约5g，加乙醚50ml，功率250W、频率 34KHZ超声处理1小时，放冷，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解， 作为供试品溶液；另取阿魏酸对照品，加乙酸乙酯制成每Iml含Img的溶液，作为对照 品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5 10 μ 1，分别点于同一以羧甲基纤 维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以30 60°C石油醚乙醚冰醋酸=10 10 0.5 为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照 品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；C、取本品20片，除去包衣，研细，取约3g，加80%的丙酮10ml，振摇15分钟，滤 过，取续滤液，作为供试品溶液；另取红花对照药材0.5g，同法制得对照药材溶液；照 薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μ1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂 的硅胶H薄层板上，以乙酸乙酯甲酸水甲醇=7 2 3 0.4为展开剂，展开， 取出，晾干；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；(2)含量测定Α、色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇乙 腈甲酸水=30 10 1 59为流动相；检测波长为286nm;理论板数按丹酚酸B 峰计算应不低于2000 ；B、对照品溶液的制备取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加75%甲醇制成每Iml 含35 μ g的溶液，即得；C、供试品溶液的制备取本品20片，除去包衣，研细，取约0.2g，精密称定，置 具塞锥形瓶中，精密加入75%甲醇50ml，称定重量，功率250W、频率34KHZ超声处理 1小时，放冷，再称定重量，用75%甲醇补足减失的重量，摇勻，滤过，取续滤液，即 得；D、测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，测 定，即得。
2.如权利要求1所述的脑康泰片的质量检测方法，其中本品每片含丹参以丹酚酸B 计，不得少于2.0mg。
全文摘要
本发明公开了一种脑康泰片的质量检测方法，包括如下步骤(1)鉴别石油醚(30～60℃)-乙醚-冰醋酸(10∶10∶0.5)为展开剂；(2)含量测定以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-甲酸-水(30∶10∶1∶59)为流动相；检测波长为286nm。理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于2000；供试品溶液的制备；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每片含丹参以丹酚酸B计，不得少于2.0mg。本发明是一种安全、检测准确性高的脑康泰片的质量检测方法。
文档编号A61K35/64GK102008683SQ201010550820
公开日2011年4月13日 申请日期2010年11月19日 优先权日2010年11月19日
发明者董大伦 申请人:贵阳新天药业股份有限公司