专利名称：一种白桦树皮取物及其制备方法和医疗用途的制作方法
技术领域：
本发明公开一种白桦树皮取物及提取方法，同时还提供了其在医疗用途，涉及中 医药学技术领域。
背景技术：
目前临床上常将糖尿病分为胰岛素依赖型(IDDM，I型糖尿病)和非胰岛素依赖型 (NIDDM，II型糖尿病)两类，其中II型糖尿病在糖尿病中占90%。WHO预计，由于人口老龄化、 肥胖、不健康的饮食以及缺乏运动的生活方式，到2025年，糖尿病患者的数目将由1995年 的1. 35亿上升为3亿。II型糖尿病的特征是胰岛素敏感组织如骨骼肌、肝、脂肪组织对胰岛素作用的抵 抗。虽然其具体机制尚不清楚，但胰岛素信号在其传导通路中的减弱甚至阻断必定是直接 关系。PTPases在胰岛素信号通路中多个环节起作用，如将自身磷酸活化的顶去磷酸化，从 而降低受体激酶活性；或将IRS-l、IRS_2、Shc等胰岛素受体的底物中蛋白酪氨酸残基至去 磷酸化，从而负调控胰岛素作用受体后通路。特定Pleases和胰岛素通路中的酪氨酸激酶 间的酶活性不平衡可能是引起II型糖尿病胰岛素抵抗的原因。因此，通过寻找选择性作用 于该通路中PTPases的抑制剂抑制其活性，加强和延长胰岛素信号，成为越来越受重视的 治疗II型糖尿病的新途径。PTPlB选择性抑制剂的研究取得了一定的进展，但大多研究局限于肽类和类 肽化合物，例比如根据PTPIB去磷酸化的底物序列设计的抑制剂EEDE (F2PMP ) M、 G1U-F2PMP-F2PMP,虽然这些肽类化合物具有较强高的选择性和较强的抑制活性，但它们的 不易穿透细胞膜和其肽类磷酸结构使很难成为药物候选化合物。最近，在非肽类PTPlB抑 制剂的报道中2-羧甲氧基苯甲酸类化合物对PTPlB有很强的抑制作用，更重要的事，其中 (2S) -2- [4' - (2-苄基-苯并呋喃)-3-联苯-4-氧]-3-苯基-丙酸化合物不仅对PTPlB有 很强的选择抑制性，还对降低ob/ob小鼠血浆中的葡萄糖和胰岛素水平有显著作用。这是 第一例从药理学上直接证明PTPlB抑制剂具有抗糖尿病活性的证据[Malamas，Μ. S. et al. J. Med. Chem. 2000, 43，1293-1310]。这为我们从天然资源里寻找高效、高选择性 的小分子非肽类PTPlB抑制剂提供了机遇。白桦树⑵etoh platyphylla Suk)为桦木科乔木植物，对土壤适应性强，喜酸性 土，沼泽地、干燥阳坡及湿润阴坡都能生长。本发明是首次从白桦树皮中分离得到抑制蛋白酪氨酸磷酸酯酶IB活性组分，经 多次药理实验研究表明，该组分具有显著抑制蛋白酪氨酸磷酸酯酶IB的活性及降血糖作 用，经文献检索，未见该类植物具有此方面的报道。
发明内容
本发明提供一种白桦树皮提取物，为一种新的组合物，具有抑制蛋白酪氨酸磷酸 酯酶IB的活性，可以降低血糖。
本发明还进一步提供白桦树皮提取物的制备方法，适用于工业化生产。本发明的另一个目的是提供了白桦树皮提取物及其从中分离的活性组分的医疗 用途，作为抑制蛋白酪氨酸磷酸酯酶IB (PTPlB)的抑制剂和胰岛素增敏剂，可用于治疗各 种糖尿病、肥胖症及其它由此引发的并发症。本发明提供的白桦树皮提取物是通过以下方法得到的
1)将干燥切碎的白桦树、BetuleiρlatyphyIla Suk)树皮，用5_10倍量有机醇(80%或 以上浓度)，加热回流提取2-4次，每次30min-60min，合并提取液；
2)提取液减压浓缩回收有机醇，至浓缩，合并浓缩液，放凉，加入1倍量水，析出沉淀， 过滤或离心取沉淀，得提取浓缩物；
3)提取浓缩物用1-2倍量水调节混悬液后，分别用1-2倍量二氯甲烷萃取3次，合并萃 取液；
4 )萃取液减压浓缩回收二氯甲烷，至浓缩，合并浓缩液，放凉，干燥； 5)干燥品研磨后经过200-300目硅胶柱层析，先用1-2倍量正己烷为流动相进行洗脱； 之后用3-5倍量二氯甲烷与甲醇按10 1比例的洗脱液洗脱，收集该洗脱液，将洗脱液常温 减压浓缩，干燥，得本发明提取物。上述的有机醇包括甲醇、乙醇。用HPLC法测定发明提取物中羽扇豆醇的含量不低于20%。对所得本发明提取物进行了蛋白酪氨酸磷酸酯酶IB抑制活性试验，表明其具有 明显的抑制活性。测试原理利用分子生物学手段在大肠杆菌系统表达人源蛋白质酪氨酸磷酸酯酶 IB (hPTPlB)催化结构域，经纯化后的hPTPlB重组蛋白能水解底物/7NPP的磷脂键，得到的 产物在410 nm处有很强的光吸收，因此可以通过直接检测410 nm处光吸收的变化以观察 酶的活性变化以及化合物对酶活性的抑制情况。标准的测活体系如下10 mM ,Tris. Cl， PH 7.6,10 mM pNPP，2% DMSO，100 nM hPTPlB。观察指标动态测定波长为410nm处的光吸收，时间为3分钟，其动力学曲线一级 反应的斜率作为酶活性指标。抑制率 试验例1
本发明提取物的抑制PTPlB活性试验
实验方法用于筛选的蛋白酪氨酸磷酸酯酶PTPlB是从大肠杆菌中表达并纯化的GST 融合蛋白。采用紫外底物PNPP，观察不同浓度对重组酶的活性抑制，以初步评价化合物的 药用效果。PTPlB水解底物/7NPP的磷脂得到的产物在410nm处有很强的光吸收。因此可以 直接检测410nm处光吸收的变化以观察酶的活性变化以及化合物对其的抑制情况。阳性对 照正钒酸钠的IC5tl为2. 0 uM。实验结果如下
权利要求
1.一种白桦树皮取物，是通过以下方法得到的1)将干燥切碎的白桦树树皮，用5-10倍量有机醇，加热回流提取2-4次，每次 30min-60min，合并提取液；2)提取液减压浓缩回收有机醇，至浓缩，合并浓缩液，放凉，加入1倍量水，析出沉淀， 过滤或离心取沉淀，得提取浓缩物；3)提取浓缩物用1-2倍量水调节混悬液后，分别用1-2倍量二氯甲烷萃取3次，合并萃 取液；4 )萃取液减压浓缩回收二氯甲烷，至浓缩，合并浓缩液，放凉，干燥； 5)干燥品研磨后经过200-300目硅胶柱层析，先用1-2倍量正己烷为流动相进行洗脱； 之后用3-5倍量二氯甲烷与甲醇按10 1比例的洗脱液洗脱，收集该洗脱液，将洗脱液常温 减压浓缩，干燥，得本发明提取物；上述的有机醇包括甲醇、乙醇等有机物醇。
2.根据权利要求1的方法，其特征在于白桦树树皮回流提取所用得有机醇浓度大于或 等于80%。
3.根据权利要求1所述白桦树皮提取物在治疗各种糖尿病、肥胖症及其并发症药物中应用。
4.根据权利要求1所述的活性组分在制备胰岛素增敏剂中的用途。
全文摘要
本发明公开一种白桦树皮取物及提取方法，同时还提供了其在医疗用途，从白桦树树皮中提取、分离获得的具有抑制蛋白酪氨酸磷酸酯酶1B活性的组份。经多次体外蛋白酪氨酸磷酸酯酶1B抑制实验表明，该组份具有明显的PTP1B抑制活性，可在制备糖尿病、肥胖症及并发症药物应用。
文档编号A61K36/185GK102138946SQ20111008818
公开日2011年8月3日 申请日期2011年4月9日 优先权日2011年4月9日
发明者吴学, 孙亚楠, 崔龙, 李东浩, 苑广信 申请人:北华大学