专利名称：热毒清片在制备抑制a-204细胞增殖药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种中成药的新用途，尤其涉及热毒清片在制备抑制A-204细胞増殖药物中的应用。
背景技术：
横纹肌肉瘤(rhabdomyosarcoma)是起源于横纹肌细胞或向横纹肌细胞分化的间叶细胞的一种恶性肿瘤为儿童软组织肉瘤中最常见的ー种少发生于成人。男性较女性多见。少发生于成人。男性较女性多见。胚胎型横纹肌肉瘤，多发于8岁前儿童(平均年龄为6岁)，腺泡型横纹肌肉瘤见于青春期男性(平均年龄为12岁)，多型性横纹肌瘤最常见于成人，也可见于儿童没有其他相关内容描述。横纹肌肉瘤发生率次于恶性纤维组织细胞男友瘤和抗生素脂肪肉瘤，居软组织肉瘤的第三位。
热毒清片是云南白药集团股份有限公司的独家产品，目前还没有其抑制横纹肌肉瘤(A-204)细胞增殖的文献报道。
发明内容
发明目的本发明的目的在于提供热毒清片在制备抑制A-204细胞增殖药物中的应用。技术方案热毒清片在制备抑制A-204细胞增殖药物中的应用。热毒清片处方为重楼、南板蓝根、蒲公英、冰片、甘草，能清热解毒，消肿散结，用于上呼吸道感染引起的咽喉发炎，规格为每片O. 3g，ロ服，一次3-4片，一日3次，现发现其能抑制A-204细胞増殖。有益效果热毒清片抑制A-204细胞増殖，效果良好。
具体实施例方式热毒清片抑制A-204细胞増殖的实验研究资料I实验材料I. I实验用细胞株横纹肌肉瘤(A-204)，来自本公司实验室细胞库，DMEM+10%FBS常规培养。I. 2实验药物研究药物热毒清片，云南白药集团股份有限公司，批号20110423药液储液称取IOOmg热毒清片,溶于5ml无水こ醇中,O. 2μηι滤器过滤，500μ Idoff管分装，-20°C存储，同时O. 2 μ m滤器过滤无水こ醇以备对照组之用。I. 3实验试剂DMEM(GIBC0 公司 Cat. No. 12100-061 Lot. No. 758137);胎牛血清(浙江天杭生物科技有限公司Lot. No. 100419)；NaHC03 (上海久亿化学试剂有限公司Cat. No. 11810_033Lot.No. 1088387)；Trypsin (AMRESC0 公司批号2010/04)；EDTA (AMRESC0 公司批号:2009/10);Penicillin G Sodium Salt(AMRESCO 公司批号2010242);Str 印 tomycin Su I fat e( AMRE SCO公司批号2010382);无水こ醇(南京化学试剂有限公司批号080310182);MTT(Biosharp批号:0793) ;PBS (实验室自配)；I. 4实验器材莱卡倒置显微镜(德国Leica型号DM1L);可见-紫外光微孔板检测仪(美国MD公司型号SPECTRAMAX 190) ;C02培养箱(FORMA型号3111);超净台(苏净集団安泰公司制造型号SW-CJ-ZFD);纯水仪(美国Spring公司型号S/N 020579);精密移液器(法国吉尔森公司型号P2);电子天平(德国赛多利斯有限公司型号BT323S);全自动高压灭菌锅(日本SANK)公司型号MLS-3020);台式电热鼓风干燥箱(上海精密实验设备公司型号DHG9123A);冰箱(西门子公司型号KG18V21TI);液氮罐(CBS型号2001);低速离心机(上海安亭科学仪器厂型号ΚΑ-1000) ;0. 2μπι滤器(MILLIP0RE型号SLGP033RB) ;10cm培养皿(NEST公司)、96孔培养板(NEST公司)；细胞计数板；离心管、移液管、Tips若干。2实验方法 I) A-204 细胞用 DMEM+10%FBS 于 37 °C、5%C02 进行常规培养(IOcm 培养皿)，当细胞生长至对数期吋，收集细胞，弃去培养液，PBS轻洗3遍，加入3ml O. 25%胰蛋白酶-O. 049ffiDTA，37°C消化2min后，向其中加入5ml完全培养基中和反应，吹打细胞后将其转入离心管中，IOOOrpm离心5min，调整细胞悬液浓度3X 104个/ml。2)将细胞种入96孔培养板中，每孔加入细胞悬液180 μ 1，培养板放入细胞培养箱中(37 °C，5%C02 )常规培养。3)根据细胞生长情況，一般长至50%_70%，加入热毒清片溶液，继续培养24h。4) 24h 后加入 20 μ I MTT 溶液(5mg/ml，即 O. 5%MTT)，继续培养 4h。5) 4h后扣板法倒去上清，用吸水纸轻轻拍干，每孔加入200 μ I ニ甲基亚砜，置摇床上低速振荡lOmin，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪490nm处测量各孔的吸光值。6)同时设置本底(不加细胞，只加培养液)，对照孔(细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、ニ甲基亚砜)，每组设定6个复孔。7)结果以药物对细胞的抑制率表示细胞增值抑制率(％)=(对照孔OD值-给药孔OD值)/对照孔OD值X 100%。实验重复3次。3统计处理采用Microsoft Excel 2003软件中的相关分析和Student t检验，数据以mean + S. D.表不。4实验结果MTT法实验后统计结果显示，与对照组比较，当剂量达到5mg/ml时，对A-204细胞增殖抑制有差异(p〈0. 05)，剂量在10mg/ml时该差异具有显著性(P〈0. 01)，当剂量达到15-20mg/ml时有极显著性差异(Ρ〈0· 001)。表I热毒清片对Α-204细胞増殖抑制影响研究这土SD)
权利要求
1.热毒清片在制备抑制A-204细胞增殖药物 中的应用。
全文摘要
本发明公开了热毒清片在制备抑制A-204细胞增殖药物中的应用，热毒清片处方为重楼、南板蓝根、蒲公英、冰片、甘草，能清热解毒，消肿散结，用于上呼吸道感染引起的咽喉发炎，规格为每片0.3g，口服，一次3-4片，一日3次，现发现其能抑制A-204细胞增殖。
文档编号A61P35/00GK102824515SQ201210347728
公开日2012年12月19日 申请日期2012年9月18日 优先权日2012年9月18日
发明者不公告发明人 申请人:南京正亮医药科技有限公司