专利名称：一种用于防治慢性肾脏病的温阳活血中药复方制剂及用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种中药方剂及其用途，具体地，涉及一种用于防治慢性肾脏病的温阳活血中药复方制剂及其用途。
背景技术：
慢性肾脏病(Chronic kidney disease, CKD)是临床上除急性肾炎和急性尿路感染(肾脏急性炎症性疾病)外多种肾脏疾病的共同临床病理过程，病程迁延，最终会发展为终末期肾脏病(End stage renal disease,ESRD) 0美 国肾脏病数据表明，终末期肾脏疾病的发病人数在不断增加，从1998年至2002年由39.4人/百万上升至98.3人/百万。据此估计，未来10年该数据将以每年4.1%的上升。在我国，成年人群CKD总患病率已达10.8%。因此，如何对CKD进行早期防治、延缓病情进展，是各国肾脏病研究者面临的重要课题。慢性肾功能衰竭是严重肾脏疾病的最终归宿。据报道我国每年约有13万人会发生慢性肾衰。虽然血透、腹透及肾移植术的开展为此提供了新途径，有效延长了病人的生命，但由于存在费用高、肾源不足及各种并发症的问题，尚难完全普及，寻找非透析疗法对此疾病的防治无疑十分关键。与此同时，马兜铃酸肾病是近年 来发现的主要以肾小管间质性病变为主的疾病，其病情进展迅速，预后较差，临床上尚无有效的治疗方法，目前多以糖皮质激素治疗为主，但是用药适应证及具体用药方案还未有定论。由于含马兜铃酸成分的中草药及其成药在某些疾病的治疗方面有其独特的疗效，还不可能将其完全限制使用。探讨此疾病的发病机制及寻找有效的预防和治疗措施是关键需要解决的问题。临床资料显示:目前我国CKD患者中IgA肾病(IgA nephropathy, IgAN)患者约占原发性肾小球疾病的30% -40%。积极寻找延缓或阻断肾小球硬化发生发展过程对于CKD患者的治疗是当前肾脏病学者共同关注的话题。另外，虽然目前以葡萄球菌肠毒素B(Staphylococcal Enterotoxin B, SEB)或以SEB为主诱导的模型接近人类IgAN发病过程，反映其部分病理改变特点，但是该模型的不足之处在于肾小球硬化形成时间较长且难以控制。因此，寻找一种近似人类IgAN发病规律且肾小球硬化出现时间较早的实验动物模型也是IgAN研究过程中一需要迫切解决的问题。
发明内容
本发明的目的是提供一种用于防治慢性肾脏病的中药复方制剂，针对目前慢性肾脏病治疗的不足，提供新型慢性肾脏病的治疗方法，该方法能够更好的提高目前慢性肾脏病治疗疗效的研究现状。为了达到上述目的，本发明提供了一种用于防治慢性肾脏病的温阳活血中药复方制剂，该中药复方制剂的原料包含以下成分:肉苁蓉15-30g、仙灵脾15-30g、桃仁10-15g、红花10-15g、牡丹皮10-15g。肉苁蓉:性味甘咸、温性；归肾、大肠经，有补肾助阳，润肠通便作用。仙灵脾:性味辛甘、温性；归肾、肝经，有补肾壮阳，祛风除湿作用。桃仁:性味苦甘；归心、肝、大肠经，有活血化瘀，润肠通便，止咳平喘作用。红花:性味苦、温性；归心、肝经，有活血通经，祛瘀止痛作用。牡丹皮:性味苦辛，微寒；归心、肝、肾经，有清热凉血，活血祛瘀作用。肉苁蓉、仙灵脾为君药，协同作用，桃仁、红花为臣药，协同作用，丹皮为佐药。该中药复方实际也可根据需要添加其他辅料。上述的用于防治慢性肾脏病的温阳活血中药复方制剂，其中，所述的中药复方制剂的原料由以下成分组成:肉苁蓉30g、仙灵脾15g、桃仁15g、红花15g、牡丹皮15g。上述的用于防治慢性肾脏病的温阳活血中药复方制剂，其中，所述的中药复方制剂的用法为用水煎服。所述的用水煎服具体过程包含:水加入后，泡上30分钟左右再煎。一般先用武火(大火)，煎沸后再用文火(小火)，保持沸的状态，避免药液外溢及过快熬干。煎药时不宜频频打开锅盖，尽量防止气味走失，减少挥发成分的外溢。一般武火5-10分钟，文火煎20分种左右可以把药液倒出来，然后加水 (和第一次相当或少点)再如上法煎一次，把此煎煮的药液混合后分2-3次/日服用。本发明还提供了一种上述的用于防治慢性肾脏病的温阳活血中药复方制剂的用途，其中，所述的用途包含用于马兜铃酸肾病发病机制的研究，以及用于对相应的马兜铃酸肾病的防治。上述的用于防治慢性肾脏病的温阳活血中药复方制剂的用途，其中，所述的用途还包含用于对IgAN肾小球硬化大鼠模型进行干预和研究。本发明提供的用于防治慢性肾脏病的温阳活血中药复方制剂具有以下优点: (I)CKD防治是目前肾脏病研究领域的难题，本发明在现代医学规范治疗基础上，积极
探索中医药在此领域的应用。根据中医“久病多虚”、“久病多瘀”理论，通过温阳活血防治CKD，研究证实本发明具有显著临床疗效；并在此基础上展开实验研究，进一步阐明其作用机制。因此，具备研究可行性及合理性。(2)本发明提供的温阳活血方是经过长期临床治疗的经验方，相较于国内其他单位所用中药方剂，具有药味少(由肉苁蓉、仙灵脾、桃仁、红花、牡丹皮五味药组成)、用药合理(温凉并用、攻补兼施，使“补而不滞邪，泻而不伤正”)、成本低、效果好等特点，因此易于推广使用。目前我们已在临床对其进行推广应用，而国内外同类研究的治疗用药，多局限于临床或者实验研究阶段。(3)在马兜铃酸肾病发病机制研究方面，国内外同类研究多集中于马兜铃酸对肾小管上皮细胞的影响等方面，而马兜铃酸对肾血管尤其是肾间质微血管的影响却鲜有研究报道。因此，我们用关木通成功复制了大鼠慢性马兜铃酸肾病模型，通过施用本发明在该模型上研究慢性马兜铃酸肾病大鼠肾缺血损伤机制，对可能参与该过程的细胞因子Ang-1、Ang-2、Tie-2、VEGF、BMP-7、Caspase-3和CD34进行了探讨，初步揭示了肾缺血损伤机制在慢性马兜铃酸肾病进展中的作用。(4)本发明还通过复合感染联合5/6肾切除方法构建出的IgAN肾小球硬化动物模型验证了温阳活血方可延缓IgAN肾小球硬化模型的进展。
图1为实施例二的实验流程示意图。图2为实施例二的各组4周肾组织电镜(X 5000)示意图。图3为实施例二的各组8周肾组织电镜(X 5000)示意图。图4为实施例二的各组12周肾组织电镜(X 5000)示意图。图5为实施例二的HIF-1 α表达的蛋白免疫印迹(Western blot)检测结果示意图。图6为实施例二的TGF-β I表达的Western blot检测结果示意图。图7为实施例二的MMP-9表达的Western blot检测结果示意图。图8为实施例二的 ΜΡ-1表达的Western blot检测结果示意图。图9为实施例三的体内实验流程示意图。图10-1和图10-2为实施例三的体外实验流程示意图。图11为实施例三的体内实验各组大鼠肾小球电镜结果示意图(X4200)，A正常组、B模型组、C温阳活血方组、D科素亚组、E温阳活血方+科素亚组。图12为实施例三的体内实验各组大鼠肾小管电镜结果示意图(X 11500)，A正常组、B模型组、C温阳活血方 组、D科素亚组、E温阳活血方+科素亚组。图13为实施例三的体内实验各组大鼠肾间质电镜结果示意图(X 11500)，A正常组、B模型组、C温阳活血方组、D科素亚组、E温阳活血方+科素亚组。图14为实施例三的体内实验各组大鼠肾组织BMP-7表达情况免疫组化染色示意图(X 250)，A正常组、B模型组、C温阳活血方组、D科素亚组、E温阳活血方+科素亚组。图15为实施例三的体内实验各组大鼠肾组织Caspase-3表达情况免疫组化染色示意图(X 250)，A正常组、B模型组、C温阳活血方组、D科素亚组、E温阳活血方+科素亚组。图16为实施例三的体内实验各组大鼠肾组织⑶34表达情况免疫组化染色示意图(X 250)，A正常组、B模型组、C温阳活血方组、D科素亚组、E温阳活血方+科素亚组。图17为实施例三的体外实验倒置显微镜下观察NRK-52E细胞正常形态示意图。图18为实施例三的体外实验各组透射电镜观察示意图。图19为实施例三的体外实验各组免疫细胞化学法检测α-平滑肌肌动蛋白(α -SM)的表达结果示意图。图20为实施例四的实验流程示意图。图21为实施例四的各组大鼠免疫荧光的表达结果示意图(Χ400)，N假手术组、M模型组、W温阳活血方组、L科素亚组、W+L中西医结合组。图22为实施例四的各组大鼠糖原染色(PAS)光镜观察示意图(Χ400)，N假手术组、M模型组、W温阳活血方组、L科素亚组、W+L中西医结合组。图23为实施例四的各组大鼠透射电镜观察示意图(X 5000)，N假手术组、M模型组、W温阳活血方组、L科素亚组、W+L中西医结合组。图24为实施例四的各组大鼠TGF-β I免疫组化结果示意图(X 200)，N假手术组、M模型组、W温阳活血方组、L科素亚组、W+L中西医结合组。
图25为实施例四的各组大鼠FN免疫组化结果示意图(X 200)，N假手术组、M模型组、W温阳活血方组、L科素亚组、W+L中西医结合组。图26为实施例四的各组大鼠a -SMA免疫组化结果示意图(X 200)，N假手术组、M模型组、W温阳活血方组、L科素亚组、W+L中西医结合组。图27为实施例四的各组大鼠I3DGF免疫组化结果示意图(X 200 )，N假手术组、M模型组、W温阳活血方组、L科素亚组、W+L中西医结合组。图28为实施例四的各组大鼠FGF-1免疫组化结果示意图(X200)，N假手术组、M模型组、W温阳活血方组、L科素亚组、W+L中西医结合组。
具体实施例方式以下结合附图对本发明的具体实施方式
作进一步地说明。实施例一:用于防治慢性肾脏病的温阳活血中药复方制剂(温阳活血方)改善CKD的临床研究。通过采用温阳活血方治疗CKD2-3期阳虚血瘀型患者，观察其对肾功能:包括血清肌酐(血清Scr)、血清胱抑素C (Cys-C)、尿素氮(BUN)、24小时蛋白定量、内生肌酐清除率(Ccr)、肾小球滤过滤(eGFR)等，血常规:包括血红蛋白(Hb)、红细胞(RBC)、白细胞(WBC)、血小板(PLT)等，肝功能:包括谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)等，心电图(EKG)等实验指标的影响，旨在进一步了解温阳活血方在治疗CKD2-3期阳虚血瘀型患者的临床疗效和安全性，探求慢性肾脏病的优化治疗方案。选取213例CKD2-3期阳虚血瘀型患者，采用随机对照方法将其分为温阳活血方组(108例)和西医一体化治疗 组(105例)，其中西医一体化治疗组给予西医基础治疗，温阳活血方组在西医基础治疗的基础上加用温阳活血方，疗程为12周，连续观察一个疗程后检测两组治疗前后肾功能(血清Scr、BUN、Cys-C)、24h尿蛋白定量，Ccr、eGFR,血常规(Hb、RBC、WBC、PLT)、肝功能(ALT、AST)、心电图、中医症候积分及临床症状积分的变化情况。观察过程中定期随访，如实填写临床病例观察表及症状积分表。根据以上数据进行统计分析及有效性评价。本实施例所选213例病例均为2010年I月至2012年7月就诊于上海市普陀区中心医院、上海市利群医院、上海市第六人民医院肾内科门诊及住院患者。一.诊断标准。西医诊断标准:2005年，国际肾脏病学会提高肾脏病整体预后工作组(KDIGO)明确提出了慢性肾脏病(CKD)的定义:(1)肾脏损伤(肾脏结构或功能异常)>3个月，伴或不伴有肾小球滤过率(GFR)下降，肾脏病理学检查异常或肾脏损伤(血、尿成分或影像学检查异常)；(2)eGFR <60ml*min-l* (1.73m2)-1彡3个月，有或无肾脏损伤证据。慢性肾脏病的临床分期见表I。表I 慢性肾脏病的分期标准。
权利要求
1.种用于防治慢性肾脏病的温阳活血中药复方制剂，其特征在于，该中药复方制剂的原料包含以下成分: 肉苁蓉15-30g、仙灵脾15-30g、桃仁10-15g、红花10_15g以及牡丹皮10_15g。
2.权利要求1所述的用于防治慢性肾脏病的温阳活血中药复方制剂，其特征在于，所述的中药复方制剂的原料由以下成分组成: 肉苁蓉30g、仙灵脾15g、桃仁15g、红花15g以及牡丹皮15g。
3.权利要求1所述的用于防治慢性肾脏病的温阳活血中药复方制剂，其特征在于，所述的中药复方制剂的用法为用水煎服。
4.种如权利要求f 3中任意一项所述的用于防治慢性肾脏病的温阳活血中药复方制剂的用途，其特征在于，所述的用途包含用于马兜铃酸肾病发病机制的研究。
5.权利要求4所述的用于防治慢性肾脏病的温阳活血中药复方制剂的用途，其特征在于，所述的用途 还包含用于对IgAN肾小球硬化大鼠模型进行干预。
全文摘要
本发明公开了一种用于防治慢性肾脏病的温阳活血中药复方制剂及用途，该中药复方制剂的原料由以下成分组成肉苁蓉15-30g、仙灵脾15-30g、桃仁10-15g、红花10-15g以及牡丹皮10-15g。该中药复方制剂的用法为用水煎服。本发明还提供该用于防治慢性肾脏病的中药复方制剂的用途，即用于马兜铃酸肾病发病机制研究的用途，和用于对IgAN肾小球硬化大鼠模型进行干预的用途。本发明提供的用于防治慢性肾脏病的温阳活血中药复方制剂，针对目前慢性肾脏病治疗的不足，提供了一种新型慢性肾脏病的治疗和研究方法，能够更好的提高目前慢性肾脏病治疗疗效的研究现状。
文档编号A61K36/736GK103083434SQ20131005674
公开日2013年5月8日 申请日期2013年2月22日 优先权日2013年2月22日
发明者彭文, 何立群, 王云满, 王浩, 王利, 付文成, 池杨峰 申请人:上海市普陀区中心医院, 上海中医药大学附属普陀医院