单性血吸虫的用途
【专利摘要】本发明公开了一种单性血吸虫的用途，用于制备预防血吸虫病的疫苗。本发明还公开了单性血吸虫用于制备阻断血吸虫病传播的疫苗的用途。本发明的单性血吸虫在免疫动物后，不仅能显著降低宿主的血吸虫病病理损伤，而且还能显著降低虫卵的孵化能力，从而有效阻断血吸虫病的传播途径，适于成为抗血吸虫病的新疫苗，具有很好的应用价值。
【专利说明】单性血吸虫的用途
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物工程【技术领域】，尤其涉及一种单性血吸虫的用途。
【背景技术】
[0002] 血吸虫病是一种人和动物都会感染的寄生虫病，流行范围广，对人和家畜均产生 严重的危害。虽然我国在血吸虫病的防治上已经取得了巨大成就，但是由于中间宿主钉螺 难以消灭及血吸虫重复感染现象严重，全面控制血吸虫病传播的前景仍不容乐观。吡喹酮 作为治疗血吸虫病的药物，以其高效、低毒、使用方便、价格低廉等优点在血吸虫病临床治 疗和防治工作中得到广泛应用，但是吡喹酮不能预防血吸虫的重复感染，而且，近年来在曼 氏血吸虫上已经有了吡喹酮抗性虫株的报道，耐药虫株的出现引起了人们的不安与高度关 注。因此，迫切需要研制抗血吸虫高效疫苗。
【发明内容】
[0003] 本发明要解决目前缺乏抗血吸虫高效疫苗的技术问题，提供一种单性血吸虫的用 途，用于制备预防血吸虫病的疫苗。
[0004] 此外，还需要提供一种单性血吸虫的用途，用于制备阻断血吸虫病传播的疫苗。
[0005] 为了解决上述技术问题，本发明通过如下技术方案实现：
[0006] 在本发明的一个方面，提供了一种单性血吸虫的用途，用于制备预防血吸虫病的 疫苗。
[0007] 在本发明的另一方面，还提供了一种单性血吸虫的用途，用于制备阻断血吸虫病 传播的疫苗。
[0008] 所述单性血吸虫为雌性或雄性血吸虫。优选的，所述单性血吸虫为雌性或雄性血 吸虫尾蚴。
[0009] 在本发明的另一方面，还提供了一种抗血吸虫疫苗，包含雌性或雄性血吸虫。优选 的，所述抗血吸虫疫苗包含雌性或雄性血吸虫尾蚴。
[0010] 在本发明的另一方面，还提供了一种上述抗血吸虫疫苗的制备方法，包括以下步 骤：
[0011] 将自然感染钉螺溢出尾蚴，通过PCR鉴定及感染小鼠确定其溢出尾蚴为单性。
[0012] 小鼠免疫性保护实验证明，用本发明的单性血吸虫免疫小鼠，能使免疫组小鼠的 肝脏虫卵孵化率降低达到85. 6%以上，且显著减轻小鼠的肝脏病变，说明用本发明的单性 血吸虫免疫动物不仅能显著减轻宿主病理变化，且能有效阻断血吸虫的传播，本发明的单 性血吸虫具有发展为抗血吸虫病候选疫苗的潜力，具有很好的应用价值。
【专利附图】
【附图说明】
[0013] 下面结合附图和【具体实施方式】对本发明作进一步详细的说明。
[0014] 图1是本发明实施例1的PCR鉴定结果图；
[0015] 图2是本发明实施例2的小鼠肝脏病变图。
【具体实施方式】
[0016] 下列实施例中，未注明具体条件的实验方法，通常按常规条件，如《精编分子生物 学实验指南》(F.M.奥斯伯，R.E.金斯顿，J.G.塞德曼等主编，马学军，舒跃龙的译.北京： 科学出版社，2004)中所述的方法进行。
[0017] 本发明通过对BalB/C小鼠进行血吸虫单性免疫，然后进行血吸虫正常感染，发现 接受血吸虫单性免疫的小鼠肝脏未发生任何病变，且虫卵孵化能力显著降低。
[0018] 本发明中，单性感染的血吸虫在宿主体内不能发育成熟，停留在童虫阶段，因此不 会对宿主造成病理损伤。本发明的单性血吸虫类似于致弱疫苗，能够在动物中诱导出高保 护力，对于血吸虫单性带虫免疫具有十分重要的意义。
[0019] 实施例1血吸虫尾蚴的性别检测
[0020] 将自然感染钉螺溢出尾蚴进行PCR鉴定、再感染小鼠确定其溢出尾蚴为单性。具 体步骤如下：
[0021] 每只自然感染钉螺单独置于一个盛满去氯水的试管中，其他条件与常规溢尾蚴法 一致(保持光照，温度控制在25°C?30°C，加钢丝网罩)。
[0022] 用接种环挑取尾蚴，将尾蚴放到含有IOul去离子水的I. 5mlEP管中。每个EP管中 加入l-2ul的20mg/ml蛋白酶K，在恒温水浴锅中进行孵育，温度为55°C，时间为15min。消 化完毕后从EP管中取出5ul，作为虫体模版，用上游引物：5-ACGT TAGA TACT GCTG TTCA-3 (SEQIDN0·1)，下游引物：5-ATATTGTTCCAAGTACGCAT-3(SEQIDN0·2)进行PCR扩 增。扩增程序：94°C预变性5分钟；94°C变性1分钟，52 °C退火30秒，72 °C延伸1分钟，35 个循环；72°C后延伸5min。PCR产物在1. 0%琼脂糖凝胶中电泳，紫外透射仪下观察结果，结 果如图1所示，日本血吸虫雌虫样品会扩增出约150bp的特异性条带，且扩增的条带清晰， 而雄虫没有该扩增条带。图1中，M:Marker ;1:日本血吸虫雄虫；2 :日本血吸虫雌虫。再进 一步将PCR鉴定过的钉螺逸出尾蚴去感染小鼠，在尾蚴感染25天后剖杀小鼠，确定感染尾 蚴性别，以此来确定钉螺逸出尾蚴性别。
[0023] 实施例2动物免疫保护实验
[0024] 1.方法
[0025] I. 1小鼠进行血吸虫单性免疫
[0026] 试验共设单雌感染组（A组)、单雄感染组（B组)、空白对照组（C组)。
[0027] A组：3只小鼠，每只感染40条雌性尾蚴；
[0028] B组：6只小鼠，每只感染40条雄性尾蚴；
[0029] C组：6只小鼠，不进行感染。
[0030] 1. 2小鼠的攻击感染和减虫率的计算
[0031] 单性感染6周后，每只小鼠在腹部用盖玻片法感染尾蚴40±2条。攻击尾蚴42天 后，解剖小鼠，肝门静脉冲洗法收集成虫计数，按下面公式计算减虫率。
[0032]
【权利要求】
1. 一种单性血吸虫的用途，其特征在于，用于制备预防血吸虫病的疫苗。
2. -种单性血吸虫的用途，其特征在于，用于制备阻断血吸虫病传播的疫苗。
3. 根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述单性血吸虫为雌性或雄性血吸 虫。
4. 根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述单性血吸虫为雌性或雄性血吸虫尾 蚴。
5. -种抗血吸虫疫苗，其特征在于，包含雌性或雄性血吸虫。
6. 根据权利要求5所述的抗血吸虫疫苗，其特征在于，包含雌性或雄性血吸虫尾蚴。
7. 权利要求5所述抗血吸虫疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： 将自然感染钉螺溢出尾蚴，通过PCR鉴定及感染小鼠确定其溢出尾蚴为单性。
【文档编号】A61K39/002GK104436179SQ201310472736
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2013年9月16日 优先权日:2013年9月16日
【发明者】金亚美, 乔洪宾, 曹宇凡, 刘金明, 林矫矫 申请人:中国农业科学院上海兽医研究所