一种用作重组猪干扰素α1的冻干保护剂及其制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种用作重组猪干扰素α1的冻干保护剂及其制备方法。所述组合物包括的各成分及其在冻干原液中的初始浓度为：蔗糖90~300g/L、甘露醇300~600g/L和甘油100～400ml/L。本发明还提供了使用本冻干保护剂用于提高rPoIFNα1产品的稳定性用途。
【专利说明】一种用作重组猪干扰素α1的冻干保护剂及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明主要涉及一种用作重组猪干扰素α I的冻干保护剂及其制备方法，尤属于治疗性兽用生物制品生产工艺【技术领域】。
【背景技术】
[0002]冷冻干燥是目前保持微生物、动物组织、细胞及蛋白质等物质生物活性的一个有效的、方法。制品经完全冻结并在一定的真空条件下使冰晶升华，从而达到低温脱水的目的，此过程即称为冷冻干燥，简称冻干，是冷冻和干燥的结合。
[0003]冷冻干燥技术具有与其他干燥方法无可比拟的优点，在低温下干燥，各种成分、酶的活性丧失少，复水性好，保存期长，储存运输方便。但是，在真空冷冻干燥过程中，冷冻和干燥不可避免地会影响蛋白质的生物学活性。为防止在冻干过程中蛋白质的损失，人们在冻干过程中常添加糖、蛋白质、氨基酸等物质来起保护作用，保护剂可以改变生物样品冷冻干燥时的物理、化学环境，减轻或防止冷冻干燥或复水对蛋白质的损失，尽可能保持原有的各种生理生化特性和生物活性，冻干保护剂还影响到保藏期间蛋白质的稳定性。目前干扰素产品的保护剂产品通常用的是白蛋白，而白蛋白价格昂贵导致干扰素产品生产成本提高。本发明通过多次试验探索到一种能既能保护重组猪干扰素α I活性免受冷冻干燥过程多种因素的影响，又能降低成本的保护剂配方，非常适合重组猪干扰素α I冻干规模化生产需要。
【发明内容】
[0004]本发明目的就是提供一种用作重组猪干扰素α I冻干保护剂及其制备方法。
[0005]本发明是通过以下技术方案实现的:
[0006]一种用作重组猪干扰素α I冻干保护剂，包括以下组分及其在配伍时的初始浓度为:蔗糖90~300g/L、甘露醇300~600g/L和甘油100~400ml/L，溶剂为注射用水。
[0007]所述的蔗糖在冻干原液中的初始浓度为90~300g/L。
[0008]所述的甘露醇在冻干原液中的初始浓度为300~600g/L。
[0009]所述的甘油在冻干原液中的初始浓度为100~400mL/L。
[0010]一种用作重组猪干扰素α I的冻干保护剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤:
[0011](1)将上述重量份的各原料混合配制为冻干原液；
[0012](2)高压灭菌，充分混匀，即得所述用作重组猪干扰素α I冻干保护剂。
[0013]本发明的优点是:
[0014]第一:降低了生产成本。本发明冻干保护剂使用的蔗糖、甘露醇以及甘油等原材料价格均非常低廉。
[0015]第二:安全。本发明采用的蔗糖、甘露醇以及甘油等原材料均可通过高压蒸汽灭菌。[0016]第三:保存期长，易于储存。
【具体实施方式】
[0017]实施例1
[0018](I)取 rPoIFNa I 原液若干。
[0019](2)按照蔗糖90~300g/L、甘露醇300~600g/L和甘油100~400ml/L配制为冻干原液。
[0020](3)将配方原液配制好后，高压灭菌，充分混匀。
[0021](4)将高压灭菌后的配方原液和rPoIFN a I原液按照3:1的比例混匀，分装，加好橡胶塞盖子，放入冻干机冻干。
[0022](5)冻干结束后，压盖，关掉冻干机。
[0023](6) rPoIFN a I冻干品质量检验
[0024]随机抽取不同批次rPoIFNa I冻干品分别按照以下方案检测，结果表明采用本冻干保护剂配方冻干后的rPoIFNa I成品质量均合格(如表1所示)。
[0025]无菌检验:按《中国生物制品规程》通则《生物制品无菌试验规程》A项进行；
[0026]安全性实验:用体重18~20g小白鼠5只，每只腹腔注射0.5ml (rPoIFN a I冻干品溶于2ml生理盐水)，观察7天，动物应健存，每只体重增加判为合格；
[0027]外观检测:观察rP·oIFNa I冻干品是否有塌缩、凹陷、缺损等现象，如无则判为合格；
[0028]复溶效果监测:取rPoIFN a I冻干品加生理盐水2ml，lmin后观察是否完全溶解以及有无无肉眼可见颗粒，如无则判为合格；
[0029]含水量检测，是利用费休氏法测定，低于3%判为合格。
[0030](7) rPoIFN a I冻干品37°C保存稳定性试验
[0031]如表2所示:随机抽取各批次干扰素，放置于37°C温箱中，各时间点取样，采用WISH细胞VSV检测系统，以微量细胞病变抑制法测定样品的效价，计算效价降低百分率，低于5%判为合格。通过检测结果表明采用本冻干保护剂配方冻干后的rPoIFNa I成品37°C可稳定保存I个月以上。
[0032](8) rPoIFN a I冻干品4°C保存稳定性试验
[0033]如表3所示:随机抽取各批次干扰素，放置于4°C冰箱中，各时间点取样，采用WISH细胞VSV检测系统，以微量细胞病变抑制法测定样品的效价，计算效价降低百分率，低于5%判为合格。通过检测结果表明采用本冻干保护剂配方冻干后的rPoIFNa I成品4°C可稳定保存24个月以上。
[0034]表1rPoIFNa I冻干品质量检验结果
【权利要求】
1.一种用作重组猪干扰素α I的冻干保护剂，其特征在于包括以下组分及其在配伍时的初始浓度为:蔗糖9(T300g/L、甘露醇30(T600g/L和甘油10(T400ml/L，溶剂为注射用水。
2.根据权利要求1所述的用作重组猪干扰素α1的冻干保护剂，其特征在于所述的蔗糖在冻干原液中的初始浓度为9(T300g/L。
3.据权利要求1所述的用作重组猪干扰素α1的冻干保护剂，其特征在于所述的甘露醇在冻干原液中的初始浓度为30(T600g/L。
4.据权利要求1所述的用作重组猪干扰素α1的冻干保护剂，其特征在于所述的甘油在冻干原液中的初始浓度为10(T400mL/L。
5.一种如权利要求1所述的用作重组猪干扰素α 1的冻干保护剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤: (1)将上述重量份的各原料混合配制为冻干原液； (2)高压灭菌，充分混匀，即得所述用作重组猪干扰素αI冻干保护剂。
【文档编号】A61K38/21GK103585633SQ201310526190
【公开日】2014年2月19日 申请日期:2013年10月29日 优先权日:2013年10月29日
【发明者】王明丽, 赵俊, 王彩玲, 关鑫 申请人:王明丽, 赵俊