干扰素的雾化吸入剂的制作方法
【专利摘要】本发明属于生物技术药物的制剂领域，涉及干扰素的雾化吸入剂。所述的雾化吸入剂单次给药剂量中含有1?100μg的干扰素与适宜量的雾化吸入剂可药用辅料，所述的干扰素由重量比1:19?19:1的干扰素α与干扰素λ组成。用本发明的干扰素的雾化吸入剂治疗病毒性肺炎，可较单独使用干扰素α的雾化吸入剂或干扰素λ的雾化吸入剂明显提高疗效。
【专利说明】
干扰素的雾化吸入剂
技术领域
[0001] 本发明一般的设及干扰素的呼吸道及肺部给药制剂，特别的设及干扰素的雾化吸 入剂。
【背景技术】
[0002] 病毒性肺炎是一种婴幼儿时期的常见病，严重危害婴幼儿的生命健康。据不完全 统计，超过90%的婴幼儿在2岁W前感染过病毒性肺炎，其中80% W上病例在1岁W内，发病 高峰年龄为2-6个月，1-6个月可见较重病例。婴幼儿因感染病毒性肺炎造成的死亡在发达 国家为0.5%-2.0%，在发展中国家可达7%，在我国更是婴幼儿死亡的首要原因。此外，病 毒性肺炎的传染性和再感染性很强，有报道表明家庭成员间可发生相继感染，已感染婴幼 儿在10年内再感染发生率高达65%。
[0003] 引起病毒性肺炎的病毒主要是腺病毒（adenovirus，ADV)和呼吸道合胞病毒 (respiratoiy syn巧tial vi;rus，RSV)，其次是流感病毒（influenza virus,IFV)和副流感 病毒（parainfluenza virus，PIV)，再次是巨细胞病毒（c}ftomegalovi;rus，CMV)、单纯瘤疹 病毒化e巧es simplex vi;rus，HSV)、肠道病毒（enterovirus,EV)、人类偏肺病毒化MPV)等。 由于运些病毒极易发生变异，加之在病毒感染后容易诱发进一步的细菌感染，从而给患儿 造成混合感染和并发症，因此婴幼儿病毒性肺炎很难实现全面的特异防治，临床上缺乏有 效的药物治疗。
[0004] 化学药物是目前治疗病毒性肺炎的最主要药物，原因是临床使用时间最长，可迅 速清除感染病毒;但化学药物治疗病毒性肺炎的缺点是停药后病情容易反弹，不能调节和 提高患儿机体免疫力对抗病毒，且在长期使用过程中容易产生耐药性。目前临床上治疗病 毒性肺炎的化学药物包括但不限于利己韦林、更昔洛韦、奥司他韦、阿糖腺巧、金刚烧胺等。 例如美国专利5,290,540公开了利己韦林用于治疗病毒性肺炎的方法。
[0005] 中药对病毒性肺炎的治疗在近年的研究使用日益广泛，运源于中药药性的溫和持 久，并兼具免疫调节作用，但中药治疗病毒性肺炎周期长，且中药在很大程度上并不适宜于 婴幼儿使用，另外中药的长期安全性问题也是一个不容忽视的问题。目前有报道临床研究 用于病毒性肺炎治疗的中药包括但不限于大青叶、板蓝根、银花、连翅、射干、黄琴、黄连、麻 黄、苦杏仁等。例如中国专利申请03131642.5公开了一种治疗小儿病毒性肺炎的清肺口服 液制剂，其由麻黄、生石膏、苦杏仁、亭巧子、桑白皮、前胡、僵蚕、丹参、虎杖、拳参等中草药 组成。又如中国专利申请02138175.5公开了一种治疗小儿病毒性肺炎的药物组合物，其由 麻黄、苦杏仁、石膏、甘草、前胡、僵蚕、丹参、虎杖、拳参、亭巧子、桑白皮十一味中药组成。
[0006] 伴随着生物技术药物的迅猛发展，近年来越来越多的研究关注生物技术药物对病 毒性肺炎的治疗，其中使用的生物技术药物包括但不限于干扰素、白细胞介素、人血丙种球 蛋白、胸腺肤、特异性抗病毒抗体等，尤其W干扰素使用的报道最多。例如中国专利申请 03147580.9公开了一种治疗病毒性肺炎的重组人干扰素 α喷雾剂，其由重组人干扰素 α原液 配W适当的保护剂、粘膜吸收促进剂、抑菌剂等制成，pH值在5.0-8.0。
[0007] 干扰素（interferon, IFN)是一种最初由动物机体产生的兼具抗病毒、抗增殖与免 疫调节作用的细胞因子蛋白质类药物，根据其产生部位、作用机理、药效特点等的不同可W 分为Ι、ΙΙ、ΙΙΙΞ种大的类型。其中I型干扰素主要是指干扰素 α与干扰素 β，干扰素 α又有包 括干扰素的曰、干扰素 a2b、干扰素〇化在内的超过20种的天然亚型；II型干扰素主要是指干 扰素丫； III型干扰素主要是指干扰素 λ，包括干扰素 λ1、干扰素 λ2、干扰素 λ3Ξ种天然亚型。
[0008] 生物技术药物，尤其是干扰素用于病毒性肺炎的治疗，作用持久，可调节和提高患 儿机体免疫力对抗病毒，不易产生耐药性，安全性更高。但目前在干扰素治疗病毒性肺炎的 报道中，所用的都是干扰素 α，未见有使用ΠΙ型干扰素，即干扰素 λ的报道。
[0009] 相较于1、11型干扰素，III型干扰素的发现与报道较晚。其中干扰素 λ1最早由津莫 吉尼蒂克斯公司公开于其国际专利申请PCT/US2001/021087(国际公布日2002年1月10日， 进入中国国家阶段后的国家申请号为01813153.0)中，干扰素 λ2与干扰素 λ3随后亦由该公 司公开于其国际专利申请PCT/US2002/012887 (国际公布日2002年10月31日，进入中国国家 阶段后的国家申请号为02801970.9)中。而在该公司再后的国际专利申请PCT/US2004/ 025864(国际公布日2005年3月17日，进入中国国家阶段后的国家申请号为 200480029170.7)中则对干扰素 λ及其多种变体做了系统的梳理，干扰素 λ1、λ2、λ3的氨基酸 序列分别被确定的报道在了其说明书公开的SEQ ID No.4、SEQ ID No.2和SEQ ID No.6中， 干扰素 λ1、λ2、λ3的制备方法则被报道在了其说明书实施例1-9中（此外，干扰素 λ1、λ2、λ3的 制备方法也可参见国际专利申请口口71]52002/012887，即中国专利申请02801970.9的说明 书实施例1-7)。
[0010] 干扰素 λ1在最初公开时的代号为zcyto21，干扰素 λ2在最初公开时的代号为 zcyto20,干扰素 λ3在最初公开时的代号为zcyto22。在随后的研究中由于发现它们的基因、 蛋白质立级结构与白介素10(化-10)非常接近，因此它们被归于白介素10家族，分别被重新 命名为 IL-29、IL-28A 与 IL-28B。
[0011] 尽管zcパo21、zcパo20与干扰素 α的氨基酸序列一致性(也即同源性）只有17%，与 干扰素 β的氨基酸序列一致性只有14%，与干扰素 γ的氨基酸序列一致性只有4% ;zcyto22 与干扰素 α的氨基酸序列一致性只有16%，与干扰素 β的氨基酸序列一致性只有13%，与干 扰素丫的氨基酸序列一致性只有4%，但它们在随后的研究中都发现和确认与传统的干扰 素有相似的信号转导途径，有很多类干扰素性质。因此从功能的角度出发，它们最终分别被 命名为干扰素 λ1、干扰素 λ2与干扰素 λ3。
[0012] 鉴于传统的干扰素 α对病毒性肺炎的疗效也有待进一步提高，因此，有必要尝试 III型干扰素，即干扰素 λ用于病毒性肺炎的治疗，更有必要尝试I型干扰素与III型干扰素 联用，即干扰素 α与干扰素 λ联用，用于病毒性肺炎的治疗。
[0013] 而在治疗病毒性肺炎的药物递送系统方面，雾化吸入剂是一种近年来在临床上发 展起来的新的给药剂型。所谓雾化吸入剂，是指将药液经过雾化变成药雾，经吸入达呼吸系 统祀部位起治疗作用的剂型。雾化吸入剂的给药必须借助一定的雾化吸入装置，包括压缩 雾化器、超声雾化器等。由于雾化吸入剂给药后不经过吸收可直接作用于呼吸系统病变部 位，从而相比其他剂型有明显更高的生物利用度与药效，因此雾化吸入剂已逐渐成为临床 上治疗小儿病毒性肺炎的首选剂型。
【发明内容】
[0014] 本发明的首要目的是提供一种干扰素(包括干扰素 α与干扰素 λ)的雾化吸入剂，W 用于婴幼儿病毒性肺炎的治疗，进一步提高疗效。
[0015] 在基础的实施方案中，本发明的干扰素的雾化吸入剂单次给药剂量(例如0.25ml、 0.5ml、1ml、2ml、3ml、4ml或5ml)中含有1-10化g的干扰素与适宜量的雾化吸入剂可药用辅 料，所述的干扰素由重量比1:19-19:1的干扰素 α与干扰素 λ组成。
[0016] 所述的雾化吸入剂可药用辅料包括但不局限于干扰素活性保护剂、渗透压调节 剂、防腐剂、吸附抑制剂、pH稳定调节剂中的一种或几种。而且应当指出，一种或一类物质可 能同时起到多种可药用辅料功能的作用。例如人血清白蛋白可同时起到渗透压调节剂、活 性保护剂、吸附抑制剂的作用。
[0017] 干扰素活性保护剂起到保护干扰素的雾化吸入剂在制备、运输、胆存与使用中干 扰素 α与干扰素 λ的活性不丧失或较少丧失的作用，除人血清白蛋白外还可W选择氨基酸、 多元醇、环糊精、卵憐脂等物质中的一种或多种的组合。
[0018] 渗透压调节剂起到将干扰素的雾化吸入剂的渗透压调节到与人体血液基本等渗 (240-360m0sm/L)的作用，除人血清白蛋白外还可W选择氯化钢、甘露醇、葡萄糖等物质中 的一种或多种的组合。
[0019] 防腐剂起到在干扰素的雾化吸入剂的制备、运输、胆存与使用过程中抑制微生物 生长，尤其是有害微生物生长，并防止微生物及其代谢产物破坏药物成分，特别是活性成分 干扰素 α与干扰素 λ的作用。运样的防腐剂可选择苯扎氯锭、苯扎漠锭、苯甲醇、苯酪、甲酪 (又包括邻甲酪、间甲酪、对甲酪）、尼泊金醋（即对径基苯甲酸醋，包括对径基苯甲酸甲醋、 乙醋、丙醋、下醋等)等物质中的一种或多种的组合。
[0020] 吸附抑制剂起到抑制或降低装盛干扰素的雾化吸入剂的容器对干扰素 α、干扰素入 及其他辅料的吸附的作用，除人血清白蛋白外还可W选择表面活性剂，在表面活性剂中又 优选非离子表面活性剂，并更优选吐溫类非离子表面活性剂。
[0021] pH稳定调节剂起到将干扰素的雾化吸入剂的抑稳定在生理适宜抑巧.0-8.0)的作 用，并要求生理安全，可选择的范围包括但不局限于憐酸盐缓冲溶液体系、构祿酸盐缓冲溶 液体系、抗坏血酸盐缓冲溶液体系，优选憐酸盐缓冲溶液体系。运样的抑稳定调节剂的总浓 度应在0. l-500mmol/L之间，优选在1-lOOmmol/L之间，并更优选在5-20mmol/L之间。
[0022] 本发明的干扰素的雾化吸入剂在配制过程中应首先按配制所需量溶解各可药用 辅料，然后在与干扰素 α、干扰素 λ的原液混合均匀后用水调节溶液的体积至目标配制体积。 各可药用辅料的溶解可同时进行，也可分别进行，但难溶性可药用辅料的配制应单独进行， 并视情况加热和/或加入一定的助溶剂。溶解过程中应快速混合，注意避免抑、溫度等的急 剧变化，从而引起药物活性成分干扰素 α与干扰素 λ的生物失活和/或化学降解。
[0023] 在一种优选的实施方案中，本发明的干扰素的雾化吸入剂中的干扰素 α是干扰素 α 2a、干扰素 a2b、干扰素 α化中的一种或W任意比例混合的几种。
[0024] 在一种优选的实施方案中，本发明的干扰素的雾化吸入剂中的干扰素 α是干扰素 α Ibo
[0025] 在一种优选的实施方案中，本发明的干扰素的雾化吸入剂中的干扰素 λ是干扰素 λ 1、干扰素 λ2、干扰素 λ3中的一种或w任意比例混合的几种。
[0026] 在一种优选的实施方案中，本发明的干扰素的雾化吸入剂中的干扰素 λ是干扰素 λ 1〇
[0027] 在一种优选的实施方案中，本发明的干扰素的雾化吸入剂中的干扰素 α是干扰素 α lb，干扰素 λ是干扰素 λ1。
[0028] 在一种优选的实施方案中，本发明的雾化吸入剂可药用辅料包含干扰素活性保护 剂，选自人血清白蛋白、氨基酸、多元醇、环糊精、卵憐脂类物质中的一种或几种的组合。
[0029] 在一种优选的实施方案中，本发明的雾化吸入剂可药用辅料包含渗透压调节剂， 选自人血清白蛋白、NaCl、甘露醇、葡萄糖中的一种或几种的组合。
[0030] 在一种优选的实施方案中，本发明的雾化吸入剂可药用辅料包含防腐剂，选自苯 扎氯锭、苯扎漠锭、苯甲醇、苯酪、甲酪、尼泊金醋中的一种或几种的组合。
[0031] 在一种优选的实施方案中，本发明的雾化吸入剂可药用辅料包含吸附抑制剂，选 自人血清白蛋白和表面活性剂中的一种或几种的组合。
[0032] 在一种优选的实施方案中，本发明的雾化吸入剂可药用辅料包含能将雾化吸入剂 的抑稳定在5.0-8.0范围内的缓冲溶液体系，选自憐酸盐缓冲溶液体系、构祿酸盐缓冲溶液 体系、抗坏血酸盐缓冲溶液体系中的一种或几种的组合。
[0033] 在一种优选的实施方案中，本发明的干扰素的雾化吸入剂含有：1)单次给药剂量 (例如0.25ml、0.5ml、1ml、2ml、3ml、4ml或5ml)中 l-100yg的干扰素；2) l-50mg/ml的人血清 白蛋白；3) l-8mg/ml的NaCl;4) 1-lOOmmol/L的憐酸氨二钢-憐酸二氨钢，pH7.0溶液，所述的 干扰素由重量比1:19-19:1的干扰素 α化与干扰素 λ组成。
[0034] 在一种优选的实施方案中，本发明的干扰素的雾化吸入剂含有：1)单次给药剂量 (例如0.25ml、0.5ml、1ml、2ml、3ml、4ml或5ml)中 l-100yg的干扰素；2) l-50mg/ml的人血清 白蛋白；3) l-8mg/ml的NaCl;4) 1-lOOmmol/L的憐酸氨二钢-憐酸二氨钢，pH7.0溶液，所述的 干扰素由重量比1:19-19:1的干扰素 α与干扰素 λ1组成。
[0035] 在一种优选的实施方案中，本发明的干扰素的雾化吸入剂含有：1)单次给药剂量 (例如0.25ml、0.5ml、1ml、2ml、3ml、4ml或5ml)中 l-100yg的干扰素；2) l-50mg/ml的人血清 白蛋白；3) l-8mg/ml的NaCl;4) 1-lOOmmol/L的憐酸氨二钢-憐酸二氨钢，pH7.0溶液，所述的 干扰素由重量比1:19-19:1的干扰素 α化与干扰素 λ1组成。
[0036] 本发明的另一个目的是提供干扰素的雾化吸入剂在制备治疗病毒性肺炎药物中 的应用。利用本发明主药含量的干扰素的雾化吸入剂治疗病毒性肺炎，可取得明显更好的 治疗效果。
[0037] 本发明中使用的术语"干扰素 α"或"α干扰素"包括人体或动物体在外界病原性物 质刺激下由白细胞产生的天然序列的抗病毒活性物质(尤其包括干扰素曰化、干扰素 a2a、干 扰素 a2b)，也包括通过基因工程方法选择适宜的表达载体表达的与上述天然序列完全相同 的重组分子，还包括天然序列的干扰素 α的突变体，尤其包括通过基因工程方法选择适宜的 表达载体表达的集成了上述天然干扰素 α保守序列的人工设计的分子，即复合干扰素分子， 例如在中国专利申请CN02159950.5中于序列表3公开序列并在说明书实施例中公开制备方 法的复合干扰素。
[0038] 本发明中使用的术语"干扰素 λ"或"λ干扰素"包括人体或动物体在外界病原性物 质刺激下产生的天然序列的抗病毒活性物质(包括干扰素 λ1、干扰素 λ2、干扰素 λ3)，也包括 通过基因工程方法选择适宜的表达载体表达的与上述天然序列完全相同的重组分子，还包 括干扰素 λ1、干扰素 λ2、干扰素 λ3的突变体，尤其是国际专利申请PCT/US2004/025864的说 明书中明确提及乃至公开氨基酸序列的干扰素如勺突变体。
[0039] 本发明中使用的术语"治疗有效量"表示当施用药物活性成分用于治疗或预防疾 病时，药物活性成分的量足W实现对疾病的治疗或预防。治疗有效量将依药物活性成分、疾 病和它的严重性和所治疗病人的年龄、体重等而异。
[0040] 本发明中使用的术语"雾化吸入剂可药用辅料"是指在雾化吸入剂处方设计时，为 解决雾化吸入剂的溶解性、有效性、稳定性、安全性等问题，加入到雾化吸入剂处方中的除 药物活性成分W外自身对人体或动物体安全的其他辅助成分。
【具体实施方式】
[0041] 通过如下的实施例对本发明的实施作进一步说明，但本发明的实施方式并不局限 于如下的实施例。
[0042] 实施例1:干扰素雾化吸入剂的制备
[0043] 按如下表1的配方组成配制不同配方的干扰素的雾化吸入剂，其中"ΡΒ"为憐酸氨 二钢-憐酸二氨钢缓冲溶液(ρΗ7.0)。
[0044] 表1干扰素雾化吸入剂的配方组成
[0045]
[0046]
[0047]
[004引实施例2:干扰素雾化吸入剂治疗病毒性肺炎的动物试验
[0049] 1)RSV病毒培养
[0050] 将呼吸道合胞病毒标准株RSV-Long(引自北京儿科研究所)接种于化P-2细胞上， 待细胞病变达80%W上时收获，将病毒液冻存于液氮中，用时于37°C融化，10(K)rpm离屯、10 分钟，取上清液备用。
[0化1] 2)RSV小鼠感染模型的建立
[0052] 取172只6-7周龄的Balb/c小鼠，雌雄各半，均用乙酸麻醉后，分别经鼻腔滴入 10中即/ml RSV病毒液0.1ml，每天滴病毒1次，共滴2次，第3天小鼠出现竖毛、烦躁不安、呼 吸急促、腹肌抽摇阳性反应，表明RSV感染小鼠模型建立成功。
[0化3] 3)分组及给药
[0化4] 将上述172只小鼠随机分为43组，每组4只，雌雄各半。组1至组42分别每日超声雾 化吸入实施例1的配方1至配方42的雾化吸入剂各1ml (加入生理盐水稀释至4ml后雾化吸 入）；组43每日超声雾化吸入生理盐水4ml。所有各组每日均只超声雾化吸入1次，共超声雾 化吸入5次(5天）。
[0055] 4)病毒滴度测定
[0化6] 将组1至组42的168只小鼠在连续给药结束后的第二天脱颈椎处死，组43的4只小 鼠在将组1至组42的小鼠给药开始的当天脱颈椎处死。所有处死后的小鼠均迅速摘取右肺 组织匀浆后W1:10进行稀释，稀释后的匀浆液-20°C保存。预先用96孔培养板培养化P-2单 层细胞。将?〇μ1稀释后的匀浆液再经10倍稀释后加入培养板孔中，每孔加 ?〇μ1，每只动物3 个重复孔，设阴性对照、正常对照。37°C，5%C02条件下，间歇振摇培养板，1小时后，用 RPMI1640液洗涂，覆W1 %甲基纤维素。置37°C，5 %C〇2培养6天。培养孔内用0.2 %福尔马林 固定，0.1%结晶紫染色，计数斑个数。病毒滴度定义为每克新鲜右肺组织斑形成单位(P即/ g)，各组的病毒滴度均表示为各组4只小鼠病毒滴度测定结果的平均值，具体结果如下表2 所示。
[0057] 表2病毒滴度测定结果
[0化引
[0化9]
【主权项】
1. 干扰素的雾化吸入剂，其特征是单次给药剂量中含有I-IOOyg的干扰素与适宜量的 雾化吸入剂可药用辅料，所述的干扰素由重量比1:19-19:1的干扰素 α与干扰素 λ组成。2. 根据权利要求1所述的雾化吸入剂，其特征是所述的干扰素 α是干扰素 a2a、干扰素 α 2b、干扰素 a Ib中的一种或以任意比例混合的几种。3. 根据权利要求1所述的雾化吸入剂，其特征是所述的干扰素 α是干扰素 a Ib。4. 根据权利要求1所述的雾化吸入剂，其特征是所述的干扰素 λ是干扰素 λ?、干扰素 λ2、 干扰素 λ3中的一种或以任意比例混合的几种。5. 根据权利要求1所述的雾化吸入剂，其特征是所述的干扰素 λ是干扰素 λ?。6. 根据权利要求1所述的雾化吸入剂，其特征是所述的雾化吸入剂可药用辅料包含干 扰素活性保护剂，选自人血清白蛋白、氨基酸、多元醇、环糊精、卵磷脂类物质中的一种或几 种的组合。7. 根据权利要求1所述的雾化吸入剂，其特征是所述的雾化吸入剂可药用辅料包含渗 透压调节剂，选自人血清白蛋白、NaCl、甘露醇、葡萄糖中的一种或几种的组合。8. 根据权利要求1所述的雾化吸入剂，其特征是所述的雾化吸入剂可药用辅料包含防 腐剂，选自苯扎氯铵、苯扎溴铵、苯甲醇、苯酚、甲酚、尼泊金酯中的一种或几种的组合。9. 根据权利要求1所述的雾化吸入剂，其特征是所述的雾化吸入剂可药用辅料包含能 将雾化吸入剂的pH稳定在5.0-8.0范围内的缓冲溶液体系，选自磷酸盐缓冲溶液体系、枸橼 酸盐缓冲溶液体系、抗坏血酸盐缓冲溶液体系中的一种或几种的组合。10. 根据权利要求1-9之一所述的雾化吸入剂在制备治疗病毒性肺炎的药物中的应用。
【文档编号】A61P31/22GK105920586SQ201610256450
【公开日】2016年9月7日
【申请日】2016年4月22日
【发明人】周敏毅, 程永庆
【申请人】北京三元基因药业股份有限公司