一种清肺抑火片的应用及制备方法
【专利摘要】本发明提供清肺抑火片在制备抑制A2780人卵巢癌细胞增殖药物中的应用，清肺抑火片的制备方法为：取黄芩245g、栀子140g、黄柏70g、大黄210g、苦参105g、天花粉140g、知母105g、桔梗140g、前胡70g，以上九味，桔梗、大黄粉碎成细粉；桅子、知母加水煎煮两次，合并煎液，滤过，滤液浓缩成膏；前胡、苦参、黄柏、黄芩用60％乙醇加热回流提取6小时，天花粉用25％乙醇加热回流提取6小时，合并醇液，回收乙醇，浓缩成膏，与上述浓缩膏合并，加入桔梗等粉末及辅料，混匀，制成颗粒，干燥，压制成1088片，即得。
【专利说明】一种清肺抑火片的应用及制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及中药制剂【技术领域】，具体涉及一种清肺抑火片的应用及制备方法。
【背景技术】
[0002]清肺抑火片记载于卫生部标准，制备方法为:取黄芩245g、桅子140g、黄柏70g、大黄210g、苦参105g、天花粉140g、知母105g、桔梗140g、前胡70g，以上九味，桔梗、大黄粉碎成细粉；桅子、知母加水煎煮两次，合并煎液，滤过，滤液浓缩成膏；前胡、苦参、黄柏、黄芩用60%乙醇加热回流提取6小时，天花粉用25%乙醇加热回流提取6小时，合并醇液，回收乙醇，浓缩成膏，与上述浓缩膏合并，加入桔梗等粉末及辅料，混匀，制成颗粒，干燥，压制成1088片，即得，现有技术中，尚未有其在制备抑制A2780人卵巢癌细胞增殖药物中的应用报道。
【发明内容】
[0003]发明目的:为了解决上述问题，本发明的目的在于提供一种清肺抑火片的应用及制备方法。
[0004]技术方案:本发明的目的是通过如下的方案实现的:
[0005]清肺抑火片在制备抑制A2780人卵巢癌细胞增殖药物中的应用，清肺抑火片的制备方法为:取黄芩245g、桅子140g、黄柏70g、大黄210g、苦参105g、天花粉140g、知母105g、桔梗140g、前胡70g，以上九味，桔梗、大黄粉碎成细粉；桅子、知母加水煎煮两次，合并煎液，滤过，滤液浓缩成膏；前胡 、苦参、黄柏、黄芩用60%乙醇加热回流提取6小时，天花粉用25%乙醇加热回流提取6小时，合并醇液，回收乙醇，浓缩成膏，与上述浓缩膏合并，加入桔梗等粉末及辅料，混匀，制成颗粒，干燥，压制成1088片，即得。
[0006]上述一种清肺抑火片在制备抑制A2780人卵巢癌细胞增殖药物中的应用，桅子、知母加水煎煮两次，第一次加水为药材重量的8-12倍量，煎煮l_2h，第二次加水为药材重量的6-10倍量，煎煮1-2h。
[0007]有益效果:清肺抑火片能抑制A2780人卵巢癌细胞增殖，可用于制备抑制B16小鼠黑色素瘤细胞增殖药物。
【具体实施方式】
[0008]以下通过实施例形式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例，凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
[0009]实施例1
[0010]取黄芩245g、桅子140g、黄柏70g、大黄210g、苦参105g、天花粉140g、知母105g、桔梗140g、前胡70g，以上九味，桔梗、大黄粉碎成细粉；桅子、知母加水煎煮两次，第一次加水为药材重量的8倍量，煎煮lh，第二次加水为药材重量的6倍量，煎煮lh，合并煎液，滤过，滤液浓缩成膏；前胡、苦参、黄柏、黄芩用60%乙醇加热回流提取6小时，天花粉用25%乙醇加热回流提取6小时，合并醇液，回收乙醇，浓缩成膏，与上述浓缩膏合并，加入桔梗等粉末及辅料，混匀，制成颗粒，干燥，压制成1088片，即得。
[0011]实施例2
[0012]取黄芩245g、桅子140g、黄柏70g、大黄210g、苦参105g、天花粉140g、知母105g、桔梗140g、前胡70g，以上九味，桔梗、大黄粉碎成细粉；桅子、知母加水煎煮两次，第一次加水为药材重量的10倍量，煎煮1.5h，第二次加水为药材重量的8倍量，煎煮1.5h，合并煎液，滤过，滤液浓缩成膏；前胡、苦参、黄柏、黄芩用60%乙醇加热回流提取6小时，天花粉用25%乙醇加热回流提取6小时，合并醇液，回收乙醇，浓缩成膏，与上述浓缩膏合并，加入桔梗等粉末及辅料，混匀，制成颗粒，干燥，压制成1088片，即得。
[0013]实施例3
[0014]取黄芩245g、桅子140g、黄柏70g、大黄210g、苦参105g、天花粉140g、知母105g、桔梗140g、前胡70g，以上九味，桔梗、大黄粉碎成细粉；桅子、知母加水煎煮两次，第一次加水为药材重量的12倍量，煎煮2h，第二次加水为药材重量的10倍量，煎煮2h，合并煎液，滤过，滤液浓缩成膏；前胡、苦参、黄柏、黄芩用60%乙醇加热回流提取6小时，天花粉用25%乙醇加热回流提取6小时，合并醇液，回收乙醇,浓缩成膏，与上述浓缩膏合并,加入桔梗等粉末及辅料，混匀，制成颗粒，干燥，压制成1088片，即得。
[0015]实施例4:清肺抑火片抑制A2780人卵巢癌细胞增殖的实验研究资料
[0016]I实验材料
[0017]1.1实验用细胞株
[0018]A2780人卵巢癌细胞，南京医科大学实验室细胞库，DMEM+10%FBS常规培养。
[0019]1.2实验药物
[0020]研究药物:本发明清肺抑火片:按实施例3方法制备。
[0021]药液储液:称取IOOmg清肺抑火片，溶于5ml无水乙醇中，0.2μπι滤器过滤，500μ Idoff管分装，-20°C存储，同时0.2 μ m滤器过滤无水乙醇以备对照组之用。
[0022]1.3实验试剂
[0023]DMEM (GIBC0 公司 Cat.N0.12100_061Lot.N0.758137);胎牛血清(浙江天杭生物科技有限公司Lot.N0.100419)；NaHC03 (上海久亿化学试剂有限公司Cat.N0.11810_033Lot.N0.1088387)；Trypsin (AMRESC0 公司批号:2010/04)；EDTA (AMRESC0 公司批号:2009/10);Penicillin G Sodium Salt(AMRESC0 公司批号:2010242);Str 印 tomycin Su I fat e( AMRE SCO公司批号:2010382);无水乙醇(南京化学试剂有限公司批号:080310182);MTT(Biosharp批号:0793) ;PBS (实验室自配)；
[0024]1.4实验器材
[0025]莱卡倒置显微镜(德国Leica型号:DM1L);可见-紫外光微孔板检测仪(美国MD公司型号:SPECTRA MAX190) ；C02培养箱(FORMA型号:3111);超净台(苏净集团安泰公司制造型号:SW-CJ-ZFD);纯水仪(美国Spring公司型号:S/N020579);精密移液器(法国吉尔森公司型号:P2);电子天平(德国赛多利斯有限公司型号:BT323S);全自动高压灭菌锅(日本SANYO公司型号:MLS-3020);台式电热鼓风干燥箱(上海精密实验设备公司型号:DHG9123A);冰箱(西门子公司型号:KG18V21TI);液氮罐(CBS型号:2001);低速离心机(上海安亭科学仪器厂型号:ΚΑ-1000) ;0.2μπι滤器(MILLIPORE型号:SLGP033RB) ;10cm培养皿(NEST公司)、96孔培养板(NEST公司)；细胞计数板；离心管、移液管、Tips若干。
[0026]2实验方法
[0027]I) A2780人卵巢癌细胞用DMEM+10%FBS于37°C、5%C02进行常规培养(IOcm培养皿)，当细胞生长至对数期时，收集细胞，弃去培养液，PBS轻洗3遍，加入3ml0.25%胰蛋白酶-0.049ffiDTA，37°C消化2min后，向其中加入5ml完全培养基中和反应，吹打细胞后将其转入离心管中，1000rpm离心5min，调整细胞悬液浓度3X 104个/ml。
[0028]2)将细胞种入96孔培养板中，每孔加入细胞悬液180 μ 1，培养板放入细胞培养箱中(37 °C，5%C02 )常规培养。
[0029]3)根据细胞生长情况，一般长至50%_70%，加入清肺抑火片溶液，继续培养24h。
[0030]4) 24h 后加入 20 μ I MTT 溶液(5mg/ml，即 0.5%MTT)，继续培养 4h。
[0031]5) 4h后扣板法倒去上清，用吸水纸轻轻拍干，每孔加入200 μ I 二甲基亚砜，置摇床上低速振荡lOmin，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪490nm处测量各孔的吸光值。
[0032]6)同时设置本底(不加细胞，只加培养液)，对照孔(细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜)，每组设定6个复孔。
[0033]7)结果以药物对细胞的抑制率表示:
[0034]细胞增值抑制率(％)=(对照孔OD值-给药孔OD值)/对照孔OD值X 100%。实验重复3次。
`[0035]3统计处理
[0036]采用Microsoft Excel2003软件中的相关分析和Student t检验，数据以mean+ S.D.表不。
[0037]4实验结果
[0038]MTT法实验后统计结果显示，与对照组比较，当剂量达到5mg/ml时，对B16细胞增殖抑制有差异(p〈0.05)，剂量在10mg/ml时该差异具有显著性(P〈0.01)，当剂量达到15-20mg/ml时有极显著性差异(Ρ〈0.001)。
[0039]表1清肺抑火片对Α2780人卵巢癌细胞增殖抑制影响研究(X土 SD)
【权利要求】
1.清肺抑火片在抑制A2780人卵巢癌细胞增殖药物中的应用，其特征在于清肺抑火片的制备方法为:取黄芩245g、桅子140g、黄柏70g、大黄210g、苦参105g、天花粉140g、知母105g、桔梗140g、前胡70g，以上九味，桔梗、大黄粉碎成细粉；桅子、知母加水煎煮两次，合并煎液，滤过，滤液浓缩成膏；前胡、苦参、黄柏、黄芩用60%乙醇加热回流提取6小时，天花粉用25%乙醇加热回流提取6小时，合并醇液，回收乙醇，浓缩成膏，与上述浓缩膏合并，加入桔梗等粉末及辅料，混匀，制成颗粒，干燥，压制成1088片，即得。
2.根据权利要求1所述一种清肺抑火片在抑制A2780人卵巢癌细胞增殖药物中的应用，其特征在于桅子、知母加水煎煮两次，第一次加水为药材重量的8-12倍量，煎煮1-2h，第二次加水为药材重量的6-10倍量，煎煮l_2h。
【文档编号】A61P35/00GK103690756SQ201310706662
【公开日】2014年4月2日 申请日期:2013年12月20日 优先权日:2013年12月20日
【发明者】李强 申请人:青岛琴诚医药技术有限公司